專利名稱：誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的藥物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及黃芪以及黃芪抽提物的一種新用途。黃芪抽 提物能誘導(dǎo)HEL細(xì)胞編程性死亡，表明黃芪抽提物能制備成治療腫瘤，尤其是血液系統(tǒng)腫 瘤的藥物。
背景技術(shù)：
中草藥是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)寶庫(kù)中一顆璀璨的明珠。近年來(lái)，已引起西方國(guó)家的高度 重視。但是有關(guān)它們的分子作用機(jī)制尚知之甚少，有待運(yùn)用近代的知識(shí)與技術(shù)加以闡明。一 般認(rèn)為黃芪具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用，近來(lái)在臨床上，通常運(yùn)用它減輕化療與放療所 引起的毒副作用。但是有關(guān)它的確切功能與作用機(jī)制還不清楚。黃芪是一種常用的補(bǔ)氣升陽(yáng)的中藥，現(xiàn)已證實(shí)其具有增強(qiáng)機(jī)體非特異性、改善心 功能、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、利尿消腫、抗菌、抗病毒、促進(jìn)造血功能、抗疲勞、抗衰老等作用。為了 更好的發(fā)揮它的作用和方便臨床應(yīng)用，已將其有效成分提取出來(lái)制成了注射液，從而提高 了療效，減少了不良反應(yīng)，為臨床應(yīng)用開(kāi)辟了廣闊前景。從目前的臨床應(yīng)用看，黃芪注射液 在心血管疾病、免疫力降低引起的呼吸系統(tǒng)疾病及腎病綜合癥等方面表現(xiàn)出較好的輔助治 療效果。發(fā)明人于1999年10月29日申請(qǐng)的專利“誘導(dǎo)分化治療的藥物及其應(yīng)用”中，申 請(qǐng)?zhí)?9119912. X公開(kāi)了黃芪等誘導(dǎo)造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞趨向終末分化的藥物，具有無(wú)毒性， 抗腫瘤的優(yōu)點(diǎn)。細(xì)胞編程性死亡是一個(gè)高度調(diào)節(jié)進(jìn)程，它與動(dòng)植物的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)。機(jī)體通 過(guò)細(xì)胞凋亡，去除有害的細(xì)胞，假如因?yàn)榉N種原因而使細(xì)胞凋亡過(guò)程失控，就會(huì)導(dǎo)致一些疾 病的產(chǎn)生(例如，腫瘤，老年癡呆癥等)。所以對(duì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的藥物篩選及其作用分 子機(jī)理的研究就顯得十分重要，而且對(duì)新型藥物的設(shè)計(jì)與開(kāi)發(fā)開(kāi)闊了一條新的途徑。具有 重要的理論意義與實(shí)際運(yùn)用價(jià)值，也會(huì)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，就是提供黃芪及黃芪抽提物在制備治療腫瘤的藥物中的新用途。本發(fā)明的另一目的，就是提供一種新的治療腫瘤的藥物組合物。本發(fā)明的第一方面，提供了黃芪在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。較佳的，所述腫 瘤為血液系統(tǒng)腫瘤。本發(fā)明的第二方面，提供了黃芪抽提物在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。較佳的， 所述腫瘤為血液系統(tǒng)腫瘤。本發(fā)明的第三方面，提供了一種組合物，其特征在于，所述組合物包括安全有效量的黃芪抽提物以及藥學(xué)上可接受的載體和/或賦型劑。優(yōu)選的，所述組合物的劑型為片劑、膠囊、口服液或注射液。如本文所用，“黃芪抽提物”是指將黃芪用蒸餾水煮沸30-180分鐘，除去塊狀物，過(guò) 濾得到黃芪溶液，將黃芪溶液在低溫下高速離心后的上清。然后將所得上清液凍干，以便于 保存。通常保存于-20°C左右。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明黃芪抽提物，以及 藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、 水、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式， 例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠 囊之類的藥物組合物，可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜 在無(wú)菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約1微克/千克體重_約 6.0毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的黃芪抽提物還可與其他治療劑一起使用。當(dāng)然，具 體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。此 外，載體和配制方法的例子可以參見(jiàn)《Remington藥物科學(xué)》(Remington，sPharmaceutical Science)。本發(fā)明還提供了一種篩選治療腫瘤，尤其是血液系統(tǒng)腫瘤的藥物或化合物等的方 法，包括步驟(a)在適合生長(zhǎng)的條件下，培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，其中在第一組腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基中添加 候選物質(zhì)，在第二組腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)基中不添加候選物質(zhì)；(b)測(cè)定第一組和第二組腫瘤細(xì)胞的凋亡蛋白酶激活因子l(Apaf-l)的活性，其 中第一組腫瘤細(xì)胞或裂解物的該酶活性高于第二組就表示該候選物質(zhì)能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。較佳的，所述腫瘤細(xì)胞為HEL細(xì)胞。更佳的，所述方法還包括測(cè)定第一組和第二組 腫瘤(HEL)細(xì)胞的蛋白酶-3(CaSpaSe-3)的活性，其中第一組腫瘤(HEL)細(xì)胞的該酶活性 高于第二組就表示該候選物質(zhì)是能誘導(dǎo)腫瘤(血液系統(tǒng)腫瘤)細(xì)胞凋亡。發(fā)明人采用HEL細(xì)胞(人體紅白血病細(xì)胞株)為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?dāng)培養(yǎng)的HEL細(xì)胞， 加入黃芪(4.5mg/ml)誘導(dǎo)3_5天后，能促使HEL細(xì)胞產(chǎn)生編程性死亡。其細(xì)胞凋亡的程度 與藥物的劑量和誘導(dǎo)時(shí)間有關(guān)聯(lián)。黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理的研究方面，發(fā)明人得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果a)黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，促進(jìn)了該細(xì)胞內(nèi)凋亡蛋白酶激活因子KApoptotic protease-acting factor 1, APAF1)的表達(dá)，及凋亡小體的形成。運(yùn)用免疫熒光分析方法，觀察到在用黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞中，呈APAF1陽(yáng)性染色， 而未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性染色。表明用黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，使APAF1的表達(dá) 上調(diào)，從而促進(jìn)了凋亡小體的形成。b)黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，激活了蛋白酶-3(CaSpaSe-3)的活力。免疫熒光分析方 法的結(jié)果表明，用黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，在凋亡細(xì)胞內(nèi)，蛋白酶-3(CaSpaSe-3)被激活，呈陽(yáng) 性染色，而在非凋亡的HEL細(xì)胞內(nèi)，蛋白酶-3無(wú)活性，呈陰性染色。上述結(jié)果表明黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，使細(xì)胞內(nèi)APAF1的表達(dá)增加。APAF1能與線 粒體釋放的細(xì)胞色素C相結(jié)合，形成凋亡小體，依次激活凋亡途徑中下游蛋白酶，最終使腫瘤細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)首次證明了黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞凋亡過(guò)程中，涉及到一條APAF1依賴蛋白酶 激活的線粒體凋亡途徑。c)黃芪促進(jìn)HEL細(xì)胞內(nèi)乙酰膽堿脂酶(AChE)的活性。運(yùn)用乙酰膽堿脂酶細(xì)胞化學(xué)染色方法證明在用黃芪誘導(dǎo)的凋亡的HEL細(xì)胞內(nèi)， AChE的活力被激活，呈現(xiàn)陽(yáng)性染色，而在未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性染色反應(yīng)。用免疫熒光染色方法，進(jìn)一步揭示了在用黃芪誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞中呈現(xiàn)陽(yáng)性染色， 而未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性反應(yīng)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果暗示了 AChE酶也積極參與了黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞的凋亡過(guò)程。然后，發(fā)明人采用K562細(xì)胞形成的裸鼠實(shí)體腫瘤，在注射黃芪后觀察到腫瘤顯著 縮小，而對(duì)照組的腫瘤則無(wú)顯著變化。1。本發(fā)明首次證明了用黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，引起該細(xì)胞產(chǎn)生編程性死亡。2.黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞凋亡，至少涉及了一條APAF1依賴的蛋白酶激活的線粒體凋 亡的途徑。3.通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明黃芪具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的功能，以達(dá)到治療腫瘤，特別是血 液腫瘤的目的，比發(fā)明人原申請(qǐng)的藥物療效更為顯著、明確。黃芪還具有提高機(jī)體免疫力以 及減輕化療與放療所引起的毒副作用等功能，更顯示了黃芪在腫瘤治療中的優(yōu)越性。


圖1.黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞凋亡(A)流式細(xì)胞儀分析a和c為未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，b和d為黃芪抽提物分別誘導(dǎo) HEL細(xì)胞3天和5天的凋亡結(jié)果。(B)透射電鏡分析a為未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，放大7040倍；b為黃芪誘導(dǎo)三天的凋 亡細(xì)胞，放大7200倍。(C) TUNEL分析a為未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞；b為黃芪誘導(dǎo)三天的凋亡細(xì)胞。TUNEL陽(yáng) 性的細(xì)胞呈綠色。(附圖中呈灰色)圖2.黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中Apaf_l的表達(dá)上調(diào)(細(xì)胞放大400倍)(a) Hoechst 33258 染色未誘導(dǎo)的 HEL 細(xì)胞；(b)未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，Apaf-1免疫染色為陰性；(c) Hoechst 33258染色黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞；(d)黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞，Apaf-1免疫染色為陽(yáng)性(箭頭，呈紅色(附 圖中呈灰色))。圖3.黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中caspase-3的活性上調(diào)(細(xì)胞放大1000倍)(a)黃芪抽提物誘導(dǎo)凋亡的HEL細(xì)胞，caspase-3染色呈陽(yáng)性(長(zhǎng)箭頭所指，呈綠 色(附圖中呈灰色))；未凋亡細(xì)胞為陰性；(b)Hoechst 33258染色黃芪抽提物誘導(dǎo)凋亡的HEL細(xì)胞(長(zhǎng)箭頭所指)用 Hoechst 33258染色，基因組碎裂；未凋亡HEL細(xì)胞(箭頭所指)細(xì)胞核是完整的；(c)光學(xué)顯微鏡下觀察黃芪抽提物誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞。凋亡的HEL細(xì)胞(長(zhǎng)箭頭所 指)和未凋亡的HEL細(xì)胞(箭頭所指)。
圖4.黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中AChE的檢測(cè)(細(xì)胞放大400倍)(A)按照Karnovsky-Roots方法對(duì)HEL細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)分析(a)未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，用Hoechst 33258染色的；(b)未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，AChE染色為陰性；(c)黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞，用Hoechst 33258染色，放大600倍；(d)黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞，AChE染色，箭頭所指的凋亡細(xì)胞染色為陽(yáng)性 (棕褐色(附圖中呈灰色))放大600倍；(e)黃芪抽提物誘導(dǎo)五天的HEL細(xì)胞，用Hoechst 33258染色；(f)黃芪抽提物誘導(dǎo)五天的HEL細(xì)胞，AChE染色，箭頭所指凋亡細(xì)胞染色為陽(yáng)性 (棕褐色(附圖中呈灰色))。(B) AChE免疫熒光染色分析(a)未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，用Hoechst 33258染色；(b)未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞，AChE免疫染色為陰性；(c)黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞，用Hoechst 33258染色；(d)黃芪抽提物誘導(dǎo)三天的HEL細(xì)胞，AChE免疫染色，凋亡細(xì)胞染色為陽(yáng)性(綠色 (附圖中呈灰色))；圖5、黃芪抽提物在動(dòng)物模型上的抑瘤分析A對(duì)照組，未注射黃芪抽提物(實(shí)體瘤平均約為1. 1厘米)；B實(shí)驗(yàn)組，注射黃芪抽提物兩周(實(shí)體瘤平均約為0. 2、0. 5厘米)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件如 Sambrook 等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York :ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡HEL和K562細(xì)胞(購(gòu)自中科院上海生命科學(xué)研究院細(xì) 胞庫(kù))用含有10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基(GIBC0-BRL)，在37°C含5% C02的細(xì)胞 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將黃芪(產(chǎn)地內(nèi)蒙古)用蒸餾水煮沸60-90分鐘，除去塊狀物，過(guò)濾得到黃 芪溶液。將黃芪溶液在低溫下高速離心，把上清凍干得到黃芪抽提物，并存放于-20°C備用。 誘導(dǎo)時(shí)，在培養(yǎng)的HEL細(xì)胞中按4. 5mg/ml添加黃芪抽提物，培養(yǎng)3_5天。流式細(xì)胞儀分析將用黃芪抽提物誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞離心收集、重懸于檸 檬酸鹽溶液中。將懸浮細(xì)胞在-20°C凍20分鐘后，在40°C快速融化并離心。將細(xì)胞染色， 用FACS流式細(xì)胞儀分析。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果表明HEL細(xì)胞用黃芪(4. 5mg/ml)誘導(dǎo)5天 后，有明顯的細(xì)胞凋亡峰出現(xiàn)( 54. 79% )見(jiàn)圖lAd，而未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞沒(méi)有檢測(cè)到凋 亡峰(圖lAc)。透射電鏡分析將用黃芪抽提物誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞固定，脫水，用Epon 812 樹(shù)脂包被。樣品按常規(guī)染色并用透射電鏡觀察。HEL細(xì)胞用黃芪誘導(dǎo)3天后，在細(xì)胞形態(tài)學(xué) 產(chǎn)生了改變?nèi)缛旧|(zhì)凝集，凋亡小體的形成等(圖lBb)；而在非凋亡的HEL細(xì)胞內(nèi)，未檢測(cè)到細(xì)胞形態(tài)學(xué)上的改變(圖IBa)。b)用 TUNEL 試劑盒檢測(cè)凋亡TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyl-transferase-mediated dUTP nick-end labeling) i式齊盒購(gòu)自 Boehringer Mannheim 公司，按照i亥公司 說(shuō)明書操作，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。用熒光顯微鏡記錄TUNEL檢測(cè)的結(jié)果。TUNEL反應(yīng)檢測(cè)呈陽(yáng) 性，證明HEL細(xì)胞經(jīng)黃芪誘導(dǎo)后，能引起HEL細(xì)胞編程性死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1C。TUNEL陽(yáng) 性的細(xì)胞呈綠色。(附圖lCb中呈灰色點(diǎn)狀)實(shí)施例2黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中Apaf_l的表達(dá)上調(diào)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞核染色和形態(tài)觀察收集HEL細(xì)胞并固定，重懸于Hoechst 33258溶液中染 色，涂片后，用熒光顯微鏡觀察并拍照。免疫熒光染色將用黃芪抽提物誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞離心收集，固定后封閉 45分鐘，先加入一抗(Apaf-1多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司，sc_8339)反應(yīng)30分鐘，清 洗后再加入Rhodamine標(biāo)記的二抗(抗兔，購(gòu)自Rockland公司)反應(yīng)30分鐘。清洗后熒 光顯微鏡觀察。黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，促進(jìn)了該細(xì)胞內(nèi)凋亡蛋白酶激活因子KApoptotic protease-acting factor 1，APAF1)的表達(dá)，及凋亡小體的形成(見(jiàn)圖2c，細(xì)胞呈灰色點(diǎn) 狀)。運(yùn)用免疫熒光分析方法，觀察到在用黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞中，呈陽(yáng)性染色(紅色 (附圖2d中呈灰色))，而未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性染色(圖2b)。表 明用黃芪誘 導(dǎo)HEL細(xì)胞后，使APAF1的表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)了凋亡小體的形成。實(shí)施例3黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中caspase-3的活性上調(diào)實(shí)驗(yàn)a)免疫熒光染色將用黃芪抽提物誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞離心收集，固定后封 閉45分鐘，加入一抗(Caspase 3單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司)反應(yīng)30分鐘，清洗后 再加入FITC標(biāo)記的二抗(抗鼠，購(gòu)自Rockland公司)反應(yīng)30分鐘。清洗后熒光顯微鏡觀 察。黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，激活了蛋白酶-3(CaSpaSe-3)的活力。免疫熒光分析方法的結(jié)果 表明，用黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，在凋亡細(xì)胞內(nèi)，蛋白酶一 3(CaSpaSe-3)被激活，呈陽(yáng)性染色 (綠色，附圖中3a中呈灰色)，而在非凋亡的HEL細(xì)胞內(nèi)，蛋白酶-3活性，呈陰性染色(圖 3)。上述結(jié)果表明黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞后，使細(xì)胞內(nèi)APAF1的表達(dá)增加。APAF1能與線 粒體釋放的細(xì)胞色素C相結(jié)合，形成了凋亡小體，依次激活凋亡途徑中下游蛋白酶，最終使 腫瘤細(xì)胞凋亡。實(shí)施例4黃芪誘導(dǎo)HEL細(xì)胞中AChE的檢測(cè)AChE 細(xì)胞化學(xué)染色根據(jù) Karnovsky-Roots 的方法(J. Histochem. Cytochem. 12 219-222，1964)進(jìn)行AChE細(xì)胞化學(xué)染色分析。棕色沉淀物(附圖中呈灰色)代表AChE酶 被激活的區(qū)域。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在用黃芪誘導(dǎo)的凋亡的HEL細(xì)胞內(nèi)，AChE的活力被激活，呈 現(xiàn)棕色(圖4Ad，圖4Af中呈灰色)的陽(yáng)性染色，而在未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性染 色反應(yīng)。免疫熒光染色將用黃芪抽提物誘導(dǎo)和未誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞離心收集，固定后封閉 45分鐘，先加入一抗(AChE多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司，sc-6431)反應(yīng)30分鐘，清洗 后再加入FITC標(biāo)記的二抗(抗山羊，購(gòu)自Rockland公司)反應(yīng)30分鐘。清洗后熒光顯微 鏡觀察。用免疫熒光染色方法，進(jìn)一步揭示了在用黃芪誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞中呈現(xiàn)綠色陽(yáng)性染色(圖4Bd中呈灰色)，而未被黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞則呈陰性反應(yīng)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果暗示了 AChE酶也積極參與了黃芪誘導(dǎo)的HEL細(xì)胞的凋亡過(guò)程。實(shí)施例5黃芪抽提物在動(dòng)物模型上的抑瘤分析用K562細(xì)胞建立裸鼠實(shí)體瘤模型將1 X IO6 107K562細(xì)胞注射到4 5周齡裸 鼠皮下，10天左右形成實(shí)體瘤。將實(shí)體瘤取出勻漿，將勻漿細(xì)胞注入到4 5周齡的裸鼠 皮下，10天左右待瘤體長(zhǎng)到一定大小時(shí)，注射中藥黃芪抽提物(10mg/g體重)，一星期兩次。 兩周后，注射黃芪抽提物的裸鼠，瘤體明顯縮小(圖5B)；而對(duì)照組裸鼠，瘤體繼續(xù)長(zhǎng)大(圖 5A)。實(shí)施例6制備藥物組合物先將黃芪用水漂洗，于玻璃瓶中加三蒸水煎煮后，去渣、過(guò)濾、離心，滅菌，按常規(guī) 方法與生理鹽水配制成注射液，可用于肌肉注射或靜脈滴注以治療白血病患者。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú) 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范 圍。
權(quán)利要求
黃芪水抽提物在制備誘導(dǎo)人體紅白血病細(xì)胞凋亡的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了黃芪抽提物的新用途以及一種組合物，它包括黃芪抽提物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑，所述組合物可用于治療腫瘤，尤其是血液系統(tǒng)腫瘤。
文檔編號(hào)A61K125/00GK101991637SQ201010545659
公開(kāi)日2011年3月30日 申請(qǐng)日期2004年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月9日
發(fā)明者侯春暉, 周維影, 張學(xué)軍, 張樹(shù)冰, 程曉東, 謝恒月, 錢若蘭 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院