專利名稱：禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑及其制作工藝和質(zhì)量檢驗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，特別是涉及一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑及其制作工藝和質(zhì)量檢驗方法。
背景技術(shù)：
目前國內(nèi)外關(guān)于轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行著廣泛研究，研究主要圍繞轉(zhuǎn)移因子的提取工藝改進(jìn)、包被技術(shù)和免疫抑制性疾病防治效果等方面內(nèi)容。通過大量實驗研究，已經(jīng)證明轉(zhuǎn)移因子具有較高的免疫活性，因此被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和獸藥領(lǐng)域。醫(yī)藥領(lǐng)域中，口服液、凍干粉、 膠囊等劑型的轉(zhuǎn)移因子免疫調(diào)節(jié)劑廣泛應(yīng)用于人類免疫失調(diào)疾病的防治，如紅斑狼瘡、乙型肝炎、過敏性鼻炎等。在獸藥領(lǐng)域，口服液和凍干粉劑型的轉(zhuǎn)移因子，作為免疫增強(qiáng)、抗病毒和抗應(yīng)激藥物，用于禽病毒性疾病的防治和減輕應(yīng)激反應(yīng)等。目前我國正處于由養(yǎng)殖大國跨越為養(yǎng)殖強(qiáng)國的階段，在這過程中制約因素有許多方面，能否有效控制疾病是其中一個重要的環(huán)節(jié)。我國畜產(chǎn)品出口主要面臨的挑戰(zhàn)是產(chǎn)品質(zhì)量較低，藥物殘留和生物污染。因此有效控制疾病，降低藥物殘留和消除生物污染成為我們畜牧業(yè)工作者努力的方向和工作的重點(diǎn)。其中病毒性疾病的有效控制已成為獸醫(yī)工作者的工作重點(diǎn)。養(yǎng)殖過程中要想有效控制疾病，同時又必須減少抗生素的使用，養(yǎng)殖場(或小區(qū))必須建立合理的綜合疾病防控體系，在這防控體系中如何提高動物機(jī)體免疫力，減少或消除應(yīng)激是重要環(huán)節(jié)之一。所以隨著我國養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，減少化學(xué)藥品使用量的要求日益迫切，而高效又安全的生物藥品將有很大的市場需求。綜上所述，未來轉(zhuǎn)移因子在這方面具有不可替代的作用，將有廣闊的市場前景。現(xiàn)有的轉(zhuǎn)移因子口服液、凍干粉等劑型不太適合動物畜禽使用。其中口服液劑型存在體積大、不易運(yùn)輸、有效期短、低溫儲存成本高、常溫貯存容易喪失有效成分等缺點(diǎn)；而凍干粉劑型則成本過高。因此，如何能創(chuàng)設(shè)一種具有提高動物免疫力和抗應(yīng)激效果，且易于儲存、便于運(yùn)輸、使用方便、成本更低、更適合于畜禽使用，并適應(yīng)我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展實際情況的新的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑及其制作工藝和質(zhì)量檢驗方法，實屬當(dāng)前本領(lǐng)域的重要改進(jìn)目標(biāo)之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，使其成本更低，從而克服現(xiàn)有的轉(zhuǎn)移因子凍干粉制作工藝的不足。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，主要包括以下步驟選用健康動物脾臟，并依次進(jìn)行預(yù)處理、搗碎和凍融；對脾臟凍融物解凍，并在加水?dāng)嚢韬箪o置；先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾；沖洗過濾后的凍融物，并將獲得的沖洗液調(diào)制為轉(zhuǎn)移因子濃縮液；將載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液混合、風(fēng)干。作為本發(fā)明的一種改進(jìn)，所述的先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾包括用200目濾網(wǎng)、 1000目濾網(wǎng)以及濾膜截留值為30000-50000道爾頓、10000-12000道爾頓、5000-8000道爾頓、3000道爾頓的超濾設(shè)備依次過濾。所述的載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液的重量比為1 1.5 1 2。所述的風(fēng)干為35_40°C風(fēng)干箱內(nèi)風(fēng)干。所述的沖洗過濾后的凍融物，是每過濾出180_220kg凍融物即取出并沖洗。所述的凍融為-18°C凍融8 10次。所述的凍融以顯微鏡觀察細(xì)胞破碎率達(dá)80%以上為準(zhǔn)。所述的先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾包括用200目濾網(wǎng)、1000目濾網(wǎng)以及濾膜截留值為50000道爾頓、12000道爾頓、7000道爾頓、3000道爾頓的超濾設(shè)備依次過濾；載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液的重量比為1 1.5;風(fēng)干為40°C風(fēng)干箱內(nèi)風(fēng)干。本發(fā)明還提供一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑，使其具有提高動物免疫力和抗應(yīng)激的效果，且易于儲存、便于運(yùn)輸、使用方便、更適合于畜禽使用，并適應(yīng)我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展實際情況，從而克服現(xiàn)有的禽用轉(zhuǎn)移因子劑型的不足。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明根據(jù)上述工藝制作的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑，其中寡核苷酸和寡肽的含量> 40mg/g。此外，本發(fā)明還提供一種上述禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的質(zhì)量檢驗方法，包括以下步驟取IOg禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑溶解于PH 5的IOOmL蒸餾水中；等待充分溶解后， 2000r/min離心15分鐘；取上清液檢測有效成分含量。采用這樣的設(shè)計后，本發(fā)明在保留了現(xiàn)有轉(zhuǎn)移因子劑型可提高動物免疫力和抗應(yīng)激效果的基礎(chǔ)上，更具備了以下優(yōu)點(diǎn)1、可常溫儲存，比口服液儲存時間更長，效價損失更少，使用效果更確切；2、比口服液包裝體積小、運(yùn)輸方便；3、在畜禽使用時，比口服液更方便，混飼、飲水使用都可以；4、比凍干粉成本低，適合于畜牧養(yǎng)殖業(yè)自身的需要，適應(yīng)我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展實際情況，適于廣泛推廣使用。


上述僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，以下結(jié)合附圖與具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。圖1是本發(fā)明禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝流程示意圖。
具體實施例方式本發(fā)明的理論依據(jù)為從動物脾臟提取的轉(zhuǎn)移因子，是小分子量(僅3000 5000 道爾頓左右)寡肽和寡核苷酸的混合物，沒有致熱原性，空間結(jié)構(gòu)簡單，性能相對穩(wěn)定，已實驗證實不受消化酶的影響，為腸道吸收良好，因此內(nèi)服對動物免疫增強(qiáng)作用良好，所以可以制作可溶性粉生產(chǎn)應(yīng)用。并經(jīng)實驗證實，轉(zhuǎn)移因子對溫度不是十分敏感，40°C以下(避光，防腐)長期存放對有效成分的含量無顯著影響，所以通過控制溫度進(jìn)行干燥。本發(fā)明轉(zhuǎn)移因子研究根據(jù)上述理論研制而成，研制特殊的工藝過程需要解決的技術(shù)問題有轉(zhuǎn)移因子最佳干燥溫度，轉(zhuǎn)移因子沖洗液的濃縮技術(shù)，轉(zhuǎn)移因子濃縮液和載體最佳混合比例等三項獨(dú)特工藝問題。本研究小組通過實驗室研究到田間試驗，進(jìn)行了多方面的探索研究，成功獲得本發(fā)明禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉的制作工藝。請參閱圖1所示，本發(fā)明一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝主要包括以下步驟。步驟一，選用健康動物脾臟，例如豬脾臟，并依次進(jìn)行預(yù)處理、搗碎和凍融。預(yù)處理具體包括仔細(xì)分離周圍結(jié)締組織和脂肪，包括脾臟的被膜；搗碎是先加等重量的蒸餾水，用組織搗碎機(jī)搗碎，并進(jìn)行分裝；凍融通?？稍赺18°C下凍融8 10次，凍融效果用顯微鏡觀察判定，組織搗碎物載玻片涂片，光學(xué)顯微鏡觀察，以細(xì)胞破碎率達(dá)80%以上為準(zhǔn)。步驟二，對脾臟凍融物解凍，加2倍重量的蒸餾水，攪拌機(jī)攪勻后，靜置30分鐘。步驟三，先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾。較佳的，具體包括用200目濾網(wǎng)過濾， 濾液再用1000目的濾網(wǎng)過濾，濾液再用超濾設(shè)備過濾，超濾設(shè)備要求為濾膜截留值為 30000-50000道爾頓(優(yōu)選50000道爾頓)、10000-12000道爾頓(優(yōu)選12000道爾頓)、 5000-8000道爾頓(優(yōu)選7000道爾頓)、3000道爾頓，依次過濾。步驟四，每過濾出180_220kg(優(yōu)選200kg)凍融物，即將其取出3000道爾頓超濾膜，用蒸餾水沖洗，沖洗液中含有較高含量的轉(zhuǎn)移因子，并將獲得的轉(zhuǎn)移因子沖洗液調(diào)制成有效成分(寡核苷酸+寡肽)>40mg/mL的轉(zhuǎn)移因子濃縮液。具體的調(diào)制和測定可采用現(xiàn)有技術(shù)，直接用蒸餾水稀釋，先測出沖洗液中有效成分含量，再計算出稀釋比例，以達(dá)到本步驟的要求。步驟五，將載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液按重量比1 1.5 1 2混合，分裝，35_40°C 風(fēng)干箱內(nèi)風(fēng)干，充分干燥后，粉碎、包裝、防潮、防紫外線。其中，可選用各種中性載體，例如價位較低的蜂窩狀載體環(huán)糊精，經(jīng)多次實驗證實，載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液的重量比 1 1.5、風(fēng)干溫度40°C為最佳條件，此條件下，產(chǎn)品的質(zhì)量較高，成本控制也較為合理。制備完成后，稱取IOg產(chǎn)物溶解于pH 5的IOOmL蒸餾水中，等待充分溶解后 2000r/min離心15分鐘，取上清液檢測有效成分含量，以有效成分含量彡40mg/g為產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)上述工藝制作的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑，其中寡核苷酸和寡肽的含量 ^ 40mg/g,呈微黃色或白色，略有腥味，粉末狀，水溶性好。本發(fā)明在原料處理和提取過程中固定成本，與凍干粉的制備過程大概相同，不同的是干燥過程凍干粉干燥50kg與載體混合物需要20小時左右，大概用電1000度，出凍干粉大概52kg左右，干燥效率低，費(fèi)用大概1000元，每公斤20元左右；而本工藝干燥50kg與載體混合物需要6小時左右，大概用電100度，出干燥粉52kg左右，干燥效率高，費(fèi)用大概 100元，每公斤僅需要2元左右，因此明顯降低了產(chǎn)品的制備成本，更符合經(jīng)濟(jì)效益。以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容做出些許簡單修改、等同變化或修飾，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于主要包括以下步驟選用健康動物脾臟，并依次進(jìn)行預(yù)處理、搗碎和凍融；對脾臟凍融物解凍，并在加水?dāng)嚢韬箪o置；先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾；沖洗過濾后的凍融物，并將獲得的沖洗液調(diào)制為轉(zhuǎn)移因子濃縮液；將載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液混合、風(fēng)干。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾包括用200目濾網(wǎng)、1000目濾網(wǎng)以及濾膜截留值為30000-50000 道爾頓、10000-12000道爾頓、5000-8000道爾頓、3000道爾頓的超濾設(shè)備依次過濾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液的重量比為1 1.5 1 2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的風(fēng)干為35-40°C風(fēng)干箱內(nèi)風(fēng)干。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的沖洗過濾后的凍融物，是每過濾出180-220kg凍融物即取出并沖洗。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的凍融為-18°C凍融8 10次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的凍融以顯微鏡觀察細(xì)胞破碎率達(dá)80%以上為準(zhǔn)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的制作工藝，其特征在于所述的先后用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾包括用200目濾網(wǎng)、1000目濾網(wǎng)以及濾膜截留值為50000道爾頓、12000道爾頓、7000道爾頓、3000道爾頓的超濾設(shè)備依次過濾；載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液的重量比為1 1.5;風(fēng)干為40°C風(fēng)干箱內(nèi)風(fēng)干。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項所述工藝制作的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑，其特征在于其中寡核苷酸和寡肽的含量> 40mg/g。
10.一種權(quán)利要求9所述的禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑的質(zhì)量檢驗方法，其特征在于包括以下步驟取IOg禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑溶解于pH 5的IOOmL蒸餾水中；等待充分溶解后，2000r/min離心15分鐘；取上清液檢測有效成分含量。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)于一種禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑及其制作工藝和質(zhì)量檢驗方法，該工藝主要包括以下步驟選用健康動物脾臟進(jìn)行預(yù)處理、搗碎和凍融；凍融物解凍、加水?dāng)嚢?、靜置；用濾網(wǎng)和超濾設(shè)備過濾；沖洗過濾后的凍融物，將沖洗液調(diào)制為轉(zhuǎn)移因子濃縮液；將載體與轉(zhuǎn)移因子濃縮液混合、風(fēng)干。本發(fā)明產(chǎn)品禽用轉(zhuǎn)移因子可溶性粉劑中，寡核苷酸和寡肽的含量≥40mg/g。該質(zhì)量檢驗方法包括取10g產(chǎn)品溶解于pH 5的100mL蒸餾水中；2000r/min離心15分鐘；取上清液檢測有效成分含量。本發(fā)明可提高動物免疫力和抗應(yīng)激效果，且易于儲存、便于運(yùn)輸、使用方便、成本更低、更適合于畜禽使用，并適應(yīng)我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展實際情況。
文檔編號A61P43/00GK102475718SQ20101055414
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月23日
發(fā)明者何孟蓮, 趙滿達(dá) 申請人:趙滿達(dá)