專利名稱：殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種磁性脂質體的制備方法，具體涉及一種殼聚糖修飾的磁性脂質體 的制備方法，該脂質體可作為腸道的靶向造影劑。
背景技術：
殼聚糖是一種帶正電荷的天然多糖，無毒、無刺激性、無致敏性、無致突變作用，具 有良好的生物相容性和生物降解性，其分子鏈上豐富的氨基和羥基使其易于進行化學修飾 而被賦予多種功能基團。殼聚糖作為藥物載體可以控制藥物釋放、延長藥物療效、降低藥物 毒副作用，提高疏水性藥物對細胞膜的通透性和藥物的穩(wěn)定性及改變給藥途徑，還可以大 大加強制劑的靶向給藥能力。最近研究表明，殼聚糖具有生物粘附性，能有效增加藥物通過 眼部、鼻腔及胃腸道粘膜上皮的吸收，而且該化合物重要特性之一是能被結腸厭氧菌叢分 泌專屬性的酶降解。因此，殼聚糖對結腸有靶向作用。利用殼聚糖來修飾脂質體，不僅對藥物有保護和促滲作用，提高藥物的緩釋性，還 可以增加藥物的靶向性，從而達到提高生物利用度的效果。同時，它也可以降低陽離子脂質 體的毒性，防止脂質體在胃腸道破壞，以達到口服結腸定位釋放的目的，因此，殼聚糖脂質 體復合微粒具有作為良好藥物載體的潛能。磁共振成像(MRI)技術可以對生物內臟器官和軟組織進行無損的快速檢測。而磁 共振成像(MRI) I技術主要是通過磁共振造影劑來實現(xiàn)的。目前，臨床上常用的磁共振造影 劑為Gd-DTPA。但Gd-DTPA有一些不足之處，如循環(huán)時間短、注射后Gd-DTPA可迅速通過 細胞間隙、經腎臟排泄、在體內分布沒有特異性、價格較昂貴等。因此，尋求價格低廉且具有 特異性的造影劑是當前研究的熱點。相比較而言，磁性納米粒子作為磁共振造影劑，安全性 較好，且易于將特異性配體連接到造影劑表面，使它選擇性地與相應受體結合，從而達到特 異性增強靶區(qū)超聲信號或局部靶向治療的目的，因此很受臨床應用的歡迎。
發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備 方法，工藝簡單，生產成本低，所得殼聚糖修飾的磁性脂質體穩(wěn)定性好，能進一步滿足生產 和應用的需求。本發(fā)明提供一種殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法，其特征在于，包括以下步 驟a、配置濃度為10-20mg/ml三氯化鐵、5-lOmg/ml 二氯化鐵和5-lOmg/ml表面活性 劑的溶液，將該溶液在50-80°C及惰性氣氛下、劇烈攪拌30分鐘后，用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH 值為8-11 ；保持溫度，繼續(xù)攪拌30分鐘后，離心分離，分別用去離子水、乙醇洗滌；b、配置濃度為10-20mg/ml磷脂和10mg/ml助表面活性劑的氯仿、蒸餾水溶液，氯 仿與水的體積比為3 1-1 3;將該溶液在旋轉蒸發(fā)儀上真空旋轉蒸發(fā)形成薄膜；加入pH =7. 4的磷酸鹽緩沖液和四氧化三鐵納米磁性粒子，用探頭超聲60分鐘后，離心分離，棄上清液及瓶底未包封的磁性材料，取中層褐色水性懸濁液，即制得磁性脂質體溶液；C、配置濃度為20mg/ml殼聚糖醋酸溶液，磁性攪拌12小時，將磁性脂質體溶液緩 慢滴加到殼聚糖醋酸溶液中，繼續(xù)攪拌2小時，即制得殼聚糖修飾的磁性脂質體。所述的表面活性劑為十六烷基三甲基溴化銨、或十二烷基硫酸鈉、或聚乙二醇辛
基苯基醚。所述的助表面活性劑為膽固醇、或正辛醇、或丙三醇。所述的殼聚糖為脫乙酰度為50-95%的殼聚糖。本發(fā)明的制備方法簡單，可操作性強，能進一步滿足生產和應用的需求；本發(fā)明制 備的造影劑具有良好的物理化學穩(wěn)定性；本發(fā)明中采用殼聚糖對腸粘膜具有良好的特異 性，有利于提高造影劑的有效利用率。本發(fā)明制備的殼聚糖修飾的磁性脂質體在腸道造影劑方面有很好的應用，且制備 工藝簡單，生產成本低，所得的造影劑穩(wěn)定性好，能進一步滿足生產和應用的需求。
具體實施例方式以下通過具體的實施例對本發(fā)明的技術方案作進一步描述。以下的實施例是對本 發(fā)明的進一步說明，而不限制本發(fā)明的范圍。實施例11、四氧化三鐵納米磁性粒子的制備在10毫升水中，分別加入02克三氯化鐵，0. 1克二氯化鐵和0.05克聚乙二醇辛基 苯基醚，配置成濃度為20mg/ml三氯化鐵、10mg/ml 二氯化鐵和5mg/ml聚乙二醇辛基苯基醚 的溶液。將該溶液在50°C及惰性氣氛下、劇烈攪拌30分鐘后，用3M氫氧化鈉溶液調節(jié)pH 值為8。保持溫度，繼續(xù)攪拌30分鐘后，離心分離，分別用去離子水、乙醇洗滌，即制得四氧 化三鐵納米磁性粒子。2、磁性脂質體的制備分別稱取0. Ig磷脂和0. Ig膽固醇，完全溶解于10毫升氯仿和蒸餾水的混合相 中，氯仿與水的體積比為1 1，配置成濃度為10mg/ml磷脂和10mg/ml膽固醇的氯仿/蒸 餾水的混合溶液。將該溶液在旋轉蒸發(fā)儀上真空旋轉蒸發(fā)形成薄膜。加入100毫升PH = 7. 4磷酸鹽緩沖液和10毫克制得的四氧化三鐵納米磁性粒子，用探頭超聲60分鐘后，離心 分離，棄上清及瓶底未包封的磁性材料，取中層褐色水性懸濁液，即制得磁性脂質體溶液。3、殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備稱取0. 1克脫乙酰度為50 %的殼聚糖，溶解于5毫升1 %的醋酸溶液中，配置成濃 度為20mg/ml的殼聚糖醋酸溶液，磁性攪拌12小時。將制得的磁性脂質體溶液緩慢滴加到 殼聚糖醋酸溶液中，滴加時間為10分鐘，繼續(xù)攪拌2小時，即制得殼聚糖修飾的磁性脂質 體。制得殼聚糖修飾的磁性脂質體制劑為白色渾濁液體，動態(tài)激光光散射法檢測囊泡 平均粒徑240. 5nm。實施例21、四氧化三鐵納米磁性粒子的制備在10毫升水中，分別加入0. 1克三氯化鐵，0.05克二氯化鐵和0.05克十六烷基三甲基溴化銨，配置成濃度為10mg/ml三氯化鐵、5mg/ml 二氯化鐵和5mg/ml十六烷基三甲基 溴化銨的溶液。將該溶液在80°C及惰性氣氛下、劇烈攪拌30分鐘后，用3M氫氧化鈉溶液調 節(jié)PH值為9。保持溫度，繼續(xù)攪拌30分鐘后，離心分離，分別用去離子水、乙醇洗滌，即制得 四氧化三鐵納米磁性粒子。2、磁性脂質體的制備分別稱取0. 1克磷脂和0. 1克丙三醇，完全溶解于10毫升氯仿和蒸餾水的混合相 中，氯仿與水的體積比為3 1，配置成濃度為10mg/ml磷脂和10mg/ml丙三醇的氯仿和蒸 餾水的混合溶液，將該溶液在旋轉蒸發(fā)儀上真空旋轉蒸發(fā)形成薄膜。加入100毫升PH = 7. 4 磷酸鹽緩沖液和50毫克制得的四氧化三鐵納米磁性粒子，用探頭超聲60分鐘后，離心分 離，棄上清液及瓶底未包封的磁性材料，取中層褐色水性懸濁液，即制得磁性脂質體溶液。3、殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備稱取0. 1克脫乙酰度為70 %的殼聚糖，溶解于5毫升1 %的醋酸溶液中，配置成濃 度為20mg/ml的殼聚糖醋酸溶液。磁性攪拌12小時，將制得的磁性脂質體溶液緩慢滴加到 殼聚糖醋酸溶液中，滴加時間為10分鐘，繼續(xù)攪拌2小時，即制得殼聚糖修飾的磁性脂質 體。制得殼聚糖修飾的磁性脂質體制劑為白色渾濁液體，動態(tài)激光光散射法檢測囊泡 平均粒徑186. 4nm。實施例31、四氧化三鐵納米磁性粒子的制備在10毫升水中，分別加入0. 1克三氯化鐵，0. 1克二氯化鐵和0. 1克十二烷基硫酸 鈉，配置成濃度為10mg/ml三氯化鐵、10mg/ml 二氯化鐵和10mg/ml十二烷基硫酸鈉。將該 溶液在80°C及惰性氣氛下、劇烈攪拌30分鐘后，用3M氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為11。保持 溫度，繼續(xù)攪拌30分鐘后，離心分離，分別用去離子水、乙醇洗滌，即制得四氧化三鐵納米 磁性粒子。2、磁性脂質體的制備分別稱取02克磷脂和0. 1克正辛醇，完全溶解于10毫升氯仿和蒸餾水的混合相 中，氯仿與水的體積比為1 3，配置成濃度為20mg/ml磷脂和10mg/ml正辛醇的氯仿和蒸 餾水的混合溶液。將該溶液在旋轉蒸發(fā)儀上真空旋轉蒸發(fā)形成薄膜。加入IOOml pH = 7. 4 磷酸鹽緩沖液和IOmg制得的四氧化三鐵納米磁性粒子，用探頭超聲60分鐘后，離心分離， 棄上清液及瓶底未包封的磁性材料，取中層褐色水性懸濁液，即制得磁性脂質體溶液。3、殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備稱取0. 1克脫乙酰度為95 %的殼聚糖，溶解于5ml，1 %的醋酸溶液中，配置成濃度 為20mg/ml的殼聚糖醋酸溶液，磁性攪拌12小時。將磁性脂質體溶液緩慢滴加到殼聚糖醋 酸溶液中，滴加時間為10分鐘，繼續(xù)攪拌2小時，即制得殼聚糖修飾的磁性脂質體。制得殼聚糖修飾的磁性脂質體制劑為白色渾濁液體，動態(tài)激光光散射法檢測囊泡 平均粒徑365. 4nm。
權利要求
1.殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法，其特征在于a、配置濃度為10-20mg/ml三氯化鐵、5_10mg/ml二氯化鐵和5_10mg/ml表面活性劑的 溶液，將該溶液在50-80°C及惰性氣氛下、劇烈攪拌30分鐘后，用氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為 8-11 ；保持溫度，繼續(xù)攪拌30分鐘后，離心分離，分別用去離子水、乙醇洗滌，即制得四氧化 三鐵納米磁性粒子；b、配置濃度為10-20mg/ml磷脂和10mg/ml助表面活性劑的氯仿和蒸餾水的混合相中， 氯仿與水的體積比為3 1-1 3 ；將該溶液在旋轉蒸發(fā)儀上真空旋轉蒸發(fā)形成薄膜；加 入pH = 7. 4的磷酸鹽緩沖液和制得的四氧化三鐵納米磁性粒子，用探頭超聲60分鐘后，離 心分離，棄上清液及瓶底未包封的磁性材料，取中層褐色水性懸濁液，即制得磁性脂質體溶 液；c、配置濃度為20mg/ml殼聚糖醋酸溶液，磁性攪拌12小時，將制得的磁性脂質體溶液 緩慢滴加到殼聚糖醋酸溶液中，繼續(xù)攪拌2小時，即制得殼聚糖修飾的磁性脂質體。
2.根據權利要求1所述的殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法，其特征在于，所述的 表面活性劑為十六烷基三甲基溴化銨、或十二烷基硫酸鈉、或聚乙二醇辛基苯基醚。
3.根據權利要求1所述的的殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法，其特征在于，所述 的助表面活性劑為膽固醇、或正辛醇、或丙三醇。
4.根據權利要求1所述的的殼聚糖修飾的磁性脂質體的制備方法，其特征在于，所述 的殼聚糖為脫乙酰度為50-95%的殼聚糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及腸道造影劑的磁性脂質體的制備方法，制備步驟如下惰性氣氛、劇烈攪拌條件下，制備四氧化三鐵納米磁性粒子；將制備的四氧化三鐵納米磁性粒子與磷脂和助表面活性劑復合，制備磁性脂質體；利用殼聚糖修飾的磁性脂質體，制備適用于腸道造影劑的磁性脂質體。本發(fā)明的制備方法簡單，可操作性強，能進一步滿足生產和應用的需求。本發(fā)明制備的殼聚糖修飾的磁性脂質體對腸粘膜具有良好的特異性，有利于提高造影劑的有效利用率。
文檔編號A61K49/18GK102000351SQ20101057142
公開日2011年4月6日 申請日期2010年12月2日 優(yōu)先權日2010年12月2日
發(fā)明者朱君 申請人:上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司