專利名稱：燕窩寡肽組合物及其制備方法和使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從燕窩中提取得到寡肽的方法和通過該方法提取得到的組合物。 本發(fā)明還涉及從燕窩中提取得到的含有小分子寡肽的組合物在制備醫(yī)藥、保健品、化妝品 中的應用。
背景技術(shù)：
燕窩為雨燕科Apodidae金絲燕屬Collocalia的幾種鳥類，吞食海中小魚或其他 蠶螺海藻等小生物消化后，分泌出的胃液與其絨羽混合凝結(jié)于懸崖峭壁上，而筑成的巢窩。 燕窩是與人參、鹿茸齊名的名貴補藥之一。燕窩中有粘蛋白，其包括人體必需的十六種氨基酸，以及唾液酸、微量元素等活性 成分。其中燕窩的主要成分為粘蛋白，為大分子的物質(zhì)，是燕窩的最主要的活性物質(zhì)之一。 將大分子量的燕窩蛋白水解為小分子的寡肽組合物，可以大大提高其生物利用度。蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的。通常由10 100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物 叫多肽，它們的分子量低于10，0000乂0&1切11，道爾頓)，能透過半透膜。一般把由2 10 個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽)；10 100個氨基酸組成的肽稱為多肽；由100個 以上的氨基酸組成的肽稱為蛋白質(zhì)。在營養(yǎng)和化妝行業(yè)，燕窩營養(yǎng)制劑進行提取處理方法比較單一，主要是以蒸煮的 粗加工的方式。這些方法主要是去除燕窩里雜質(zhì)類，得到純度較好的蛋白或糖蛋白，通常還 保留幾乎完整的大分子形式。大分子形式的蛋白或糖蛋白生物利用度一般比較低，在營養(yǎng) 和化妝行業(yè)中是不利的。而多肽，特別是小分子肽有以下特點(1)不需消化，直接吸收。(2)吸收時不需消耗人體能量。(3)不增加人體胃腸功能負擔。(4)具優(yōu)先吸收特點。(5)吸收快速，比人體吸收大分子蛋白質(zhì)快129600秒鐘，較人體氨基酸快64800秒鐘。(6)以自身能量推動吸收。(7) 100% 被吸收。(8)在人體吸收功能降低時，人體能夠被動吸收。(9)具有載體作用，可將人體其它營養(yǎng)載在基體上，輸送到人體細胞組織。(10)具有極強的活性和生理功能多樣性。因此，人們嘗試通過各種水解方法把燕窩蛋白水解變成小的肽，以提高其生物利用度。專利CN92112013. 3，利用單一酶酶解或復合酶酶解方法對燕窩進行處理，到了一 種燕窩營養(yǎng)物。但該方法使用了高濃度的酶，成本很高，而且沒有獲得具有營養(yǎng)品和化妝品領(lǐng)域希望得到的低分子量的燕窩寡肽產(chǎn)品。[oo19] 專利(；N200510068015．2中利用無花果蛋白酶提取到的燕窩多肽。但該方法只使用了一種酶，效率很低，而且沒有公開工藝對燕窩多肽分子量分布的影響。
(；N2200710069423．9利用超聲波粉碎和利用堿性蛋白酶水解得到一種化妝品配料。但該方法使用了超聲波處理的手段，增加了工序和對設(shè)備的投入，而且得到的燕窩多肽分子量主要分布在2000以上，不能滿足營養(yǎng)品和化妝品領(lǐng)域的需要。
CN 2008 1006 1920．9利用酶解與膜過濾耦合技術(shù)連續(xù)制備窄分子量分布燕窩提取物的方法。但該方法使用了膜過濾耦合技術(shù)的手段，增加了工序和對設(shè)備的投入，而且得到的燕窩多肽分子量主要分布在1000以上，不能滿足營養(yǎng)品和化妝品領(lǐng)域的需要。
由于燕窩是雨燕分泌出的胃液與其絨羽的混合物，其具有特殊的理化性質(zhì)，對水解，特別是利用酶的水解產(chǎn)生難以掌握的影響，一般仍保留分子量超過10000的蛋白質(zhì)形式。現(xiàn)有技術(shù)都沒有能夠解決通過相對簡單和方便的方法和步驟獲得燕窩的肽鏈長度主要為二肽到五肽，分子量主要分布在180—1000[)之間的小分子納米寡肽。
另外，燕窩中的多糖1燕窩唾液酸1微量元素等也是其重要活性物質(zhì)，所以，營養(yǎng)和化妝行業(yè)中希望獲得的燕窩產(chǎn)品仍具有其特有的多糖1燕窩唾液酸1微量元素等。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種從燕窩中水解提取得到小分子寡肽的方法，其采用酶解與酸水解結(jié)合來水解燕窩，獲得含有小分子納米寡肽的組合物，其特征在于，所述納米寡肽的分子量主要分布在180—1000])之間，優(yōu)選的，所述組合物中分子量為180—1000])的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比超過約40％。在本發(fā)明的一個方面，所述組合物中分子量為180—10001)的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比是分子量為1000—2000])的多肽的高斯分布峰面積百分比的約5倍，以及是分子量為1000一10000[)的多肽的高斯分布峰面積百分比的約2倍。在本發(fā)明的又一個方面，所述組合物中納米寡肽的分子量具有如下的高斯分布分子量范圍比努“X 2200．nm， 數(shù)均分子量 重均分子量>工000024．941886720122工0000—50007．0770877380
5000—30004．09385839473000—20003．4l243324692000一工0008．07工33 1工384，1000—50017．74641668500一工8023．55301325<工80工1．14。
在本發(fā)明的一個方面，酶解所采用的酶選自胰蛋白酶1胃蛋白酶1木瓜蛋白酶1堿性蛋白酶1基質(zhì)金屬蛋白酶1中性蛋白酶和菠蘿蛋白酶，優(yōu)選為木瓜蛋白酶。
在本發(fā)明的一個方面，酸水解所采用的酸是是鹽酸1乙酸和硫酸，優(yōu)選鹽酸。
在本發(fā)明的一個方面，水解的順序是先酶解，然后酸水解。這種水解順序能夠減少很多工藝步驟，大大節(jié)省操作的時間，以及節(jié)約原料和中間材料。更重要的，采用以上順序，能夠更有效地得到需要的納米寡肽提取物，即納米寡肽的分子量主要分布在180—1000[)之間，優(yōu)選的，所述組合物中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比超過 約 40%。本發(fā)明提供的一種從燕窩中提取得到納米寡肽的方法包括以下步驟a)將新鮮燕窩清洗干凈，與去離子水按1 20 1 50混合，浸泡至燕窩吸水完全。b)將浸泡液升溫至90 95°C，保持10 15分鐘，使蛋白質(zhì)變性；c)把浸泡液降溫至50 60°C，按燕窩干重的重量 3%重量加入木瓜蛋白酶 (200萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至4 6，在50 60°C保溫4 6小時；d)用10%鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至1. 5 2，80 90°C保溫2 4小時；e)過濾得澄清微黃色液體；f)濃縮，進行噴霧干燥或冷凍干燥得到淡黃色粉末。在本發(fā)明的上述方法中，步驟a)中優(yōu)選水量為至少1 30，最好為1 35 1 40，步驟b)中優(yōu)選溫度為約95°C;時間為至少約12分鐘，最好為約15分鐘，步驟c)中 優(yōu)選添加酶的量為燕窩干重的2 2. 5重量％，最優(yōu)選為子實體干重的2. 5重量優(yōu)選溫 度為約55°C ；優(yōu)選pH5. 2 5. 5 ；維持時間為5小時。步驟d)中優(yōu)選pHl. 6. 1. 8 ；優(yōu)選 溫度為約88°C ；維持時間為3小時。本發(fā)明出乎意料地發(fā)現(xiàn)，由于燕窩溶于水后具有特殊 的理化性質(zhì)，對水解，特別是利用酶的水解產(chǎn)生難以掌握的影響，因此在酶解反應前的處理 非常重要。本發(fā)明的方法中的優(yōu)選技術(shù)方案中采用的使用酶的量和水解時間，以及酸的用 量和水解時間能夠更有效地得到需要的小分子寡肽提取物，即納米寡肽的分子量主要分布 在180-1000D之間，優(yōu)選的，所述組合物中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面 積百分比超過約40%。本發(fā)明提供了一種從燕窩水解提取得到的組合物，所述水解為采用酶解與酸水 解結(jié)合來水解燕窩，獲得含有小分子納米寡肽的組合物，其特征在于，所述組合物中含有 燕窩水解得到的小分子的納米寡肽，所述納米寡肽的分子量主要分布在180-1000D之間。 在本發(fā)明的一個方面，所述組合物中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積 百分比超過約40%，更優(yōu)選的，其中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百 分比是分子量為1000-2000D的多肽的高斯分布峰面積百分比的約5倍，以及是分子量為 1000-10000D的多肽的高斯分布峰面積百分比的約2倍。在本發(fā)明的又一個方面，其中所述
重均分子量
20122 7380 3947 2469 1384 668 325
ο 在本發(fā)明的一個方面，其中制備所述組合物采取的方法中，酶解使用的酶選自胰
組合物中肽的分子量具有如下的高斯分布
分子量范圍峰面積百分 比(％，λ 220nm)數(shù)均分子量>1000024.941886710000 50007.0770875000 30004.0938583000 20003.4124332000 10008.0713311000 50017.74641500 18023.55301<18011.14蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、中性蛋白酶和菠蘿蛋白酶， 優(yōu)選為木瓜蛋白酶。酸水解使用的酸選自鹽酸、乙酸和硫酸，優(yōu)選鹽酸。在本發(fā)明的又一個 方面，其中制備所述組合物采取的方法中，水解所采用是先用酶水解，再用酸水解的順序。本發(fā)明提供的從燕窩水解提取得到的組合物中還含有多糖類、燕窩唾液酸、微量 元素等。本發(fā)明從燕窩中水解得到小分子寡肽組合物，聚集了燕窩各種有效活性成分，以 其小分子的納米活性，在食品、保健品、化妝品領(lǐng)域應用前景廣闊。本發(fā)明提供了如前面所述的從燕窩水解提取得到的組合物在制備醫(yī)藥、食品、保 健品、化妝品中的應用。在本發(fā)明的一個方面，提供了一種化妝品組合物，其含有如前面所述的從燕窩水 解提取得到的組合物。在本發(fā)明的一個方面，提供了一種保健品組合物，其含有如前面所述的從燕窩水 解提取得到的組合物。在本發(fā)明的一個方面，提供了一種食品組合物，其含有如前面所述的從燕窩水解 提取得到的組合物。在本發(fā)明的一個方面，提供了一種藥物組合物，其含有如前面所述的從燕窩水解 提取得到的組合物。本發(fā)明提供的醫(yī)藥、食品、保健品、化妝品組合物的劑型包括為液體或粉末，即口 服液、膠囊、片劑、丸等。本發(fā)明可用于食品、保健品、藥品、化妝品的添加劑并可以進行工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明利用酶解與酸水解結(jié)合的方法成功地將燕窩水解成含有分子量主要分布 在180-1000D之間的納米寡肽的組合物。本發(fā)明提供的燕窩提取物中的多肽具有納米級活 性，從而深入開發(fā)燕窩制品，在營養(yǎng)與化妝品等領(lǐng)域有更好的應用前景。本發(fā)明得到的燕窩提取物中同時保留了其它活性成分，如多糖、燕窩唾液酸，鐵、 鋅、銅等微量元素。本發(fā)明提供的燕窩提取物不僅能提供人體生長發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì)， 而且具有獨特的生物學功能，能夠抗氧化、抗疲勞、抗衰老、抗癌、抗病毒，提高機體免疫力。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不應以此限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1將新鮮燕窩清洗干凈，與去離子水按1 40混合，浸泡至燕窩吸水完全。將浸泡液 升溫至95°C，保持15分鐘，使蛋白質(zhì)變性；保溫結(jié)束后，降溫至55°C，按燕窩干重的2. 3% 重量加入木瓜蛋白酶O00萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至5. 2，在55°C保溫5小時；保溫結(jié)束后用10% 鹽酸溶液調(diào)PHI. 8，保溫90°C水解3小時；保溫結(jié)束后液體過濾，將過濾液濃縮至原液體量 的1/8，進行真空冷凍干燥得到淡黃色低燕窩分子量寡肽粉末。根據(jù)本行業(yè)內(nèi)常用的高效液相分析方法檢測肽分子量的QB/T22492-2008標準對 提取物的分子量分布做測定，得到其高斯分布結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種從燕窩中水解提取得到納米寡肽的方法，其采用酶解與酸水解結(jié)合來水解燕 窩，獲得含有小分子納米寡肽的組合物，其特征在于，所述納米寡肽的分子量主要分布在 180-1000D之間，優(yōu)選的，所述組合物中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積 百分比超過約40%。
2.權(quán)利要求1的方法，其中酶解所采用的酶選自胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、堿 性蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、中性蛋白酶和菠蘿蛋白酶，優(yōu)選為木瓜蛋白酶。
3.權(quán)利要求1的方法，其中酸水解所采用的酸是鹽酸、乙酸和硫酸，優(yōu)選鹽酸。
4.權(quán)利要求1的方法，其中水解的順序是先酶解，然后酸水解。
5.權(quán)利要求1的方法，其中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百分 比是分子量為1000-2000D的多肽的高斯分布峰面積百分比的約5倍，以及是分子量為 1000-10000D的多肽的高斯分布峰面積百分比的約2倍，優(yōu)選的，所述組合物中肽的分子量 具有如下的高斯分布分子量范圍峰面積百分 比(％，λ 220nm)數(shù)均分子量重均分子量>1000024.94188672012210000 50007.07708773805000 30004.09385839473000 20003.41243324692000 10008.07133113841000 50017.74641668500 18023.55301325<18011.14O
6.權(quán)利要求1-5中任一項的方法，所述方法包括以下步驟a)將新鮮燕窩清洗干凈，與去離子水按1 20 1 50混合，浸泡至燕窩吸水完全。b)將浸泡液升溫至90 95°C，保持10 15分鐘，使蛋白質(zhì)變性；c)把浸泡液降溫至50 60°C，按燕窩干重的重量 3%重量加入木瓜蛋白酶QOO 萬u/g)，調(diào)節(jié)pH至4 6，在50 60°C保溫4 6小時；d)用10%鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至1.5 2，80 90°C保溫2 4小時；e)過濾得澄清微黃色液體；f)濃縮，進行噴霧干燥或冷凍干燥得到淡黃色粉末。
7.一種從燕窩水解提取得到的組合物，所述水解為采用酶解與酸水解結(jié)合來水解燕 窩，獲得含有小分子納米寡肽的組合物，其特征在于，所述組合物中含有燕窩水解得到的小 分子的納米寡肽，所述納米寡肽的分子量主要分布在180-1000D之間，優(yōu)選的，所述組合物 中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比超過40%，更優(yōu)選的，其中分 子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比是分子量為1000-2000D的多肽的 高斯分布峰面積百分比的約5倍，以及是分子量為1000-10000D的多肽的高斯分布峰面積 百分比的約2倍，最優(yōu)選的，其中所述組合物中肽的分子量具有如下的高斯分布分子量范圍峰面積百分 比(％，λ 220nm)數(shù)均分子量重均分子量>1000024.94188672012210000 50007.07708773805000 30004.09385839473000 20003.41243324692000 10008.07133113841000 50017.74641668500 18023.55301325<18011.14O
8.權(quán)利要求6的組合物，其中還含有其它活性成分，包括多糖、燕窩唾液酸、微量元素寸。
9.一種化妝品組合物，其含有權(quán)利要求7或8的從燕窩水解提取得到的組合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求7或8的從燕窩水解提取得到的組合物在制備醫(yī)藥、保健品、化妝品 中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從燕窩中水解提取得到小分子寡肽的方法，其采用酶解與酸水解結(jié)合來水解燕窩，獲得含有小分子納米寡肽的組合物，其特征在于，所述納米寡肽的分子量主要分布在180-1000D之間，優(yōu)選的，所述組合物中分子量為180-1000D的納米寡肽的高斯分布峰面積百分比超過40％。本發(fā)明提供的北蟲草寡肽提取物中同時保留了其它活性成分，包括多糖、燕窩唾液酸、微量元素等。本發(fā)明還涉及從燕窩中提取得到的含有納米寡肽的組合物在制備醫(yī)藥、保健品、化妝品中的應用。
文檔編號A61K8/64GK102102119SQ20101057150
公開日2011年6月22日 申請日期2010年12月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月3日
發(fā)明者杜以波, 胡如桂 申請人:北京中生奧普寡肽技術(shù)研究所