專(zhuān)利名稱(chēng)：一種防治慢性高原病的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治慢性高原病的非合成藥物，它是以中草藥為原料制備而成 的。
背景技術(shù)：
我國(guó)高原地區(qū)具有十分重要的戰(zhàn)略地位，也是西部大開(kāi)發(fā)戰(zhàn)略的主要戰(zhàn)場(chǎng)，蘊(yùn) 藏著豐富的各種自然資源。高原地區(qū)自然環(huán)境惡劣，嚴(yán)重影響人員健康、生活質(zhì)量和部 隊(duì)的戰(zhàn)斗力。至今，高原特殊的自然環(huán)境對(duì)長(zhǎng)期駐扎人員所產(chǎn)生的巨大影響始終存在。 慢性高原病是指長(zhǎng)期生活在海拔2500米以上高原的世居者或移居者，對(duì)高原低氧環(huán)境逐 漸失去習(xí)服而導(dǎo)致的臨床綜合征，主要表現(xiàn)為紅細(xì)胞增多，血紅蛋白增高。高原紅細(xì) 胞增多癥是慢性高原病四種亞型中的主要亞型，是一種嚴(yán)重影響高原久居人群健康的疾 病，我國(guó)青藏高原人群高原紅細(xì)胞增多癥患病率為2.5%。高原紅細(xì)胞增多癥多發(fā)生在海 拔3000米以上地區(qū)，多為移居者，少數(shù)世居者亦可罹患，多為慢性發(fā)病。隨海拔高度 增高患病率明顯增加，移居漢族的患病率明顯高于世居藏族，男性患病率較女性顯著為 高。作為我國(guó)戰(zhàn)略戰(zhàn)備的需要，必須克服高原紅細(xì)胞增多癥對(duì)人體造成的傷害，因此， 尋找防治高原紅細(xì)胞增多癥藥物是高原醫(yī)學(xué)研究的重要課題之一。高原紅細(xì)胞增多癥發(fā)病與低氧時(shí)紅細(xì)胞生成素的水平增高有密切的關(guān)系，低氧 時(shí)機(jī)體血漿紅細(xì)胞生成素水平增高，刺激骨髓紅系增生是高原紅細(xì)胞增多癥的發(fā)病基 礎(chǔ)。高原紅細(xì)胞增多癥具有紅細(xì)胞、血紅蛋白和血細(xì)胞比容增高，導(dǎo)致血液粘滯度顯著 增加，具有濃粘聚凝的特點(diǎn)，并出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀和體征，從而影響到組織器官充血、血 流淤滯及低氧性損害、微循環(huán)障礙及增加心臟后負(fù)荷等一系列病理改變。高原環(huán)境低氧 引起機(jī)體低氧血癥，通氣驅(qū)動(dòng)不足、夜間睡眠周期型呼吸或呼吸暫停、肺泡換氣功能障 礙、肺動(dòng)脈高壓及血液流變學(xué)異常等因素均加重已出現(xiàn)的低氧血癥，因此，改善低氧血 癥是治療高原紅細(xì)胞增多癥的關(guān)鍵。血液流變學(xué)異常是高原紅細(xì)胞增多癥發(fā)病的重要環(huán) 節(jié)，主要解決高原紅細(xì)胞增多癥患者血液濃粘聚凝的問(wèn)題以改善微循環(huán)也有利于高原紅 細(xì)胞增多癥的治療。由于目前對(duì)高原紅細(xì)胞增多癥預(yù)防比較困難，迄今尚無(wú)滿(mǎn)意的治療方法。在藥 物治療上，至今仍無(wú)重大突破。但是，通過(guò)長(zhǎng)期的研究證明，下列藥物僅能部分地緩解 慢性高原病癥狀，如乙酰唑胺、抗凝藥、內(nèi)皮素受體拮抗劑、吸入型一氧化氮、前列環(huán) 素、擴(kuò)血管藥物、鈣拮抗劑、磷酸二酯酶抑制劑；中草藥如紅景天、黨參、人參、銀 杏葉和藏藥等。僅有文獻(xiàn)表明復(fù)方天棘膠囊、利舒康膠囊等中藥復(fù)方制劑能部分地緩解 高原紅細(xì)胞增多癥癥狀。復(fù)方天棘膠囊由紅景天、枸杞和沙棘組成，能明顯改善高原紅 細(xì)胞增多癥患者生活質(zhì)量，降低血紅蛋白、紅細(xì)胞和紅細(xì)胞壓積，升高血氧分壓和血氧 飽和度，調(diào)節(jié)和改善患者體內(nèi)氧自由基代謝失衡，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其有抗疲勞、抗缺氧和 提高機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力。鑒于高原紅細(xì)胞增多癥患者血液濃粘聚凝的特點(diǎn)，除改善缺 氧環(huán)境外，抗凝治療常作為主要手段之一。但僅僅采用具有活血抗凝功效的西藥，只能暫時(shí)緩解癥狀，是治標(biāo)不治本的策略。一些能頑強(qiáng)生長(zhǎng)的特高海拔植物，說(shuō)明它具有在嚴(yán)酷的極度缺氧、寒冷、干燥 和強(qiáng)輻射等因素構(gòu)成的高原環(huán)境下生長(zhǎng)、繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。生長(zhǎng)于高原的紅景天屬和沙 棘屬植物具備這類(lèi)“物質(zhì)基礎(chǔ)”，對(duì)其深入研究就可能成為治療高原紅細(xì)胞增多癥的有 效藥物。沙棘為胡頹子科沙棘屬的灌木或小喬木，廣泛分布 于海拔2500米以上地區(qū)，抗旱和耐寒性極強(qiáng)。沙棘性溫、味酸澀，入肝、胃、大腸經(jīng)， 有活血化瘀、化痰寬胸、補(bǔ)脾健胃等功能。沙棘是我國(guó)古代藏醫(yī)、蒙醫(yī)和中醫(yī)的常用藥 物，早在1300年前，我國(guó)唐代的《月王藥珍》、《四部醫(yī)典》及清代的《晶珠本草》 等均記載了沙棘具有祛痰、利肺、養(yǎng)胃、活血、化瘀等醫(yī)藥用途，1977年衛(wèi)生部首次將 沙棘正式列入《中國(guó)藥典》，此后均列入歷版藥典。沙棘葉富含黃酮類(lèi)、單寧類(lèi)和三 萜類(lèi)化合物，主要生物活性成分為異鼠李素、槲角素等黃酮類(lèi)化合物，可提高血液循環(huán) 能力。沙棘葉醇提取物對(duì)低氧誘導(dǎo)的氧化損害有強(qiáng)的抗氧化和細(xì)胞保護(hù)活性，是一種較 強(qiáng)的抗氧化劑，具有明顯的抗應(yīng)激功能，還提高小鼠的耐寒冷、耐常壓缺氧和抗疲勞能 力，并有明顯的抗輻射作用。沙棘葉提取物對(duì)淋巴細(xì)胞氧化損傷的細(xì)胞保護(hù)、抗氧化、 免疫調(diào)節(jié)活性明顯強(qiáng)于沙棘果提取物，且沙棘葉中總黃酮含量大于果實(shí)。沙棘總黃酮對(duì) 活性氧自由基清除作用明顯強(qiáng)于維生素Ε。為了進(jìn)一步闡明沙棘總黃酮的藥理作用，本發(fā)明對(duì)沙棘葉進(jìn)行提取純化，并對(duì) 其防治慢性高原病進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)沙棘總黃酮具有明顯的提高耐缺氧能力、抗疲 勞、耐寒冷等功效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出沙棘葉提取物沙棘總黃酮在制備防治慢性高原病藥物中 的應(yīng)用。通過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)證明沙棘總黃酮提取物具有提高耐缺氧能力、抗疲勞、耐寒冷等 新的醫(yī)藥用途，可特別用于制備防治慢性高原病藥物。其中沙棘葉提取物沙棘總黃酮的制備方法如下
(1)醇提將沙棘葉干燥后粉碎，8-20倍量50%-95%乙醇浸泡Ih后，回流提取1_3 次，控制回流溫度60°C-100°C，每次0.5-2 h，合并濾液，過(guò)濾；
(2)濃縮利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，提取液濃縮到原來(lái)體積四分之一至二分之

(3)萃取用石油醚萃取濃縮提取液至石油醚相無(wú)色，再用水飽和正丁醇萃取，萃 取至鹽酸-鎂粉檢測(cè)無(wú)色；
(4)純化濃縮萃取液得沙棘總黃酮粗提取物，將粗提物用適量水稀釋?zhuān)?1500-2000daltOn的膜進(jìn)行過(guò)濾，其濾液再經(jīng)200daltOn膜過(guò)濾，再經(jīng)減壓干燥得沙棘總黃 酮粉末。利用沙棘總黃酮制備防治慢性高原病的藥物，藥物中包含有提取物沙棘總黃酮 1%-99.5%，其余為制備膠囊、軟膠囊、散劑、顆粒劑、片劑或丸劑的輔料
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過(guò)多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明 中藥沙棘總黃酮具有提高耐缺氧能 力、抗疲勞、耐寒冷等功效。本發(fā)明為慢性高原病提供一種非合成防治藥物，其功能明確、價(jià)格低廉、無(wú)毒副作用，拓寬了沙棘葉防治疾病的范圍。藥效實(shí)驗(yàn)例沙棘總黃酮抗缺氧、抗疲勞、耐寒冷的實(shí)驗(yàn)研究。本系列實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)本發(fā)明的藥物進(jìn)行初步藥效學(xué)研究，觀察沙棘總黃酮的抗缺 氧、抗疲勞、耐寒冷的功效。實(shí)驗(yàn)材料
1.1動(dòng)物清潔級(jí)KM小鼠，體重18-22 g，清潔級(jí) 雄性Wistar大鼠，體重180-220 g，由第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。自由飲水?dāng)z食，清潔級(jí)動(dòng)物房適 應(yīng)性飼養(yǎng)1周，溫度(20 士 2)°C，濕度(60 士 5)%，12 h光照周期。1.2試劑沙棘葉，實(shí)驗(yàn)用沙棘葉采自青海省西寧市地區(qū)，經(jīng)第二附屬醫(yī)院國(guó)家 藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)張?jiān)娖礁敝魅嗡帋熻b定為胡頹子科沙棘屬植物沙棘，藥用部位為沙棘 葉。葉片采下后陰干儲(chǔ)藏備用，使用前粉碎過(guò)40目篩備用。相關(guān)試劑盒均為南京建成 生物工程研究所產(chǎn)品。其余試劑均為化學(xué)純級(jí)試劑。實(shí)驗(yàn)方法
2.1沙棘總黃酮的制備
(1)醇提將沙棘葉干燥后粉碎，8-20倍量50%-95%乙醇浸泡Ih后，回流提取1_3 次，控制回流溫度60°C-100°C，每次0.5-2 h，合并濾液，過(guò)濾；
(2)濃縮利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，提取液濃縮到原來(lái)體積四分之一至二分之

(3)萃取用石油醚萃取至石油醚相無(wú)色，再用水飽和正丁醇萃取，萃取至鹽酸-鎂 粉檢測(cè)無(wú)色；
(4)純化濃縮萃取液得沙棘總黃酮粗提取物，將粗提物用適量水稀釋?zhuān)?1500-2000daltOn的膜進(jìn)行過(guò)濾，其濾液再經(jīng)200daltOn膜過(guò)濾，再經(jīng)減壓干燥得沙棘總黃 酮粉末。2.2沙棘總黃酮的
2.2.1小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)
健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18-22 g，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，隨機(jī)分成每組10 只動(dòng)物，正常攝食飲水。藥物治療組每天分別灌胃高中低劑量沙棘總黃酮；對(duì)照組給予 等量的蒸餾水，每只小鼠IOg體重每天灌胃0.2 ml，連續(xù)灌胃7天。其中復(fù)方天棘膠囊 按0.61 g/kg體重劑量給藥。末次給藥1 h后，將小鼠放入盛有15 g鈉石灰的250 ml的 磨口瓶?jī)?nèi)(每瓶1只)用凡士林涂瓶口、蓋嚴(yán)，使之不漏氣，外用保鮮膜再次封住瓶口， 從瓶蓋封嚴(yán)即刻計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠因缺氧而窒息性死亡的時(shí)間。2.2.2小鼠亞硝酸鹽中毒缺氧實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)分組和給藥同小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7天，末次給藥Ih后，各組動(dòng)物按 230 mg/kg劑量逐只腹腔注射亞硝酸鈉，秒表立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄每只小 鼠自注射開(kāi)始至停止呼吸的時(shí)間，作為小鼠中毒缺氧的時(shí)間。2.3小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)分組和給藥同小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7天。實(shí)驗(yàn)時(shí)，將爬桿架置于水溫 15°C、深約10 cm的水盆中。末次給藥30 min后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，將小鼠放在有機(jī)玻璃棒上， 使肌肉處于靜力緊張狀態(tài)，記錄小鼠由于肌肉疲勞從有機(jī)玻璃棒上跌落下來(lái)的時(shí)間，第3次落水時(shí)終止實(shí)驗(yàn)，累計(jì)3次的時(shí)間作為爬桿時(shí)間。2.4小鼠游泳試驗(yàn)
2.4.1常溫游泳實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)分組和給藥同小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7天，末次給 藥Ih后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在溫度25-30°C的水中游泳90min，游泳結(jié)束后摘眼球采血，離心取 血清，測(cè)定小鼠血液乳酸含量、乳酸脫氫酶活性及血液尿素氮濃度，取肝臟組織用蒽酮 法測(cè)定肝糖原含量。2.4.2負(fù)重游泳試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)分組和給藥同小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7天。置 小鼠在游泳箱中游泳，水深30 cm，水溫25士0.5°C，正式游泳前動(dòng)物先訓(xùn)練2次，最后1 次灌胃30 min后開(kāi)始鼠尾根部負(fù)荷5%體質(zhì)量的鉛皮(5A保險(xiǎn)絲)。記錄小鼠自游泳開(kāi) 始至死亡的時(shí)間(力竭沉入水中30 s不起)，作為力竭性游泳時(shí)間。2.5耐寒冷實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)分組和給藥同小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)，連續(xù)灌胃7天，末次給藥Ih后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將 小鼠分別以組為單位分裝于鐵絲籠中，放置于-20°C的低溫冰柜中，記錄小鼠存活時(shí)間。2.6統(tǒng)計(jì)分析
所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(H)表示，應(yīng)用SPSS 13.0
統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，多重比較用LSD法。 結(jié)果以戶(hù)<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果
3.1沙棘總黃酮的小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn) 3.1.1小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)
與正常對(duì)照組小鼠的密閉缺氧死亡時(shí)間比較，高劑量沙棘總黃酮組和陽(yáng)性對(duì)照組小 鼠的密閉缺氧死亡時(shí)間明顯延長(zhǎng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明沙棘總黃酮與復(fù)方天棘膠囊一樣 具有抗缺氧作用。表1每組雌雄各5只小鼠密閉缺氧死亡時(shí)間(min) (/7=10, ts)
權(quán)利要求
1.沙棘葉提取物沙棘總黃酮在制備防治慢性高原紅細(xì)胞增多癥等慢性高原病藥物中 的應(yīng)用。
2.一種制備權(quán)利要求1所述的沙棘葉提取物的方法，所述方法包括以下步驟(1)醇提將沙棘葉干燥后粉碎，8-20倍量50%-95%乙醇浸泡Ih后，回流提取1_3 次，控制回流溫度60°C-100°C，每次0.5-2 h，合并濾液，過(guò)濾；(2)濃縮減壓濃縮，提取液濃縮到原來(lái)體積四分之一至二分之一；(3)萃取用石油醚萃取至石油醚相無(wú)色，再用水飽和正丁醇萃取，萃取至鹽酸-鎂 粉檢測(cè)無(wú)色；(4)純化濃縮萃取液得沙棘總黃酮粗提取物，將粗提物用水稀釋?zhuān)?1500-2000daltOn的膜進(jìn)行過(guò)濾，其濾液再經(jīng)200daltOn膜過(guò)濾，再經(jīng)減壓干燥得沙棘總黃 酮粉末。
3.—種防治慢性高原病的藥物，所述藥物中包含有提取物沙棘總黃酮1%_99.5%，其 余為制備膠囊、軟膠囊、散劑、顆粒劑、片劑或丸劑的輔料。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種口服防治慢性高原病的沙棘葉單方中藥，它是從高原植物沙棘葉中經(jīng)乙醇回流提取、減壓濃縮、萃取、純化、干燥獲得的有效部位，作為藥品、食品或保健品使用。本發(fā)明還公開(kāi)了該藥物的制備方法，制備而得的有效部位經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，具有提高耐缺氧能力、抗疲勞、耐寒冷等功效，可用于防治高原紅細(xì)胞增多癥等慢性高原病。為防治慢性高原病患者提供了一種純天然藥物。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102008520SQ20101057565
公開(kāi)日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2010年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者周世文, 周吉銀 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院