專利名稱：3,3`-二吲哚甲烷在炎癥性腸病治療中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及3，二吲哚甲烷在治療炎癥性腸病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
炎癥性腸病是常見(jiàn)的消化道疾病，是以主要累及直腸、結(jié)腸的慢性非特異系炎癥， 其癥狀主要包括腹痛、腹瀉、血便，而且病程遷延不愈，甚至有癌變可能。針對(duì)炎癥性腸病治療過(guò)去主要集中在水楊酸制劑、糖皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑等。但是傳統(tǒng)的治療存在靶點(diǎn)尚不明確，副作用較大。停藥后易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)。雖然炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但是近年來(lái)的研究表明自由基在腸炎的發(fā)生過(guò)程中起著重要的作用。自由基主要包括超氧陰離子自由基(02‘_)、羥自由基(0H‘_)、過(guò)氧化氫(H2O2)等。在炎癥性腸病發(fā)生過(guò)程中，炎癥部位的自由基含量大幅上調(diào)，其危害一方面可以破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，引發(fā)細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，產(chǎn)生分解產(chǎn)物丙二醛(MDA)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性和交聯(lián)，直接造成腸道功能失調(diào)和組織損傷。另外一方面，自由基還可以通過(guò)激活轉(zhuǎn)錄因子NF-κ β，誘導(dǎo)炎癥相關(guān)基因表達(dá)，使得炎癥因子水平升高，細(xì)胞間黏附分子表達(dá)上升，導(dǎo)致活化淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞由血管向炎癥部位遷移，進(jìn)一步加重炎癥性腸病患者的腸道炎癥反應(yīng)。為此以自由基為靶點(diǎn)進(jìn)行治療腸炎可以有效減輕炎癥發(fā)作程度。3，3’-二吲哚甲烷 (DIM)及其母體化合物吲哚-3-甲醇(I3C)最早被報(bào)道具有抗癌作用。吲哚-3-甲醇(I3C) 在體內(nèi)胃酸環(huán)境中很不穩(wěn)定，可發(fā)生縮合反應(yīng)形成低聚物3，3’ - 二吲哚甲烷。3，3’ - 二吲哚甲烷雖有文獻(xiàn)報(bào)道其可以保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷，但尚未有其用于治療炎癥性腸病的相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問(wèn)題就是公開(kāi)了一類可以有效保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷，從而阻斷炎癥性腸病發(fā)作的小分子藥物，具體涉及到3，3’ - 二吲哚甲烷(DIM)及其水溶液注射制劑以及母體化合物吲哚-3-甲醇(I3C)在炎癥性腸病中的治療。本發(fā)明所涉及的3，3’-二吲哚甲烷以及母體化合物吲哚-3-甲醇為商業(yè)購(gòu)買所得 (南京銳馬精細(xì)化工有限公司)。本發(fā)明所涉及的3，3’ - 二吲哚甲烷水溶液注射制劑是利用環(huán)糊精水溶液配制所得，具體方法參見(jiàn)發(fā)明專利“二吲哚甲烷及其衍生物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用”張峻峰，董磊，夏蘇華，陳江寧，申請(qǐng)?zhí)?00810243556. 8。本發(fā)明所述的3，3’-二吲哚甲烷以及母體化合物吲哚-3-甲醇在炎癥性腸病治療中的應(yīng)用
1.使用三硝基苯磺酸(TNBS)的50%乙醇溶液于BALB/C小鼠灌腸，建立TNBS型炎癥性腸病模型；
2.將3，3’- 二吲哚甲烷以及吲哚-3-甲醇溶解到玉米油中，在建立TNBS型炎癥性腸病模型同時(shí)進(jìn)行灌胃，對(duì)炎癥性腸病進(jìn)行治療；
3.治療后每天測(cè)定小鼠體重，并于治療3天后處死小鼠，取病變結(jié)腸拍照，分別做組織學(xué)損傷評(píng)分和MPO值測(cè)定。本發(fā)明所述的3，3’ - 二吲哚甲烷的水溶液注射制劑在炎癥性腸病治療中的應(yīng)用
1.使用三硝基苯磺酸(TNBS)的50%乙醇溶液于BALB/C小鼠灌腸，建立TNBS型炎癥性腸病模型；
2.將配制好的3，3’-二吲哚甲烷的水溶液注射制劑在建立TNBS型炎癥性腸病模型同時(shí)進(jìn)行腹腔注射，對(duì)炎癥性腸病進(jìn)行治療；
3.治療后每天測(cè)定小鼠體重，并于治療3天后處死小鼠，取病變結(jié)腸拍照，分別做組織學(xué)損傷評(píng)分和MPO值測(cè)定。本發(fā)明的有益效果是提供一種新的治療炎癥性腸病的方法，通過(guò)給予3，3’ - 二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷，從而阻斷和抑制腸炎的發(fā)作。同時(shí)，本發(fā)明所使用的小分子藥物易于獲取，價(jià)格低廉，性質(zhì)穩(wěn)定，便于保存和運(yùn)輸。


圖1不同劑量的I3C 口服治療TNBS腸炎模型三天的組織學(xué)評(píng)分。圖2 口服I3C治療TNBS腸炎模型三天的結(jié)腸MPO值測(cè)定結(jié)果。圖3不同劑量的DIM 口服治療TNBS腸炎模型三天的組織學(xué)評(píng)分。圖4 口服DIM治療TNBS腸炎模型三天的結(jié)腸MPO值測(cè)定結(jié)果。圖5 DIM水溶液注射制劑治療TNBS腸炎模型三天的組織學(xué)評(píng)分。圖6腹腔注射DIM治療TNBS腸炎模型三天的結(jié)腸MPO值測(cè)定結(jié)果。
具體實(shí)施例方式1. 口服I3C對(duì)TNBS導(dǎo)致的小鼠腸炎模型的治療
將I3C用玉米油溶解，配成2. Omg/ml儲(chǔ)液備用。按照文獻(xiàn)報(bào)道方法建立小鼠TNBS腸炎模型，即取雌性BALB/C小鼠30只，體重16-1 ，將TNBS溶液(溶于50%乙醇)0. Iml灌腸，并于建模當(dāng)日，將小鼠隨機(jī)分成三組即I3C治療低劑量組、I3C治療高劑量組和陰性對(duì)照組，分別給予處理。I3C治療低劑量組按％ig/kg灌胃給I3C，I3C治療高劑量組按20mg/ kg灌胃給I3C，對(duì)照組給相應(yīng)量的玉米油，每天給藥一次。每天稱量老鼠體重。模型建立3 天后處死，取病變結(jié)腸組織，做組織學(xué)損傷評(píng)分和MPO值測(cè)定。(1)組織學(xué)損傷評(píng)分
取部分結(jié)腸組織固定，進(jìn)行HE染色，做病理切片，顯微鏡下觀察，進(jìn)行組織學(xué)損傷評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下
表一結(jié)腸炎組織學(xué)損傷標(biāo)準(zhǔn)
權(quán)利要求
1. 3，二吲哚甲烷及吲哚-3-甲醇在制備治療炎癥性腸病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇在治療炎癥性腸病中的應(yīng)用。所述二吲哚甲烷和吲哚-3-甲醇可以有效保護(hù)機(jī)體免受自由基損傷，阻止自由基導(dǎo)致的黏附分子的表達(dá)增加,從而有效減輕炎癥性腸病的癥狀。所述吲哚-3-甲醇和二吲哚甲烷在驗(yàn)證性腸病的動(dòng)物模型中取得很好的療效，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K31/404GK102526030SQ201010576940
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月7日
發(fā)明者張峻峰, 董磊, 黃振 申請(qǐng)人:南京大學(xué)