專利名稱：一種從莼菜老葉中提取分離體內(nèi)堿溶性多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從莼菜老葉中提取分離體內(nèi)堿 溶性多糖的方法。
背景技術(shù)：
莼菜，一種原始花被亞綱睡蓮科，莼菜屬多年生淡水水生草本植物 [Braseniaschreberi] 0又名馬蹄草、湖菜、水葵、露葵。該植物主要分布于浙江、江蘇兩省 太湖流域，湖北省西部利川市境內(nèi)。4月下旬至10月下旬采摘帶有卷葉的嫩稍。民間對莼 菜的傳統(tǒng)應(yīng)用歷史和現(xiàn)代藥理研究表明莼菜多糖通常具有降膽固醇、降血糖、降血脂、抗氧 化、抗炎癥、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等功效，莼菜嫩葉體內(nèi)多糖有一定的還原能力，同時(shí)對超氧 陰離子自由基和羥自由基也具有一定的清除能力。目前關(guān)于莼菜多糖的提取、分離方法研 究主要集中在莼菜嫩葉體外多糖的提取、分離。相關(guān)的專利文獻(xiàn)有莼菜的凝膠技術(shù)(CN 03113443. 2)，莼菜多糖粘膠生產(chǎn)菌及莼菜多糖粘膠生產(chǎn)工藝(CN :94112514. 9)；莼菜多糖 方面的相關(guān)文獻(xiàn)①莼菜多糖的提取、分離及某些生物活性的研究(王淑如等，中國藥科大 學(xué)學(xué)報(bào)，1987，No. 3)；②莼菜多糖的提取及其功能特性的研究(王倩等，江南大學(xué)，2009)；
③莼菜體外膠質(zhì)分離及組成成分的初步分析(周毅峰，等，食品與發(fā)酵工業(yè)，2005，No.4)；
④莼菜多糖提取工藝研究中的頂光譜分析(顧小曼等，武漢化工學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，No.1)；⑤ 莼菜水溶性多糖提取工藝優(yōu)化研究(唐巧玉等，北方園藝，2008，No. 3)；⑥莼菜多糖提取工 藝中的^、UV光譜分析(余世鑫等，湖北化工，1996，No.3)；⑦莼菜多糖的提取分離工藝技 術(shù)(今日科技，1999，NO. 1)；⑧分光光度法測定莼菜多糖中的葡萄糖醛酸(余世鑫等，分析 化學(xué)，1997，No. 9)。以莼菜嫩葉為原料進(jìn)行莼菜體外多糖提取、分離，其資源利用率低，附加值不高， 勢必影響綜合開發(fā)利用莼菜資源的經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從莼菜加工后剩下的老葉和10月下旬田間不再利用 的莼菜老葉中提取分離體內(nèi)多糖的方法。本發(fā)明一種從莼菜老葉中提取分離體內(nèi)堿溶性多糖的方法，其特征在于包括以下 步驟a.原料處理新鮮莼菜老葉干燥、粉碎過100目篩；b.浸提莼菜原料粉末以重量1 20料液比，經(jīng)100°C熱水提取60min，趁熱在 4000rpm下離心15min，對濾渣重復(fù)提取1次，濾渣以重量1 20料液比，經(jīng)0. 02M NaOH溶 液，溫度80°C，提取60min，4000rpm離心15min，收集上清液，對濾渣重復(fù)提取1次，合并兩 次上清液；c.濃縮分離將上清液在50-60°C下減壓濃縮至原體積的1/3-1/5，再調(diào)節(jié)pH為7 左右，然后加入3倍體積的95 %乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置8-24h后，4000rpm離心15min，收集沉淀；d.洗滌沉淀經(jīng)95%乙醇洗滌后，得莼菜堿溶性粗多糖；e.純化粗多糖加20倍重量的0. 02M NaOH稀堿溶液復(fù)溶；用sevag法脫蛋白；再 調(diào)節(jié)多糖溶液PH至pH8，于50°C下滴加等體積的20%雙氧水脫色后，加入3倍體積的95% 乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加20倍重量的0. 02M NaOH溶液復(fù)溶沉淀，得多糖溶液， 用多糖溶液3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，用20倍重量的0. 02M NaOH溶 液溶解沉淀，調(diào)節(jié)PH為7. 0左右，然后邊攪拌邊噴霧干燥，得莼菜堿溶性多糖。本發(fā)明針對從莼菜加工后剩下的老葉和10月下旬田間不再利用的莼菜老葉，采 用熱水浸提后，再用稀堿溶液提取莼菜老葉體內(nèi)堿溶性多糖，經(jīng)多次醇沉、脫蛋白、脫色、噴 霧干燥，獲得莼菜堿溶性多糖，該方法成本低，提取得率較高，環(huán)保，適合工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)， 可實(shí)現(xiàn)莼菜資源的綜合開發(fā)利用和經(jīng)濟(jì)效益的提高。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1原料處理新鮮莼菜老葉干燥、粉碎過100目篩，備用；堿溶性多糖浸提原料粉末03kg，加IOL蒸餾水，加熱至100°C，提取60min，趁 熱4000rpm離心15min，對濾渣加蒸餾水10L，加熱至100°C下重復(fù)提取1次，濾渣加入IOL 0. 02M NaOH溶液，加熱至80°C，提取60min，4000rpm離心15min，收集上清液，對濾渣重復(fù)提 取1次，合并兩次上清液；濃縮分離將上清液在60°C下減壓濃縮至原體積的1/3，再調(diào)節(jié)pH為7，然后加入 3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，4000rpm離心15min，收集沉淀；純化沉淀經(jīng)95%乙醇洗滌后，得莼菜堿溶性粗多糖，加IOOOml 0. 02M NaOH溶液 復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液G氯仿1正丁醇， ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液pH至ρΗ8，于50°C下滴加等體積的20%雙氧水脫色后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加IOOOml 0. 02M NaOH溶液復(fù)溶后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，加IOOOml 0. 02M NaOH溶液溶解，調(diào) 節(jié)PH為7. 0左右，然后邊攪拌邊噴霧干燥，得初步純化的莼菜堿溶性多糖，產(chǎn)品得率約11 % (葡萄糖醛酸作標(biāo)樣，咔唑法測定)。實(shí)施例2原料處理新鮮莼菜老葉干燥、粉碎過100目篩，備用；堿溶性多糖浸提原料粉末1kg，加IOL蒸餾水，加熱至100°C，提取60min，趁熱 4000rpm離心15min，對濾渣加蒸餾水10L，加熱至100°C下重復(fù)提取1次，濾渣中加入20L 0. 02M NaOH溶液，加熱至80°C，提取60min，4000rpm離心15min，收集上清液，對濾渣重復(fù)提 取1次，合并兩次上清液；濃縮分離將上清液在60°C下減壓濃縮至原體積的1/3，再調(diào)節(jié)pH為7，然后加入 3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，4000rpm離心15min，收集沉淀；純化沉淀經(jīng)95%乙醇洗滌后，得莼菜堿溶性粗多糖，加2000ml 0. 02M NaOH溶液 復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液(4氯仿1正丁醇，ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液ρΗ至ρΗ8，于50°C下滴加等體積的20%雙氧水脫色后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加2000ml 0. 02M NaOH溶液復(fù)溶后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，加2000ml 0. 02M NaOH溶液溶解，調(diào) 節(jié)PH為7. 0左右，然后邊攪拌邊噴霧干燥，得初步純化的莼菜堿溶性多糖，產(chǎn)品得率約11 % (葡萄糖醛酸作標(biāo)樣，咔唑法測定)。實(shí)施例3原料處理新鮮莼菜老葉干燥、粉碎過100目篩，備用；堿溶性多糖浸提原料粉末^ig，加IOL蒸餾水，加熱至100°C，提取60min，趁熱 4000rpm離心15min，對濾渣加蒸餾水10L，加熱至100°C下重復(fù)提取1次，濾渣向水提后的 莼菜殘?jiān)屑尤?0L 0. 02M NaOH溶液，加熱至80°C，提取60min，4000rpm離心15min，收集
上清液，對濾渣重復(fù)提取1次，合并兩次上清液；濃縮分離將上清液在60°C下減壓濃縮至原體積的1/3，再調(diào)節(jié)pH為7，然后加入 3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，4000rpm離心15min，收集沉淀；純化沉淀經(jīng)95%乙醇洗滌后，得莼菜堿溶性粗多糖，加4000ml 0. 02M NaOH溶液 復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液G氯仿1正丁醇， ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液pH至ρΗ8，于50°C下滴加等體積的20%雙氧水脫色后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加4000ml 0. 02M NaOH溶液復(fù)溶后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，加4000ml 0. 02M NaOH溶液溶解，調(diào) 節(jié)PH為7. 0左右，然后邊攪拌邊噴霧干燥，得初步純化的莼菜堿溶性多糖，產(chǎn)品得率約11 % (葡萄糖醛酸作標(biāo)樣，咔唑法測定)。
權(quán)利要求
1. 一種從莼菜老葉中提取分離體內(nèi)堿溶性多糖的方法，其特征在于包括以下步驟a.原料處理新鮮莼菜老葉干燥、粉碎過100目篩；b.浸提莼菜原料粉末以重量1 20料液比，經(jīng)100°C熱水提取60min，趁熱在4000rpm 下離心15min，對濾渣重復(fù)提取1次，濾渣以重量1 20料液比，經(jīng)0. 02M NaOH溶液，溫度 80°C，提取60min，4000rpm離心15min，收集上清液，對濾渣重復(fù)提取1次，合并兩次上清 液；c.濃縮分離將上清液在50-60°C下減壓濃縮至原體積的1/3-1/5，再調(diào)節(jié)pH為7左 右，然后加入3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置8-24h后，4000rpm離心15min，收集沉淀；d.洗滌沉淀經(jīng)95%乙醇洗滌后，得莼菜堿溶性粗多糖；e.純化粗多糖加20倍重量的0.02M NaOH稀堿溶液復(fù)溶；用sevag法脫蛋白；再調(diào)節(jié) 多糖溶液PH至pH8，于50°C下滴加等體積的20%雙氧水脫色后，加入3倍體積的95%乙醇 沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加20倍重量的0. 02M NaOH溶液復(fù)溶沉淀，得多糖溶液，用多 糖溶液3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，用20倍重量的0. 02M NaOH溶液溶 解沉淀，調(diào)節(jié)pH為7. 0左右，然后邊攪拌邊噴霧干燥，得莼菜堿溶性多糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從莼菜老葉中提取分離體內(nèi)堿溶性多糖的方法；本發(fā)明主要解決莼菜嫩葉加工后剩下的老葉和10月下旬田間不再利用的莼菜老葉體內(nèi)多糖提取、分離技術(shù)。本發(fā)明包括以下技術(shù)步驟將新鮮莼菜老葉干燥粉碎；熱水提取、水提后的殘?jiān)?，用稀堿溶液提取、離心收集上清液；將上清液減壓濃縮，醇沉，離心收集沉淀；沉淀經(jīng)純化，噴霧干燥，得莼菜老葉體內(nèi)堿溶性多糖。該方法成本低，產(chǎn)品得率較高，環(huán)保，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61P39/06GK102086236SQ20101058148
公開日2011年6月8日 申請日期2010年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月6日
發(fā)明者劉長懷, 周大寨, 周毅峰, 唐巧玉, 羅袓友, 艾訓(xùn)儒, 高明茂 申請人:湖北民族學(xué)院