專利名稱：用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物及其制備方法與造模方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種造模藥物組合物及其制備方法與造模方法，尤其是一種用于骨關(guān) 節(jié)炎造模的藥物組合物及其制備方法與造模方法。
背景技術(shù)：
目前常用的骨關(guān)節(jié)炎的造模方法均不理想，大多為手術(shù)造模，主要缺點(diǎn)是該方法 操作復(fù)雜且創(chuàng)傷大，手術(shù)造成的治病因素(切斷韌帶、半月板)始終存在，不易觀察出藥物 的療效；關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射化合物的方法主要缺點(diǎn)，其一是需要反復(fù)3次注射才能成模，成模時(shí) 間長且不確定。其二是用生理鹽水配制后，藥液具有流動(dòng)性，進(jìn)入關(guān)節(jié)后不能黏附于關(guān)節(jié)面 只破壞軟骨組織，而易于擴(kuò)散到關(guān)節(jié)囊壁，造成對關(guān)節(jié)周圍軟組織的嚴(yán)重?fù)p傷，引起急性炎 癥及明顯腫脹，給再次注射造成找位困難，影響劑量的準(zhǔn)確性和病理損傷的一致性，同時(shí)死 亡率高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物 的制備方法。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問題在于提供上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物 的造模方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是—種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3-5%、泊洛沙姆30-35%、其余 為磷酸緩沖液。優(yōu)選的，上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，其中按其重量體積比計(jì)濃度 (g/100ml)為木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余為磷酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入30_35g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入3_5g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置3_5°C冰箱中預(yù)冷20-40分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 05-0. 1ml，將其注入造模動(dòng)物膝關(guān)節(jié) 腔；(3)將造模動(dòng)物置于50_55°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。優(yōu)選的，上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置4°C冰箱中預(yù)冷30分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 1ml，將其注入造模動(dòng)物膝關(guān)節(jié)腔；
(3)將造模動(dòng)物置于50°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。優(yōu)選的，上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，所述造模動(dòng)物為大鼠 或兔。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，利用了泊洛沙姆控釋與凝膠的雙重特性， 使注入關(guān)節(jié)的木瓜蛋白酶不具有流動(dòng)性，隨凝膠態(tài)的泊洛沙姆黏貼于軟骨表面，并向軟骨 釋放，直接致軟骨損傷，獲得骨關(guān)節(jié)炎模型；該方法簡單易行，成模快，成功率高，適宜于治 療骨關(guān)節(jié)炎藥物的藥效學(xué)研究。


圖1為實(shí)施例1所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖IA為注射部位、圖IB為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖IC為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖2為實(shí)施例2所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖2A為注射部位、圖2B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖2C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖3為實(shí)施例3所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖3A為注射部位、圖;3B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖3C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖4為實(shí)施例4所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖4A為注射部位、圖4B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖4C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖5為實(shí)施例5所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖5A為注射部位、圖5B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖5C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖6為實(shí)施例6所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖6A為注射部位、圖6B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖6C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)；圖7為實(shí)施例7所述藥物組合物造模結(jié)果圖，其中圖7A為注射部位、圖7B為造模 前軟骨結(jié)構(gòu)、圖7C為造模后軟骨結(jié)構(gòu)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余為磷 酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入4g木瓜蛋白酶泊洛沙姆，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置4°C冰箱中預(yù)冷30分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 1ml，將其注入造模大鼠膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后大鼠置于50°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖1所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。實(shí)施例2一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3.5%、泊洛沙姆35%、其余為 磷酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入3. 5g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置5°C冰箱中預(yù)冷20分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 05ml，將其注入兔膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后兔置于55°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖2所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。實(shí)施例3一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3%、泊洛沙姆30%、其余為磷 酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入3g木瓜蛋白酶混勻；(2)繼續(xù)加入30g泊洛沙姆，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置3°C冰箱中預(yù)冷40分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 07ml，將其注入大鼠的膝關(guān)節(jié)腔(3)將注射后大鼠置于55°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖3所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。
實(shí)施例4一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆33%、其余為磷 酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入33g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入4g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置3°C冰箱中預(yù)冷20分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 1ml，將其注入大鼠的膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后大鼠置于52°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖4所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。實(shí)施例5—種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶5%、泊洛沙姆35%、其余為磷 酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入5g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置5°C冰箱中預(yù)冷35分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 08ml，將其注入兔膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后兔置于55°C溫度環(huán)境下2小時(shí)；造模結(jié)果如圖5所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。實(shí)施例6一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3.8%、泊洛沙姆32%、其余為 磷酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為
(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入32g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入3. 8g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置3°C冰箱中預(yù)冷30分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 1ml，將其注入兔膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后兔置于50°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖6所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。實(shí)施例7一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸緩 沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶4.5%、泊洛沙姆30%、其余為 磷酸緩沖液。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，具體步驟為(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸緩沖液中加入30g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入4. 5g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。上述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，具體步驟為(1)取上述藥物組合物置4°C冰箱中預(yù)冷30分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0. 1ml，將其注入大鼠膝關(guān)節(jié)腔；(3)將注射后大鼠置于50°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。造模結(jié)果如圖7所示，A為注射部位，B為正常膝關(guān)節(jié)軟骨，結(jié)構(gòu)完整，軟骨表面光 滑，切線層軟骨細(xì)胞呈梭形、平行排列于表面，移行層和深層軟骨細(xì)胞呈圓形或卵圓形，柱 狀排列，基質(zhì)呈紅色，鈣化層可見少量細(xì)胞和藍(lán)染的鈣化基質(zhì)，C為造模2小時(shí)后受損關(guān)節(jié)， 關(guān)節(jié)局部軟骨均出現(xiàn)明顯的病理改變，主要表現(xiàn)為軟骨表面受損部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光澤；切線層細(xì)胞腫大、變性、呈卵園形平行排列于表面，有少量壞死；移行層和深層 部分軟骨細(xì)胞溶解壞死，基質(zhì)紋理消失，呈著色不一的淡粉色，顯示模型成功。此外，參照實(shí)施例1所述繼續(xù)對150只大鼠進(jìn)行造模，成功率達(dá)到100%，且病理損 傷一致。上述參照實(shí)施例對該一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物及其制備方法與造模 方法進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施 例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，其特征在于由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和 PH5. 7磷酸緩沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3_5%、泊洛沙姆 30-35%、其余為磷酸緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，其特征在于其中按其重 量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余為磷酸緩沖液。
3.權(quán)利要求1所述的用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的制備方法，其特征在于具體 步驟為(1)按照每100mlPH5.7的磷酸緩沖液中加入30_35g泊洛沙姆混勻；(2)繼續(xù)加入3-5g木瓜蛋白酶，攪拌均勻。
4.權(quán)利要求1或2所述的用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，其特征在于 具體步驟為(1)取上述藥物組合物置3-5°C冰箱中預(yù)冷20-40分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0.05-0. 1ml，將其注入造模動(dòng)物膝關(guān)節(jié)腔；(3)將造模動(dòng)物置于50-55°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，其特征在于 具體步驟為(1)取上述藥物組合物置4°C冰箱中預(yù)冷30分鐘，取出；(2)注射器吸取步驟(1)中藥物組合物0.1ml，將其注入造模動(dòng)物膝關(guān)節(jié)腔；(3)將待造模動(dòng)物置于50°C溫度環(huán)境下2小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物的造模方法，其特征在 于所述造模動(dòng)物為大鼠或兔。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物及其制備方法與造模方法，所述藥物組合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和pH5.7磷酸緩沖液組成，按其重量體積比計(jì)濃度(g/100ml)為木瓜蛋白酶3-5％、泊洛沙姆30-35％、其余為磷酸緩沖液；所述用于骨關(guān)節(jié)炎造模的藥物組合物，利用了泊洛沙姆控釋與凝膠的雙重特性，使注入關(guān)節(jié)的木瓜蛋白酶不具有流動(dòng)性，隨凝膠態(tài)的泊洛沙姆黏貼于軟骨表面，并向軟骨釋放，直接致軟骨損傷，獲得骨關(guān)節(jié)炎模型；該方法簡單易行，成?？欤晒β矢?，適宜于治療骨關(guān)節(jié)炎藥物的藥效學(xué)研究。
文檔編號A61K9/06GK102058877SQ20101059015
公開日2011年5月18日 申請日期2010年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月16日
發(fā)明者崔元璐, 師詠梅, 柳占彪, 胡利民, 高秀梅 申請人:天津中醫(yī)藥大學(xué)