專(zhuān)利名稱(chēng)：一種人類(lèi)同種肌腱制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人類(lèi)同種肌腱制備方法，具體涉及一種可以用于制作同種異體肌腱的制備方法，屬于醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肌腱是一種排列規(guī)則的致密結(jié)締組織，由膠原、腱細(xì)胞和腱基質(zhì)組成。膠原是肌腱的主要組成部分，占肌腱干重的70 90%，在維持肌腱強(qiáng)度上發(fā)揮主導(dǎo)作用。腱細(xì)胞是一種形態(tài)特殊的成纖維細(xì)胞，數(shù)量較少，是同種肌腱移植時(shí)抗原的主要載體。腱基質(zhì)為膠原組織提供結(jié)構(gòu)載體，而且其彈性還有助于減少作用于肌腱的摩擦力和剪切力。肌腱連接骨骼肌和肌組織，使肌組織附著于骨或筋膜，將力量傳遞至骨骼系統(tǒng)，產(chǎn)生關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)。肌腱/韌帶缺損是運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)常見(jiàn)損傷，由于韌帶在組成上與肌腱相似，傳統(tǒng)方法多用自體肌腱移植修復(fù)受損的肌腱/韌帶，但由于自體肌腱移植存在供腱體積不足、數(shù)量有限，以及對(duì)供區(qū)造成新的損傷等問(wèn)題，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者較多使用同種肌腱移植來(lái)代替自體肌腱用于肌腱/韌帶缺損的治療。例如在前交叉韌帶翻修手術(shù)中，較之自體肌腱移植，學(xué)者們更傾向于將同種肌腱作為首選，目前前交叉韌帶翻修手術(shù)中同種肌腱使用率達(dá) 90% ；再如手部肌腱缺損，尤其是多條肌腱缺損時(shí)，自體肌腱來(lái)源受限，同種肌腱是目前較為理想的自體肌腱替代物。但是同種肌腱中如果存在活性腱細(xì)胞，移植后會(huì)導(dǎo)致較為明顯的免疫排斥反應(yīng)，且存在潛在的細(xì)菌、病毒感染。公開(kāi)號(hào)CN101496912A公開(kāi)了一種生物衍生肌腱修復(fù)材料及其制備方法，是對(duì)合法供體來(lái)源的經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)為合格的肌腱，或經(jīng)檢疫后證實(shí)健康的動(dòng)物肌腱進(jìn)行物理加工和化學(xué)處理，除掉軟組織、消毒、通過(guò)去除脂肪、脫細(xì)胞處理，經(jīng)超步驟( 預(yù)凍和冷凍干燥后，對(duì)組織進(jìn)行去纖膜分絲，重新編織處理，最終得到保留肌腱基本結(jié)構(gòu)的一類(lèi)新型肌腱缺損修復(fù)材料。除異種肌腱外，該方法雖然采用了同種肌腱做原料，但操作步驟繁雜，采用諸多化學(xué)試劑對(duì)肌腱進(jìn)行消毒、脫脂、脫蛋白，難以完全避免藥物殘留；經(jīng)過(guò)冷凍干燥、將肌腱解聚、分絲重組等過(guò)程，會(huì)導(dǎo)致同種肌腱原有結(jié)構(gòu)的改變；采用25kGy較大劑量輻照，易引起肌腱強(qiáng)度變化，影響肌腱性能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前同種肌腱移植存在免疫排斥反應(yīng)和細(xì)菌、病毒感染，且操作步驟繁雜、藥物殘留多、肌腱原有結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度改變大的技術(shù)問(wèn)題，提供一種無(wú)免疫排斥反應(yīng)和細(xì)菌、病毒感染，且操作簡(jiǎn)單、無(wú)藥物殘留、肌腱原有結(jié)構(gòu)和強(qiáng)度無(wú)改變的人類(lèi)同種肌腱制備方法。本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)問(wèn)題而采取的技術(shù)方案為—種人類(lèi)同種肌腱制備方法，包括以下步驟1)提取人類(lèi)供體肌腱材料并用生理鹽水將肌腱表面的血跡清洗干凈；2)將清洗干凈的肌腱材料置于-60 _80°C冷凍保存30 90天；
3)取步驟( 冷凍后的肌腱材料，室溫下復(fù)溫后，剪去肌腱周?chē)氖杷山Y(jié)締組織；4)將修剪好的肌腱材料浸入重量比為0.05 2 10 30 70 90的過(guò)氧乙酸、乙醇和水的混合溶液中，靜置20 50分鐘進(jìn)行病毒滅活；5)用水清洗滅活肌腱至末次清洗液中過(guò)氧乙酸含量為0. 1 5ppm ；6)再次修剪步驟( 清洗干凈的肌腱，并將肌腱表面的水浙干，在無(wú)菌條件下真空包裝修剪肌腱后，再次普通包裝兩次；7)采用鈷-60輻照包裝好的肌腱再次滅菌后制成。所述的鈷-60輻照采用的劑量為10 20kGy。本發(fā)明同種肌腱取自供體年齡為15 50歲，無(wú)感染病史或體檢無(wú)感染癥狀，無(wú)惡性腫瘤病史，無(wú)病毒性肝炎、梅毒、艾滋病、結(jié)核或麻風(fēng)病史，無(wú)自身免疫性疾病，無(wú)嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良，接受類(lèi)固醇治療不超過(guò)3個(gè)月，大劑量應(yīng)用不超過(guò)1周，無(wú)藥物或其它毒物中毒史， 并且在獲取供體肌腱前進(jìn)行如下方面的檢測(cè)血清學(xué)檢驗(yàn)HIV I/II抗體、HIV抗原、HIV聚合酶鏈反應(yīng)、HBV表面抗原、HBV表面抗體、HBV核心抗體、HCV抗體、人T淋巴細(xì)胞病毒抗體 (HTLV I/II抗體)、梅毒的快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)，在上述檢測(cè)均為陰性時(shí)在1萬(wàn)級(jí)潔凈間， 嚴(yán)格無(wú)菌操作，獲取供體。本發(fā)明對(duì)本發(fā)明中的病菌滅活工藝進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如下1) PRV的檢查結(jié)果見(jiàn)表1和表2 表1同種肌腱修復(fù)材料過(guò)氧乙酸-乙醇滅活PRV的結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種人類(lèi)同種肌腱制備方法，其特征是包括以下步驟1)提取人類(lèi)供體肌腱材料并用生理鹽水將肌腱表面的血跡清洗干凈；2)將清洗干凈的肌腱材料置于-60 -80°C冷凍保存30 90天；3)取步驟(2)冷凍后的肌腱材料，室溫下復(fù)溫后，剪去肌腱周?chē)氖杷山Y(jié)締組織；4)將修剪好的肌腱材料浸入重量比為0.05 2 10 30 70 90的過(guò)氧乙酸、乙醇和水的混合溶液中，靜置20 50分鐘進(jìn)行病毒滅活；5)用水清洗滅活肌腱至末次清洗液中過(guò)氧乙酸含量為0.1 5ppm ；6)再次修剪步驟(5)清洗干凈的肌腱，并將肌腱表面的水浙干，在無(wú)菌條件下真空包裝修剪肌腱后，再次普通包裝兩次；7)采用鈷-60輻照包裝好的肌腱再次滅菌后制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人類(lèi)同種肌腱制備方法，其特征是所述的鈷-60輻照采用的劑量為10 20kGy。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人類(lèi)同種肌腱制備方法，屬于醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明主要解決目前同種肌腱移植存在免疫排斥反應(yīng)和細(xì)菌、病毒感染，且操作步驟繁雜等技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明一種人類(lèi)同種肌腱制備方法，包括以下步驟1)清洗；2)冷凍保存30～90天；3)修剪肌腱周?chē)氖杷山Y(jié)締組織；4)將修剪好的肌腱材料浸入過(guò)氧乙酸、乙醇和水的混合溶液中，靜置進(jìn)行病毒滅活；5)用水清洗滅活肌腱至末次清洗液中的過(guò)氧乙酸；6)再次修剪并將肌腱表面的水瀝干，在無(wú)菌條件下真空包裝修剪肌腱后，再次普通包裝兩次；7)采用鈷-60輻照包裝好的肌腱再次滅菌后制成。本發(fā)明具有無(wú)免疫排斥反應(yīng)和細(xì)菌、病毒感染，且操作簡(jiǎn)單、無(wú)藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61L27/36GK102166373SQ20101059938
公開(kāi)日2011年8月31日 申請(qǐng)日期2010年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月13日
發(fā)明者劉曉明, 周沫, 張乃麗, 張育敏, 李寶興, 李寶明, 李幼忱, 趙亞平, 陳學(xué)英, 馬紹英 申請(qǐng)人:山西奧瑞生物材料有限公司