專利名稱：用于治療脂肪肝的松花粉提取物及其制備方法、用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及從植物，特別是從裸子植物松花粉中提取有效物質(zhì)的工藝技術領域。
背景技術：
脂肪肝是指由于各種原因引起的肝細胞內(nèi)脂肪堆積過多的病變，脂肪性肝病正嚴 重威脅國人的健康，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公認為隱蔽性肝硬化的常 見原因。脂肪肝是一種常見的臨床現(xiàn)象，而非一種獨立的疾病。其臨床表現(xiàn)輕者無癥狀，重 者病情兇猛。一般而言，脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時治療?？苫謴驼?。脂肪肝 的形成，一般是由于肝臟內(nèi)脂肪的分解與合成代謝失去平衡，或運出發(fā)生障礙，脂肪就會在 肝細胞內(nèi)過量積聚，當脂肪含量增加至30%以上，則稱為脂肪肝。脂肪肝按自身體素質(zhì)不 同、飲食習慣不同等導致脂肪肝的發(fā)病原理不同，一般可分為肥胖、過食性脂肪肝，肝炎后 脂肪肝，酒精性脂肪肝，營養(yǎng)缺乏性脂肪肝，藥物性脂肪肝，糖尿病性脂肪肝，妊娠性脂肪肝 和不明原因的隱源性脂肪肝等。脂肪肝按輕重程度不同又分為輕度脂肪肝、中度脂肪肝和 重度脂肪肝。輕度脂肪肝，已成為現(xiàn)代人的普遍問題，輕度脂肪肝是治療脂肪肝的最佳時 期。在某些職業(yè)人群中(白領人士、出租車司機、職業(yè)經(jīng)理人、個體業(yè)主、政府官員、高級知 識分子等)脂肪肝的平均發(fā)病率為25%;肥胖人群與II型糖尿病患者中脂肪肝的發(fā)病率為 50% ;嗜酒和酗酒者脂肪肝的發(fā)病率為58%;在經(jīng)常失眠、疲勞、不思茶飯、胃腸功能失調(diào)的 亞健康人群中脂肪肝的發(fā)病率約為60%。近年來脂肪肝人群的年齡也不斷下降，年齡只有 40歲，30歲左右的病人也越來越多，45歲以下男性脂肪肝明顯多于女性。其中約25%的患 者發(fā)生肝纖維化，1. 5% 8. 0%的患者發(fā)展為肝硬化，經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)發(fā)病率較高，并且發(fā)病 有小齡化的趨勢，已成為一個嚴重危害人類健康的常見隱患。因此，防治脂肪肝已引起醫(yī)學 界的高度重視。由于脂肪肝并非為獨立性病種，通過引發(fā)肝功能的損傷，引起血液生化指標 和酶值的變化。在反應肝細胞損傷的檢測項目中，以血清酶值最常見，如谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、γ —谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)等。當 肝臟發(fā)生脂肪變時，由于肝細胞受到損害，細胞變性、壞死，細胞膜破碎或細胞膜的通透性 增加，肝細胞中所含的ALT和AST就會被釋放到血液中，使血中ALT、AST活性增加。由于 ALT、AST主要存在于肝細胞中，當其明顯升高時常提示有肝損傷。肝臟發(fā)生脂肪變時，常見 ALT、AST升高，但多以ALT升高為主。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)是診斷肝細胞實質(zhì)損害的主要項 目，其高低往往與病情輕重相平行。Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶是酒精性肝損傷的重要指標，而且非 常敏感。當今脂肪肝的治療仍以去除病因，積極治療原發(fā)病和堅持合理飲食制度為主，藥 物僅起輔助治療作用。所以，對該病的研究已成為國內(nèi)外研究的共同熱點和難點。到目前 為止，西藥尚無防治脂肪肝的有效藥物，以中藥長期調(diào)理性為好，其中何首烏和山楂最好， 能降低血脂，防止膽固醇在肝內(nèi)沉積。西藥常選用保護肝細胞、去脂藥物及抗氧化劑等，如 維生素B、C、E、卵磷脂、肌苷、輔酶A、還原型谷胱甘肽、?；撬?、肉毒堿乳清酸鹽、肝泰樂，以 及某些降脂藥物(例如肝旨清)等等。上述藥物雖然很多，但大多仍需要進一步驗證其療效以及安全性，因此，應在醫(yī)生指導下正確選用，切不可濫用。有人把脂肪肝和冠心病比喻成高脂血癥一根繩上的兩個螞蚱，因為肥胖、高脂血 癥、糖尿病和酗酒是脂肪肝的常見病因，而這些因素也同樣與動脈粥樣硬化和冠心病關系 密切。有明顯心肌損傷和血流動力學紊亂，T細胞免疫功能下降，肝活檢研究顯示，這些病例 中91. 4%有肝細胞脂肪變性。一般而言，酒精脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時治療常 可恢復正常。西方發(fā)達國家推測，兒童非酒精性脂肪肝的患病率至少為1%至洲，肥胖兒童 患病率更高，達22. 5%至52. 8%發(fā)病率。肝臟是身體內(nèi)以物質(zhì)代謝功能為主的一個器官， 并在身體里面扮演著解毒、代謝、去氧化，儲存肝糖，分泌性蛋白質(zhì)的合成等等功能。隨著生 活水平提高，許多人每天都攝入大量的酒精和高脂類食物，不知不覺中形成脂肪肝?，F(xiàn)代生 活節(jié)奏快，大家忙于自己的工作，社會普遍認為脂肪肝不是病而忽視治療。然而脂肪肝可以 引發(fā)很多疾病，特別是通過引起多項血液生化指標的改變，影響機體代謝。長期食用高脂食 物或大量飲酒，酒精會直接毒害肝細胞，影響其結構及功能；許多人就是因為飲酒過度才患 上酒精性肝炎、脂肪肝致使肝臟受損。而肝損傷可導致甘油三酯(TG)下降，甘油三酯是長 鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。是人體內(nèi)含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油 三酯分解產(chǎn)物供給能量，是體內(nèi)能量的主要來源。脂肪肝會導致食入的大量脂肪吸收減少， 膽汁分泌不足，不能分解吃進去的脂肪，脂肪在肝臟形成脂肪滴從而加重病情。裸子植物松花粉是裸子植物的雄性生殖細胞，擔負著植物繁衍的重任，包含著孕 育新生命所必需的全部營養(yǎng)物質(zhì)，其營養(yǎng)豐富、均衡、搭配合理，是純天然的營養(yǎng)寶庫。松花 粉是松科植物馬尾松、油松或同屬樹種的花粉，產(chǎn)生于雄蕊的花芯中是松樹體精華之所在。 松花粉是中國醫(yī)學寶庫中的藥食兼用花粉品種，作為中國傳統(tǒng)藥材，其藥食兼用的歷史已 逾數(shù)千年，從MOO年前的《神農(nóng)本草經(jīng)》到今天的《中華人民共和國藥典》等歷代醫(yī)藥典籍 中都有記載，明代的《本草綱目》中記載“松花，甘、溫、無毒。潤心肺，益氣，除風止血。”在 民間更是以其神奇的功效被奉為“仙藥”。人工采集的松花粉具有品質(zhì)純凈、無污染、無異體 花粉或有毒花粉摻雜、無動物激素的特點，是純天然的綠色食品。松花粉中含有豐富的蛋白 質(zhì)、氨基酸、不飽和脂肪酸、多糖、維生素、膳食纖維、酶類、黃酮、核酸、天然激素等多種營養(yǎng) 成分和生物活性物質(zhì)，眾多研究表明其具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，改善生殖機能、促進新陳代謝，提 高機體免疫力等功效，是大自然賜予人類的天然營養(yǎng)庫。目前我國脂肪肝的發(fā)病 率很高，隨著現(xiàn)代生活水平提高，人們營養(yǎng)過剩、肥胖、過量飲酒、高脂飲食、缺少運動，造成 脂肪肝。在中國肥胖兒童中，脂肪肝的發(fā)病率高達八成左右，脂肪肝已經(jīng)成為影響現(xiàn)代人生 活質(zhì)量的重要問題。而脂肪肝治療期長，起效緩慢，患者依從性差，往往治療易被人們忽視。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一目的在于發(fā)明一種能高效地從根本上治療脂肪肝的裸子植物松花粉 水溶性物質(zhì)。本發(fā)明所述水溶性物質(zhì)為從裸子植物松花粉中提取的分子量為3000D以下的水 溶性物質(zhì)。本發(fā)明的第二個目的在于發(fā)明上述松花粉水溶性物質(zhì)的制備方法。包括以下步驟
1)將裸子植物松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10 20分鐘；2)以常壓常溫水浸泡20 30分鐘后，再以超聲波處理20 40分鐘；
3)離心法除去固體雜質(zhì)，取上清；
4)將所述上清在1 5°C的環(huán)境溫度下以分子篩超濾分離，取得分子量為3000D以下 的裸子植物松花粉水溶性物質(zhì)。 經(jīng)試驗，利用裸子植物松花粉治療脂肪肝效果顯著，且無副作用，而且費用低廉， 簡單易行。裸子植物松花粉是裸子植物雄蕊花藥，是植物的雄性生殖細胞。裸子植物松花 粉內(nèi)含各種豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，具有多種的生物學活性。裸子植物松花粉能夠在激素的受體 水平上發(fā)揮抗雌激素、抗雄激素的藥理作用，但對裸子植物松花粉中是何物質(zhì)起作用目前 研究不多。本發(fā)明就是利用水提的方法從裸子植物松花粉分離出對脂肪肝有治療效果的成 份。 本發(fā)明所述步驟1)的氣流粉碎破壁是一種低溫破壁工藝，經(jīng)10 20分鐘處理，目 的是破壞裸子植物松花粉的細胞壁，便于裸子植物松花粉中有效成份的提取和保持活性。本發(fā)明步驟2)中先浸泡時間為20 30分鐘，然后超聲波提取20 40分鐘，目 的是便于裸子植物松花粉中有效成份充分溶解、分離。本發(fā)明步驟3)中除去固體雜質(zhì)的方法是在轉(zhuǎn)速為10000 16000轉(zhuǎn)的離心機中 離心10 15分鐘。目的是能有效去處裸子植物松花粉中固體雜質(zhì)，使提取液澄清，透明， 使提取液得到進一步提純。本發(fā)明再一目的在于發(fā)明上述裸子植物松花粉水提物的應用方法。一種應用方法是用于治療脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物用于制備治療脂肪 肝口服制劑。作為口服制劑的優(yōu)點是使用方便、吸收效果好、價格低廉，可作為兒童一般保健使 用，預防脂肪肝的發(fā)生。
第二種應用方法是用于治療脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物用于制備治療脂肪肝 的注射制劑。作為注射制劑的優(yōu)點是吸收迅速、治療針對性強。


圖1為自然健康組肝臟組織切片圖。圖2為灌胃豬油白酒模型對照組肝臟組織切片圖。圖3為灌胃松花粉水提液組肝臟組織切片圖。
圖4為注射松花粉水提液組肝臟組織切片圖。
具體實施例方式一、制備裸子植物松花粉治療脂肪肝水提物 1、分檢裸子植物松花粉在常溫下去除花粉雜質(zhì)。2、將除雜的裸子植物松花粉氣流粉碎破壁處理10 20分鐘。3、以常壓常溫水浸泡的花粉20 30分鐘后，超聲波粉碎20 40分鐘。4、除去固體雜質(zhì)，取水溶液
在轉(zhuǎn)速為10000 16000轉(zhuǎn)的離心機中離心10 15分鐘，取上清。
5、將上清在1 5 °C的環(huán)境溫度下，以3000D分子篩超濾分離出分子量為3000D以 下的裸子植物松花粉水提物，即為用于治療脂肪肝松花粉水提物。二、制備口服制劑和注射制劑
1、制備口服制劑A:
將治療脂肪肝的裸子植物松花粉水提物與蜂蜜或其他食品添加劑調(diào)勻，經(jīng)超濾和巴氏 消毒滅菌后，灌裝備用。
2、制備注射制劑B:
將治療脂肪肝的裸子植物松花粉水提物巴氏消毒滅菌后與注射生理鹽水以11 2 的體積比混和，均勻溶解后抽真空密封，待用。三、應用
(一)試驗對象
大鼠(體重200 300克)
(二)使用劑量
1、口服制劑口服4-6毫升/天，連接服用20 30天。2、注射肌肉或腹腔注射2-4毫升/天連續(xù)20 30天
(三)對比結果
試驗組二月齡SD大鼠肝臟組織切片結果比較 1、將自然健康組肝臟組織切片，見圖1。從圖1可見雄性大白鼠肝臟肝細胞結構清晰，肝血竇明顯，肝索排列整齊。2、將灌胃豬油和白酒模型組肝臟組織切片，見圖2。從圖2可見肝細胞邊界不清，變圓內(nèi)有空泡，肝血竇受壓變窄，肝索排列紊亂。3、將灌胃松花粉水提液組肝臟組織切片，見圖3。從圖3可見肝臟出現(xiàn)大量肝血竇，肝索較清晰，肝細胞排列較整齊，細胞內(nèi)未見脂 肪空泡。4、將注射松花粉水提液組肝臟組織切片，見圖4。從圖4可見肝臟肝血竇分布均勻，肝索清晰可見，肝細胞排列整齊，細胞核大位于 細胞中央。裸子植物松花粉水提液干預后對各試驗組大鼠血液酶值指標比較分析，如下表
松花粉水提液干預后對各試驗組大鼠血液酶值指標比較分析表(單位u/l)
權利要求
1.用于治療脂肪肝的松花粉提取物，為從松花粉中提取的分子量小于3000D的水溶性 物質(zhì)。
2.一種如權利要求1所述用于治療脂肪肝的松花粉水提取物的制備方法，其特征在于 包括以下步驟1)將裸子植物松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10 20分鐘；2)以常壓常溫水浸泡20 30分鐘后，再以超聲波處理20 40分鐘；3)離心法除去固體雜質(zhì)，取上清液；4)將所述上清液在1 5°C的環(huán)境溫度下以分子篩超濾分離，取得分子量為3000D以 下的裸子植物松花粉水溶性物質(zhì)。
3.根據(jù)權利要求2所述制備方法，其特征在于步驟3)中所述離心法是在轉(zhuǎn)速為 10000 16000轉(zhuǎn)的冷凍離心機中離心10 15分鐘。
4.如權利要求1所述用于治療脂肪肝的松花粉提取物用于制備治療脂肪肝的口服制 劑。
5.如權利要求1所述用于治療脂肪肝的松花粉提取物用于制備治療脂肪肝的注射制劑。
全文摘要
用于治療脂肪肝的松花粉水提取物及其制備方法、用途，涉及從裸子植物松花粉中提取有效物質(zhì)的工藝技術領域。先將松花粉除雜、破壁，再以常壓常溫水浸泡后的超聲波提取，離心除去固體雜質(zhì)，取水溶液，最后，在1～5℃的環(huán)境溫度下分離出分子量為3000D以下的裸子植物松花粉水提取物，即為用于治療脂肪肝的裸子植物松花粉水提取物，可作為兒童一般保健使用，預防脂肪肝的發(fā)生?？蓪⑺苫ǚ鬯崛∥镉糜谥苽渲委熤靖慰诜苿招Ч?、價格低廉。還可將松花粉水提取物用于制備治療脂肪肝的注射制劑，吸收迅速、治療針對性強。
文檔編號A61K36/15GK102145025SQ20101060736
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權日2010年12月28日
發(fā)明者喬強, 于建偉, 劉志河, 葉滿紅, 周斌, 尹利端, 李明, 王桐, 石麗花, 鞠東 申請人:新時代健康產(chǎn)業(yè)(集團)有限公司, 煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司