專利名稱：用于治療兒童性早熟的松花粉水提取物及其制備方法、用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及從裸子植物，特別是從松花粉中提取有效物質(zhì)工藝技術(shù)領域。
背景技術(shù)：
性早熟是指兒童性成熟的年齡明顯提前，主要表現(xiàn)為兒童的性腺(即男性的睪丸、 女性的卵巢)功能過早發(fā)育、生殖器官發(fā)育提前和出現(xiàn)第二性征。醫(yī)學上將性早熟的年齡 界定為女孩8歲以前、男孩9歲以前，出現(xiàn)與年齡不相應的第二性征就叫性早熟。女孩身體 出現(xiàn)周期性陰道流血、乳房增大、臀部變寬、陰毛腋毛生長、月經(jīng)來潮等，并伴有體格發(fā)育， 如身高、體重、骨骼的增長的現(xiàn)象。男孩9歲以前出現(xiàn)睪丸陰囊增大，陰莖增長變粗，出現(xiàn)陰 毛、胡須、腋毛，聲音變粗且低沉，喉結(jié)變大，身材長高，甚至出現(xiàn)陰莖勃起、排精現(xiàn)象等。性 早熟常伴隨身體發(fā)育加速，如身體增高、肌肉發(fā)育加快、骨骺提前閉合，以及較早地生長停 止。如果女孩在長大的過程中，過早地出現(xiàn)了男性性征，如長胡須、長喉結(jié)，說話聲音變粗 等，而男孩則出現(xiàn)乳房增大等女性特征，則叫異性性早熟。性早熟分為真性性早熟和假性性早熟。真性性早熟又叫完全性早熟，它是指青春 期提前建立在“下丘腦垂體”成熟的基礎上，有第二性征出現(xiàn)，并且男孩有遺精、女孩有排卵 現(xiàn)象。假性性早熟又叫不完全性早熟，性早熟的孩子只有乳房發(fā)育、陰毛發(fā)育或者月經(jīng)來潮 現(xiàn)象，并無性腺發(fā)育，無排卵現(xiàn)象，無生育功能。兒童性早熟易導致個矮、早戀和性格怪異。 性早熟的孩子幾乎個個成年后都矮小，身體越早成熟也就意味著身高增長停止得越早。發(fā) 育提早一年，往往會損失5厘米左右的身高，而女孩月經(jīng)來潮1 2年或男孩遺精后基本上 就喪失了增高的機會。不少家長誤以為月經(jīng)來潮是青春期開始的標志，其實醫(yī)學認為，月經(jīng) 來潮往往意味青春期發(fā)育已接近尾聲，此時再不治療就晚了。性早熟的女孩很多成年后身 高達不到150厘米、男孩不超過160厘米，繼而會給他們將來的升學、就業(yè)、成家等帶來一系 列困難。性早熟的兒童由于缺乏必要的知識，往往會背負不必要的精神負擔，使他們覺得自 己是和同學們不一樣，存在自卑心理，性格逐漸變得怪異。此外，生理上的巨大改變也可能 引發(fā)性早熟兒童對性產(chǎn)生強烈興趣和好奇，從而對學習無法集中注意力，甚至會引發(fā)早戀 等社會問題。兒童性早熟問題已經(jīng)成為一個亟需重視和解決的社會問題，我們急需研究出能控 制我國少年兒童性早熟的良藥，這是關(guān)系子孫后代的大事。松花粉是裸子植物松樹的雄性生殖細胞，擔負著松樹繁衍的重任，包含著孕育新 生命所必需的全部營養(yǎng)物質(zhì)，其營養(yǎng)豐富、均衡、搭配合理，是純天然的營養(yǎng)寶庫。松花粉是 松科植物馬尾松、油松或同屬樹種的花粉，產(chǎn)生于雄蕊的花芯中是松樹體精華之所在。松花 粉是中國醫(yī)學寶庫中的藥食兼用花粉品種，作為中國傳統(tǒng)藥材，其藥食兼用的歷史已逾數(shù) 千年，從MOO年前的《神農(nóng)本草經(jīng)》到今天的《中華人民共和國藥典》等歷代醫(yī)藥典籍中都 有記載，明代的《本草綱目》中記載“松花，甘、溫、無毒。潤心肺，益氣，除風止血?！痹诿耖g 更是以其神奇的功效被奉為“仙藥”。人工采集的松花粉具有品質(zhì)純凈、無污染、無異體花粉或有毒花粉摻雜、無動物激素的特點，是純天然的綠色食品。松花粉中含有豐富的蛋白質(zhì)、 氨基酸、不飽和脂肪酸、多糖、維生素、膳食纖維、酶類、黃酮、核酸、天然激素等多種營養(yǎng)成 分和生物活性物質(zhì)，眾多研究表明其具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，改善生殖機能、促進新陳代謝，提高 機體免疫力等功效，是大自然賜予人類的天然營養(yǎng)庫。過去人們對松花粉存在錯誤的認識， 沒有經(jīng)過必要的研究就認為服用松花粉及其制品是造成我國少年兒童性早熟的罪魁禍首， 幾乎全國有關(guān)少年兒童性早熟的專家都這么認為，殊不知松花粉可能成為防治我國少年兒 童性早熟的良藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明第一目的在于發(fā)明一種從根本上高效治療兒童性早熟的裸子植物松花粉 提取物。本發(fā)明所述提取物為從裸子植物松花粉中提取的分子量為4000D以下的水溶性 物質(zhì)。本發(fā)明的第二個目的在于發(fā)明上述松花粉水溶性物質(zhì)的制備方法。包括以下步驟
1)將裸子植物松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10 20分鐘；
2)以常壓常溫水浸泡10 15分鐘后，再以超聲波處理20 40分鐘；
3)離心法除去固體雜質(zhì)，取上清液；
4)將上清在1 5°C的環(huán)境溫度下以分子篩超濾分離，取得分子量為4000D以下的松 花粉水溶性物質(zhì)。本發(fā)明所述步驟1)的氣流粉碎破壁時間為10 20分鐘，目的是破壞松花粉的細 胞壁，便于松花粉中有效成份的提取和保持活性。本發(fā)明步驟2)中先經(jīng)浸泡時間為10 15分鐘，然后再超聲波處理20 40分鐘， 目的是便于松花粉中有效成份充分溶解、分離。本發(fā)明步驟3)中除去固體雜質(zhì)的方法是在轉(zhuǎn)速為8000 10000轉(zhuǎn)的冷凍離心機 中離心10 15分鐘。目的是有效去除松花粉中固體雜質(zhì)，使提取液澄清、透明，使提取液 得到進一步提純。經(jīng)試驗，利用松花粉治療兒童性早熟效果顯著，且無副作用，而且費用低廉，簡單 易行，便于生產(chǎn)。松花粉是裸子植物雄蕊花藥，是松樹的雄性生殖細胞。松花粉內(nèi)含各種豐 富的營養(yǎng)物質(zhì)，具有多種的生物學活性。松花粉能夠在激素的受體水平上發(fā)揮抗雌激素、抗 雄激素的藥理作用，抑制二氫睪丸酮的生物效應，使發(fā)育的腺體逆轉(zhuǎn)近似正常，但對松花 粉中是何物質(zhì)起作用目前研究不多。本發(fā)明就是利用水提的方法從松花粉分離出對兒童性 早熟有治療效果的成份。本發(fā)明再一目的在于發(fā)明上述松花粉水提物的應用方法。一種應用方法是用于治療兒童性早熟的裸子植物松花粉提取物用于制備治療兒 童性早熟口服制劑。作為口服制劑的優(yōu)點是使用方便、吸收效果好、價格低廉，可作為兒童一般保健使 用，預防兒童性早熟的發(fā)生。
第二種應用方法是用于治療兒童性早熟的裸子植物松花粉提取物用于制備治療兒童性早熟的注射制劑。作為注射制劑的優(yōu)點是吸收迅速、治療針對性強。


圖1為自然健康組睪丸組織切片圖。圖2為圖1的局部放大圖。圖3為注射丙酸睪丸酮模型對照組睪丸組織切片圖。圖4為圖3的局部放大圖。圖5為灌胃松花粉水提液組睪丸組織切片圖。圖6為圖5的局部放大圖。圖7為注射松花粉水提液組睪丸組織切片圖。圖8為圖7的局部放大圖。
具體實施例方式一、制備裸子植物松花粉治療兒童性早熟的水提物 1、分檢松花粉在常溫下去除松花粉雜質(zhì)。2、破壁處理將除雜的松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10 20分鐘。3、浸泡、超聲處理以常壓常溫水浸泡破壁處理后的松花粉10 15分鐘，然后再 超聲波處理20 40分鐘。4、離心除去固體雜質(zhì)，取水溶液在轉(zhuǎn)速為8000 10000轉(zhuǎn)的冷凍離心機中離心 10 15分鐘，取上清。5、超濾將所取的上清在1 5°C的環(huán)境溫度下采用4000D的分子篩超濾，分離 出分子量為4000D以下的松花粉水提物，即為用于治療兒童性早熟的裸子植物松花粉水提 物。二、制備口服制劑和注射制劑
1、制備口服制劑A:
將治療兒童性早熟的裸子植物松花粉水提物與蜂蜜或其他食品添加劑調(diào)勻，經(jīng)超濾和 巴氏消毒滅菌后，灌裝，即成。
2、制備注射制劑B:
將治療兒童性早熟的裸子植物松花粉水提物巴氏消毒滅菌后與注射生理鹽水以1 1 2的體積比混和，均勻溶解后抽真空密封，即成。三、應用
(一)試驗對象
大鼠(體重200 300克)
(二)使用劑量
1、口服制劑口服4-6毫升/天，連接服用40 60天。2、注射肌肉或腹腔注射2-4毫升/天連續(xù)20-30天。(三)對比結(jié)果
試驗組二月齡SD大鼠睪丸組織切片結(jié)果比較1、從自然健康組睪丸組織切片圖1、2可見雄性大白鼠睪丸生精上皮細胞層數(shù)多，各 級生精細胞界限明顯，生精小管管腔內(nèi)有大量精子存在。2、從注射丙酸睪丸酮模型組睪丸組織切片圖3、4可見睪丸生精上皮細胞層數(shù) 少，細胞排列稀疏，精原細胞少。3、從灌胃松花粉水提液組睪丸組織切片圖5、6可見睪丸生精上皮細胞層數(shù)又增 多，細胞排列整齊，細密。4、從注射松花粉水提液組睪丸組織切片圖7、8可見睪丸生精上皮細胞層數(shù)多， 各級生精細胞界限明顯。睪丸是產(chǎn)生精子和分泌雄性激素的器官，左右各一，多呈卵圓形。外面有兩層被 膜，即鞘膜和白膜。其內(nèi)部實質(zhì)被結(jié)締組織的中隔分為許多睪丸小葉，每個睪丸小葉內(nèi)含有 迂回盤旋的曲精小管，每一曲精小管內(nèi)有大量不同發(fā)育階段的精細胞。幼稚階段的靠近基 膜，發(fā)育愈成熟的愈靠近管腔，依次為精原細胞、精母細胞、精子細胞和精子。從睪丸組織切 片可以發(fā)現(xiàn)花粉水提液對大鼠睪丸發(fā)育是有影響的，不管是灌胃，還是腹腔注射都能顯著 影響睪丸的組織結(jié)構(gòu)和發(fā)育狀態(tài)，但不同種類、劑量和使用方法對睪丸發(fā)育影響很大，從睪 丸組織切片來看注茶組在調(diào)控睪丸發(fā)育方面效果最好，證明了花粉水提液能夠抵抗外源性 雄激素的不利影響，對睪丸起到保護作用。松花粉水提液對各實驗組血清性激素和促性腺激素的影響，見下表
各實驗組血清性激素、促性腺激素平均數(shù)統(tǒng)計表
雌二醇(pmol/1)睪酮(mnol/1)LH(mIu/ml)FSH(mIu/ml)對照組64. 22±33. 0522. 76±13. 162. 65±0. 883. 56±0. 60模型組66. 3±33. 4830. 02±22. 102. 88 ±0. 703. 40±0. 54灌松組75. 3±37. 077. 43±3. 232. 42±0. 772. 12±1. 07腹注松組93. 2±24. 9416. 37±18. 332. 60±0. 533. 04±1. 05
經(jīng)統(tǒng)計分析，腹注松組的血清雌二醇含量與對照組、模型組顯著高；灌松組血 清睪酮含量與模型組極顯著低，灌松組血清睪酮含量與對照組顯著低。灌松組血清FSH含 量與對照組、模型組極顯著低，灌松組血清FSH含量與腹注松組顯著低。血清LH含量差異 不顯著。 性機能開始成熟并排出成熟精子，是雄性青春期發(fā)育的顯著特點。性成熟有賴于 腦垂體前葉分泌出來的促性腺激素。FSH和LH均由垂體前葉同一細胞所合成，但分別儲存 在不同的小泡(vesieles)中。兩者均為糖蛋白(glyeoproteins)激素，分子量分別是33000 和洲000。FSH、LH、T和E2都與睪丸及其生精過程有關(guān)，前兩種激素都是通過提高局部雄激 素濃度而影響生精過程，LH可促進間質(zhì)細胞發(fā)育并分泌T，F(xiàn)SH可刺激支持細胞分泌雄激素 結(jié)合蛋白，這些有助于提高曲細精管局部雄激素濃度，從而促進生精上皮的發(fā)育和精子生 成。精子生成和成熟需要FSH與T共同作用，F(xiàn)SH主要作用于精子成熟最后階段，促進次級 精母細胞發(fā)育為精子細胞和精子。經(jīng)統(tǒng)計分析，灌松組血清FSH含量與對照組、模型組比極 顯著低，灌松組血清FSH含量與腹注松組比顯著低。灌松組血清睪酮含量與模型組比極顯 著低，灌松組血清睪酮含量與對照組比顯著低。這表明灌喂松花粉水提取液能顯著降低血 清FSH、T含量，精子的生成和成熟又與這二種激素密切相關(guān)，這二種激素水平的下降勢必 會影響到精子成熟。所以松花粉水提液可以通過降低血清性激素，促性腺激素的水平影響 雄性大鼠的性成熟。
總之，通過以上試驗表明本發(fā)明產(chǎn)品能有效防治性早熟，且注射制劑的療效好于 口服制劑。
權(quán)利要求
1.用于治療兒童性早熟的松花粉水提取物，其特征在于所述提取物為從松花粉中提取 的分子量小于4000D的水溶性物質(zhì)。
2.一種如權(quán)利要求1所述用于治療兒童性早熟的松花粉提取物的制備方法，其特征在 于包括以下步驟1)將裸子植物松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10 20分鐘；2)以常壓常溫水浸泡10 15分鐘后，再以超聲波處理20 40分鐘；3)離心法除去固體雜質(zhì)，取上清液；4)將所述上清在1 5°C的環(huán)境溫度下以分子篩超濾分離，取得分子量為4000D以下 的裸子植物松花粉水溶性物質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于步驟3)中所述離心法是在轉(zhuǎn)速為 8000 10000轉(zhuǎn)的冷凍離心機中離心10 15分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述用于治療兒童性早熟的松花粉提取物用于制備治療兒童性早熟 的口服制劑。
5.如權(quán)利要求1所述用于治療兒童性早熟的松花粉提取物用于制備治療兒童性早熟 的注射制劑。
全文摘要
用于治療兒童性早熟的松花粉水提取物及其制備方法、用途，涉及從松花粉中提取有效物質(zhì)工藝技術(shù)領域。將裸子植物松花粉經(jīng)氣流粉碎破壁處理10～20分鐘；以常壓常溫水浸泡10～15分鐘后，再以超聲波處理20～40分鐘；離心法除去固體雜質(zhì)，取上清液；將上清在1～5℃的環(huán)境溫度下以分子篩超濾分離，取得分子量為4000D以下的松花粉水溶性物質(zhì)?？蓪⑺苫ǚ厶崛∥镉糜谥苽渲委焹和栽缡炜诜苿?，吸收效果好、價格低廉，可預防兒童性早熟的發(fā)生。還可將松花粉提取物用于制備治療兒童性早熟的注射制劑，吸收迅速、治療針對性強。
文檔編號A61P5/24GK102145027SQ20101060739
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者喬強, 于建偉, 劉志河, 葉滿紅, 周斌, 尹利端, 李明, 王桐, 石麗花, 鞠東 申請人:新時代健康產(chǎn)業(yè)(集團)有限公司, 煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司