專利名稱：一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法
一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說它是抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法。尖尾芋(Alocasia eucullatta (Dour) Schott)為天南星科植物假海芋的根莖，生于山澗陰濕處，或樹旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、活血、 消腫，治疔瘡、癰腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病。迄今為止，對(duì)尖尾芋的研究很少，多見于一般藥效學(xué)報(bào)道。有關(guān)尖尾芋的抗癌藥理活性很少報(bào)道，僅見侯學(xué)文從中分離得到一個(gè)凝集素，其對(duì)肺腺癌細(xì)胞株P(guān)18僅有很少殺傷能力。癌癥是當(dāng)今社會(huì)發(fā)病率高、死亡率高的一種頑痰，目前尚無治愈率較高的藥物的報(bào)道。本發(fā)明人在尋找中草藥抗癌活性成分過程中，發(fā)現(xiàn)尖尾芋提取物具有很好的抗腫瘤活性，并且從中獲得多個(gè)具有抗癌活性的二苯乙烯、二苯乙烯苷、腦苷類化合物等多種骨架類型的化合物。本發(fā)明的目的在于提供一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其工藝簡單實(shí)用，為尖尾芋的應(yīng)用提供了廣泛的途徑。本發(fā)明的目的是通過如下方案實(shí)現(xiàn)的以尖尾芋(Alocasia eucullatta (Dour) Schott)為原料，采用溶劑提取法.溶劑萃取法.樹脂吸附法，正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)舍濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋總提取物，將制成的尖尾芋總提取物作為抗癌活性成分用于治療多種癌癥。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是尖尾芋提取物工藝簡單實(shí)用，抗癌療效好，并且無毒副作用。為尖尾芋應(yīng)用提供了廣泛的途徑。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)地描述。 實(shí)施例1.溶劑提取法/溶劑萃取法全用提取制備尖尾芋提取物1. 2kg用50%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮干燥即可得到尖尾芋提取物，收率為1.2%。2.溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物尖尾芋1.0kg用80%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。乙醇提取物上D-IOl型吸附樹脂柱，先用水、5%乙醇/水洗脫以除去色素和雜質(zhì)，而后用60%乙醇/水洗脫。其中60%乙醇/水洗脫部分減壓濃縮除乙醇，再經(jīng)冷凍干燥可得到尖尾芋提取物，收率為1.0%。3.尖尾芋提取物的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)3.1細(xì)胞株、試劑及儀器人宮頸癌Hela細(xì)胞株購自中科院細(xì)胞庫；DMEM培養(yǎng)液，Gibco產(chǎn)品；胎牛血清， Gibco產(chǎn)品；胰蛋白酶，Gibco產(chǎn)品；DMSO溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000 培養(yǎng)箱，Thermo 公司；Multishkan MK3 酶標(biāo)儀，Thermo 公司。3. 2腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法人宮頸癌Hela細(xì)胞株用含10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C， 5% CO2濃度及飽和濕度。當(dāng)細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)生長期時(shí)，用25%胰酶消化細(xì)胞，洗滌吹散細(xì)胞稀釋至106/ml，每孔100 μ L接種于96孔板，以備MTT實(shí)驗(yàn)。3. 3細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT法)尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1%。DMS0的尖尾芋提取物溶液，用含10%胎牛血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、2 μ g/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100 μ L 接種于96孔板，混勻，使尖尾芋提取物每孔終濃度分別達(dá)到50、25、10、1 μ g/mL，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)5h，測定各孔吸光度。以不加任何處理的培養(yǎng)細(xì)胞為空白對(duì)照，以單用培養(yǎng)細(xì)胞作為陰性對(duì)照。每個(gè)濃度梯度均設(shè)置12個(gè)平行組，分別計(jì)算細(xì)胞抑制率。按照以下公式計(jì)算抑制率抑制率=1-(實(shí)驗(yàn)組吸光度平均值/對(duì)照組吸光度平均值)X 100%結(jié)果見表1表1尖尾芋提取物對(duì)Hela細(xì)胞體外增殖的抑制作用
權(quán)利要求
1.一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于以植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour) Schott)為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法，樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥常用干燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分，使之在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
2.一種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于植物原料尖尾芋(Alocasia eucul latta (Dour) Schott)可以是根莖，也可以是枝葉、果實(shí)等全草的任一部位，原料可以是新鮮采集的，也可以是經(jīng)過炮制的。
3.—種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的尖尾芋提取物包括其中所含的各種類型的有機(jī)酸、二苯乙烯、二苯乙烯苷、甾體皂甙類化合物以及其它骨架類型的化合物。
4.一種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其它低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
5.一種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng)水或者低級(jí)脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進(jìn)行萃取，或者經(jīng)低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁辭進(jìn)行萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
6.一種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-IOl型吸附樹脂，XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其它類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
7.—種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析或者氧化鋁柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠或氧化鋁，或者薄層層析用硅膠或氧化鋁，洗脫可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、苯/甲醇、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇.乙酸乙酯/甲醇，苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等溶媒中的一種或者多種，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
8.—種如權(quán)利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS) 或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈，洗脫時(shí)可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明是一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，它以植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour)Schott)為原料，制成可以治療癌癥的活性提取物。采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法、凝膠層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結(jié)合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分在癌癥治療中進(jìn)行應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K125/00GK102526379SQ201010608330
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者馮怡, 王源, 鄭向煒, 阮克鋒 申請(qǐng)人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心