專利名稱：蟾酥在制備用于抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中醫(yī)中藥領(lǐng)域，具體涉及蟾酥在制備用于抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
化學(xué)基因組學(xué)(Chemical Genomics或Chemogenomics)作為后基因組學(xué)時(shí)代的新技術(shù)，是基因組學(xué)與藥物發(fā)現(xiàn)之間的橋梁和紐帶，將成為功能基因組學(xué)研究的有力工具。化學(xué)基因組學(xué)技術(shù)整合了組合化學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、分子生物學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域的相關(guān)技術(shù)，采用具有生物活性的化學(xué)小分子配體作為探針，研究與人類疾病密切相關(guān)的基因、 蛋白質(zhì)的生物功能，同時(shí)為新藥開(kāi)發(fā)提供具有高親和性的藥物先導(dǎo)化合物，是后基因組學(xué)時(shí)代藥物發(fā)現(xiàn)的新模式，將極大加快制藥工業(yè)的發(fā)展?；瘜W(xué)基因組學(xué)藥物發(fā)現(xiàn)模式的一般程序包括靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、高通量篩選、組合化學(xué)合成、生物學(xué)功能測(cè)試等。代謝物組學(xué)(metabonomics)作為繼基因組學(xué)后新發(fā)展起來(lái)的一門系統(tǒng)科學(xué)。主要研究生物體受外界刺激或擾動(dòng)后，所有低分子量的代謝產(chǎn)物隨時(shí)空變化的情況，從而探明生物體系代謝途徑的一種研究方法。代謝物組學(xué)近年來(lái)發(fā)展十分迅速，在植物學(xué)、毒理學(xué)、臨床診斷、藥物開(kāi)發(fā)、營(yíng)養(yǎng)科學(xué)等研究領(lǐng)域都已有出色的成果取得。代謝物組學(xué)作為一種新的組學(xué)研究技術(shù)，大大豐富了系統(tǒng)生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容，成為生命科學(xué)研究的一種具有最前景的方法之一基于復(fù)雜疾病對(duì)于用藥的要求，復(fù)方藥物則顯得具有較大的優(yōu)勢(shì)。復(fù)方藥物長(zhǎng)期以來(lái)以其多成分、多靶點(diǎn)以及副作用小的作用特點(diǎn)受到了越來(lái)越多的重視。但是由于復(fù)方成分復(fù)雜，其藥效組分及作用靶點(diǎn)一直是復(fù)方藥物走向世界市場(chǎng)的瓶頸。麝香保心丸是在宋代著名方書(shū)《太平惠明和劑局方》蘇合香丸的基礎(chǔ)上研制開(kāi)發(fā)的，是中國(guó)醫(yī)藥傳統(tǒng)的精髓與現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)相結(jié)合的結(jié)晶。從方劑組成看，它由麝香、冰片、 蘇合香、人參、蟾酥、肉桂、牛黃7味藥組成。麝香保心丸遵循了君臣佐使的組方原則，特點(diǎn)為寒溫并用，以溫為主；通補(bǔ)兼施，以補(bǔ)為輔；不僅能芳香溫通快速緩解胸悶胸痛心絞痛癥狀，同時(shí)增加人參扶正，益氣強(qiáng)心，避免了活血化淤藥久服破氣的弊端，適合長(zhǎng)期服用。麝香保心丸中的蟾酥，含有幾十種脂溶性活性和毒性成分(統(tǒng)稱蟾蜍毒素)，蟾蜍毒素既是蟾酥的有效成分又是毒性成分，過(guò)量用藥將會(huì)表現(xiàn)出急性的毒性，損害心臟組織。目前，對(duì)麝香保心丸毒副作用的研究甚少。為了使該中藥復(fù)方能夠更好的在臨床上應(yīng)用，對(duì)它的毒副作用進(jìn)行科學(xué)研究，闡明復(fù)方配伍減毒的必要性和科學(xué)性等等，顯得十分重要。麝香保心丸(國(guó)藥準(zhǔn)字D1020068)主要含麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片。麝香保心丸是芳香溫通類治療胸痹(冠心病、心絞痛)的代表復(fù)方中藥藥物，因其療效確切、安全方便、價(jià)格經(jīng)濟(jì)，而成為治療冠心病、心絞痛的常用藥物之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，麝香保心丸在芳香溫通類治療胸痹的中藥中穩(wěn)居第一，是唯一在全國(guó)擁有較高知名度的獨(dú)家傳統(tǒng)中藥大品種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是研究蟾酥的毒副作用，通過(guò)該研究可以合理調(diào)節(jié)麝香保心丸中蟾酥的量，從而可以很好地治療或預(yù)防心臟疾病。本發(fā)明提供了蟾酥在制備用于抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)蟾酥抑制油酸和亞油酸的生物合成，可以合理調(diào)節(jié)藥物中蟾酥的含量，從而更好地治療或預(yù)防心臟疾病。優(yōu)選地，所述蟾酥的含量以華蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的總量計(jì)為 18-56 μ g。優(yōu)選地，所述藥物為口服劑型或注射劑型。優(yōu)選地，所述口服劑型為片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑或口服液；所述注射劑型為水針劑或粉針劑。心臟的生理功能活動(dòng)需要持續(xù)的能量供給，心肌的能源來(lái)自血液中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)， 通過(guò)氧化磷酸化產(chǎn)生高能磷酸鍵，心肌高能磷酸化合物(ATP)是心肌細(xì)胞進(jìn)行生命活動(dòng)的直接能源供給者，心臟能量的產(chǎn)生、儲(chǔ)存或利用一旦發(fā)生障礙，其收縮與舒張功能必將受損。通過(guò)對(duì)這些潛在生物標(biāo)志物的生理意義和代謝途徑進(jìn)行分析，我們推斷有兩種可能的機(jī)制是造成心肌磷脂含量降低和花生四烯酸(AA)升高的原因。自由脂肪酸(FFA)再?；系K磷脂代謝存在脫?；驮脔；^(guò)程，即在磷脂酶的作用下，磷脂水解成FFA與溶血磷脂，經(jīng)過(guò)?；o酶A合成酶(CoAQ的作用，在FFA再酰化， 與溶血磷脂再合成磷脂。此循環(huán)的任一環(huán)節(jié)都可導(dǎo)致磷脂代謝紊亂。研究者發(fā)現(xiàn)，新生鼠離體心肌細(xì)胞釋放花生四烯酸(AA)的量與培養(yǎng)液中高能磷酸化合物(ATP)減少的程度有關(guān)，當(dāng)ATP減少75%以上時(shí)，AA釋放明顯增加，他們認(rèn)為AA釋放增加是繼發(fā)于ATP減少的結(jié)果。蟾酥中的毒性成分可引起各器官組織的微小血管劇烈收縮，導(dǎo)致組織缺血缺氧，因而推測(cè)心肌缺血時(shí)ATP嚴(yán)重減少導(dǎo)致CoAS活性降低，使FFA再?；茏?，這可能是磷脂含量減少的重要原因。蛋白激酶(Protein kinase C，PKC)通路的活化PKC廣泛存在于人體的各種組織細(xì)胞中，是細(xì)胞內(nèi)一組重要的蛋白激酶。研究發(fā)現(xiàn)，PKC通路的活化能引起磷脂酶A2(PLA2) 活性的增強(qiáng)，PLA2是體內(nèi)重要的磷脂酶，它能催化磷脂裂解，產(chǎn)生游離的AA。在正常情況下，體內(nèi)的AA主要是以脂肪酰基的形式儲(chǔ)存在質(zhì)膜磷脂中，尤其是在磷脂酰膽堿(PC)中， 而細(xì)胞中游離的AA濃度幾乎為零；當(dāng)PKC通路被激活后，進(jìn)一步活化了 PLA2，使得質(zhì)膜磷脂的水解加快，磷脂含量降低，另一方面釋放產(chǎn)生的游離AA水平升高。此外，脂肪酸是心臟能量來(lái)源的主要物質(zhì)，在本研究中，脂肪酸的代謝異常說(shuō)明心肌的能量代謝發(fā)生了紊亂。通過(guò)對(duì)這些脂肪酸的生理意義和代謝途徑進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，AA 和亞油酸(LA)是同屬于AA生物合成中的兩個(gè)代謝物，其中LA是AA生物合成的前體物質(zhì)。 給藥后體內(nèi)游離M的增多，可能會(huì)抑制作為其前體的LA的生成，致使其水平出現(xiàn)一定程度的下調(diào)。在本研究的蟾酥給藥組動(dòng)物中，AA的代謝水平上調(diào)，而LA和OA的代謝水平都發(fā)生下調(diào)，說(shuō)明蟾酥的毒副作用會(huì)抑制LA和油酸(OA)的生物合成。AA的代謝異常對(duì)心臟的正常功能有極大的影響，可致使心臟的收縮力下降，心輸出量減少，甚至可誘發(fā)或加重心肌梗塞和心絞痛。因此，可以通過(guò)改變蟾酥的量，來(lái)改變LA和OA的代謝水平，從而使AA代謝水平達(dá)到正常水平。本研究還發(fā)現(xiàn)麝香保心丸給藥組中，雖然各化合物的含量與正常組相比有所偏移，但與含等量蟾酥的蟾酥組相比，更接近正常對(duì)照組，這提示麝香保心丸中的某些成分，可通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體抗脂質(zhì)過(guò)氧化的能力，從而降低心肌損傷。研究表明，在心肌缺血(梗塞)狀態(tài)下，血清中FFA的含量升高，缺血時(shí)線粒體中高濃度的FFA也可直接或間接抑制丙酮酸的氧化，以高耗氧的方式為心肌提供能量，在某種程度上也加重了心肌缺氧。當(dāng)血流完全阻斷時(shí)，氧化磷酸化合成ATP的過(guò)程停止，糖原酵解成為心肌細(xì)胞惟一的能量來(lái)源。在缺氧情況下仍以脂肪酸作為主要能量來(lái)源會(huì)對(duì)心肌產(chǎn)生不利的影響以高耗氧的方式供能會(huì)加重心肌缺氧；通過(guò)抑制抑制葡萄糖有氧氧化，降低ATP產(chǎn)生的效率，使細(xì)胞內(nèi)乳酸和氫離子含量增加，pH值下降，抑制心肌收縮功能；脂肪酸中間代謝產(chǎn)物的蓄積影響細(xì)胞膜的屏障和轉(zhuǎn)運(yùn)功能，導(dǎo)致生理性功能損害。改善心肌代謝要以促進(jìn)糖代謝和抑制脂肪酸代謝為主。因此，通過(guò)給于適量蟾酥來(lái)抑制油酸和亞油酸的生成，可改善心肌細(xì)胞的缺氧狀態(tài)，從而起到治療心臟疾病的作用。


以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中圖1是蟾酥給藥不同劑量組和麝香保心丸組在0. 5,1. 0,1. 5,2. 0小時(shí)的心率變化
曲線；圖2是大鼠血清UPLC/T0F-MS代謝指紋譜圖；圖3蟾酥不同劑量給藥組與對(duì)照組的PLS-DA分析圖；圖4蟾酥低劑量組、麝香保心丸組與對(duì)照組的PLS-DA分析圖；圖5差異表達(dá)情況聚類圖，其中圖數(shù)字(1，2，；3)代表了三次生物學(xué)重復(fù)；灰色為與對(duì)照相比上調(diào)表達(dá)基因，白色代表與C Group相比下調(diào)表達(dá)基因；以及圖6差異表達(dá)基因涉及的生理過(guò)程；其中各數(shù)字代表含義如下
1 有機(jī)物質(zhì)應(yīng)答 Response to organic substance
2 免疫應(yīng)答 Immune response
3 內(nèi)源性刺激應(yīng)答 Response to endogenous stimulus
4 離子穩(wěn)態(tài) Ion homeostasis
5 激素應(yīng)激 Response to hormone stimulus
6 防御反應(yīng) Defense response
7 陽(yáng)離子穩(wěn)態(tài) Cation homeostasis
8 肌動(dòng)蛋白構(gòu)建Actin organization
9 蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)，易 1 立 Protein import into nucleus, translocation
10血管發(fā)育 Blood vessel development
11:1 Hi.^rF^1 Collagen fibril organization
12 細(xì)胞凋亡和程序性死亡 Apoptosis and programmed cell death
13穩(wěn)態(tài)進(jìn)禾呈 Homeostatic process
14氧化還原 Oxidation reduction
15無(wú)機(jī)物應(yīng)激 Response to inorganic substance
16糖代謝進(jìn)禾呈 Glucose metabolic process
17 氧化應(yīng)激 Response to oxidation stress18 鐵離子穩(wěn)態(tài) Iron ion homeostasis19 磷酸化作用 Phosphorylation20 -MfkWMM^ Regulation of cell proliferation21 :酶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 Enzyme linked receptor protein signaling pathway22 :細(xì)胞粘附調(diào)節(jié) Regulation of cell adhesion23 :醇代謝進(jìn)程 Alcohol catabolic process24 :細(xì)胞夕卜基質(zhì)構(gòu)建 Extracellular matrix organization25 抗凋亡調(diào)節(jié) Regulation of anti-apoptosis26 IfiS^iIiill Regulation of cellular ketone metabolic process27 :胰島素樣生長(zhǎng)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路hsulin-like growth factor receptorsignaling pathway28 :細(xì)胞夕卜結(jié)構(gòu)構(gòu)建 Extracellular structure organization29 :細(xì)胞夕卜基質(zhì)構(gòu)建 Extracellular matrix organization30 血壓調(diào)節(jié) Regulation of blood pressure31禾呈 Collagen biosynthetic process32 表皮發(fā)育 Skin morphogenesis33 :軟骨成骨作用 Endochondral ossification
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例11.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表1動(dòng)物分組及給藥劑量
權(quán)利要求
1.蟾酥在制備用于抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述蟾酥的含量以華蟾酥毒基(C26H34O6) 和脂蟾毒配基(C24H32O4)的總量計(jì)為18-56 μ g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述藥物為口服劑型或注射劑型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述口服劑型為片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑或口服液；所述注射劑型為水針劑或粉針劑。
全文摘要
本發(fā)明提供蟾酥在制備用于抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應(yīng)用。在本發(fā)明的蟾酥給藥組動(dòng)物中，AA的代謝水平上調(diào)，而LA和OA的代謝水平都發(fā)生下調(diào)，說(shuō)明蟾酥的毒副作用會(huì)抑制LA和OA的生物合成。AA的代謝異常對(duì)心臟的正常功能有極大的影響，可致使心臟的收縮力下降，心輸出量減少，甚至可誘發(fā)或加重心肌梗塞和心絞痛。本發(fā)明的通過(guò)蟾酥抑制油酸和亞油酸的生物合成，可以合理調(diào)節(jié)藥物中蟾酥的含量，從而更好地治療或預(yù)防心臟疾病。
文檔編號(hào)A61P9/00GK102552327SQ20101060879
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者王義明, 羅國(guó)安, 詹常森, 陳忠樑, 黃昕明 申請(qǐng)人:上海和黃藥業(yè)有限公司