專利名稱：一種增強免疫力的藥物組合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別涉及一種具有增強免疫力功能的藥物組合物， 屬于中藥組合物領域。
背景技術：
伴隨著社會的進步、競爭的激烈，機體免疫力低下人群日趨龐大，因此人們對提高機體免疫力的產(chǎn)品需求量與日俱增。而增強機體免疫力的產(chǎn)品已經(jīng)不滿足于生化類產(chǎn)品， 更多地青睞于植物和中藥提取物的產(chǎn)品。例如專利申請?zhí)枮?00910067904. 5的專利公開了一種具有增強免疫力、抗輻射功能的保健食品，包括人參多糖，刺五加提取物，昆布，蜂乳，氯化血紅素，Vc，葉酸。其具有增強免疫力和抗輻射功能，它適用于以免疫功能低下為主要癥候的亞健康人群，年老體衰， 久病虛弱，以及接觸輻射的工作者和正在進行化療、放療的癌癥患者，以及進行化療、放療后導致免疫功能低下，白細胞、血紅細胞下降等毒副作用的患者。又如專利申請?zhí)枮?00710176607的發(fā)明涉及一種具有改善體力疲勞功能的保健食品及其制備方法，包括人參、刺五加和制淫羊藿。其用于易疲勞者和免疫力低下者，但不適用于少年兒童。專利申請?zhí)枮?00610010082. 3的發(fā)明涉及一種緩解疲勞增強免疫力的保健品及其制備方法，含有刺五加、黃芪、紅景天苷及其苷元酪醇和酸棗仁。但是以上現(xiàn)有的增強免疫力的產(chǎn)品或多或少地存在諸如所需原料種類繁雜并含有人參等昂貴材料，總體吸收效果差，食用既不方便又影響吸收的缺陷，且現(xiàn)有的加工工藝粗糙，不能有效釋放多種營養(yǎng)物質(zhì)互補、強化營養(yǎng)作用的能力。而且部分的營養(yǎng)品只適用于特定的人群。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種增強免疫力藥物組合物，并通過動物實驗評價該增強免疫力藥物組合物的功能。本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)的一種增強免疫力藥物組合物，包括以下組分刺五加、黃芪、枸杞、黃精、蛹蟲草子實體。其中，各組份的重量份為刺五加79. 2-118. 8份、黃芪79. 2-118. 8份、枸杞 65. 6-98. 4份、黃精65. 6-98. 4份、蛹蟲草子實體26. 4-39. 6份。優(yōu)選的，各組份的重量份為刺五加89. 1-108. 9份、黃芪89. 1-108. 9份、枸杞 73. 8-90. 2份、黃精73. 8-90. 2份、蛹蟲草子實體29. 7-36. 3份。更優(yōu)選的，各組份的重量份為刺五加99份、黃芪99份、枸杞82份、黃精82份、蛹蟲草子實體33份。本發(fā)明所述的增強免疫力藥物組合物可將原料按照藥物常規(guī)制劑方法制備成任何一種臨床上適宜的制劑。其中，所述制劑是顆粒劑、膠囊劑或片劑。本發(fā)明還提供將所述增強免疫力藥物組合物制成顆粒劑的方法，具體為將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，10-30目造粒；將造好的顆粒在50-55°C下干燥，以顆粒劑工藝要求控制顆粒的含水量；將干燥后的顆粒選取10-20目篩網(wǎng)整粒，按照顆粒劑常規(guī)比例加入常規(guī)顆粒劑輔料混合均勻，然后裝袋，得到顆粒劑。本發(fā)明還提供了一種將所述增強免疫力藥物組合物制成膠囊劑的方法，具體為將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)；按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，20-35目造粒；將造好的顆粒放入冷烘箱，吹風干燥，待顆粒松散分散時，將其加熱至50_55°C繼續(xù)烘干，使顆粒含水量符合常規(guī)膠囊劑含水量；將干燥后的顆粒冷卻，并與常規(guī)膠囊劑輔料混合均勻，然后裝入膠囊，得到膠囊劑。本發(fā)明還提供了一種將所述增強免疫力藥物組合物制成片劑的方法，具體為將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，10-30目造粒；將造好的顆粒在50_55°C下干燥，以常規(guī)片劑工藝要求控制顆粒的含水量；將干燥后的顆粒選取10-20目篩網(wǎng)整粒，按照常規(guī)比例加入常規(guī)片劑輔料混合均勻，然后壓片，得到片劑。其中上述各種制劑的制備方法中，可將所用原料藥替換為原料藥的提取物，例如刺五加、黃芪、枸杞、黃精各自的提取物，例如但不限于按《中華人民共和國藥典》O010版) 制備的提取物或市售的中藥提取物產(chǎn)品。本發(fā)明通過動物實驗評價了所述藥物組合物的增強免疫力功能，證明了本發(fā)明的藥物組合物可用于制備增強免疫力的藥物。
具體實施例方式本發(fā)明提供的增強免疫力藥物組合物，包括刺五加、黃芪、枸杞、黃精、蛹蟲草子實體。本發(fā)明所用到的原料藥均可從普通藥物材商店購買得到，其規(guī)格符合國家藥物材標準即可；也可將購買的原料藥用常規(guī)方法進行提取，將所得提取物作為原料，例如按《中華人民共和國藥典》OOlO版)制備的提取物。刺五加及其提取物《中華人民共和國藥典》O010版一部)記載刺五加為五加科植物刺五加的干燥根及根莖。其味辛、微苦、性溫，歸脾、腎、心經(jīng)。《本草綱目》稱刺五加為“本經(jīng)上品”，能“補中益氣，堅筋骨，強意志，久服輕身耐老”。中醫(yī)認為它能同時補益先天之本腎臟和后天之本脾臟.即益氣健脾，補腎安神。近代研究表明，其與人參同屬于五加科，親緣關系較近，含有的有機化學成分也具有一定聯(lián)系，且素有“小人參”之美譽，國內(nèi)外已將刺五加作為與人參具有相似作用的天然植物應用于臨床。刺五加根莖含有多種苷類及糖類，其主要標志性成分是刺五加多糖(ASPQ和刺五加苷，此外，還含刺五加皂甙、異嗪皮啶、丁香甙、胡蘿卜甙和芝麻素等。其中刺五加多糖的藥理作用廣泛，參與人體細胞的各種生命過程及生理功能的調(diào)節(jié)，具有增強免疫力、抗癌、抗病毒等生理功能，并以獨特的活性和低毒性的特點使其在臨床應用中具有很大的潛力。黃芪及其提取物《中華人民共和國藥典》(2010版一部)記載黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其味甘，性溫，歸肺脾經(jīng)，是常用的“扶正固本，補益中氣”的益氣中藥，具有益氣補虛之功效?；瘜W成分復雜，含有多糖、多種皂甙、黃酮以及氨基酸、亞油酸、生物堿等。黃芪提取物是以黃芪干燥的根為原料提取的產(chǎn)品，其主要標志性成分為黃芪多糖(Af3S)。枸杞及其提取物《中華人民共和國藥典》(2010版一部)記載枸杞子為茄科植物寧夏枸杞的成熟果實，味甘，性平，歸肝、腎經(jīng)。是我國傳統(tǒng)的滋補中藥，始載于《神農(nóng)本草
經(jīng)》，并被列為上品。明朝李時珍在《本草綱目》中記載枸杞有“堅筋骨，......，補精氣諸不
足，明日安神，令人長壽”等功效。近年的醫(yī)學研究表明，枸杞中含多種營養(yǎng)成分和微量元素及高含量的多糖，枸杞多糖(LBP)是枸杞子提取物的標志性成分，大量的試驗研究表明LBP 能在多條途徑、多個層面對發(fā)揮增強免疫力的作用。黃精及其提取物《中華人民共和國藥典》(2010版一部)記載黃精為百合科植物黃精、滇黃精或多花黃精的干燥根莖，味甘、性平，歸脾、肺、腎經(jīng)，具有健脾、潤肺、益腎等功能。始載于《名醫(yī)別錄》，按藥材形狀不同，分別習稱為“雞頭黃精”、“姜形黃精”、“大黃精”。
《名醫(yī)別錄》將其列為上品，稱黃精“補中益氣，......久服輕身延年不饑”?；瘜W成分研究
表明，黃精含有菸酸、醌類、粘液質(zhì)、生物堿、淀粉、糖類、氨基酸及微量元素。黃精多糖是黃精化學組成的一個重要部分，是黃精主要生物學活性成分之一。蛹蟲草子實體蛹蟲草[Cordyc印s militaris (L. ex Fr.) Link]，又稱蛹草、北蟲草、北冬蟲夏草，是蟲草屬真菌寄生于鱗翅目昆蟲蛹體后形成的蟲菌復合體。屬于子囊菌類的麥角菌目，麥角菌科，蟲草屬真菌。與冬蟲夏草化學成分相似甚至高于冬蟲夏草，被認為是冬蟲夏草的優(yōu)秀替代品之一，其成分主要含蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖，具有提高免疫力， 抑菌、抗炎等功效。本發(fā)明組合物采用的刺五加、黃芪屬于衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號《衛(wèi)生部關于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》中附件2 (可用于保健食品的物品名單)內(nèi)的材料，枸杞子、 黃精屬于衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51號《衛(wèi)生部關于進一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》中附件 1(既是食品又是藥品的物品名單)內(nèi)的材料，均可以用于保健食品。蛹蟲草子實體為衛(wèi)生部批準的新資源食品(2005年第3號)。本發(fā)明中優(yōu)選采用刺五加提取物、黃芪提取物、枸杞提取物、黃精提取物和蛹蟲草子實體相配合，能起到很好的增強免疫力的作用。下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的保護范圍。在本發(fā)明實施例中所用的刺五力Π、黃芪、枸杞、黃精等原料藥購買自藥店；所用的刺五加提取物、黃芪提取物、枸杞提取物和黃精提取物分別購自西安三江生物工程有限公司，貨號分別為20090310、20090317、20090323、20090325 ；蛹蟲草子實體購自珠海市先康生物科技有限公司，貨號為20090301。
實施例1稱取以下重量的原料藥刺五加475. 2g，黃芪475. 2g，枸杞393. 6g，黃精393. 6g，蛹蟲草子實體158. 4g。制備方法將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，將原料藥混合均勻；將原料藥混合物與重量含量為75%的食用級乙醇造粒，10目造粒；在50-55°C下干燥，依據(jù)中華人民共和國藥典二部2010版的方法測定其含水量， 控制其含水量為5% ；將干燥后的顆粒選取10目篩網(wǎng)整粒，然后加入微粉硅膠和硬脂酸鎂作為輔料，混合均勻后裝袋，得到顆粒劑。實施例2稱取以下重量的原料藥刺五加提取物593. 32g，黃芪提取物593. 32g，枸杞提取物494. 44g，黃精提取物 494. 44g，蛹蟲草子實體197. 78g。制備方法將上述原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，將原料藥混合均勻；將原料藥混合物與重量含量為90%的食用級乙醇混合，20目造粒；放入冷烘箱，打開吹風，當顆粒表面發(fā)白時，用鏟子翻動，然后加熱至30-35°C，過 20-60分鐘后再翻動，繼續(xù)烘干；待顆粒松散分散時，將其加熱至50_55°C烘干，依據(jù)中華人民共和國藥典二部 2010版的方法測定其含水量，控制其含水量為按重量計5% ；將干燥后的顆粒冷卻后加入二氧化硅和硬脂酸鎂，混勻，裝入0#膠囊，得到膠囊劑。實施例3稱取以下重量的原料藥刺五加594. Og,黃芪594. Og,枸杞492. Og,黃精492. Og,蛹蟲草子實體198. Ogo制備方法將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，將原料藥混合均勻；將原料藥混合物與重量含量為87%的食用級乙醇混合，10目造粒；在50_55°C下干燥顆粒，依據(jù)中華人民共和國藥典二部2010版的方法測定其含水量，控制其含水量為按重量計8% ；將干燥后的顆粒選取10目篩網(wǎng)整粒，加入微粉硅膠混合均勻，然后壓片，得到片劑。實施例4稱取以下重量的原料藥刺五加534. 6g、黃芪534. 6g、枸杞442. 8g、黃精442. Sg、蛹蟲草子實體178. 2g。制備方法將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)；將原料藥混合均勻；將原料藥混合物與重量含量為87%的食用級乙醇混合，35目造粒；
放入冷烘箱，打開吹風，當顆粒表面發(fā)白時，用鏟子翻身，然后再加熱至30-35°C， 加熱半小時后再翻身，繼續(xù)烘干；待顆粒較松散時，加熱至50-55°C烘干，按照中華人民共和國藥典二部2010版的方法測定其含水量，使顆粒的含水量為按重量計6% ；將干燥后的顆粒放涼后加入二氧化硅和硬脂酸鎂混勻，并裝入膠囊，得到膠囊劑。實施例5稱取以下重量的原料藥刺五加提取物435. 6g、黃芪提取物435. 6g、枸杞提取物360. Sg、黃精提取物 360. Sg、蛹蟲草子實體145. 2g。制備方法將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)；將原料藥混合均勻；將原料藥的混合物與重量含量為75%的食用級乙醇混合，30目造粒；放入冷烘箱，打開吹風，當顆粒表面發(fā)白時，用鏟子翻身，然后再加熱至30-35°C， 加入半小時后再翻身，繼續(xù)烘干；待顆粒較松散時，加熱至50-55°C烘干，按照中華人民共和國藥典二部2010版的方法測定其含水量，控制顆粒的含水量為按重量計5% ；將顆粒放涼后加入微粉硅膠混勻，并裝入膠囊，得到膠囊劑。試驗例1本發(fā)明膠囊增強免疫力功能動物實驗1材料和方法1)樣品實施例2制備的膠囊，400mg/粒，內(nèi)容物為棕色至棕褐色粉末。2)實驗動物選用北京維通利華實驗動物技術有限公司[許可證號 SCXK(京)2006-0009]繁育的18_22g昆明種健康清潔級雌性小鼠192只，共分為四批進行實驗，每批隨機分為4組，每組12只。實驗一批進行臟器/體重比值測定、遲發(fā)型變態(tài)反應實驗、半數(shù)溶血值(HC50)的測定和抗體生成細胞數(shù)的測定；實驗二批進行碳廓清實驗；實驗三批進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗；實驗四批進行ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗和NK細胞活性測定。實驗動物飼養(yǎng)于北京聯(lián)合大學應用文理學院保健食品檢測中心SPF級動物室。3)劑量實驗例2制備的膠囊，推薦劑量為成人(按60kg體重計)每日2. 4g，相當于0.04g/日/kg體重。實驗設人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即每日0. 2g/kgBW、0. 4g/ kgBWU. 2g/kgBW為低、中、高劑量組。受試物以無菌水配制，每日一次經(jīng)口給予，連續(xù)灌胃33天后測各項指標。小鼠灌胃體積為0. lmL/10g鼠重。同時設一空白對照組(Og/kgBW)，用無菌水替代受試物，每日灌胃體積與各受試物組相同。4)主要儀器與試劑ES-2100A電子天平、BS223S電子天平、755分光光度計、酶標儀、二氧化碳培養(yǎng)箱、 低速離心機、恒溫水浴、顯微鏡、倒置顯微鏡、螺旋測微儀。
潔凈工作臺、無菌手術器械、微量注射器(25 μ L)、細胞計數(shù)器、Μ孔和96孔平底細胞培養(yǎng)板、96孔U型細胞培養(yǎng)板、玻璃平皿、紗布、試管、玻片架、200目篩網(wǎng)、計時器、血色素吸管、載玻片等。綿羊紅細胞(SRBC)、生理鹽水、Hank，s液(pH 7. 2-7. 4)、RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清、青霉素、鏈霉素、刀豆蛋白A(ConA)、1%冰醋酸、lmol/L的HCl溶液、酸性異丙醇(96mL 異丙醇加lmol/L的HCl溶液4mL)、MTT、PBS緩沖液(pH 7. 2-7. 4)、補體(豚鼠血清)、SA 緩沖液、瓊脂糖、都氏試劑(碳酸氫鈉l.Og，高鐵氰化鉀0. 2g，氰化鉀0.05g，加蒸餾水至 IOOOmL)、YAC-I細胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、0. 2mol/ L 的 Tris-HCl 緩沖液(pH 8. 2),1% NP40、印度墨汁、0. 1% Na2CO3、雞紅細胞、甲醇、Giemsa 染液等。5)實驗方法A.臟器體重比值的測定小鼠稱重后頸椎脫白處死，取脾臟和胸腺，去盡筋膜，用濾紙吸干臟器表面血污， 稱重，計算脾臟體重比值和胸腺體重比值。B.遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)實驗(足跖增厚法)取羊血，生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積 SRBC (2000r/min, IOmin) 0. 2mL，致敏后4d，測量左后足跖部厚度，同一部位測量三次，取平均值。然后在測量部位皮下注射20% (v/v，用生理鹽水配制)壓積SRBC 20yL，于注射后 24h測量左后足跖部厚度，以攻擊前后足跖厚度的差值來表示DTH的程度。受試樣品組的差值顯著高于對照組的差值，可判定該項實驗結果陽性。C. ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗(MTT法)無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’ s液的小平皿中，用鑷子輕輕將脾磨碎，制成單個細胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，制成細胞懸液。用Hank’ s液洗3次，每次離心 IOmin (1000r/min)o然后將細胞懸浮于ImL的完全培養(yǎng)液中，鏡檢計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為 3 X IO6個/mL。再將脾細胞懸液分兩孔加入M孔培養(yǎng)板中，每孔lmL，在其中一孔加75 μ L ConA液(相當于7. 5 μ g/mL)，另一孔作為對照，置5% CO2, 37°C CO2孵箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結束前4h，每孔輕輕吸去上清液0. 7mL，加入0. 7mL不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，同時加入MTT (5mg/mL) 50 μ L/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解。然后將此液體移入比色杯中，在755分光光度計上比色測定，波長570nm。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細胞的增值能力。受試樣品組的光密度差值顯著高于對照組的光密度差值，可判定該項實驗結果陽性。D.抗體生成細胞數(shù)的測定(Jerne改良玻片法)取羊血，生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積 SRBC 0.2mL。將SRBC免疫5天后的小鼠頸椎脫臼處死，取出脾臟，輕輕磨碎脾臟，制成細胞懸液。離心(1000r/min) lOmin，用Hank，s液洗2遍，最后將細胞懸液在8mL Hank，s液中。將瓊脂糖加熱溶解后，與等量雙倍Hank’ s液混合，分裝小試管，每管0.5mL，再向管內(nèi)加10% (v/v,用SA液配制)壓積SRBC 50 μ L、脾細胞懸液8 μ L，迅速混勻后，傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，做平行片，待瓊脂凝固后，將玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中37°C溫育lh，然后用SA緩沖液稀釋的補體(1 8)加入到玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)溫育1. 后，計數(shù)溶血空斑數(shù)。用空斑數(shù)/全脾細胞來表示。受試樣品組的空斑數(shù)顯著高于對照組的空斑數(shù)，可判定該項實驗結果陽性。E.半數(shù)溶血值(HC50)的測定取羊血，生理鹽水洗滌3次，每只鼠經(jīng)腹腔注射2% (v/v，用生理鹽水配制)壓積 SRBC 0. 2mL進行免疫。5天后，摘除眼球取血于離心管內(nèi)，放置約lh，將凝固血與管壁剝離， 使血清充分析出，2000r/min離心lOmin，收集血清。用SA緩沖液將血清稀釋為300倍，取 ImL置試管內(nèi)，依次加入10% (v/v，用SA緩沖液配制)壓積SRBC 0.5mL，補體ImL(用SA 緩沖液按1 8稀釋)。另設不加血清的對照管(以SA緩沖液代替)。置37°C恒溫水浴中保溫15min后，冰浴終止反應。2000r/min離心lOmin，取上清lmL，加都氏試劑至3mL。同時取10% (v/v，用SA緩沖液配制)的壓積SRBC 0. 25mL，加都氏試劑至4mL于另一試管中， 充分混勻，放置IOmin后，于MOnm處以對照管作空白，分別測定各管光密度值。溶血素的量以半數(shù)溶血值(HC50)表示，按下式計算樣品半數(shù)溶血值=樣品光密度值/SRBC半數(shù)溶血時的光密度值X稀釋倍數(shù)受試樣品組的HC50顯著高于對照組的HC50，可判定該項實驗結果陽性。F.小鼠碳廓清實驗按體重從小鼠尾靜脈注射稀釋4倍的印度墨汁(0. 05mL/10g)。待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2、101^11，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血2(^1^，并將其加到21^ 0. Na2CO3溶液中。用755分光光度計在600nm波長處測光密度值(OD)，以Na2CO3溶液作空白對照。將小鼠處死，取肝臟和脾臟稱重。以碳廓清指數(shù)(a)表示小鼠碳廓清的能力，按下式計算a:k= (IgOD1-IgOD2)/(Vt1) a =體重+ (肝重 + 脾重)Xk"3受試樣品組的碳廓清指數(shù)顯著高于對照組的碳廓清指數(shù)，可判定該項實驗結果陽性。G.小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(半體內(nèi)法)小鼠腹腔注射20% (v/v，用生理鹽水配制)雞紅細胞QOOOr/min，lOmin)懸液 ImL,間隔30min，頸椎脫臼處死，將其仰位固定于鼠板上，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL，轉動鼠板lmin。取腹腔巨噬細胞洗液lmL，分別滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)， 移置37°C孵箱溫育30min。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以1 1 丙酮甲醇溶液固定，Gicmsa-磷酸緩沖液染色，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計數(shù)，每片計數(shù)100個巨噬細胞，按下式計算吞噬率和吞噬指數(shù)吞噬百分率(％ )=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)XlOO吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細胞總數(shù)/計數(shù)的巨噬細胞數(shù)得出的吞噬百分率再按下式進行數(shù)據(jù)轉換，X = SirT1 V P，式中P為吞噬百分率， 用小數(shù)表示。所得數(shù)據(jù)為計量資料，受試樣品組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均顯著高于對照組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，可判定該項實驗結果陽性。H. NK細胞活性的測定(乳酸脫氫酶LDH測定法)實驗前24h將靶細胞YAC-I進行傳代培養(yǎng)，應用前以Hank's液洗3次，用含10% 小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為4X IO5個/mL。受試小鼠頸椎脫臼處死， 無菌取脾，制成脾細胞懸液，用Hank’ s液洗2次，每次離心IOmin (lOOOr/min)。棄上清將細胞漿彈起，加入0. 5mL滅菌水20秒，裂解紅細胞后再加入0. 5mL 2倍Hank’ s液及8mL 他1^，8液，100017/11^11，101^11離心，用ImL含10%小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸，鏡檢計數(shù)，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為2 X IO7個/mL。使效靶比為50 1。取靶細胞和效應細胞各100 μ L，加入U形96孔培養(yǎng)板中；靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100 μ L，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和ΝΡ40各100 μ L ；上述各項均設三個平行孔， 37°C>5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，將96孔板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100 μ L置平底96孔培養(yǎng)板中，加入LDH基質(zhì)液100 μ L，反應3-lOmin，然后每孔加入lmol/L的HCl 溶液30 μ L終止反應，在酶標儀490nm處測光密度值(OD)，計算NK細胞活性NK細胞活性(％ )=(反應孔OD-自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD-自然釋放孔 0D)X100得出的NK細胞活性按下式進行數(shù)據(jù)轉換，X = SirT1 V P，式中P為NK細胞活性， 用小數(shù)表示。所得數(shù)據(jù)為計量資料，受試樣品組的NK細胞活性顯著高于對照組的NK細胞活性，可判定該項實驗結果陽性。6)數(shù)據(jù)處理用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)處理。采用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值< Fatl5,結論各組均數(shù)間差異無顯著性，F(xiàn)值> Fatl5， P^O. 05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計； 若變量轉換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。7)結果判定依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范)》(2003版)規(guī)定在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四個方面任兩個方面結果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。其中細胞免疫功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定細胞免疫功能測定結果陽性。體液免疫功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定體液免疫功能測定結果陽性。單核-巨噬細胞功能測定項目中的兩個實驗結果均為陽性，或任一實驗的兩個劑量組結果陽性，可判定單核-巨噬細胞功能結果陽性。NK細胞活性測定實驗的一個以上劑量組結果陽性，可判定NK細胞活性結果陽性。2、結果1)本發(fā)明增加免疫力的藥物組合物對小鼠體重的影響表1各組小鼠的初始體重(Y±SD )
權利要求
1.一種增強免疫力藥物組合物，包括以下組分刺五加、黃苗、枸杞、黃精、蛹蟲草子實體。
2.根據(jù)權利要求1所述的增強免疫力藥物組合物，其中，各組份的重量份為刺五加 79. 2-118. 8份、黃芪79. 2-118. 8份、枸杞65. 6-98. 4份、黃精65. 6-98. 4份、蛹蟲草子實體 26. 4-39. 6 份。
3.根據(jù)權利要求2所述的增強免疫力藥物組合物，其中，各組份的重量份為刺五加 89. 1-108. 9份、黃芪89. 1-108. 9份、枸杞73. 8-90. 2份、黃精73. 8-90. 2份、蛹蟲草子實體 29. 7-36. 3 份。
4.根據(jù)權利要求3所述的增強免疫力藥物組合物，其中，各組份的重量份為刺五加99 份、黃芪99份、枸杞82份、黃精82份、蛹蟲草子實體33份。
5.如權利要求1-4中任一項所述的增強免疫力藥物組合物，其特征在于，按照中藥常規(guī)制劑方法制備成任何一種臨床上適宜的制劑。
6.如權利要求5所述的增強免疫力藥物組合物，其特征在于，所述制劑是顆粒劑、膠囊劑或片劑。
7.一種制備權利要求1-4中任一項所述增強免疫力藥物組合物的方法，其特征在于， 包括如下步驟將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，10-30目造粒；將造好的顆粒在50-55°C下干燥，以顆粒劑工藝要求控制顆粒的含水量；將干燥后的顆粒選取10-20目篩網(wǎng)整粒，按照顆粒劑常規(guī)比例加入常規(guī)顆粒劑輔料混合均勻，然后裝袋，得到顆粒劑。
8.一種制備權利要求1-4中任一項所述增強免疫力藥物組合物的方法，其特征在于， 包括如下步驟將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)；按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，20-35目造粒；將造好的顆粒放入冷烘箱，吹風干燥，待顆粒松散分散時，將其加熱至50-55°C繼續(xù)烘干，使顆粒含水量符合常規(guī)膠囊劑含水量；將干燥后的顆粒冷卻，并與常規(guī)膠囊劑輔料混合均勻，然后裝入膠囊，得到膠囊劑。
9.一種制備權利要求1-4中任一項所述增強免疫力藥物組合物的方法，其特征在于， 包括如下步驟將每種原料藥粉碎后過60目篩，去除粗粒及雜質(zhì)，按照所述配比混合均勻，得到原料藥混合物；將所得原料藥混合物與食用級乙醇混合，10-30目造粒；將造好的顆粒在50-55°C下干燥，以常規(guī)片劑工藝要求控制顆粒的含水量；將干燥后的顆粒選取10-20目篩網(wǎng)整粒，按照常規(guī)比例加入常規(guī)片劑輔料混合均勻， 然后壓片，得到片劑。
10.權利要求1-5所述的增強免疫力藥物組合物在制備用于增強免疫力的藥物中的應
全文摘要
本發(fā)明涉及一種增強免疫力藥物組合物及其制備方法和應用。本發(fā)明的增強免疫力藥物組合物包括以下組分刺五加、黃芪、枸杞、黃精、蛹蟲草子實體。通過動物實驗證明了本發(fā)明增強免疫力藥物組合物對小鼠體重增長無不良影響，符合對增強免疫力保健食品的評判標準，具有增強免疫力的功能。
文檔編號A61K36/8969GK102526477SQ20101060982
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權日2010年12月28日
發(fā)明者王志文 申請人:北京潤康普瑞生物技術有限公司