專利名稱：用激肽釋放酶抑制劑治療粘膜炎的制作方法
用激肽釋放酶抑制劑治療粘膜炎相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2009年1月6日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序號(hào)61/142，746的優(yōu)先權(quán)。在先申請(qǐng)的公開內(nèi)容被認(rèn)為是本申請(qǐng)公開內(nèi)容的部分(并且通過引用并入本申請(qǐng)公開內(nèi)容中)。
背景技術(shù)：
粘膜炎是高劑量化療(CT)和/或放療(RT)方案常見的嚴(yán)重副作用，通常表現(xiàn)為口腔、食管、咽和胃腸道的紅斑和疼痛的潰瘍性損傷，威脅全世界至少600，000人的成功治療。這些旨在殺傷癌細(xì)胞的細(xì)胞減少性療法還可以無差別地破壞其他快速生長的細(xì)胞，例如口腔和咽喉以及胃腸道的內(nèi)表面。粘膜炎的發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過程。通常，粘膜炎癥狀在施用CT后5至8天發(fā)展并持續(xù)大約7至14天。粘膜炎病變目前被確定為5階段過程開始、產(chǎn)生信使而傳導(dǎo)信號(hào)、擴(kuò)增、潰瘍和最后愈合。口腔和胃腸(GI)粘膜炎可以影響達(dá)100%經(jīng)歷高劑量化療和造血干細(xì)胞移植 (HSCT)的患者、80%接受放療的頭頸惡性腫瘤患者、以及大范圍的接受化療的患者。對(duì)于大多數(shù)癌癥治療來說，大約5-15%患者患有粘膜炎。然而，使用5-氟尿嘧啶(5-FU)時(shí)，達(dá) 40%患有粘膜炎并且10-15%患有3-4級(jí)粘膜炎。依立替康治療在超過20%患者中伴有嚴(yán)重的GI粘膜炎。75-85%骨髓移植接受者經(jīng)歷粘膜炎，其中口腔粘膜炎是最常見且最使人虛弱的，特別是使用苯丙氨酸氮芥時(shí)。在3級(jí)口腔粘膜炎中，患者不能吃固體食物，并且在 4級(jí)口腔粘膜炎中，患者也不能食用液體。對(duì)頭頸或?qū)桥杌蚋共康姆暖煼謩e伴隨3級(jí)和4 級(jí)的口腔或GI粘膜炎，通常超過50%的患者。在經(jīng)歷頭頸放療的患者中，疼痛和降低的口腔功能可以在放療結(jié)束后長期持續(xù)。在大多數(shù)試驗(yàn)中，分次放射劑量增加粘膜炎風(fēng)險(xiǎn)至> 70%患者?？谇徽衬ぱ滓呀?jīng)被在經(jīng)歷造血干細(xì)胞移植的骨髓毒性療法的同時(shí)經(jīng)歷抗癌療法的患者認(rèn)定為是抗癌療法的最使人虛弱的副作用，骨髓毒性療法伴隨最高級(jí)別的粘膜毒性，70% -80%患者罹患口腔粘膜炎。嚴(yán)重的口腔粘膜炎的并發(fā)癥可以包括嚴(yán)重程度需要阿片樣物質(zhì)止痛的疼痛；由于口腔和咽喉潰瘍而難以或不能吞咽，如果嚴(yán)重可能需要完全胃腸外營養(yǎng)(TPN)和補(bǔ)水；難以或不能講話，這可能妨礙患者的交流能力。重要的是，口腔粘膜炎的發(fā)展通常阻礙腫瘤學(xué)家開出化療或放射療法的完全劑量和方案，使得該疾病常常限制可能治愈性治療的潛在完全益處。據(jù)估計(jì)，口腔粘膜炎發(fā)展的負(fù)擔(dān)增加頭頸癌患者 $4，000的醫(yī)院成本，并且增加骨髓移植患者$43，000的醫(yī)院成本。控制口腔粘膜炎是首要的。有許多不同的方法來幫助緩解疼痛，包括吸允冰塊、抗氧化劑和口腔清洗劑。幾種口腔清洗劑是可用的，組合了抗組胺藥、麻醉劑、抗炎藥(例如皮質(zhì)激素)、抗生素和抗真菌劑。麻醉性鎮(zhèn)痛藥也可以證明幫助緩解疼痛。其他方法包括抗微生物劑、抗炎劑和良好的口腔護(hù)理。帕利夫明(KEPIVANCE )(人角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF))是唯一被批準(zhǔn)用于口腔粘膜炎的藥物，并且適用于降低接受需要造血干細(xì)胞支持/移植的骨髓毒性療法的惡性血液病患者嚴(yán)重口腔粘膜炎的發(fā)病和持續(xù)時(shí)間。然而，HSCT代表了癌癥群體的小亞群， 并且大多數(shù)實(shí)體瘤帶有KGF受體，藉此，該物質(zhì)可能具有潛在不期望的激動(dòng)效應(yīng)。因此，將帕利夫明(KEPIVANCE )應(yīng)用于癌癥及隨后其治療產(chǎn)生的口腔粘膜炎的較大市場是極不可能的。除了 HSCT的其他適應(yīng)癥研究目前被進(jìn)行，并且包括藥物在移植物抗宿主疾病、頭頸癌、2/3期結(jié)腸癌多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病和小兒HSCT群體中的使用。因此，在治療粘膜炎中存在明顯的未滿足的需求。發(fā)明概述本文公開了治療粘膜炎、特別是口腔粘膜炎的方法。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于治療粘膜炎的方法，包括施用治療有效量的分離的激肽釋放酶抑制劑，任選與另一種物質(zhì)例如帕利夫明(KEPIVANCE )(人角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子(KGF))組合。本文描述的方法包括施用有效量的激肽釋放酶抑制劑。這種量可以是足以產(chǎn)生可檢測的改善、減少或緩解至少一種癥狀、調(diào)節(jié)(例如改善)至少一個(gè)生理參數(shù)或預(yù)防更嚴(yán)重級(jí)別疾病發(fā)展至統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的程度的量。本文公開了預(yù)防粘膜炎特別是口腔粘膜炎的方法。一個(gè)方面，本發(fā)明提供了預(yù)防粘膜炎(例如有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的患者中)的方法，包括施用預(yù)防有效量的分離的激肽釋放酶抑制劑，任選與另一種物質(zhì)例如帕利夫明(KEPIVANCE )(人角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子 (KGF))組合。本文描述的方法包括施用有效量的激肽釋放酶抑制劑。這種量可以是足以減少或延遲或緩解至少一種癥狀或一個(gè)生理參數(shù)的量。有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者(例如患者)可以是例如將經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷化療(例如高劑量化療)和/或放療方案的受試者。作為另一個(gè)實(shí)例，有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者(例如患者)可以是例如已被診斷患有癌癥例如頭或頸癌的受試者。用于方法、組合物和試劑盒的激肽釋放酶抑制劑可以是例如血漿激肽釋放酶 (pKal)或組織激肽釋放酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，抑制劑是血漿激肽釋放酶抑制劑。用于方法、組合物和試劑盒的激肽釋放酶抑制劑可以是本文描述的Kimitz結(jié)構(gòu)域多肽的任何一個(gè)、包括任何此類Kimitz結(jié)構(gòu)域的更大多肽(條件是通過標(biāo)準(zhǔn)測定法測定，激肽釋放酶抑制劑多肽結(jié)合并抑制激肽釋放酶)、激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如抗體，例如抗血漿激肽釋放酶抗體)或本文描述的其他激肽釋放酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，激肽釋放酶抑制劑包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成:Glu Ala Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO :2)或其片段，例如 SEQ ID NO :2 的氨基酸 3-60 在一些實(shí)施方案中，激肽釋放酶抑制劑包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列 iij^ :Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO 2的氨基酸3-60)。在一些實(shí)施方案中，激肽釋放酶抑制劑包括血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如抗體，例如本文描述的抗血漿激肽釋放酶抗體)。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白(例如抗體，例如人抗體)結(jié)合相同的表位或者競爭結(jié)合本文描述的蛋白。在一些實(shí)施方案中，本文描述的蛋白選自由以下組成的組M162-A04，M160-G12, M142-H08, X63-G06, X81-B01, X67-D03 和 X67-G04。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X81-B01競爭或結(jié)合相同表位。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白與)(67-D03競爭或結(jié)合相同表位。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人前激肽釋放酶)，但是結(jié)合血漿激肽釋放酶(例如人血漿激肽釋放酶)的活性形式。在某些實(shí)施方案中，蛋白在血漿激肽釋放酶或其片段的催化結(jié)構(gòu)域的活性位點(diǎn)或附近結(jié)合，或者結(jié)合與血漿激肽釋放酶活性位點(diǎn)重疊的表位。在一些實(shí)施方案中，蛋白結(jié)合形成血漿激肽釋放酶的催化三聯(lián)體的一個(gè)或多個(gè)氨基酸His434、Asp483和/或Ser578 (編號(hào)基于人序列)。在一些實(shí)施方案中，蛋白結(jié)合Ser479、Tyr563和/或Asp585 (編號(hào)基于人序列) 的一個(gè)或多個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白使因子XIIa和/或緩激肽生產(chǎn)減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、 約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%，與標(biāo)準(zhǔn)相比較，例如在相同條件下但不存在所述蛋白時(shí)的因子XIIa和/或緩激肽生產(chǎn)。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白具有小于1000、500、100或IOnM的表觀抑制常數(shù)禮,_)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列是相同多肽鏈的組成部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列是不同多肽鏈的組成部分。例如， 血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白是IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白可以是可溶性Fab(sFab)。在其他實(shí)施方式中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白包括Fab2'、scFv、迷你抗體、 scFv: :Fc融合體、Fab: :HSA融合體、HSA: :Fab融合體、Fab: :HSA: :Fab融合體或者包括本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可以提供為 IgG、Fab、Fab2、Fab2 ‘、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH: :CH1: :HSA+LC、 HSA: :VH: :CH1+LC、LC: :HSA+VH: :CHI、HSA: :LC+VH: :CH1 或其他適當(dāng)?shù)臉?gòu)建體。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白是人或人源化抗體或者在人中是非免疫原性的。例如，蛋白包括一個(gè)或多個(gè)人抗體構(gòu)架區(qū)，例如所有人構(gòu)架區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白包括人Fc結(jié)構(gòu)域或與人Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白是靈長類或靈長類化抗體或者在人中是非免疫原性的。例如，蛋白包括一個(gè)或多個(gè)靈長類抗體構(gòu)架區(qū)，例如，所有靈長類構(gòu)架區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白包括靈長類Fc結(jié)構(gòu)域或者與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的!7C結(jié)構(gòu)域。“靈長類”包括人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes 和 Pan paniscus (倭猩猩))、大猩猩(Gorilla gorilla)、長臂猿、猴子、狐猴、 旨猴(Daubentonia madagascariensis)禾口目艮鏡猴。在一個(gè)實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白包括人構(gòu)架區(qū)或與人構(gòu)架區(qū)至少 95、96、97、98或99%相同的構(gòu)架區(qū)。在某些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白不包括來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎選自由口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和胃腸粘膜炎組成的組。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎是口腔粘膜炎。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括施用帕利夫明。在一些實(shí)施方案中，結(jié)合蛋白(例如抗體，例如人抗體)包括重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列，其中所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自本文描述的蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè))CDR區(qū)，和/或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自本文描述的蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè))⑶R區(qū)，其中所述蛋白結(jié)合(例如，并且抑制)血漿激肽釋放酶。在一些實(shí)施方案中，所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自M162-A04、 M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 或 X67-G04 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè))CDR區(qū)，和/或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自M162-A04、M160-G12、M142-H08、 X63-G06、X81-B01、X67-D03或)(67-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè)) CDR區(qū)(分別地)。在一些實(shí)施方案中，來自所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè)) ⑶R區(qū)來自X81-B01，和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè))⑶R區(qū)來自 X8I-BOI0在一些實(shí)施方案中，來自所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè)) ⑶R區(qū)來自X67-D03，和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)(例如三個(gè))⑶R區(qū)來自)(67-D03。在一些實(shí)施方案中，所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括本文描述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括本文描述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括M162-A04、 M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 或 X67-G04 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和 / 或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括] 162-404、]\1160-612、]\1142-!108463-606481-801、 X67-D03或X67-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(分別地)。在一些實(shí)施方案中，所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括X81-B01的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括X81-B01的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括)(67-D03的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括X67-D03的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施方案中，蛋白包括本文描述蛋白的重鏈和/或本文描述蛋白的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，蛋白包括M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、 X67-D03 或 X67-G04 的重鏈和 / 或 M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、 X67-D03或X67-G04的輕鏈(分別地)。在一些實(shí)施方案中，蛋白包括X81-B01的重鏈和/或X81-B01的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，蛋白包括)(67-D03的重鏈和/或)(67-D03的輕鏈。在一些實(shí)施方案中，蛋白包括下述特征的一個(gè)或多個(gè)(a)人⑶R或人構(gòu)架區(qū)；(b) HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、88、89、90、 91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%相同的一個(gè)或多個(gè)(例如 1、2 或 3) CDR ； (c) LC 免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域的^1 至少85、88、89、90、91、92、 93、94、95、96、97、98、99或100%相同的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3) CDR ； (d) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、 98、99或100%相同(例如，總體上或在構(gòu)架區(qū)或CDR中)；(e)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100% 相同(例如，總體上或在構(gòu)架區(qū)或CDR中)；(f)蛋白結(jié)合本文描述蛋白結(jié)合的表位，或者與本文描述的蛋白競爭結(jié)合；(g)靈長類CDR或靈長類構(gòu)架區(qū)；(h)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域的CDRl至少一個(gè)氨基酸但不超過2或3個(gè)氨基酸差異的CDRl ； (i)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域的CDR2至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4、5、6、7或8個(gè)氨基酸差異的⑶R2 ； (J)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域的CDR3至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4、5或6 個(gè)氨基酸差異的CDR3 ； (k) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域的⑶Rl至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4或5個(gè)氨基酸差異的⑶Rl ； (1) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域的CDR2至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3或4個(gè)氨基酸差異的CDR2 ； (m)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域的 ⑶R3至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4或5個(gè)氨基酸差異的⑶R3 ； (n) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文描述的LC可變結(jié)構(gòu)域至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸差異(例如，總體上或在構(gòu)架區(qū)或CDR中)；和(O)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文描述的HC可變結(jié)構(gòu)域至少一個(gè)氨基酸但不超過2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)氨基酸差異 (例如，總體上或在構(gòu)架區(qū)或CDR中)。在一些實(shí)施方案中，蛋白具有小于1000、500、100或IOnM的表觀抑制常數(shù)(Kiiapp)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的輕鏈和重鏈的抗體(例如人抗體):M162_A04、M160-G12, Μ142-Η08, X63-G06, X81-B0U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的重鏈的抗體 (例如人抗體):M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 和 X67-G04。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的輕鏈的抗體 (例如人抗體):M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 和 X67-G04。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)M162_A04、M160-G12, M142-H08, X63-G06, X81-B0U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體):M162_A04、M160-G12, M142-H08, X63-G06, X81-B0U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的組的抗體的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體):M162_A04、M160-G12, M142-H08, X63-G06, X81-B0U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的重鏈組的相應(yīng)CDR的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)重鏈CDR的抗體(例如人抗體):M162-A04、M160-G12、M142-H08、 X63-G06, X81-B0U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由以下組成的輕鏈組的相應(yīng)CDR的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)輕鏈CDR的抗體(例如人抗體):M162-A04、M160-G12、M142-H08、 X63-G06, X81-BO U X67-D03 和 X67-G04o在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自由M162-A04、M160-G12、M142-H08、 X63-G06、X81-B01、X67-D03和X67-G04組成的重鏈組的相應(yīng)CDR的一個(gè)或多個(gè)(例如1、 2 或 3)重鏈 CDR 和選自由 M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 和 X67-G04組成的輕鏈組的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或幻輕鏈⑶R(分別地)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有X81-B01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有X81-B01的重鏈的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有X81-B01的輕鏈的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自X81-B01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有X81-B01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有X81-B01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自X81-B01的重鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)重鏈⑶R的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自X81-B01的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)輕鏈CDR的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自X81-B01的重鏈的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2 或3)重鏈⑶R和來自X81-B01的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)輕鏈CDR 的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有)(67-D03的輕鏈和重鏈的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有)(67-D03的重鏈的抗體(例如人抗體)。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有)(67-D03的輕鏈的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有選自X67-D03的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有)(67-D03的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有)(67-D03的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自X67-D03的重鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)重鏈⑶R的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自X67-D03的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或3)輕鏈CDR的抗體(例如人抗體)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，蛋白是具有來自)(67-D03的重鏈的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2 或3)重鏈⑶R和來自X67-D03的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個(gè)或多個(gè)(例如1、2或幻輕鏈⑶R 的抗體(例如人抗體)。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如，人前激肽釋放酶)，但是結(jié)合血漿激肽釋放酶(例如人血漿激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白使因子XIIa和/或緩激肽生產(chǎn)減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、 約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%，與標(biāo)準(zhǔn)相比較，例如在相同條件下但不存在所述蛋白時(shí)的因子XIIa和/或緩激肽生產(chǎn)。在一些實(shí)施方案中，血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白具有小于1000、500、100或IOnM的表觀抑制常數(shù)禮,_)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列是相同多肽鏈的組成部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列是不同多肽鏈的組成部分。例如， 蛋白是IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。蛋白可以是可溶性Fab (sFab)。在其他實(shí)施方式中，蛋白包括Fab2 ‘、scFv、迷你抗體、scFv: :Fc融合體、 Fab: :HSA融合體、HSA: :Fab融合體、Fab: :HSA: :Fab融合體或者包括本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可以提供為IgG、Fab、Fab2、 Fab2'、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH: :CH1: :HSA+LC、HSA: :VH: :CH1+LC、 LC: :HSA+VH: :CHI、HSA: :LC+VH: :CH1 或其他適當(dāng)?shù)臉?gòu)建體。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白是人或人源化抗體或者在人中是非免疫原性的。例如，蛋白包括一個(gè)或多個(gè)人抗體構(gòu)架區(qū)，例如所有人構(gòu)架區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白包括人Fc結(jié)構(gòu)域或與人Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或 99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白是靈長類或靈長類化抗體或者在人中是非免疫原性的。 例如，蛋白包括一個(gè)或多個(gè)靈長類抗體構(gòu)架區(qū)，例如，所有靈長類構(gòu)架區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白包括靈長類Fc結(jié)構(gòu)域或者與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少 95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域?！办`長類”包括人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes 和 Pan paniscus (倭猩猩))、大猩猩(Gorilla gorilla)、長臂猿、猴子、狐猴、指猴(Daubentonia madagascariensis)禾口目艮鏡猴。在一個(gè)實(shí)施方案中，蛋白包括人構(gòu)架區(qū)或與人構(gòu)架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的構(gòu)架區(qū)。在某些實(shí)施方案中，蛋白不包括來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎選自由口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和胃腸粘膜炎組成的組。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎是口腔粘膜炎。在一些實(shí)施方案中，所述方法還包括施用帕利夫明。一方面，本發(fā)明提供了用于治療粘膜炎的試劑盒。該試劑盒包括激肽釋放酶抑制劑以及給患有粘膜炎或有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者(例如患者)施用所述抑制劑的使用說明書。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒還包括施用治療粘膜炎的其他治療劑(例如帕利夫明)的使用說明書，并且可以任選包含其他治療劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述使用說明書提供了激肽釋放酶抑制劑的給藥方案、給藥時(shí)間表和/或施用途徑，不同于在缺乏其他治療劑時(shí)抑制劑的給藥方案、給藥時(shí)間表和/或施用途徑。有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者(例如患者)可以是例如將經(jīng)歷、正在經(jīng)歷或?qū)⒔?jīng)歷化療(例如，高劑量化療)和/或放療方案的受試者。作為另一個(gè)實(shí)例，有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者(例如患者)可以是例如已被診斷患有癌癥例如頭或頸癌的受試者。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎選自由口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和胃腸粘膜炎組成的組。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎是口腔粘膜炎。在一些方面，本公開特征為試劑盒，其中該試劑盒包括包含分離的激肽釋放酶抑制劑的容器；和所述激肽釋放酶抑制劑用于治療粘膜炎的使用說明書。在一些實(shí)施方案中，試劑盒還包括包含帕利夫明的容器。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎選自由口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和胃腸粘膜炎組成的組。在一些實(shí)施方案中，粘膜炎是口腔粘膜炎。在一些方面，本公開特征為包含治療有效量的本文描述的分離的激肽釋放酶抑制劑和治療有效量的帕利夫明的組合物。在另一方面，本文提供了分離的激肽釋放酶抑制劑在生產(chǎn)用于治療和/或預(yù)防粘膜炎的藥劑中的用途。本發(fā)明一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案的細(xì)節(jié)在附圖和以下描述中提出。本發(fā)明的其他特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將根據(jù)說明書和附圖以及根據(jù)權(quán)利要求書而明顯。本申請(qǐng)引用的所有參考文獻(xiàn)、待決的專利申請(qǐng)和公布的專利的內(nèi)容在此明確通過引用并入。附圖簡述

圖1顯示了質(zhì)粒pPIC-K503中的一部分DNA和相應(yīng)的針對(duì)示例性激肽釋放酶抑制劑多肽推導(dǎo)的氨基酸。插入的DNA編碼與具有加框區(qū)包圍的氨基酸的PEP-I (DX-88)多肽的氨基末端框內(nèi)融合的釀酒酵母的mat α Prepro信號(hào)肽(加下劃線)。加框區(qū)中顯示的PEP-I多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO :2，并且相應(yīng)的核苷酸編碼序列是SEQ ID NO :3。虛線箭頭指示用于產(chǎn)生測序模板的AOX區(qū)中兩個(gè)PCR引物的位置和方向。圖中整個(gè)核苷酸序列的DNA序列包括融合蛋白的結(jié)構(gòu)編碼序列并且指定為SEQ ID NO :27。該序列加雙下劃線的部分指示診斷探針序列。BstBI和EcoR I指示序列中其各自回文、六聚、限制內(nèi)切酶位點(diǎn)的位置。星號(hào)指示翻譯終止密碼子。詳情參見正文。圖2A和2B顯示了示例性氨基酸序列、衍生這些變體的天然LACI序列(SEQ ID NO 32)和其他已知Kunitz結(jié)構(gòu)域(SEQ ID NOS J9-31和33-53)的比對(duì)。顯示了半胱氨酸殘基。圖3描繪了使用ROLIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化的形式(X63-G06) 和種系化、密碼子優(yōu)化的形式(X81-B01)的輕鏈DNA序列的比對(duì)。星號(hào)(*)指示的位置是保守的，而空位對(duì)應(yīng)于X81-B01中由于密碼子優(yōu)化或種系化而改變的堿基。圖4描繪了使用ROLIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化的形式(X63-G06) 和種系化、密碼子優(yōu)化的形式(X81-B01)的輕鏈氨基酸序列的比對(duì)。星號(hào)(*)指示的位置是保守的，而空位對(duì)應(yīng)于X81-B01中由于種系化而改變的氨基酸。在非種系化的抗體 (X63-G06)和種系化、密碼子優(yōu)化的抗體(X81-B01)之間總共11個(gè)氨基酸不同。圖5描繪了使用ROLIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化的形式(X63-G06) 和種系化、密碼子優(yōu)化的形式(X81-B01)的重鏈DNA序列的比對(duì)。星號(hào)(*)指示的位置是保守的，而空位對(duì)應(yīng)于X81-B01中由于密碼子優(yōu)化而改變的DNA堿基。圖6描繪了使用ROLIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化的形式(X63-G06) 和種系化、密碼子優(yōu)化的形式(X81-B01)的重鏈氨基酸序列的比對(duì)。星號(hào)(*)指示的位置是保守的。兩個(gè)抗體在重鏈中具有相同的氨基酸序列。圖 7A 描繪了 EPI-KAL2 與 X81-B01 競爭結(jié)合 pKal。X81-B01 (IgG)被捕獲在 CM5 BIACORE 芯片上的抗人Fc片段特異性表面。pKal (IOOnM)在1 μ M EPI-KAL2存在(圖中的下方的傳感圖)或不存在(圖中上方的傳感圖)下流經(jīng)所述表面。圖 7Β 描繪了 EPI-KAL2 與 X67-D03 競爭結(jié)合 pKal。X67-D03 (IgG)被捕獲在 CM5 BIACORE芯片上的抗人Fc片段特異性表面。pKal (IOOnM)在1 μ M EPI-KAL2存在下(圖中的下方的傳感圖)或不存在下(圖中上方的傳感圖)流經(jīng)所述表面。圖8描繪了表15所列抗體的CLIPS表位作圖結(jié)果。圖9A-9C描繪了來自不同物種的pKal序列的ClustalW比對(duì)?！?”指示的位置在物種之間是保守位置，而“”指示的位置指示物種之間的保守取代?！?”指示的位置在一些物種中是非保守取代。符號(hào)指示的氨基酸區(qū)段通過溶劑可及表面積計(jì)算被顯示是高度溶劑暴露的?！?+ ”指示的氨基酸區(qū)段被鑒定為表15所列抗體的潛在表位?；疑癸@的氨基酸通過溶劑可及表面積計(jì)算被發(fā)現(xiàn)在與Kimitz結(jié)構(gòu)域活性位點(diǎn)抑制劑復(fù)合時(shí)被包埋。加下劃線的位置是形成催化三聯(lián)體的氨基酸(His434、Asp483和kr578，編號(hào)基于人序列)。發(fā)明詳述發(fā)明人在本文提出了通過施用分離的激肽釋放酶抑制劑來治療粘膜炎例如口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和/或胃腸粘膜炎的新方法。^X為了方便，在進(jìn)一步描述本發(fā)明之前，說明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求書中采用的某些術(shù)語在此定義。除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)提及物。術(shù)語“抗體”指包括至少一種免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的蛋白。例如，抗體可以包括重(H)鏈可變區(qū)(在本文縮寫為VH)和輕(L)鏈可變區(qū)(在本文縮寫為VL)。在另一實(shí)例中，抗體包括兩個(gè)重(H)鏈可變區(qū)和兩個(gè)輕(L)鏈可變區(qū)。術(shù)語“抗體”涵蓋抗體的抗原結(jié)合片段(例如，單鏈抗體、Fab和sFab片段、F(ab' )2、Fd片段、Fv 片段、scFv 和結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)片段(de Wildt 等，Eur J Immunol. 1996 ；26 (3) 629-39.))以及完整抗體?？贵w可以具有IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亞型)的結(jié)構(gòu)特征。 抗體可以來自任何來源，但是靈長類(人和非人靈長類)和靈長類化的抗體是優(yōu)選的。VH和VL區(qū)可以進(jìn)一步細(xì)分為高變區(qū)，稱為“互補(bǔ)決定區(qū)”(“⑶R”)，介于稱為“構(gòu)架區(qū)”(“FR”)的更保守的區(qū)域之間。構(gòu)架區(qū)和⑶RP的范圍已經(jīng)被精確確定(參見，Kabat， Ε· A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242,禾口 Chothia，C.等(1987) J. Mol. Biol. 196 :901_917，還參見 www. hgmp. mrc. ac. uk)。本文使用 Kabat定義。每個(gè)VH和VL通常包括三個(gè)⑶R和四個(gè)FR，從氨基末端到羧基末端以如下順序排列FR1，CDRl，F(xiàn)R2, CDR2, FR3, CDR3, FR4?？贵w的VH或VL鏈可以進(jìn)一步包括重鏈或輕鏈恒定區(qū)的全部或部分，從而分別形成免疫球蛋白重鏈或免疫球蛋白輕鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是兩個(gè)免疫球蛋白重鏈和兩個(gè)免疫球蛋白輕鏈的四聚體，其中免疫球蛋白重鏈和免疫球蛋白輕鏈通過例如二硫鍵相互連接。在IgG中，重鏈恒定區(qū)包括三個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，CHU CH2和CH3。輕鏈恒定區(qū)包括CL結(jié)構(gòu)域。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)通常介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)核經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(Clq)。免疫球蛋白輕鏈可以是κ或Y型。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是糖基化的?？贵w可以對(duì)抗體依賴性細(xì)胞毒性和/或補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性而言是功能性的?？贵w的一個(gè)或多個(gè)區(qū)可以是人的或?qū)嶋H上是人的。例如，可變區(qū)的一個(gè)或多個(gè)可以是人或?qū)嶋H上是人的。例如，⑶R的一個(gè)或多個(gè)可以是人的，例如HC⑶R1、HC⑶R2、HC CDR3、LC CDRULC CDR2和LC CDR3。輕鏈CDR的每一個(gè)可以是人的。HC CDR3可以是人的。 構(gòu)架區(qū)的一個(gè)或多個(gè)可以是人的，例如HC或LC的FR1、FR2、FR3和FR4。例如，F(xiàn)c區(qū)可以是人的。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有構(gòu)架區(qū)是人的，例如，具有人體細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的構(gòu)架區(qū)序列，所述人體細(xì)胞例如產(chǎn)生免疫球蛋白的造血細(xì)胞或非造血細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，人序列是種系序列，例如由種系核酸編碼。在一個(gè)實(shí)施方案中，選定Fab的構(gòu)架(FR)殘基可以被轉(zhuǎn)換為最相似的靈長類種系基因、特別是人種系基因中相應(yīng)殘基的氨基酸類型。恒定區(qū)的一個(gè)或多個(gè)可以是人的或?qū)嶋H上是人的。例如，免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域、恒定區(qū)、恒定結(jié)構(gòu)域(CH1，CH2，CH3，CL1)或完整抗體的至少70、75、80、85、90、92、95、98或100%可以是人的或?qū)嶋H上是人的?？贵w的全部或部分可以通過免疫球蛋白基因或其區(qū)段編碼。示例性的人免疫球蛋白基因包括 κ、λ、α (IgAl 和 IgA2)、y (IgGl，IgG2，IgG3，IgG4)、δ、ε 和 μ 恒定區(qū)基因以及許多免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長免疫球蛋白“輕鏈”(約25KDa或約214個(gè)氨基酸)由NH2-末端的可變區(qū)基因(約110個(gè)氨基酸)和COOH-末端的κ或λ恒定區(qū)基因編碼。 類似地，全長免疫球蛋白“重鏈”(約50KDa或約446個(gè)氨基酸)由可變區(qū)基因(約116個(gè)氨基酸)和其他前述恒定區(qū)基因之一例如、(編碼約330個(gè)氨基酸)編碼。人HC的長度被顯著改變，因?yàn)镠C CDR3從約3個(gè)氨基酸殘基變?yōu)槌^35個(gè)氨基酸殘基。術(shù)語全長抗體的“抗原結(jié)合片段”指保持與感興趣的靶特異性結(jié)合能力的全長抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。術(shù)語全長抗體的“抗原結(jié)合片段”結(jié)合片段內(nèi)涵蓋的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的一價(jià)片段；(ii)F(ab' )2片段，包括通過二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段，(ν)由VH結(jié)構(gòu)域組成的 dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341 :544-546)；和(vi)保留功能性的分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CD 。而且，盡管Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域VL和VH由單獨(dú)基因編碼，但是它們可以使用重組方法由合成連接體結(jié)合，所述連接體使它們能夠成為單個(gè)蛋白鏈，其中VL和VH區(qū)配對(duì)形成一價(jià)分子，成為單鏈Fv(scFv)。參見例如美國專利5，260，203,4, 946，778和4，881，175 ； Bird 等(1988)Science 242 :423-426 ；和 Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 5879-5883?？贵w片段可以使用任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)獲得，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)。 術(shù)語“單特異性抗體”指對(duì)特定靶例如表位表現(xiàn)出單一結(jié)合特異性和親和力的抗體。該術(shù)語包括“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”，其在本文用來指單分子組合物的抗體或其片段制品，不論該抗體是如何產(chǎn)生的。抑制常數(shù)(Ki)提供了抑制劑效價(jià)的量度，它是使酶活性減少一半所需的抑制劑濃度，并且不依賴于酶或底物濃度。表觀Ki(Ki,app)以不同底物濃度獲得，通過測量不同濃度抑制劑(例如抑制性結(jié)合蛋白)對(duì)反應(yīng)程度(例如酶活性)的抑制效果；將作為抑制劑濃度的函數(shù)的假一級(jí)速率常數(shù)變化擬合為Morrison方程(方程1)，產(chǎn)生對(duì)表觀Ki值的估計(jì)。Ki是從Ki，app與底物濃度曲線的線性回歸分析提取的y軸截距獲得的。
權(quán)利要求
1.一種用于治療或預(yù)防粘膜炎的方法，該方法包括給患有粘膜炎或者有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展粘膜炎的受試者施用治療有效量的分離的激肽釋放酶抑制劑。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述激肽釋放酶抑制劑是血漿激肽釋放酶抑制劑。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述血漿激肽釋放酶抑制劑包括含有下述氨基酸序列的多肽Xaal Xaa2 Xaa3 Xaa4 Cys Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 XaalO Xaall Gly Xaa 13 Cys Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28 Xaa29 Cys Xaa31 Xaa32 Phe Xaa34 Xaa35 Gly Gly Cys Xaa39 Xaa40 Xaa41 Xaa42 Xaa43 Xaa44 Xaa45 Xaa46 Xaa47 Xaa48 Xaa49 Xaa50 Cys Xaa52 Xaa53 Xaa54 Cys Xaa56 Xaa57 Xaa58(SEQ ID NO :1)，其中Xaal、Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa56、Xaa57或Xaa58各自獨(dú)立為任何氨基酸或者不存在；XaalO是選自由以下組成的組的氨基酸Asp和Glu ；Xaall是選自由以下組成的組的氨基酸Asp、Gly、kr、Val、Asn、lie、Ala和Thr ； Xaa 13是選自由以下組成的組的氨基酸ArgjisJrc^AsnJerJhiNAlaAGlyALys和Gln ；Xaa 15是選自由以下組成的組的氨基酸Arg、Lys、Ala、Ser、Gly、Met、Asn和Gln ；Xaa 16是選自由以下組成的組的氨基酸Ala、Gly、Ser, Asp和Asn ；Xaa 17是選自由以下組成的組的氨基酸Ala、Asn、Ser, lie、Gly、Val.Gln和Thr ；Xaa 18是選自由以下組成的組的氨基酸His、Leu、Gln和Ala ；Xaa 19是選自由以下組成的組的氨基酸Pro、Gin、Leu、Asn和Ile ；Xaa21是選自由以下組成的組的氨基酸Trp、Phe, Tyr、His和lie ；Xaa22是選自由以下組成的組的氨基酸Tyr和Wie ；Xaa23是選自由以下組成的組的氨基酸Tyr和Wie ；Xaa31是選自由以下組成的組的氨基酸Glu、Asp、Gln、Asn、Ser、Ala、Val、Leu、Ile和Thr ；Xaa32是選自由以下組成的組的氨基酸Glu、Gin、Asp Asn、Pro, Thr, Leu、Ser, Ala、 Gly 禾口 Val ；Xaa34是選自由以下組成的組的氨基酸Thr、lie、Ser, Val、Ala、Asn、Gly和Leu ；Xaa35是選自由以下組成的組的氨基酸Tyr、Trp和Wie ；Xaa39是選自由以下組成的組的氨基酸Glu、Gly、Ala、Ser和Asp ；Xaa40是選自由以下組成的組的氨基酸Gly和Ala ；Xaa43是選自由以下組成的組的氨基酸Asn和Gly ；Xaa45是選自由以下組成的組的氨基酸Phe和Tyr ；并且其中所述多肽抑制激肽釋放酶。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中XaalO是Asp。
5.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaall是Asp。
6.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaal3是ftx)，Xaal5是Arg，Xaal6是Ala，Xaa17是 Ala, Xaa 18 是 His，并且 Xaal9 是 Pro。
7.權(quán)利要求3所述的方法，其中是Trp。
8.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaa31是Glu。
9.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaa32是Glu。
10.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaa34是lie。
11.權(quán)利要求3所述的方法，其中是Tyr。
12.權(quán)利要求3所述的方法，其中Xaa39是Glu。
13.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多肽包括MetHis Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe PheAsn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO :2 的氨基酸 3-60)。
14.權(quán)利要求13所述的方法，其中所述多肽還包括在氨基末端Met殘基之前的 Glu-Ala 序列。
15.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多肽由以下組成MetHis Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg TrpPhe Phe Asn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp (SEQ ID NO :2 的氨基酸 3-60)。
16.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多肽包括GluAla Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp(SEQ ID NO : 。
17.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述多肽由以下組成GluAla Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Arg Ala Ala His Pro Arg Trp Phe Phe Asn lie Phe Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe lie Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp(SEQ ID NO :2)。
18.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述血漿激肽釋放酶抑制劑包括血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白，所述血漿激肽釋放酶結(jié)合蛋白包括重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列，其中所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自本文描述的蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)⑶R區(qū)，并且所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自本文描述的蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)⑶R區(qū)，其中所述蛋白結(jié)合血漿激肽釋放酶。
19.權(quán)利要求18所述的方法，其中所述重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自 M162-A04、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X81-B01、X67-D03 或 X67-G04 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)⑶R區(qū)，并且所述輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包括來自M162-A04、M160-G12、M142-H08、 X63-G06, X81-B01、X67-D03或)(67-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)CDR區(qū)(分別地)。
20.權(quán)利要求18所述的方法，其中來自所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)CDR區(qū)來自X81-B01，并且來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)⑶R區(qū)來自X81-B01。
21.權(quán)利要求18所述的方法，其中來自所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)CDR區(qū)來自X67-D03，并且來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)⑶R區(qū)來自X67-D03。
22.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述粘膜炎選自由口腔粘膜炎、食管粘膜炎、咽粘膜炎和胃腸粘膜炎組成的組。
23.權(quán)利要求22所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎。
24.權(quán)利要求1所述的方法，還包括施用帕利夫明。
25.一種組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1所述的分離的激肽釋放酶抑制劑和治療有效量的帕利夫明。
26.—種試劑盒，其中所述試劑盒包括 包含分離的激肽釋放酶抑制劑的容器；和用于治療粘膜炎的所述激肽釋放酶抑制劑的使用說明書。
27.權(quán)利要求沈所述的試劑盒，還包括包含帕利夫明的容器。
全文摘要
公開了用于治療粘膜炎的包括分離的激肽釋放酶抑制劑的方法、試劑盒和組合物。
文檔編號(hào)A61K38/16GK102307594SQ201080004100
公開日2012年1月4日 申請(qǐng)日期2010年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月6日
發(fā)明者A·施德利西特 申請(qǐng)人:戴?？怂褂邢薰?br>