專利名稱：滅活的全病毒疫苗的穩(wěn)定賦形劑的制作方法
滅活的全病毒疫苗的穩(wěn)定賦形劑本發(fā)明涉及一種疫苗組合物，它含有這種滅活全病毒和使該疫苗組合物穩(wěn)定的賦形劑，該賦形劑組合物含有緩沖液、必需和非必需的氨基酸混合物、二糖、多元醇、螯合劑、 脲或脲衍生物和非離子型表面活性劑。本發(fā)明還涉及這種疫苗組合物的制備方法以及如此賦形劑組合物。在病毒疫苗的范圍內，通常將病毒疫苗分成3種類型活病毒疫苗、滅活全病毒疫苗和亞單位病毒疫苗。這3種類型疫苗通過它們是固有的和它們?yōu)槠浔４娑?guī)定使用的賦形劑組合物的一些特征進行區(qū)分。一般而言，含有受限量病毒抗原的這些亞單位疫苗比滅活的全病毒疫苗更容易保存，因為即使它們被殺死也都試圖保持其結構完整性，或比這些活病毒疫苗更容易保存，因為它們也試圖保持其病毒感染能力。對于每類病毒疫苗已制備出合適賦形劑。對于這些減毒病毒的病毒疫苗，根據待保存減毒病毒制備物已制備出不同的穩(wěn)定賦形劑。JP 57007423描述了一種用于使麻疹病毒的減毒株穩(wěn)定的以在磷酸鹽緩沖液中的二糖和多元醇為基的賦形劑。EP 065905描述了含有在磷酸鹽緩沖液中的一種或多種選自十一氨基酸、乳糖和山梨糖醇的氨基酸的用于使登革熱病毒減毒株穩(wěn)定的賦形劑。 最后，EP 0869814描述一種疫苗組合物，它含有一種水痘病毒減毒株和穩(wěn)定劑，該穩(wěn)定劑含有山梨糖醇、甘露醇、蔗糖、葡聚糖、氨基酸的混合物、脲和EDTA。在滅活病毒疫苗的領域內，即時給藥的疫苗組合物往往含有動物來源蛋白，例如牛或人的白蛋白、明膠或酪蛋白。這些蛋白已知用于改善這些疫苗，尤其含有難以保存病毒的疫苗的保存(穩(wěn)定作用)。含有滅活狂犬病病毒的疫苗組合物便是這種情況。 Frazatti-Gallina及其同事在《Vaccine》(2004)，第23卷，第511-517頁中強調蛋白質在穩(wěn)定抗狂犬病疫苗中的重要作用，因為該賦形劑含有白蛋白。然而，在這些疫苗中存在蛋白，除了如果蛋白來源沒有嚴格加以控制而可能存在傳播疾病潛在危險外，還可存在一種努力避免的潛在過敏風險，尤其當這些疫苗含有血清蛋白，例如白蛋白或白蛋白衍生物時。因此，需要尋找一種其組成不含有蛋白的穩(wěn)定賦形劑以使這些滅活全病毒的病毒疫苗穩(wěn)定，特別地以使含有難以保存的滅活全病毒(例如狂犬病病毒)的疫苗穩(wěn)定。還需要尋找一種也適合于使低劑量滅活病毒疫苗穩(wěn)定的穩(wěn)定賦形劑，即在有效劑量疫苗中它含有少量的總蛋白。對于含有非常少的殘留蛋白雜質的非常純的疫苗而言，這種要求是更重要的。這些殘留蛋白雜質，即使它們有潛在的過敏性風險，但在一定程度上可有助于使低劑量滅活病毒疫苗穩(wěn)定。它們可阻止能使疫苗效力降低的病毒聚集、結構退化或吸附現象發(fā)生。為此，本發(fā)明的目的是一種疫苗組合物，它含有
a)滅活全病毒制備物，以及
b)穩(wěn)定賦形劑，它含有 i緩沖液，
必需和非必需氨基酸的混合物， iii 二糖，iv多元醇， ν螯合劑，
Vi脲或脲衍生物，以及 Vii非離子型表面活性劑。優(yōu)選地，該滅活全病毒是狂犬病病毒。根據本發(fā)明的一個方面，該疫苗組合物也沒有任何血清蛋白。根據另一個方面，該疫苗組合物還沒有任何動物來源的外源蛋白，優(yōu)選地沒有任何動物來源的外源產品。根據另一個方面，這些病毒蛋白是在該疫苗組合物中存在總蛋白的至少70%。根據另一個方面，在該疫苗組合物中的總蛋白濃度彡lOOPg/ml，優(yōu)選地彡80μδ/ ml ο在一個特別方面中，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的總蛋白量< lOOPg。在另一個特別方面中，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的總蛋白的量是 1-50μβ。在本發(fā)明的另一個方面中，該穩(wěn)定賦形劑沒有任何蛋白，或任何蛋白和任何肽，或優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽。根據另一個方面，在該疫苗組合物中含有的必需和非必需氨基酸的混合物至少含有精氨酸或精氨酸鹽和谷氨酸或谷氨酸鹽。根據一個特別方面，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的必需和非必需氨基酸的量是 0. 5-2. 5mg。根據另一個方面，在賦形劑中含有的二糖是麥芽糖。根據另一個方面，在該疫苗組合物中含有的多元醇是山梨糖醇。根據一個特別方面，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的二糖和多元醇的量是 10-50mg。在另一個方面中，在該疫苗組合物中含有的鰲合劑是EDTA或EDTA鹽。根據一個特別方面，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的鰲合劑的量是
0. 01-0. Imgo根據另一個特別方面，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的脲或脲衍生物的量是 0. 3-1. 5mg0在另一個方面中，在該疫苗組合物中含有的非離子型表面活性劑是泊洛沙姆 (poloxamere)0優(yōu)選地，該泊洛沙姆是泊洛沙姆188。根據一個特別方面，在一個有效劑量的疫苗組合物中含有的非離子型表面活性劑量是 0. 001-0. 5mg。根據另一個方面，該疫苗組合物的pH是7. 0-10. 0，優(yōu)選地7. 0-9. 0。在另一個方面中，在該疫苗組合物中含有的緩沖液是磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、 HEPES緩沖液或它們的混合物。在一個特別方面中，該緩沖液是其摩爾濃度為IO-IOOmM的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明還涉及一種疫苗組合物制備方法，該組合物含有純化并滅活的全病毒制備物，其中
a)通過收獲被該病毒感染的細胞培養(yǎng)物的上清液制備全病毒制備物，
b)對該全病毒制備物進行純化并滅活，或者對該全病毒制備物進行純化并滅活，以及
c)將該純化并滅活的全病毒制備物稀釋在穩(wěn)定賦形劑中，該穩(wěn)定賦形劑組成含有 i緩沖液，
必需和非必需氨基酸的混合物， iii 二糖， iv多元醇， ν螯合劑，
Vi脲或脲衍生物，以及 Vii非離子型表面活性劑。
根據一種優(yōu)選方式，在不加入動物來源的外源產品時實施本發(fā)明的方法。在本發(fā)明方法的一種優(yōu)選實施方式中，這種病毒是狂犬病病毒。在另一個方面中，本發(fā)明的方法包括，在純化并滅活的全病毒制備物稀釋后，將如此得到的疫苗組合物分配在包裝裝置中的步驟，以及任選地該疫苗組合物的凍干步驟。本發(fā)明還涉及一種疫苗組合物，它含有根據本發(fā)明方法一個優(yōu)選實施方式得到的凍干劑型純化并滅活的全病毒制備物。本發(fā)明還涉及一種用于滅活的全病毒疫苗的穩(wěn)定賦形劑，其組成含有 i緩沖液，
必需和非必需氨基酸的混合物， iii 二糖， iv多元醇， ν螯合劑，
Vi脲或脲衍生物，以及 Vii非離子型表面活性劑。優(yōu)選地，該穩(wěn)定賦形劑組合物也沒有任何蛋白，或任何蛋白和任何肽，或優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽。特別優(yōu)選地，該穩(wěn)定賦形劑的組合物也沒有任何動物來源產品。本發(fā)明的詳細描述
本發(fā)明疫苗組合物含有該滅活全病毒(或滅活全病毒制備物)和穩(wěn)定賦形劑，其賦形劑組成含有緩沖液、必需和非必需氨基酸的混合物、二糖、多元醇、螯合劑、脲或脲衍生物和非離子型表面活性劑。該賦形劑組合物有利地代替在其組成中含有蛋白的現有技術的賦形劑。特別有益地，它使難以保存的這些疫苗組合物穩(wěn)定，非常特別地，使含有該狂犬病病毒作為滅活全病毒的這些疫苗組合物穩(wěn)定，而它不必添加蛋白。本發(fā)明的疫苗組合物在液體劑型、冷凍液體劑型或凍干劑型下都是穩(wěn)定的，這提供了非常大的應用靈活性。本發(fā)明的穩(wěn)定賦形劑保持該疫苗組合物為冷凍、液體或凍干劑型的時間內的生物活性。一般而言，冷凍疫苗組合物保存溫度<-35°C ；液體劑型組合物保存溫度為 +20C _+8°C，而凍干劑型組合物保存溫度為約+5°C。有利地，在不利條件下保存的疫苗組合物，如在+37°C保存的液體劑型疫苗組合物，或讓這些疫苗組合物受到一系列解凍和再冷凍時，還保持在疫苗組合物中的病毒生物活性和物理完整性。通過測定隨著時間推移的該病毒組成免疫原的量(其對于誘發(fā)抗病毒的保護免疫性是重要的)和/或通過檢測其在官方認可的動物模型中試樣測試中的效力來評價在該疫苗組合物中的病毒生物活性。在含有滅活狂犬病病毒的疫苗組合物的情況下，通過測定隨著時間推移的(或在連續(xù)解凍過程中)病毒滴度(其是以呈未變性形態(tài)糖蛋白G濃度的測定結果為基礎進行估算)和/或通過采用NIH正式測試檢測該疫苗組合物的效力來評價該疫苗組合物的穩(wěn)定性。為了估算糖蛋白G含量，可以采用夾心類型的ELISA法，該方法識別至少一個，優(yōu)選地兩個糖蛋白G的構象表位，如實施例1所描述的那樣。在實施識別糖蛋白G的兩個構象表位的ELISA法時，通常使用中和該狂犬病病毒的抗體作為包被抗體，該狂犬病病毒識別位于糖蛋白G抗原位點II的構象表位(《Journal of Clinical investigation》(1989)，第84卷，第971-975頁)，使用識別位于蛋白G抗原位點III的構象表位的中和抗體作為揭示抗體(《Biologicals》(2003)，第31卷，第9_16頁)。這些結果用國際單位表示，因為人們通常采用對照NIBSC國際參照進行校正的標準作為參照。還可能采用被認為是對ELISA法有利替代的BIAcore技術，該技術基于應用用于定量病毒滴度的表面等離子體共振。本發(fā)明的穩(wěn)定賦形劑還通過保持病毒粒子的物理完整性而起作用。它特別阻止病毒粒子隨著時間推移而生成聚集體和/或其結構降解。這可以使用檢測這些聚集體的儀器 (例如zetasizer Nano ZS(Malvern instrument))加以控制，并且可以建立在該疫苗組合物中病毒粒子尺寸的分布曲線。這種病毒或病毒制備物呈全病毒粒子形式，其一般采用福爾馬林、甲醛或β丙酸內酯化學處理進行滅活。也可以采用如在WO 2005/093049中描述的其它滅活方法。主要所使用的滅活全病毒制備物含有包膜病毒，因為它們往往更難以保存，并且需要使用特定賦形劑組合物以保證其保存。特別地涉及日本腦炎滅活全病毒制備物。特別優(yōu)選地，這些滅活全病毒制備物含有該狂犬病病毒。這些病毒制備物來自一般呈被該病毒感染的細胞培養(yǎng)物的上清液的提取物形式的收獲物?？梢允褂煤袆游飦碓囱宓膫鹘y(tǒng)培養(yǎng)基以生產細胞原液，并感染這些細胞。有利地，用于細胞培養(yǎng)與感染的這些培養(yǎng)基不含有血清蛋白，也沒有動物來源產品。在這些培養(yǎng)基中任選存在的蛋白一般是濃度非常低的低分子量蛋白(S10KD)或更確定地說肽，這因此降低過敏風險。例如以商品名VP SFM(InVitrogen), Opti Pro serum-free (InVitrogen)、Episerf (InVitrogen)、Ex-cell MDCK(Sigma-Aldrich)、 Ex-Cell Vero (SAFC biosciences)、MP-BHK serum free (MP Biomedicals), SFC-IO BHK express serum free(Promo cell)、SFC_20 BHK express protein free(Promo cell)、HyQ PF Vero (Hyclone Ref. SH30352. 02)、Hyclone SFM4 Megavir 銷售的培養(yǎng)基，MDSS2 培養(yǎng)基 (Axcell biotechnology) Jj^iDMEM Iscove 培養(yǎng)基(Hyclone)、Ham(Ham-FlO，Ham-Fl2)營養(yǎng)培養(yǎng)基、leibovitz L-15培養(yǎng)基(Hyclone)便是這種情況。例如，這些狂犬病病毒收獲物是由已生產的Vero細胞原液得到的，然后使用病毒感染培養(yǎng)基進行感染，這些培養(yǎng)基優(yōu)選地沒有任何血清蛋白、任何動物來源蛋白，甚至沒有任何動物來源產品，例如VP SFM培養(yǎng)基。
有利地，在本發(fā)明的疫苗組合物中含有的滅活的全病毒制備物是非常純的。通常地，先純化后滅活，或者相反地先滅活然后純化來自一些收獲物的病毒。在不使用血清蛋白、不使用動物來源的外源蛋白，甚至不使用動物來源的外源產品情況下，實施該病毒的任何生產與純化步驟時，有利地本發(fā)明疫苗組合物沒有任何血清蛋白，以便最大程度地降低過敏性風險，也沒有任何動物來源的外源蛋白，甚至沒有任何動物來源產品，以便最大程度地降低疾病傳播風險。關于“動物來源的蛋白或產品”，應該理解是其生產方法包括至少一個其中使用來自動物或人的材料的步驟的蛋白或產品。關于“外源蛋白或產品”，應該理解是在病毒生產和/或純化方法的一個步驟中引入的蛋白或產品。例如，在該培養(yǎng)基組合物中任選地含有的蛋白或產品，在病毒生產和/或純化步驟時使用的酶(如胰蛋白酶或 benzonase)都是外源蛋白或產品。在其生產方法包括至少一個使用來自動物或人的材料的步驟時，這些外源蛋白或產品是動物來源的。當這些外源蛋白或產品采用其它方法(例如使用植物材料，采用化學合成或采用基因重組)使用一些酵母、細菌或植物進行制備時， 這些外源蛋白或產品不是動物來源的。來自細胞(由這些細胞生產出這些病毒以得到本發(fā)明疫苗組合物)的蛋白或產品相反地是內源性蛋白或產品，因為它們與這些病毒同時產生 (或被鹽析出)。在本發(fā)明的范圍內，可以有利地實施具有特別好性能的純化方法，這些方法引起得到非常純的病毒制備物。作為實例列舉病毒純化方法，它包括陰離子交換色譜法，接著陽離子交換色譜法，再以WO 97/06243描述的通過金屬螯合親合的色譜法結束。為了純化與滅活由感染細胞培養(yǎng)物的上清液得到的狂犬病病毒，一種選擇方法是使用于2009年4月14 日在法國提出的號為0952310專利申請描述的方法，它包括在含有在其上已接枝磺基異丁基基團的聚甲基丙烯酸酯基體的擔體上的陽離子交換色譜法步驟、用benzonase處理的步驟、蔗糖梯度超離心步驟和使用β-丙酸內酯的滅活步驟。所得到滅活全狂犬病病毒制備物是特別純的，但更難以保存(穩(wěn)定)，因為它的殘留蛋白雜質非常少。在該疫苗制備物中病毒量少，這種困難就更大。借助該賦形劑組合物，本發(fā)明疫苗組合物依然是穩(wěn)定的，甚至在總蛋白濃度 (lOOPg/ml，彡80μδ/πι1,^ 5(^g/ml，甚至彡20μδ/πι1的情況下也如此。一般而言，病毒蛋白占在本發(fā)明疫苗組合物中存在的總蛋白的至少70%，優(yōu)選地總蛋白的至少80%，特別優(yōu)選地總蛋白的至少90%。在一個有效的疫苗劑量中，其通常具有< IOOPg或< 5(^g，甚至< 20μβ 的總蛋白量。作為指出，殘留的DNA量為每有效疫苗劑量<100pg，優(yōu)選地<50pg。關于“有效疫苗劑量(或有效劑量的疫苗組合物)”，應該理解是在為了在第一次疫苗接種或加強疫苗接種范圍內推薦的免疫方法和免疫方案給藥后誘發(fā)人或動物保護性免疫所必需的劑量中含有的滅活病毒的量。在抗狂犬病病毒的疫苗接種的情況下，借助OMS認可的正式測試方法，NIH測試方法(在OMS的狂犬病專著(WHO Technical Series Report 941-2007年 1月)中描述的)測定了抗狂犬病疫苗的效力。滅活的抗狂犬病疫苗劑量在根據這種測試其含有至少2. 5UI時是有效的。根據通常推薦的這些接種或血清-接種方案，通過人肌內給藥這個劑量誘發(fā)抗狂犬病的保護性免疫發(fā)展。這些“總蛋白”相應于在該疫苗組合物中存在的所有的蛋白。它們是用這些病毒蛋白、純化時未被除去的殘留蛋白，如細胞蛋白、細胞培養(yǎng)和病毒感染培養(yǎng)基的蛋白以及在該純化方法中任選地加入的蛋白(例如在像上述狂犬病病毒的純化方法的情況下的benzonase)表示的。一般而言，采用Bradford方法對總蛋白進行量化。為了量化病毒蛋白在這些總蛋白中的比例，在變性與還原的條件下對該疫苗組合物試樣進行在聚丙烯酰胺凝膠上的電泳，接著用考馬斯藍的揭示和電泳譜光密度分析。在含有滅活全狂犬病病毒的疫苗組合物的情況下，用包膜糖蛋白G、核蛋白N、磷蛋白P、基質蛋白M和依賴RNA的RNA聚合酶L表示的病毒蛋白在聚丙烯酰胺凝膠電泳上是很容易鑒定的。在本發(fā)明疫苗組合物的有效劑量中含有的總蛋白量一般是lPg_5(^g，優(yōu)選地2Pg_2(^g。特別優(yōu)選地總蛋白的至少 70%，至少75%，至少80%，至少85%，甚至至少90%是病毒蛋白。本發(fā)明的賦形劑是特別有利的，因為它能使難以保存的疫苗組合物穩(wěn)定，例如含有滅活全狂犬病病毒的疫苗組合物，并且在所述組合物中發(fā)現在有效疫苗劑中
-占總蛋白至少70%的病毒蛋白量，和/或
-IOOPg以下的總蛋白，往往總蛋白的量是 μβ-50μβ，優(yōu)選地2μβ-20μβ。本發(fā)明的賦形劑組合物優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽，甚至任何寡肽，并且一般而言不含有動物來源產品以最大程度地降低可與其應用相關的生物和/或過敏安全問題。在本發(fā)明的范圍內，術語“該穩(wěn)定賦形劑沒有任何蛋白，，應該理解是一種其組成沒有任何生物大分子的穩(wěn)定賦形劑，該生物大分子含有通過肽鍵將彼此連接起來的50個以上氨基酸的鏈。術語“該穩(wěn)定賦形劑沒有任何蛋白和任何肽”應該理解是其組成沒有任何生物大分子的穩(wěn)定賦形劑，該生物大分子含有通過肽鍵將彼此連接起來的20個以上氨基酸的鏈。術語“該穩(wěn)定賦形劑沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽”應該理解是其組成沒有任何生物分子的穩(wěn)定賦形劑，該生物分子含有通過一個或多個肽鍵將彼此連接起來的氨基酸。 例如含有通過唯一肽鍵將彼此連接起來的兩個氨基酸的二肽不被包括在沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽的穩(wěn)定賦形劑組合物之外，但可以構成沒有任何蛋白和任何肽的穩(wěn)定賦形劑組合物的一部分。構成該賦形劑組合物一部分的氨基酸混合物含有至少一種在全部所必需的氨基酸中的必需氨基酸(全部所必需的氨基酸用胱氨酸、酪氨酸、精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸表示)和至少一種在全部非必需氨基酸的非必需氨基酸(全部非必需氨基酸用天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、甘氨酸、脯氨酸和絲氨酸表示)。這些具有酸官能的氨基酸可以呈酸或鹽形式。對于這些基礎氨基酸也同樣如此。優(yōu)選地，本發(fā)明賦形劑至少含有精氨酸或精氨酸鹽，例如精氨酸和谷氨酸的鹽酸鹽，或谷氨酸鹽，例如谷氨酸鈉。最后，該氨基酸混合物優(yōu)選地含有1-12種必需氨基酸，其中至少有精氨酸或其鹽，1-8種非必需氨基酸，其中至少有谷氨酸或其鹽。在該疫苗組合物中氨基酸總濃度一般< 20g/l，往往是2g/l-10g/l。在有效劑量的本發(fā)明疫苗組合物中，這表示必需和非必需氨基酸總量彡5mg，優(yōu)選地其量為0. 5-2. 5mg，特別優(yōu)選地0. 8-1. Smgo精氨酸(呈鹽酸鹽形式)的量與在賦形劑中含有的氨基酸總量之比一般高于0.5，而谷氨酸 (呈谷氨酸鈉形式)的量與在賦形劑中含有的氨基酸總量之比小于0. 5。本發(fā)明賦形劑還含有二糖。由動物來源原料(如乳)得到的二糖除外。作為適合于本發(fā)明目的的二糖，可以列舉蔗糖、麥芽糖或海藻糖，但優(yōu)選地使用單一麥芽糖或與其它二糖(如蔗糖)合用的麥芽糖。在該賦形劑組合物中還包括的多元醇是非動物來源的。主要為六醇，例如山梨糖醇和/或甘露醇。優(yōu)選地使用山梨糖醇，因為甘露醇具有在本發(fā)明疫苗組合物呈凍干劑型時會結晶的缺陷。在該疫苗組合物中二糖和多元醇總濃度一般是30g/ l-100g/l。優(yōu)選地，本發(fā)明的賦形劑含有麥芽糖和山梨糖醇。在一個有效劑量的疫苗組合物中，這通常相應于10-50mg的量，優(yōu)選地相應于20-25mg的量。麥芽糖的量一般是麥芽糖和山梨糖醇總量的至少70%。鰲合劑也是本發(fā)明賦形劑的組分之一。其主要為EDTA(乙二胺四乙酸)或其鹽(妝+、1(+等)。在該疫苗組合物中EDTA或EDTA鹽濃度一般是0.02-0. 5g/l，優(yōu)選地0. 02-0. 2g/l。在一個有效劑量的疫苗組合物中，這通常相應于0. 01-0. Img,優(yōu)選地 0. 01-0. 05mg,特別優(yōu)選地 0. 01-0. 04mg EDTA 或 EDTA 鹽的量。脲或脲衍生物，例如烯丙基脲、乙酰胺、氨基甲酸甲酯或氨基甲酸丁酯也構成該賦形劑組合物的一部分。優(yōu)選地，這種疫苗組合物含有濃度一般lg-10g/l，優(yōu)選地濃度lg-5g/l的脲。在一個有效劑量的疫苗組合物中，這通常相應于0.3-;3mg，優(yōu)選地 0. 3-1. 5mg，特別優(yōu)選地0. 4-1. 2mg脲的量。本發(fā)明的賦形劑還含有有助于使該疫苗組合物穩(wěn)定的非離子型表面活性劑。不受理論的約束，它有助于保持該病毒的生物活性，還通過避免生成聚集體或病毒結構降解有助于保持病毒粒子的物理完整性。還可避免該病毒吸附在包裝容器壁上，特別地當這些壁用玻璃或塑料制成時尤其如此。適合于本發(fā)明目的的非離子型表面活性劑是用非動物來源的原料得到的，并且在藥物學方面與通過非經腸給藥產品是相容的。作為特別適合于本發(fā)明目的的非離子型表面活性劑類，可以列舉泊洛沙姆，它們是環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的 “嵌段共聚物”，其化學式是HO(QH4O)a(C3H6O)b(C2H4O)aH,其中a表示環(huán)氧乙烷單元數，b表示環(huán)氧丙烷單元數。這些泊洛沙姆的分子量一般是1000-16000道爾頓。具有特別好處的泊洛沙姆的分子量是5000-15500道爾頓。這些泊洛沙姆尤其地是以商品名Pluronic 銷售的，其中pluronic F68，即泊洛沙姆188，它表示在室溫下呈固態(tài)形式的泊洛沙姆，其聚氧丙烯的分子量約1750道爾頓，而其聚氧乙烯部分占該分子總重量的約80%。在這些泊洛沙姆中，特別推薦泊洛沙姆188(plUronic F68)。任選地，可以使用脫水山梨糖醇酯，特別地以商品名Tweene銷售的脫水山梨糖醇聚氧乙烯酯，如Tweene 20(脫水山梨糖醇聚氧乙烯00)單月桂酸酯，即polysorbate 20)，或TweeneSO (脫水山梨糖醇聚氧乙烯Q0)單油酸酯，即polysorbate 80)。適合本發(fā)明目的的非離子型表面活性劑非常低的濃度進行使用，這樣保持滅活病毒粒子的結構，其應該仍然與尺寸與活病毒的相近。非常高濃度時，這種表面活性劑能夠離解或改變這些病毒粒子的結構，尤其包膜病毒的結構，這樣可影響該疫苗組合物的免疫原性。當pluronic F68用作表面活性劑時，在該疫苗組合物中的總濃度< lg/Ι，一般是0.005g/l-lg/l，特別優(yōu)選地O.Olg/1-O. lg/Ι。在這個濃度范圍內，泊洛沙姆188對該免疫體系不發(fā)揮輔助作用。在一個有效劑量的疫苗組合物中，這通常相應于 0. OOlmg-O. 5mg,優(yōu)選地0. 003-0. 3mg的量。非常優(yōu)選地，該疫苗組合物含有泊洛沙姆188 或任選地泊洛沙姆188和polysorbate 20的混合物。選擇本發(fā)明賦形劑緩沖液使得該疫苗組合物的pH是7. 0-10. 0，優(yōu)選地7. 0-9. 0， 特別優(yōu)選地7. 3-8. 3。正是在這個pH范圍內，滅活病毒粒子的物理熱穩(wěn)定性，特別是狂犬病病毒粒子的物理熱穩(wěn)定性是最大的。這些對相圖的研究表明，在PH為7. 3-8. 3時，必須將該狂犬病病毒制備物加熱到至少60°C的溫度才觀察到其狂犬病病毒粒子聚集，而在pH<6. 0 時在室溫下觀察到嚴重的聚集現象。這種緩沖液通常是磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液或它們的混合物。它們的濃度一般是10-100mM。優(yōu)選地，該賦形劑組合物含有磷酸鹽緩沖液，其摩爾濃度通常是IO-IOOmM,或混合物形式的磷酸鹽緩沖液與Tris緩沖液。本發(fā)明特別優(yōu)選的疫苗組合物含有
滅活的全狂犬病病毒制備物，和穩(wěn)定賦形劑，它含有 磷酸鹽緩沖液；
必需和非必需氨基酸的混合物，它至少含有精氨酸或精氨酸鹽與谷氨酸或谷氨酸鹽； 麥芽糖； 山梨糖醇； EDTA 或 EDTA 鹽； 脲；
泊洛沙姆188 ；
該疫苗組合物的PH是7. 3-8. 3。任選地，可以把Tween 20作為附加的非離子型表面活性劑加到這種疫苗組合物中。這種疫苗組合物有利地沒有任何血清蛋白和任何動物來源的外源產品并一般含有非常純的狂犬病病毒制備物。在該疫苗組合物中泊洛沙姆188的濃度<lg/l，非常優(yōu)選地0. Olg/ 1-0. lg/Ι。磷酸鹽緩沖液的摩爾濃度一般是10-100mM。精氨酸和谷氨酸或它們各自的鹽是該氨基酸混合物中的絕大多數組分，因為它們一般按照重量計是必需和非必需氨基酸總量的至少2/3。這種必需和非必需氨基酸的混合物的濃度通常是2-10g/l，麥芽糖和山梨糖醇的總濃度通常是50-100g/l，EDTA或EDTA鹽的濃度通常是0. 02-0. 2g/l，脲的總濃度通常是l_5g/l。在該疫苗組合物中總蛋白濃度通常是5_5(^g/ml。在有效劑量的抗狂犬病疫苗中，其通常表示必需和非必需氨基酸的量為0. 5mg-2. 5mg，麥芽糖和山梨糖醇的量是 10-50mg, EDTA或EDTA鹽量是0. Olmg-O. Img,脲的量是0. 3-1. 5mg,泊洛沙姆188的量是 0. 001-0. 5mg,以及總蛋白的量是2-20μβ。本發(fā)明疫苗組合物的制備方法，除病毒制備物生產、純化和滅活這些步驟外，還包括往該純化并滅活的全病毒制備物中加入穩(wěn)定賦形劑的步驟，以及把如此得到的組合物分配在包裝裝置中的步驟。一般而言，在把該疫苗組合物分配到這些包裝裝置中之前，將該制備物稀釋在本發(fā)明的穩(wěn)定賦形劑中。本發(fā)明疫苗組合物可以以散裝劑型(sous la forme de vrac)存在在這種情況下，一旦分配，該滅活全病毒濃度比在該疫苗組合物中存在的濃度高，但該賦形劑組合物是同一組合物。這種散裝劑型一般保持在<_35°C的溫度下冷凍。這時通過將這種散裝劑型解凍，然后將其稀釋在該穩(wěn)定賦形劑中以達到期望的病毒濃度，進行該疫苗組合物的分配步驟。這時得到最后散裝劑型產品，它再分配到包裝裝置中。為了確保該疫苗組合物無菌，還可以在分配步驟之前加一個滅菌過濾步驟，例如使用0. 2Mm過濾膜的滅菌過濾步驟。一般通過在實施純化方法結束時得到的純化并滅活病毒制備物在緩沖液中滲濾得到這種散裝劑型，所述的緩沖液一般對應于該賦形劑的緩沖液。如果例如該賦形劑的緩沖液是50mM磷酸鹽緩沖液，則使用50mM磷酸鹽緩沖液作為滲濾緩沖液。如果期望提高病毒濃度，則滲濾步驟之前為超濾步驟。使用具有一般為5kDa-100kDa，優(yōu)選地8kDa-50kDa，特別優(yōu)選地約IOkDa的低截留閾值的超濾膜，以便最大程度地將這種病毒保留在截留物中， 并且除去對凍干方法可有負面影響的鹽。然后，把含有病毒制備物的截留物與該穩(wěn)定賦形劑混合，以得到散裝劑型(vrac)，其組成相應于本發(fā)明的疫苗組成。還可以使用與穩(wěn)定賦形劑具有同樣組成的緩沖液作為滲濾緩沖液，以在一步中得到散裝劑型。含有滅活全狂犬病病毒的本發(fā)明疫苗組合物制備方法包括下述步驟使用細胞培養(yǎng)和病毒感染的培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基優(yōu)選地沒有任何血清蛋白和任何動物來源產品，例如像使用VP SFM培養(yǎng)基)，通過收獲被病毒感染的Vero細胞培養(yǎng)物的上清液，生產全病毒制備物。特別地采用于2009年4月14日在法國申請的專利號為0952310的專利申請描述的方法純化和滅活這種病毒，該方法包括在優(yōu)選地含有基于在其上已接枝磺基異丁基基團的聚甲基丙烯酸酯的基體的擔體上的陽離子交換色譜法步驟、用重組benzonase處理、蔗糖梯度超離心步驟與使用丙酸內酯的滅活步驟。得到的滅活全狂犬病病毒制備物是非常純的，沒有任何血清蛋白和任何動物來源的外源產品；殘留DNA含量<100pg/ml，這些病毒蛋白是總蛋白的至少70%。然后根據在前段描述的模式制備散裝劑型，它一般保存在<_35°C 的溫度下。再以期望病毒濃度把這種散裝劑型稀釋在本發(fā)明的賦形劑中，然后把它分配到這些包裝裝置中。在每個包裝裝置中通常加入0. Iml-Iml該疫苗組合物，以便這種組合物一旦分配便含有至少一個有效疫苗劑量。這些用于分配最后散裝劑型產品的包裝裝置通常呈瓶(用玻璃或塑料制成的)或注射器形式，但也可以使用與接種操作相容的其它包裝裝置。使用z6tasizer Nano ZS儀器(Malvern Instrument)對含有這種純化狂犬病病毒的本發(fā)明疫苗組合物進行的粒度分析(這種儀器測定基于光“準彈性”散射(動態(tài)光散射)的粒子的布朗運動)表明存在單一的100-300nm病毒粒子(其平均值約ISOnm)均勻群，它相應于野生狂犬病病毒的平均尺寸。在本發(fā)明疫苗組合物保存過程中未檢測到聚集體，也未檢測到病毒粒子尺寸分布曲線的變化。這些液體劑型的疫苗組合物在溫度2-8 °C下在至少3個月期間，在23-27 °C下在至少1個月期間是穩(wěn)定的(參見實施例3)。它們?yōu)槔鋬鰟┬蜁r在< _35°C溫度下也可以保存至少12個月，優(yōu)選地至少M個月。采用傳統(tǒng)的凍干法時，也可以以凍干劑型保存這些疫苗組合物。本發(fā)明賦形劑組合物在凍干步驟期間不會造成病毒的明顯損失。一種凍干方法是將該組合物冷凍到低于_40°C的溫度下，然后將其產品干燥兩次，第一次干燥在約_15°C溫度與80微巴下進行，而第二次干燥在約+40°C溫度與80微巴下進行。這些凍干疫苗劑量的殘留水分含量<3%，并且在溫度2-8°C下穩(wěn)定至少18個月(參見實施例幻。最后，如在本發(fā)明中描述的抗狂犬病疫苗組合物表現出與以商品名VeroraB 銷售的現有技術的疫苗組合物(其在一劑量疫苗中含有的總蛋白量是在一有效劑量的本發(fā)明疫苗組合物中可測總蛋白量(一般的至少100倍)同樣的穩(wěn)定性。另外，本發(fā)明的賦形劑組合物，有利地能夠長久地保存液體或冷凍劑型的疫苗組合物，即使優(yōu)選的保存劑型是凍干劑型。這種疫苗組合物為液體劑型保存時，或如果它冷凍保存時在解凍后可直接給藥于待接種疫苗的受試者。它為凍干劑型時，把這種凍干物即時溶于通常為鹽溶液的稀釋劑中， 例如像低滲氯化鈉溶液。這種稀釋劑還可以含有非常低濃度的表面活性劑，它的化學結構在藥物學方面與非經腸途徑使用是相容的。它通常是Tweene20、Tweene80或plUroniceF68， 以非常低的濃度使用它們以發(fā)揮輔助作用。在該稀釋劑中的表面活性劑濃度一般而言 (0. 1% (重量/重量)。這種疫苗為凍干劑型時，通常為有兩個包裝的試劑盒形式，第一個(一般而言呈瓶形式)裝有該凍干疫苗組合物，第二個(一般而言呈瓶或注射器形式)裝有這種稀釋劑。 還可以使用“旁通”型注射器，其中該疫苗組合物裝在該注射器的下部，而其上部裝這種稀釋劑。本發(fā)明最后涉及用于滅活的全病毒疫苗，特別地用于滅活的全狂犬病病毒疫苗的穩(wěn)定賦形劑，它含有
a.緩沖液，
b.必需和非必需氨基酸的混合物，
c.二糖，
d.多元醇，
e.螯合劑，
f.脲或脲衍生物，以及
g.非離子型表面活性劑。優(yōu)選地，這種賦形劑沒有任何蛋白，優(yōu)選地沒有任何肽和任何蛋白，還更優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽。還非常優(yōu)選地沒有任何動物來源的產品。通過閱讀下述實施例將更好地理解本發(fā)明，這些實施例用于說明本發(fā)明而不限制其內容。

圖1是在抗狂犬病疫苗組合物(其中該穩(wěn)定賦形劑組合物是F04+0. 001%泊洛沙姆188)的3個連續(xù)解凍與再冷凍周期過程中采用“動態(tài)光散射(DLS) ”得到的病毒粒子尺寸分布曲線的重疊。· DO (冷凍前)，■ Dl (在第一次解凍后)；AD2(在第二次解凍后) 和+D3(在第三次解凍后)。圖2是在抗狂犬病疫苗組合物(其中該穩(wěn)定賦形劑組合物是F04+0. 01%泊洛沙姆 188)的3個連續(xù)解凍與再冷凍周期過程中采用“動態(tài)光散射(DLS) ”得到的病毒粒子尺寸曲線重疊?！?DO (冷凍前)，■ Dl (在第一次解凍后)；AD2(在第二次解凍后)和+D3(在第三次解凍后)。^MM 1 : 形齊IlX寸含有鄉(xiāng)屯化并滅活的狂犬病病毒的散裝齊!I型疫龍組合4勿穩(wěn)定個牛的影響
1. 1散裝劑型的制備
通過使用無血清的病毒感染培養(yǎng)基，在Vero細胞上已進行狂犬病病毒生產。使這些Vero細胞系細胞適應于如在WO 01/40443申請中描述的無血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件。然后，把它們轉移到生物發(fā)生器中，它裝有在VP SFM培養(yǎng)基中的cytodex 1微擔體 1 (Invitrogen)。通過保持pH約7. 2士0. 2、氧飽和度25%士 10%以及對這種培養(yǎng)基進行輕微攪拌在37°C下培養(yǎng)3-4天后，通過使用含有VP SFM培養(yǎng)基(Invitrogen)的病毒感染培養(yǎng)基，這些細胞已用狂犬病病毒(Pitmarm-Moore株)以感染復數0. 01進行感染。在第7 天(R1)，第11天(似)和第15天(舊)收獲了感染細胞培養(yǎng)物的上清液。在每次收獲后，再加入其新的病毒感染培養(yǎng)基。采用兩次連續(xù)過濾使含有感染病毒的培養(yǎng)物的上清液澄清 第一次使用由SMffl聚丙烯制成的預過濾器(Sartopure PP2，SART0RIUQ，該預過濾器除去在收獲時吸入的某些微擔體、從擔體上脫落的Vero細胞和大尺寸細胞碎片，第二次使用由 0. 8Mm和0. 45Mm兩個過濾器組合組成的PES過濾器(Sartopore 2，SART0RIUS)，它除去這些聚集體?；谝韵率龇绞讲捎肊LISA法進行的糖蛋白G(gpG)的量的測定，測定了在這些澄清收獲物中存在的狂犬病病毒的量
在ELISA微孔板的孔中分配約0. 12μβ/100μ1 1112-1 anti-gpG單克隆抗體溶液(在 ((Journal of Clinical investigation》，(1989)，第84卷，第971-975頁中描述了這種溶液特性)，該溶液預先已稀釋在《包被》緩沖液(0. 2M碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液，pH 9.6)中。 在冷室內溫育一夜后，接著用洗滌緩沖液(加入Tween20的磷酸鹽緩沖液，0. 05%)洗滌多次，在每個孔中分配ΙΟΟμΙ飽和緩沖液(加入1%牛白蛋白血清的磷酸鹽緩沖液)。在37°C 溫育一小時后，接著洗滌幾次，獲得了每個待測試試樣在稀釋緩沖液(加入0. 05%Tween20 和1%白蛋白血清的磷酸鹽緩沖液)中的一系列稀釋度。平行地，在每個微孔板中獲得參照試樣的一系列稀釋度，它對照NIBSC國際標準(例如PISRAV)進行了校準。在37°C再溫育一小時后，接著洗滌幾次，在每個孔中分配ΙΟΟμΙ anti-gpG小鼠的單克隆抗體溶液 Dl (其特性在((Biologicals)) (2003)，第31卷，第9-16頁得到描述)，它進行了生物素化并在稀釋緩沖液中稀釋至1/5000后使用。讓這些板置于37°C下1小時，然后在每個孔中分配ΙΟΟμΙ預先在稀釋緩沖液中稀釋1/5000的與過氧化物酶偶聯的鏈霉親和素溶液 (Southern Biotechnology Associates)之前反復洗滌幾次。在37°C再溫育一小時后，接著洗滌幾次，在每個孔中分配ΙΟΟμΙ 0.05Μ ρΗ5檸檬酸鹽緩沖液，它含有揭示底物(0-苯二胺)。在避光與室溫的條件下溫育30分鐘后，通過添加50μ1/孔2Ν壓304溶液中止其揭示反應(reaction de revelation) 在兩個波長(49&ιπι和620nm)處讀取微孔板的分光光度數。測定的光密度是在考慮塑料吸收時的兩個讀數之差。根據歐洲藥典(PharmaC0p6e Europeenne)的建議采用平行直線法計算相對活性。該試樣狂犬病病毒滴度是以該狂犬病病毒的糖蛋白G濃度的測定基礎的，它是相對于其參照以UI/ml表示的。在還對澄清液的電導率和pH進行控制后，在預先用20mM Tris、150mM NaCl、 pH=7. 5緩沖液平衡的Fractogel EMD S03"色譜擔體(Merck)上沉積每ml擔體約50UI當量的糖蛋白G (采用ELISA測定)。這種色譜擔體隨后用平衡緩沖液進行洗滌，然后，將狂犬病病毒洗脫在20mM Tris,600mM NaCl、pH=7. 5緩沖液中，回收獨立級分的病毒峰。然后進行在PES Medium Screen 100KD膜(PALL)上的超濾步驟，接著是在20mM Tris, NaCl 150mM、pH=7. 5緩沖液中的滲濾。再添加MgCl2溶液，以便在該滲濾液(diafiltrat)中的濃度是2mM。通過往該反應培養(yǎng)基添加15U/ml粗制收獲物，并且讓該反應培養(yǎng)基在實驗室溫度下保持2小時，進行用benzonase的處理。在34_60%蔗糖墊上，在+5°C下使用45型鈦轉子以21000rpm進行超離心池?；厥蘸屑兓《镜奶荻燃壏?，合并，然后稀釋在50mM磷酸鹽、150mM NaCl、pH=7. 5緩沖液中，以便最后的純化病毒懸浮液體積是澄清收獲物體積的約1/12. 5。然后，這種純化病毒懸浮液通過β丙酸內酯處理進行滅活，接著通過在約37°C 溫度下加熱使β丙酸內酯滅活2小時。通過用IOkDa膜(Omega medium screen PALL)超濾，接著在50mM磷酸鹽、150mM NaCUpH 7. 5緩沖液中滲濾，將純化并滅活的病毒制備物濃縮6倍。得到的狂犬病病毒制備物為濃縮散裝劑型，其基于糖蛋白G濃度的測定的滴度是約80UI/ml。然后面對4個賦形劑(F01-F04)中的一個來滲析一等分散裝劑型，該賦形劑組成如下。1. 2測試的賦形劑的組成
FOl :50mM 磷酸鹽、150mM NaCl、麥芽糖(5%，p/p)、pH=8. 0 緩沖液；
F02 :50mM磷酸鹽、麥芽糖(5%，ρ/ρ)、ρΗ=8. 0緩沖液；F03 :50mM 磷酸鹽、麥芽糖(5%，ρ/ρ)、泊洛沙姆 188 (BASF) (0. 001%, ρ/ρ)、ρΗ=8. 0 緩沖
液；
F04 :489PM、pH=8. 0緩沖液，其組成如下c
權利要求
1.疫苗組合物，其含有a)滅活的全病毒制備物，以及b)穩(wěn)定賦形劑，其包含1.緩沖溶液， .必需和非必需氨基酸的混合物，iii.二糖，iv.多元醇，v.螯合劑，vi.脲或脲衍生物，以及vii.非離子型表面活性劑。
2.根據權利要求1的組合物，其中所述滅活的全病毒是狂犬病病毒。
3.根據權利要求1或2的組合物，其特征在于，所述組合物還沒有任何血清蛋白。
4.根據權利要求1-3中任一項的組合物，其特征在于，所述組合物還沒有任何動物來源的外源蛋白，優(yōu)選地沒有任何動物來源的外源產品。
5.根據權利要求1-4中任一項的組合物，其特征在于，病毒蛋白占在該疫苗組合物中存在的總蛋白的至少70%。
6.根據權利要求1-5中任一項的組合物，其特征在于，總蛋白濃度為彡lOOPg/ml，優(yōu)選地彡 80μδ/πι1 ο
7.根據權利要求1-6中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的總蛋白的量為< lOOPg。
8.根據權利要求1-7中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的總蛋白的量為1-50μβ。
9.根據權利要求1-8中任一項的組合物，其特征在于，所述穩(wěn)定賦形劑沒有任何蛋白， 或者沒有任何蛋白和任何肽，或者優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽。
10.根據權利要求1-9中任一項的組合物，其特征在于，所述必需和非必需氨基酸的混合物至少包含精氨酸或精氨酸鹽和谷氨酸或谷氨酸鹽。
11.根據權利要求1-10中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的必需和非必需氨基酸的量為0. 5-2. 5mg。
12.根據權利要求1-11中任一項的組合物，其特征在于，所述二糖為麥芽糖。
13.根據權利要求1-12中任一項的組合物，其特征在于，所述多元醇為山梨糖醇。
14.根據權利要求1-13中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的二糖和多元醇的總量為10-50mg。
15.根據權利要求1-14中任一項的組合物，其特征在于，所述鰲合劑為EDTA或EDTA鹽。
16.根據權利要求1-15中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的鰲合劑的量為0. 01-0. Img0
17.根據權利要求1-16中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的脲或脲衍生物的量為0. 3-1. 5mg。
18.根據權利要求1-17中任一項的組合物，其特征在于，所述非離子型表面活性劑為泊洛沙姆。
19.根據權利要求1-18中任一項的組合物，其特征在于，所述非離子型表面活性劑為泊洛沙姆188。
20.根據權利要求1-19中任一項的組合物，其特征在于，在一個有效劑量的疫苗組合物中所含有的非離子型表面活性劑的量為0. 001-0. 5mg。
21.根據權利要求1-20中任一項的組合物，其特征在于，該疫苗組合物的pH為 7. 0-10. 0，優(yōu)選地 7. 0-9. 0。
22.根據權利要求1-21中任一項的組合物，其特征在于，所述緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液或它們的混合物。
23.根據權利要求1-22中任一項的組合物，其特征在于，所述緩沖溶液為其摩爾濃度為IO-IOOmM的磷酸鹽緩沖液。
24.制備疫苗組合物的方法，所述疫苗組合物含有純化并滅活的全病毒制備物，其中a)通過收獲被所述病毒感染的細胞培養(yǎng)物的上清液產生全病毒制備物，b)對所述全病毒制備物進行純化和滅活，或者備選地將所述全病毒制備物滅活然后純化，以及c)將所述純化并滅活的全病毒制備物稀釋在穩(wěn)定賦形劑中，所述穩(wěn)定賦形劑的組成包含i.緩沖溶液， .必需和非必需氨基酸的混合物，iii.二糖，iv.多元醇，v.螯合劑，vi.脲或脲衍生物，以及vii.非離子型表面活性劑。
25.根據權利要求M的方法，其特征在于，在不引入動物來源的外源產品的情況下實施該方法。
26.根據權利要求M或25的方法，其特征在于，所述病毒為狂犬病病毒。
27.根據權利要求M-26中任一項的方法，其中在稀釋所述純化并滅活的全病毒制備物之后，將如此獲得的疫苗組合物分配在包裝裝置中，以及任選地將該疫苗組合物凍干。
28.疫苗組合物，其含有根據權利要求27的方法獲得的以凍干劑型存在的純化并滅活的全病毒制備物。
29.用于滅活的全病毒疫苗的穩(wěn)定賦形劑，其組成包含i.緩沖溶液， .必需和非必需氨基酸的混合物，iii.二糖，iv.多元醇，v.螯合劑，vi.脲或脲衍生物，以及vii.非離子型表面活性劑。
30.根據權利要求四的穩(wěn)定賦形劑，其特征在于，所述穩(wěn)定賦形劑還沒有任何蛋白，或者沒有任何蛋白和任何肽，或者優(yōu)選地沒有任何蛋白、任何肽和任何寡肽。
31.根據權利要求30的穩(wěn)定賦形劑，其特征在于，所述穩(wěn)定賦形劑還沒有任何動物來源的產品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種疫苗組合物，它含有a)滅活全病毒，以及b)穩(wěn)定賦形劑，它含有I緩沖液,ii必需和非必需氨基酸的混合物，iii二糖，iv多元醇,v螯合劑,vi脲或脲衍生物，以及vii非離子表面活性劑。
文檔編號A61K47/00GK102281900SQ201080004679
公開日2011年12月14日 申請日期2010年10月7日 優(yōu)先權日2009年10月7日
發(fā)明者弗蘭康 A., 卡爾沃薩 E., 切瓦利耶 M., 莫雷諾 N., 齊加里尼 S., 法布雷 V. 申請人:賽諾菲巴斯德有限公司