專利名稱：G-csf用于延長(zhǎng)卒中溶栓治療的治療時(shí)間窗的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)多肽在預(yù)防急性卒中后梗死半影 (penumbra)中神經(jīng)元細(xì)胞死亡中的用途。更特別地，本發(fā)明提供了通過先施用G-CSF多肽并且隨后進(jìn)行溶栓療法而增加急性卒中后溶栓治療的治療窗的方法。
背景技術(shù)：
粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)最初被鑒定為一種負(fù)責(zé)產(chǎn)生嗜中性粒細(xì)胞的髓系中的造血因子。最近，鑒定了該因子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的存在和活性。G-CSF及其受體在腦缺血之后上調(diào)，G-CSF起抗神經(jīng)元凋亡的作用，穿過完整的血腦屏障，并減小實(shí)驗(yàn)性卒中模型的梗死面積(Schneider 等，J Clin Invest. 2005,115 :2083 ；Zhao 等，Exp Neurol. 2007， 204 569 ；Schabitz 等，Stroke 2003,34 :745 ；Six 等，Eur J Pharmacol. 2003,458 :327 ； Shyu 等，Circulation 2004,110 :1847 ；Gibson 等，2005，25 :431 ；Komine-Kobayashi 等，J Cereb Blood Flow Metab. 2006，26 :402 ;Schneider 等，BMC Biol. 2006，4 :36)。這導(dǎo)致了在急性缺血性卒中患者中的多項(xiàng)較小的臨床試驗(yàn)(綜述，Schabitz等，Stroke 2006,37 1654 ;Schabitz 等，Trends Pharmacol Sci. 2007,28 157) 然而，盡管對(duì)已公開數(shù)據(jù)進(jìn)行的薈萃分析支持該因子在實(shí)驗(yàn)性卒中模型中功效的廣泛基礎(chǔ)(Mirmerup等，Stroke 2008， 39:1856)，但是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)是使用瞬時(shí)缺血模型進(jìn)行的。特別地，沒有針對(duì)栓塞模型的公開數(shù)據(jù)。用重組的組織纖維蛋白溶酶原激活劑(rt-PA)進(jìn)行溶栓仍然是迄今唯一批準(zhǔn)的急性卒中療法。遺憾的是，rt-PA的使用受到相對(duì)窄時(shí)間窗的限制。最近證實(shí)其效力可達(dá)發(fā)生卒中癥狀后4. 5小時(shí)，但是效力隨時(shí)間而迅速降低(Hacke等，Lancet 2004,363 :768 ； Hacke等，NEngl JMed. 2008,359 :1317)。治療效力隨時(shí)間降低的生物學(xué)原因很可能在于細(xì)胞活力隨灌注不足腦區(qū)域中的缺血/缺氧而進(jìn)行性受損。在再灌注期間，這可伴有自由基的生成(即再灌注損傷)。在臨床上，這一概念得到如下數(shù)據(jù)的支持該數(shù)據(jù)表明在MRI上灌注/擴(kuò)散(PWI/DWI)錯(cuò)配的存在可鑒定其中溶栓可能在治療時(shí)間窗以后更有效的患者 (Fisher 等，Cerebrovasc Dis. 2006，21，增刊 2 64)。一種延長(zhǎng)溶栓時(shí)間窗的策略可以是保護(hù)處于鑒定為PWI/DWI錯(cuò)配區(qū)域之風(fēng)險(xiǎn)的組織。已經(jīng)采用正常氣壓的高壓氧治療(Henninger等J Cerb Blood Flow Metab. 2007， 27 1632)和刺激蝶腭神經(jīng)節(jié)證實(shí)了該假說的概念驗(yàn)證(proof-of-conc印t) (Herminger和 Fisher Stroke 2007,38:2779)。發(fā)明簡(jiǎn)述卒中引起的腦梗死包括梗死核心(已不可逆損傷的組織)和半影(處于危險(xiǎn)但仍然可搶救的組織)。溶栓(特別是用組織纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA))被認(rèn)為是一種治療急性缺血性卒中的有效療法，但是只有在卒中發(fā)作后短時(shí)間內(nèi)(治療窗)開始該治療才有效。在腦缺血的第一個(gè)小時(shí)之內(nèi)，可挽救的半影組織的體積隨時(shí)間而強(qiáng)烈地、連續(xù)地減小。此后，建立溶栓性再灌注在預(yù)防神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)一步死亡和改善臨床結(jié)果方面無效或甚至有害。t-PA必須在卒中發(fā)作之后的最初4. 5小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選3小時(shí)之內(nèi)施用，然而該時(shí)期有時(shí)候被醫(yī)師延長(zhǎng)多達(dá)總共6小時(shí)。為此，早期的溶栓介入是通常所期望的。然而，另一方面，溶栓介入可具有嚴(yán)重的出血不良副作用，其惡化了卒中患者的臨床后果。因此，溶栓治療需要在施用血栓溶解劑之前進(jìn)行神經(jīng)成像以排除出血和評(píng)估基本的凝血參數(shù)。然而，在此期間，梗死半影中的神經(jīng)元細(xì)胞繼續(xù)死亡，溶栓治療窗可能關(guān)閉。需要一種方法或試劑，其能夠在卒中發(fā)作之后不久使半影中神經(jīng)元細(xì)胞停止死亡 (“半影冷凍(penumbra freezing) ”)，從而延長(zhǎng)治療窗用于之后的溶栓治療，以允許進(jìn)行必要的仔細(xì)診斷檢查和治療決策。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在卒中模型中施用G-CSF時(shí)，其能夠保護(hù)半影區(qū)，從而防止梗死面積進(jìn)一步擴(kuò)大。本領(lǐng)域中公認(rèn)，對(duì)半影組織的保護(hù)程度對(duì)于溶栓再灌注的有益效果而言是至關(guān)重要的。因?yàn)镚-CSF在急性缺血性卒中患者中是安全的，并且至少在動(dòng)物模型中沒有指征表明其可引起腦內(nèi)出血，或者增加全身出血的風(fēng)險(xiǎn)，因此其可以在重癥監(jiān)護(hù)開始時(shí)立即施用給卒中患者，而不需要廣泛的在先診斷檢查，或者甚至在入院或運(yùn)送到醫(yī)院之前由醫(yī)務(wù)工作者或其他有資格的健康專業(yè)人員給予。G-CSF可被認(rèn)為是急救藥物，其可以在救護(hù)車中給予以延長(zhǎng)時(shí)間窗，并可改善溶栓(例如通過t-PA)后的結(jié)果。本發(fā)明涉及G-CSF用于延長(zhǎng)后續(xù)的急性卒中溶栓治療的治療窗以允許必要的溶栓前診斷檢查的用途。一個(gè)方面是治療患有急性卒中的患者的方法，包括首先施用G-CSF，接著進(jìn)行診斷檢查(所述檢查使得能夠做出溶栓療法是否適合于該患者的決定)，以及任選地基于診斷檢查的結(jié)果隨后進(jìn)行溶栓治療。這樣的診斷檢查可以是例如排除出血性卒中，其為溶栓療法的禁忌癥。


圖1 在通過單凝塊注射(clot injection)誘導(dǎo)栓塞性缺血之后M小時(shí)的梗死體積。顯示從TTC染色的切片得到的校正的水腫體積。在凝塊注射(靜脈內(nèi))1小時(shí)之后和凝塊注射(腹膜內(nèi))4小時(shí)之后，用G-CSF處理大鼠，各自120yg/kg體重。與載體組相比，G-CSF處理導(dǎo)致顯著更小的梗死(ρ < 0. 05)。圖2 在sMCAO模型中擴(kuò)散加權(quán)損傷(diffusion-weighted lesion)的時(shí)空進(jìn)展。 使大鼠進(jìn)行持久的MCA細(xì)絲閉塞，并在閉塞之后監(jiān)測(cè)擴(kuò)散加權(quán)損傷的進(jìn)展3小時(shí)。在閉塞發(fā)生之后60分鐘和4小時(shí)給予G-CSF或載體溶液。在60分鐘時(shí)間點(diǎn)獲取圖像之前開始60 分鐘劑量。在CBF缺乏方面，組間和組內(nèi)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。除了載體組中120分鐘和180 分鐘以外，所有時(shí)間點(diǎn)CBF都顯著地大于ADC。在90分鐘開始，G-CSF組顯示出比載體組顯著更小的ADC體積。G-CSF組中的最終梗死體積也顯著小于載體組(ρ = 0.007)。顯示為平均值+/-SEM ；* φ < 0. 05 ；PWI體積(A)，DffI和最終梗死(B)，絕對(duì)(C)和相對(duì)錯(cuò)配(D)。圖3 不同物種(人(SEQ ID NO :6)、小鼠(SEQ ID NO 11)、大鼠(SEQ ID N0:12)、貓(SEQ ID NO: 13)、牛(SEQ ID NO: 14)和豬(SEQ ID NO :15))的 G-CSF 肽序列的比對(duì)顯示了強(qiáng)保守氨基酸的和較弱保守氨基酸的位置。在進(jìn)化強(qiáng)保守的氨基酸通常被認(rèn)為對(duì)于蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能來說至關(guān)重要。發(fā)明詳述本發(fā)明人描述了下述這一發(fā)現(xiàn)其使得G-CSF理想地適于作為卒中治療中的時(shí)間窗延長(zhǎng)劑以便進(jìn)行任何進(jìn)一步治療，優(yōu)選卒中溶栓治療(例如，用rt-PA)。這是一種非常有用的應(yīng)用，因?yàn)橄拗谱渲腥芩ㄖ委?例如rt-PA治療)有用性的主要問題是由于效力隨時(shí)間喪失而導(dǎo)致的有限時(shí)間窗。基于臨床研究，rt-PA通常必須在卒中發(fā)作之后的最初3至4. 5小時(shí)內(nèi)施用。有時(shí)，某些醫(yī)師可能在多達(dá)6小時(shí)之內(nèi)施用該藥物。因?yàn)楸仨殞?duì)個(gè)體患者排除rt-PA的出血副作用的可能性以避免情況惡化，所以常常很難在該時(shí)間窗內(nèi)獲得安全的溶栓治療?？稍谝伤颇X損傷已經(jīng)出現(xiàn)后很快給予G-CSF，因?yàn)槠洳⒉粫?huì)使可能的出血性卒中復(fù)雜化，并且其甚至在高劑量下也是良好耐受的。這一發(fā)現(xiàn)與下述事實(shí)有關(guān)在持久細(xì)絲閉塞的卒中動(dòng)物模型中，在持續(xù)缺血的情況下，G-CSF使擴(kuò)散加權(quán)缺乏的情況保持穩(wěn)定。這種效應(yīng)也稱為“半影冷凍”(“penumbra freezing”)。這意味著腦組織破壞可以延遲至直到可應(yīng)用溶栓治療以重新打開閉塞的血管。在單獨(dú)的G-CSF可能不足以能夠使卒中完全恢復(fù)的情況下，本發(fā)明出乎意料的發(fā)現(xiàn)使得能夠進(jìn)行聯(lián)合或連續(xù)治療，其包括先向?qū)ο笫┯肎-CSF的步驟以及隨后施用血栓溶解劑 (例如rt-PA)的步驟。在先的G-CSF施用允許推遲開始溶栓治療至卒中發(fā)作后的最初幾天內(nèi)，優(yōu)選在第一個(gè)M小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選在第一個(gè)12小時(shí)之內(nèi)。這允許在卒中之后或疑似卒中之后對(duì)患者進(jìn)行更精細(xì)的診斷檢查，以確保安全有效的附加溶栓治療。這種早期G-CSF施用和推遲溶栓治療(例如施用rt-PA)之組合的優(yōu)點(diǎn)就本發(fā)明人所知，之前未公開過。出人意料地，甚至在血管閉塞期間，G-CSF在保護(hù)半影組織方面也是有效的。根據(jù)本發(fā)明，在卒中發(fā)作后的第一個(gè)12小時(shí)期間、優(yōu)選地在第一個(gè)6小時(shí)期間、 更優(yōu)選地在第一個(gè)3小時(shí)期間施用G-CSF。G-CSF的優(yōu)選使用是在小時(shí)期間靜脈內(nèi) (i. v.)或皮下(s. c.)給予至少10μ g/kg體重、至少90μ g/kg體重或至少130μ g/kg體重的劑量，使時(shí)間窗長(zhǎng)達(dá)M小時(shí)。根據(jù)本發(fā)明，其包括G-CSF的施用可以在施用血栓溶解劑之前完成或者可以在施用血栓溶解劑之后繼續(xù)進(jìn)行。進(jìn)一步地，本發(fā)明還包括可施用G-CSF僅一次?；蛘撸珿-CSF 還可以在至少兩個(gè)分開的步驟中施用。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選使用人重組G-CSF，例如非格司亭(Filgrastim)。根據(jù)本發(fā)明， 還可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的功能性G-CSF衍生物。本發(fā)明方法適于患有卒中或有理由懷疑患有卒中的哺乳動(dòng)物(優(yōu)選人)的治療。作為本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種治療哺乳動(dòng)物對(duì)象卒中的方法，其包括步驟 (a)開始向所述對(duì)象施用治療活性量的G-CSF或功能活性G-CSF衍生物，以及隨后的(b)向該對(duì)象施用治療活性量的血栓溶解劑。作為本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種治療哺乳動(dòng)物對(duì)象卒中的方法，其包括步驟(a)向所述對(duì)象施用治療活性量的G-CSF或功能活性G-CSF衍生物，以及隨后的(b)向該對(duì)象施用治療活性量的血栓溶解劑。所述哺乳動(dòng)物對(duì)象可以是人。
作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種如上所述的方法，其中所述對(duì)象在步驟 (a)之后和步驟(b)之前進(jìn)行診斷檢查，以排除在步驟(b)期間發(fā)生出血或其它不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)。上述步驟(b)的“血栓溶解劑”意指能夠至少部分溶解纖維蛋白-血小板凝塊的任何試劑。血栓溶解劑的實(shí)例包括鏈激酶、尿激酶原、尿激酶、去氨普酶和組織型纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA)。雖然可以使用天然的t-PA，但優(yōu)選使用重組t-PA(rt-PA，例如阿替普酶)。本發(fā)明還可使用上述血栓溶解劑的混合物、生理活性片段或突變體形式。本文使用的術(shù)語(yǔ)“組織型纖維蛋白溶酶原激活劑”旨在包括這樣的雜合體、片段和突變體，以及天然來源或重組來源的組織型纖維蛋白溶酶原激活劑。作為本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種如上所述的方法，其中在卒中發(fā)作之后的第一個(gè)6小時(shí)之內(nèi)開始步驟(a)的施用G-CSF或功能活性G-CSF衍生物，和/或在卒中發(fā)作之后的第一個(gè)M小時(shí)之內(nèi)、或在卒中發(fā)作之后的4. 5小時(shí)至M小時(shí)期間、或在卒中之后的6小時(shí)至M小時(shí)期間，開始步驟(b)的施用所述血栓溶解劑。作為本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種如上所述的方法，其中在卒中發(fā)作之后的第一個(gè)6小時(shí)、第一個(gè)4. 5小時(shí)或第一個(gè)3小時(shí)之內(nèi)向所述對(duì)象施用步驟(a)的G-CSF 或功能活性G-CSF衍生物，和/或在卒中發(fā)作之后的第一個(gè)M小時(shí)之內(nèi)、或在卒中發(fā)作之后的4. 5小時(shí)至M小時(shí)期間、或在卒中之后的6小時(shí)至M小時(shí)期間，開始步驟(b)的施用所述血栓溶解劑。作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種如上所述的方法，其中在步驟(a)的 G-CSF或功能活性G-CSF衍生物的施用、開始施用或施用結(jié)束與步驟(b)的開始施用所述血栓溶解劑之間存在至少0. 5小時(shí)、至少1. 5小時(shí)或至少3小時(shí)的時(shí)間段。優(yōu)選地，該時(shí)間段用于所述對(duì)象的診斷檢查，評(píng)價(jià)溶栓治療的出血或其它不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)。作為本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種治療患有急性卒中的哺乳動(dòng)物對(duì)象的方法，包括初始G-CSF施用或初始G-CSF施用的開始，接著診斷檢查(所述檢查評(píng)價(jià)對(duì)象溶栓治療的風(fēng)險(xiǎn))，以及任選地基于該診斷檢查的結(jié)果隨后進(jìn)行溶栓治療。這樣的診斷檢查可以例如排除作為溶栓治療之禁忌癥的出血性卒中。作為本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了一種如上所述的方法，其中以至少IOyg/ kg體重、至少90 μ g/kg體重或至少130 μ g/kg體重的劑量靜脈內(nèi)或皮下給予步驟(a)的所述 G-CSF。作為本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供了 G-CSF或其功能活性衍生物，其用于制備用于治療患有急性卒中的哺乳動(dòng)物對(duì)象的藥物組合物，其中所述對(duì)象在卒中發(fā)作之后的最初6 小時(shí)之內(nèi)或卒中發(fā)作之后的3至6小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)或在卒中發(fā)作之后的4. 5至6小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)被收治進(jìn)卒中單元或臨床，并且其中在不使用本發(fā)明方法時(shí)評(píng)價(jià)對(duì)象對(duì)于溶栓治療的出血或其它嚴(yán)重不良副作用之風(fēng)險(xiǎn)所必需的診斷檢查所消耗的時(shí)間將導(dǎo)致超出溶栓治療的治療窗。本文上下文中的溶栓治療可以是例如施用t-PA，如rt-PA。本文上下文中的溶栓治療的治療窗可以在卒中發(fā)作之后的3小時(shí)之內(nèi)、4. 5小時(shí)之內(nèi)或6小時(shí)之內(nèi)。本文上下文中的診斷檢查可以持續(xù)至少0. 5小時(shí)、至少1. 5小時(shí)或至少3小時(shí)。本文上下文中的哺乳動(dòng)物對(duì)象可以在被收治進(jìn)卒中單元或診所之后立即，或者在卒中發(fā)作之后的第一個(gè)6 小時(shí)之內(nèi)、第一個(gè)4. 5小時(shí)之內(nèi)或第一個(gè)3小時(shí)之內(nèi)，接受G-CSF或其功能活性衍生物。進(jìn)一步，在本文上下文中，如果診斷檢查允許，則所述哺乳動(dòng)物對(duì)象可隨后接受溶栓治療。本文上下文中的所述哺乳動(dòng)物對(duì)象可以是人。本文上下文中的G-CSF可以是人G-CSF，優(yōu)選非
格司亭。上述實(shí)施方案的診斷檢查意指對(duì)患有急性卒中的哺乳動(dòng)物患者的任何檢查，其允許、改善或支持采用溶栓治療(特別是采用t-PA的溶栓治療)對(duì)患者是適合還是其禁忌癥的決定。這樣的診斷檢查可以是例如，但不限于醫(yī)學(xué)成像，如磁共振成像(MRI)、血液參數(shù)(如凝血因子)的分析、或?qū)颊呒韧v的調(diào)查。因?yàn)榛加屑毙宰渲械幕颊叱３o意識(shí)或意識(shí)混亂，所以調(diào)查患者既往病歷可能很耗時(shí)。應(yīng)在開始治療前通過診斷檢查排除的急性卒中溶栓治療(特別是t-PA治療)的禁忌癥例如但不限于活躍性內(nèi)出血、腦血管意外史、近期顱內(nèi)或脊柱內(nèi)外科手術(shù)或創(chuàng)傷、顱內(nèi)腫瘤、動(dòng)靜脈畸形、或動(dòng)脈瘤、出血素質(zhì)(包括但不限于當(dāng)前使用口服抗凝血藥(例如華法林鈉)，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(International Normalized Ratio, INR) > 1.7，凝血酶原時(shí)間(PT) > 15秒，在卒中發(fā)作之前48小時(shí)之內(nèi)施用肝素和就診時(shí)活化的部分凝血酶原時(shí)間(aPTT)延長(zhǎng)，或者血小板計(jì)數(shù)< 100,000/ mm3)、治療時(shí)不受控制的高血壓(例如，收縮壓> 185mm Hg，或舒張壓> IlOmm Hg)、顱內(nèi)出血、蛛網(wǎng)膜下出血、近期(在3個(gè)月之內(nèi))顱內(nèi)或脊柱內(nèi)外科手術(shù)、嚴(yán)重的頭部創(chuàng)傷、之前卒中、顱內(nèi)出血史、卒中發(fā)作時(shí)癲癇。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)是一種眾所周知的生長(zhǎng)因子?？梢栽诒疚拿枋龅谋景l(fā)明方法中使用的G-CSF是人G-CSF(前體形式，短的剪接變體(SEQ ID NO 2)；成熟形式， 短的剪接變體(SEQ ID NO 4)；前體形式，長(zhǎng)的剪接變體(SEQ ID NO 6)；成熟形式，長(zhǎng)的剪接變體(SEQ ID NO 8)；非格司亭(SEQ ID NO 10))或已知可獲得的各種功能性變體、突變蛋白和模擬物。在隨后的討論中，將這些都稱為G-CSF衍生物?？捎糜诒景l(fā)明的所述G-CSF是與本文描述的人G-CSF氨基酸序列具有至少70%、 優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%的同一性的蛋白質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用的 G-CSF是由與人G-CSF編碼序列(前體形式，短剪接變體(SEQ ID NO=D ；成熟形式，短剪接變體(SEQ ID NO 3)；前體形式，長(zhǎng)剪接變體(SEQ ID NO 5)；成熟形式，長(zhǎng)剪接變體(SEQ ID NO 7)；非格司亭(SEQ ID NO :9))具有至少70%、優(yōu)選80%、更優(yōu)選至少90%、95%和 97%同一性的多核苷酸序列編碼的那些，這些多核苷酸將在嚴(yán)格條件下與人G-CSF編碼序列的編碼多核苷酸序列雜交。術(shù)語(yǔ)“嚴(yán)格條件”或“嚴(yán)格雜交條件”包括在該條件下多核苷酸以比其它序列可檢測(cè)的更大程度(例如，至少為背景的2倍)與其目的序列雜交。嚴(yán)格條件將為如下那些在pH 7. 0至8. 3下鹽濃度小于約1. 5M Na離子(通常為約0. 01至1. OM Na 離子濃度(或其它鹽))，溫度對(duì)于短探針(例如10至50個(gè)核苷酸)而言為至少約30°C和對(duì)于長(zhǎng)探針(例如大于50個(gè)核苷酸)而言為約60°C，例如，高嚴(yán)格條件包括在37°C下，在50% 的甲酰胺、IM NaClU % SDS下雜交和在60至65°C下，在0. IX SSC中清洗(參見Tijssen， Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Acid Probes,第 I 部分第 2 章，"Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays" , Elsevier, New York(1993)；以及 Current Protocols in Molecular Biology,第 2 章，Ausubel 等編，Greene Publishing and ffiley-Interscience, New York(1995))。氨基酸和多核苷酸的同一性、同源性和/或相似性可以使用 ClustalW 算法(MEGALIGN , Lasergene, Wisconsin)來測(cè)定。
各種G-CSF功能性受體、突變蛋白和模擬物的實(shí)例包括G-CSF的功能片段和變體(例如，結(jié)構(gòu)和生物學(xué)方面與野生型蛋白質(zhì)類似，并且具有至少一個(gè)生物學(xué)方面等同的結(jié)構(gòu)域)、其化學(xué)衍生物(例如，包含另外的化學(xué)部分，如聚乙二醇和其聚乙二醇衍生物， 和/或糖基化形式如Lenogastrim )、和G-CSF的肽模擬物(例如，在結(jié)構(gòu)和/或功能上模擬肽的低分子量化合物(參見例如Abell，Advances in Amino Acid Mimetics and Peptidomimetics, London :JAI Press(1997) ；Gante, Angew Chem. 1994,106 :1780 ；Olson 等，J Med Chem. 1993,36 :3039)。G-CSF衍生物的其它實(shí)例包括白蛋白與G-CSF的融合蛋白(Albugranin )或其它融合修飾物，例如在美國(guó)專利No. 6，261, 250中公開的那些；PEG-G-CSF綴合物及其它PEG 化形式；描述在 WO 00/44785 和 Viens 等，J Clin Oncology 2002，6 :24 中的那些；G-CSF 的正亮氨酸類似物，其描述于美國(guó)專利No. 5，599，690中；G-CSF模擬物，例如在WO 99/61445、 WO 99/61446和Tian等，Science 1998，281 :257中描述的那些；G-CSF突變蛋白，其中已經(jīng)修飾、刪除或插入了單個(gè)或多個(gè)氨基酸，如在美國(guó)專利No. 5，214，132和5，218，092中所描述的；在美國(guó)專利No. 6，261，550和美國(guó)專利No. 4，810，643中描述的那些G-CSF衍生物；以及嵌合分子，其包含G-CSF的全部序列或部分序列與其它序列片段的組合，例如來立司亭， 參見例如 Streeter 等，Exp Hematol. 2001,29 :41，Monahan 等，Exp Hematol. 2001,29 :416， Hood 等，Biochemistry 2001,40 :13598, Farese 等，Stem Cells 2001，19 :514，F(xiàn)arese 等， Stem Cells 2001，19 :522，MacVittie 等，Blood 2000,95:837。另外，G-CSF 衍生物還包括那些在SEQ ID NO 4的17、36、42、64和74位的半胱氨酸被另外的氨基酸(如絲氨酸)替換(或類似地在SEQ ID N0:10上進(jìn)行)的那些，如在美國(guó)專利No. 6，004，548中描述的，在第一個(gè)(N-末端)位置位有丙氨酸的G-CSF ；在具有G-CSF活性的多肽中至少一個(gè)氨基被修飾的那些，如在EP 0 335 423中描述的；在蛋白質(zhì)的N-末端區(qū)域中具有氨基酸被替換或刪除的G-CSF衍生物，如在EP 0 272 703中描述的；天然G-CSF的衍生物，其具有天然 G-CSF的至少一種生物學(xué)特性和在5mg/mL下至少35%的溶液穩(wěn)定性，其中該衍生物具有至少由Ser17殘基替代天然序列的Cys17和由Ser27殘基替代天然序列的Asp27，如在EP 0 459 630中描述的；編碼G-CSF的修飾的DNA序列，其中N-末端被修飾以增加重組宿主細(xì)胞中蛋白質(zhì)的表達(dá)，而沒有改變蛋白質(zhì)的氨基酸序列，如在EP 0 459 630中描述的；通過失活至少一個(gè)酵母菌KEX2蛋白酶加工位點(diǎn)以增加使用酵母菌的重組體產(chǎn)率來修飾的G-CSFJn 在EP 0 243 153中描述的；賴氨酸改變的蛋白質(zhì)，如在美國(guó)專利No. 4，904，584中描述的； 半胱氨酸改變的蛋白質(zhì)變體，如在WO 90/12874(US 5，166，322)中描述的；為了幫助在原核表達(dá)之后分子的折疊，向G-CSF分子的任一末端添加氨基酸，如在AU-A-10948/92中描述的；在SEQ ID NO 4的G-CSF的50-56位和SEQ ID NO 8的G-CSF的53至59位的序列 Leu-Gly-His-Ser-Leu-Gly-Ile (SEQ ID NO 16)或 / 和在 SEQ ID N0:xx(174 形式)的成熟 G-CSF 的 43、79、156 和 170 位或在 SEQ ID NO 8 的成熟 G-CSF 的 46、82、159 或 173 位的四個(gè)組氨酸殘基中的至少一個(gè)被取代的，如在AU-A-763 80/91中描述的；以及引入限制性位點(diǎn)以促進(jìn)所選區(qū)域的盒式誘變和引入側(cè)翼限制性位點(diǎn)以促進(jìn)基因整合進(jìn)所期望的表達(dá)系統(tǒng)中的編碼合成G-CSF的核酸序列，如在GB 2 213 821中描述的。G-CSF類似物的其它實(shí)例包括SEQ ID N0 17)和其它描述于美國(guó)專利No. 6，632，似6中的。上述內(nèi)容通過引用并入本文。
G-CSF的各種功能性衍生物、變體、突變蛋白和/或模擬物優(yōu)選地保留少20%、優(yōu)選50%、更優(yōu)選至少75%、和/或最優(yōu)選至少90%的野生型哺乳動(dòng)物G-CSF的生物活性一生物活性的量包括 25%,30%,35%,40%,45%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%, 95%;以及其中所有的值和子范圍。進(jìn)一步地，所述G-CSF的功能性衍生物、變體、突變蛋白和/或模擬物也可以具有相對(duì)于野生型哺乳動(dòng)物G-CSF活性的100%或更高的生物活性一生物活性的量包括至少105%、至少110% )、至少125%、至少150%和至少200%。為了測(cè)量G-CSF的生物活性，可以單獨(dú)或組合使用幾種已知的測(cè)定方法。在實(shí)施例1中闡述了測(cè)定G-CSF功能的一個(gè)實(shí)例。用于測(cè)定G-CSF功能的其它方法是已知的，包括使用小鼠骨髓細(xì)胞的集落形成測(cè)定；用G-CSF誘導(dǎo)刺激骨髓細(xì)胞增殖；用依賴于 G-CSF 生長(zhǎng)或應(yīng)答于 G-CSF 的細(xì)胞系(例如，AML-193 ；32D ；BaF3 ；GNFS-60 ；HL-60 ；Ml ； NFS-60 ;0CI/AMLla;和TOHI-3B)進(jìn)行的特異性生物測(cè)定。這些及其它測(cè)定描述在下述文獻(xiàn)中=Braman 等，Am J Hematology 1992,39 :194 ；Clogston 等，Anal Biochem. 1992，202 375 ；Hattori 等，Blood 1990,75 :1228 ；Kuwabara 等，J Pharmacobiodyn. 1992，15 :121 ； Motojima 等，J Immunological Methods 1989,118 :187 ;Sallerfors 禾口 Olofsson, Eur J Haematology 1992,49 199 ；Shorter 等，Immunology 1992,75468 ；Tanaka 禾口 Kaneko， J Pharmacobiodyn. 1992,15 359 ；Tie φ, J Immunological Methods 1992,149 115 ； Watanabe 等，Anal Biochem. 1991，195 :38。在一個(gè)實(shí)施方案中，將所述G-CSF進(jìn)行修飾的或制備，或者作為G-CSF模擬物存在，所述模擬物增強(qiáng)了其透過血腦屏障的能力，或改變了其對(duì)腦組織的分布系數(shù)。這樣的修飾的一個(gè)實(shí)例是添加PTD或TAT序列(Cao等，J Neurosci. 2002,22 :5423 ；Mi 等，Mol Ther. 2000,2 :339 ；Morris 等，Nat Biotechnol. 2001,19 :1173 ；Park 等，J Gen Virol. 2002,83 :1173)。這些序列也可以以突變形式使用，并將額外的氨基酸添加到蛋白質(zhì)的氨基或羧基末端。而且，向靜脈內(nèi)應(yīng)用的任何G-CSF制劑中添加緩激肽或類似物質(zhì)將有助于其遞送至腦或脊髓(Emerich 等，Clin Pharmacokinet. 2001,40 :105 ；Siegal 等，Clin Pharmacokinet. 2002,41 :171)。在一個(gè)實(shí)施方案中，G-CSF的生物活性通過與另一種造血因子融合而增強(qiáng)。增強(qiáng)的活性可在如上所述的生物活性測(cè)定中測(cè)量。G-CSF的這種優(yōu)選的修飾或配制將導(dǎo)致抗凋亡作用的增加和/或神經(jīng)發(fā)生增加。這種修飾的一個(gè)實(shí)例是髓細(xì)胞生成蛋白-1 (Myelopoietin-I)、G-CSF/IL-3 融合蛋白(McCubrey 等，Leukemia 2001,15:1203)或祖細(xì)胞生成素-I (Progenipoietin-I) (ProGP-I)，祖細(xì)胞生成素-1是一種結(jié)合人胚胎肝酪氨酸激酶flt-3和G-CSF受體的融合蛋白。
實(shí)施例實(shí)施例1 G-CSF減少栓塞模型內(nèi)的梗死面積腦缺血的栓塞模型可能代表了比細(xì)絲模型更接近人類情形的卒中模型。迄今為止，還沒有在栓塞模型中顯示出G-CSF的功效。在此，通過將預(yù)形成的血凝塊注射到大鼠頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)來建立栓塞卒中模型。用異氟烷(對(duì)于誘導(dǎo)而言5%，對(duì)于外科手術(shù)而言2%，對(duì)于維持而言1.2%)麻醉重約320g的雄性Wistar大鼠(n = 20)。將ΡΕ-50聚乙烯管插入股動(dòng)脈中，用于監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓(MABP)和獲得測(cè)量血?dú)?pH，PaO2, PaCO2)、電解質(zhì)(Na+，Κ+，Ca2+)和血糖的血樣。 用直腸探針連續(xù)監(jiān)測(cè)體溫，并用恒溫控制加熱燈保持在37. 0+/0.3°C。對(duì)于栓塞卒中(ES)， 在約1秒鐘時(shí)間中在翼腭動(dòng)脈(pterygopalatanine artery, PPA)和頸內(nèi)動(dòng)脈(internal caroted artery, ICA)分叉處，將一個(gè)紅色血凝塊(直徑=0. ；35讓，長(zhǎng)=18mm)注射到20 只動(dòng)物的頸內(nèi)動(dòng)脈中。使用激光多普勒血流儀(Laser Doppler Flowmetry)監(jiān)測(cè)閉塞成功。Verum(G-CSF，非格司亭(SEQ ID NO 10))和載體(緩沖溶液Q50mM山梨醇、 0. 004%吐溫-80和IOmM乙酸鈉緩沖液(pH 4))組接受兩次注射在血凝塊注射后1小時(shí)靜脈內(nèi)輸注(120 μ g/kg體重，30分鐘)，和在血凝塊注射后4小時(shí)腹膜內(nèi)推注(120 μ g/kg 體重)。在M小時(shí)時(shí)，如前所述對(duì)動(dòng)物進(jìn)行神經(jīng)學(xué)評(píng)分(評(píng)分等級(jí)0 無缺陷，1 不能伸長(zhǎng)左前爪，2 左前爪抓握力降低，3 通過拉尾部向麻痹側(cè)轉(zhuǎn)圈，4 自發(fā)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈，以及5 死亡；Menzies等，Neurosurgery 1992,31 :100)，并處死以通過用2，3，5-三苯基四唑氯化物 (TTC)染色測(cè)定梗死體積，采用水腫校正(Men g等，Ann Neurol. 2004，55 :207)。處理沒有顯著地改變生理參數(shù)(血液pH、血?dú)夥謮?PaC02，PaO2)、電解質(zhì)(Na+，K+， CA2+)的血漿濃度和葡萄糖的血漿濃度)。而且，處理沒有影響MABP (重復(fù)測(cè)量AN0VA，ρ > 0. 05)，然而，在30分鐘時(shí)，MABP有明顯的與組無關(guān)的降低，之后血壓再次升高。在ES之后16和M小時(shí)之間，20只動(dòng)物中有12只過早地死亡，因此，其也包括在TTC分析中。通過死后TTC染色測(cè)定的梗死體積為^5+/-20mm3(載體)和 206+/-16mm3(G-CSF,平均值+/-SEM ；P = 0. 003)(圖1)。然而，這一梗死面積相當(dāng)大的降低并沒有反映在M小時(shí)時(shí)的神經(jīng)學(xué)評(píng)分上，在處理組間沒有顯示出任何差異(載體 4. 0+/-1. 33 ；G-CSF :4. 2+/-1. 32)，很可能反映出對(duì)較大梗死評(píng)級(jí)的不靈敏。實(shí)施例2在持久灌注缺乏的存在下，G-CSF使DWI損傷的發(fā)展停止如前所述，使用4-0硅氧烷涂層的尼龍細(xì)絲縫線進(jìn)行MCA的持久細(xì)絲閉塞(右中腦的縫合閉塞(sMCAO ;Bouley等，Neurosci Lett. 2007，412 185)。在環(huán)境空氣中，用異氟烷(對(duì)于誘導(dǎo)而言5 %，對(duì)于外科手術(shù)而言2 %，對(duì)于維持而言1.2%)麻醉重約320+/19g的 Wistar大鼠(η = 15)。將ΡΕ-50聚乙烯管插入股動(dòng)脈中，用于在大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCA0)之前以及在其閉塞之后 30、60、90、120、180 分鐘監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓(MABP)和獲得測(cè)量血?dú)?PHJaO2，PaCO2)、電解質(zhì)(Na+，K+，Ca2+)和血糖的血樣。用直腸探針連續(xù)監(jiān)測(cè)體溫，并用恒溫控制加熱燈將體溫保持在37. 0+/-0. 3°C。通過MRI測(cè)量在180分鐘的時(shí)間段內(nèi)對(duì)灌注缺乏和DWI損傷進(jìn)行監(jiān)測(cè)。這些MRI 實(shí)驗(yàn)在配有Biospec Bruker控制臺(tái)(Billerica，MA，USA)和20G/cm梯度的插入物(ID = 12cm，上升時(shí)間120 μ s)的4. 7T/40cm水平磁體上進(jìn)行。使用表面線圈(ID = 2. 3cm)進(jìn)行腦成像，和使用主動(dòng)去耦頸線圈用于灌注標(biāo)記(Meng等，Arm Neurol. 2004，55 :207)。在 sMCAO之后25、45、60、90、120、150和180分鐘對(duì)動(dòng)物成像。用沿χ、y或ζ方向施加的擴(kuò)散靈敏梯度分別獲得三個(gè)ADC圖。經(jīng)3分鐘獲得單脈沖的超聲平面圖像(EPI)，矩陣=64X64， 譜寬=200kHz, TR = 2s (90° 翻轉(zhuǎn)角)，TE = 37. 5ms, b = 8 禾口 1，300s/mm2，Δ = 24ms, δ =4. 75ms，視野(FOV) = 2. 56x 2. 56cm，七個(gè)1. 5mm切片，16個(gè)平均值。使用具有單脈沖、 梯度超聲、EPI采集的連續(xù)動(dòng)脈自旋標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行定量CBF測(cè)量。在4分鐘中交替地獲得六十對(duì)圖像(用于信號(hào)平均)，一個(gè)含有動(dòng)脈自旋標(biāo)記，另一個(gè)(對(duì)照)不含有自旋標(biāo)記制品。MRI參數(shù)類似于ADC測(cè)量，不同點(diǎn)在于TE= 13. 5毫秒。在存在沿流向的1. 0高斯/cm 梯度的情況下，動(dòng)脈自旋標(biāo)記使用1.78秒矩形射頻脈沖。將頻率補(bǔ)償信號(hào)轉(zhuǎn)移至未標(biāo)記的圖像。在閉塞發(fā)生后M小時(shí)時(shí)測(cè)定最終的梗死體積，同時(shí)切除腦，并沿冠狀方向切片成七個(gè)1. 5mm厚的切片，其與MR切片對(duì)應(yīng)，并用TTC染色。在閉塞之后1小時(shí)(靜脈內(nèi)；120 μ g/kg體重，經(jīng)30分鐘)和閉塞之后4小時(shí)(腹膜內(nèi)；120 μ g/kg體重，推注)，用載體(緩沖溶液Q50mM山梨醇，0. 004%吐溫-80和IOmM 乙酸鈉緩沖液(pH 4))，η = 5)或G-CSF(非格司亭，SEQ ID NO 10 ；η = 10)處理大鼠。預(yù)先指定將存活超過16小時(shí)的動(dòng)物包括在本研究中，同時(shí)排除在16小時(shí)之前死亡的那些。評(píng)價(jià)G-CSF對(duì)表現(xiàn)彌散系數(shù)(ADC)和腦血流(CBF)特征以及缺血性損傷的時(shí)空發(fā)展的作用。兩組之間的血?dú)?、電解質(zhì)、pH和血糖水平?jīng)]有差異。在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中，處理組之間的 MABP也沒有顯著不同(重復(fù)測(cè)量AN0VA，ρ >> 0. 05)，然而，在本實(shí)驗(yàn)過程中，存在與組無關(guān)的明顯升高(對(duì)于時(shí)間這一因素而言，重復(fù)測(cè)量AN0VA，ρ < 0. 05)。15只動(dòng)物中有2只在16至M小時(shí)期間死亡。使用Quickvol II 分析圖像(Schmidt 等，J Neurooncol. 2004,68 :207)。如前所述計(jì)算定量CBF和ADC圖及其相應(yīng)閾值衍生的損傷體積(Meng等，Ann Neurol. 2004，55 207)。對(duì)于ADC，將用于定義異常DWI和PWI區(qū)域的閾值減小至0. 53 X 10-3mm2/s，對(duì)于CBF， 將其減小到0. 3mL/g/分鐘，如之前所證實(shí)的(Meng等，Ann Neurol. 2004，55 :207)。圖2概述了閾值衍生的ADC和CBF損傷體積的時(shí)空發(fā)展。CBF損傷體積在組間(載體和G-CSF)沒有差異，并且隨時(shí)間相對(duì)恒定地保持在約230mm3(圖2A)。在載體處理的動(dòng)物中，ADC衍生的損傷隨時(shí)間以線性方式增加，直到120分鐘時(shí)曲線變平坦。通過TTC方法在第M小時(shí)測(cè)定的最終梗死體積稍微高于在閉塞后180分鐘測(cè)量的最后一次DWI體積。在G-CSF處理的動(dòng)物中，從閉塞之后25分鐘至45分鐘，DWI損傷增長(zhǎng)，與載體的情況相同。然而，當(dāng)在應(yīng)用CSF之后的60分鐘時(shí)間點(diǎn)獲得MRI數(shù)據(jù)時(shí)，該增長(zhǎng)似乎開始逆轉(zhuǎn)。在第90分鐘，在G-CSF處理的動(dòng)物中，DffI損傷變得顯著小于載體處理的大鼠(對(duì)于相互作用處理-時(shí)間，重復(fù)測(cè)量AN0VA，ρ < 0. 0001，然后進(jìn)行Tukey-Kramer 事后檢驗(yàn))。對(duì)于以下的所測(cè)量時(shí)間點(diǎn)，所述損傷保持穩(wěn)定，直到在180分鐘MRI數(shù)據(jù)獲取結(jié)束時(shí)，在M小時(shí)得大致相同尺寸的最終梗死(圖2B)。TTC定義的梗死體積在處理組之間顯著不同Q23+/-7mm3(載體)與 124+/-19mm3(G-CSF ；ρ = 0. 007)，很好地對(duì)應(yīng)于這兩個(gè)組中的3小時(shí)ADC損傷體積和載體組中的3小時(shí)CBF (圖2Β和2Α)。圖2C和2D顯示了 CBF和ADC衍生體積之間的絕對(duì)錯(cuò)配和相對(duì)錯(cuò)配。在閉塞之后90 分鐘，所有兩次測(cè)量都變得顯著不同(P < 0. 05 ；重復(fù)測(cè)量AN0VA，接著進(jìn)行Tukey Kramer 事后檢驗(yàn))。通過多重線性回歸模型(因素PWI、動(dòng)物(隨機(jī)因素)、處理、時(shí)間、時(shí)間X處理相互作用)，使用另一種統(tǒng)計(jì)方法，并比較相對(duì)于DWI體積和處理的隨時(shí)間的PWI體積表現(xiàn)， 表明處理效果在sMCAO之后84分鐘變得明顯。本實(shí)驗(yàn)表明，G-CSF的作用必須在閉塞發(fā)病之后至少90分鐘立即進(jìn)行，以允許對(duì)DWI缺乏體積的顯著作用。在向神經(jīng)元9加入G-CSF 之后的5分鐘內(nèi)，體外抗細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)的誘導(dǎo)立即進(jìn)行，并伴有Akt的磷酸化和活化。相反，骨髓衍生細(xì)胞介導(dǎo)的間接作用需要將那些細(xì)胞從骨髓釋放到血流中，通過血腦屏障，侵入組織，可能接著釋放保護(hù)因子。就本實(shí)驗(yàn)中所觀察到的效果來說，這不大可能足夠快。
在Menzies神經(jīng)病理學(xué)評(píng)級(jí)中沒有檢測(cè)到組間在第4和M小時(shí)的顯著差異，很可能反映出評(píng)級(jí)對(duì)較大梗死的不靈敏性。
權(quán)利要求
1.一種治療哺乳動(dòng)物對(duì)象的卒中的方法，包括以下步驟(a)開始向所述對(duì)象施用治療活性量的G-CSF或功能活性G-CSF衍生物，然后(b)向所述對(duì)象施用治療活性量的血栓溶解劑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(a)之后和步驟(b)之前對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行診斷檢查， 以排除在步驟(b)期間出現(xiàn)出血或其它不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中步驟(a)使用人G-CSF。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，其中步驟(b)使用rt-PA。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中在所述卒中發(fā)作之后的第一個(gè)6小時(shí)之內(nèi)開始施用所述G-CSF或功能活性G-CSF衍生物。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其中在所述卒中發(fā)作后6小時(shí)之后施用所述血栓溶解劑。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的方法，其中在所述卒中發(fā)作之后的第一個(gè)6小時(shí)之內(nèi)完成所述G-CSF或功能活性G-CSF衍生物的施用。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的方法，其中在開始施用G-CSF或功能活性G-CSF衍生物之后至少0. 5小時(shí)施用所述血栓溶解劑。
9.權(quán)利要求2至8中任一項(xiàng)的方法，其中所述診斷檢查持續(xù)至少0.5小時(shí)。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的方法，其中以至少90μ g/kg體重的劑量靜脈內(nèi)或皮下給予G-CSF。
11.G-CSF或功能活性G-CSF衍生物在制備用于治療患有急性卒中的哺乳動(dòng)物對(duì)象的藥物組合物中的用途，其中所述對(duì)象在卒中發(fā)作之后的最初6小時(shí)之內(nèi)被卒中單元或診所收治，并且其中評(píng)價(jià)所述對(duì)象的溶栓治療的出血或其它嚴(yán)重不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)所必需的診斷檢查所消耗的時(shí)間否則將導(dǎo)致超出溶栓治療的治療窗。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述溶栓治療的治療窗為卒中發(fā)作后3小時(shí)。
13.權(quán)利要求11或12的用途，其中所述診斷檢查持續(xù)至少0.5小時(shí)。
14.權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的用途，其中所述哺乳動(dòng)物對(duì)象在被卒中單元或診所收治后立即接受G-CSF或功能活性G-CSF衍生物。
15.權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的用途，其中所述G-CSF是人G-CSF。
16.G-CSF，其用在治療對(duì)象卒中的方法中，其中在施用G-CSF之前的6小時(shí)內(nèi)已經(jīng)觀察到所述對(duì)象的卒中發(fā)作，并且其中在所述施用G-CSF之前，除了觀察到所述卒中發(fā)作之外， 沒有進(jìn)行進(jìn)一步的卒中診斷。
17.G-CSF,其用在治療對(duì)象卒中的方法中，其中在施用G-CSF之前的6小時(shí)內(nèi)已經(jīng)觀察到所述對(duì)象的卒中發(fā)作，并且其中在所述施用G-CSF之后，對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行診斷檢查，以排除由于施用所述血栓溶解劑而導(dǎo)致出血或其它不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)。
18.血栓溶解劑，其用在治療對(duì)象卒中的方法中，其中所述對(duì)象在其卒中發(fā)作之后的6 小時(shí)內(nèi)已經(jīng)施用G-CSF，并且其中在所述施用G-CSF之后對(duì)所述對(duì)象進(jìn)行診斷檢查，以排除由于施用所述血栓溶解劑而導(dǎo)致出血或其它不良副作用的風(fēng)險(xiǎn)。
19.權(quán)利要求18的血栓溶解劑，具有如在權(quán)利要求6至10中任一項(xiàng)所定義的特征。
全文摘要
本發(fā)明涉及G-CSF及其衍生物的以下用途用于延長(zhǎng)急性卒中后溶栓治療的治療窗，從而允許在溶栓治療前進(jìn)行必需的診斷檢查以避免溶栓出現(xiàn)的出血及其它嚴(yán)重不良副作用。
文檔編號(hào)A61K38/19GK102316891SQ201080007924
公開日2012年1月11日 申請(qǐng)日期2010年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月17日
發(fā)明者阿爾明·施奈德, 馬克·菲舍爾 申請(qǐng)人:森格尼斯生物科學(xué)有限兩合公司