專利名稱：用于緩解神經(jīng)突生長抑制的蛋白激酶a和/或酪蛋白激酶ⅱ的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)損傷或神經(jīng)疾病領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及緩解神經(jīng)元再生(例如神經(jīng)突生長，neurite outgrowth)的抑制。
背景技術(shù)：
神經(jīng)元延伸神經(jīng)突以與其他神經(jīng)元或其靶組織進行通訊。成體中樞神經(jīng)系統(tǒng) (CNS)中的這種神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)在損傷后僅不良地再生。這在本領(lǐng)域中是個問題，導(dǎo)致患者神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)損傷后的不良結(jié)局。成體哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)不能再生部分歸因于與損傷的髓鞘質(zhì)相關(guān)的神經(jīng)突生長抑制劑。髓鞘質(zhì)相關(guān)的糖蛋白(MAG)、Nogo-A(也稱為網(wǎng)狀蛋白4A，Reticulon 4A)和少突膠質(zhì)細胞髓鞘質(zhì)糖蛋白(OMgp)為可結(jié)合Nogo受體I(NgRl)的髓鞘質(zhì)相關(guān)的神經(jīng)突生長抑制劑。這些髓鞘質(zhì)相關(guān)蛋白，Nogo-A、MAG以及OMgp通過結(jié)合Nogo受體將來自少突膠質(zhì)細胞的信號傳輸至神經(jīng)元中。該Nogo信號傳導(dǎo)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的發(fā)育和維持中具有關(guān)鍵作用。它可抑制神經(jīng)元的分化、遷移以及神經(jīng)突生長，導(dǎo)致?lián)p傷的成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)恢復(fù)不良。Nogo-A通過被稱為Nogo-66的結(jié)構(gòu)域結(jié)合NgRl。Nogo-66結(jié)構(gòu)域由66個氨基酸組成，單獨的Nogo-66結(jié)構(gòu)域(無Nogo-A的其他區(qū)域)足以抑制神經(jīng)突生長。MAG(但既非 Nogo-A也非OMgp)不僅能通過NgRl而且能通過NgR2 (NgRl同源性蛋白)抑制神經(jīng)突生長 (6)。NgRl使得信號傳導(dǎo)復(fù)合物含有LING0-1和p75N 或TAJ/TROY (McGee和 Strittmatter Trends Neurosci 26,193-198(2003) ；Schwab φ, Trends Mol Med 12， 四3-四7(2006))。p75N 和TAJ/TROY均屬于TNF α受體家族，且提出其作為用于啟動抑制神經(jīng)突生長的細胞內(nèi)信號的主要組分。不確定NgR2是否使復(fù)合物含有LING0-1和ρ75·或 TAJ/TR0Y。盡管關(guān)于Nogo信號傳導(dǎo)的信息在擴展，但關(guān)于控制該信號傳導(dǎo)的機制的信息有限。這在本領(lǐng)域是個問題。已知細胞內(nèi)cAMP的水平增加克服了 Nogo信號傳導(dǎo)對于神經(jīng)突生長的抑制性作用(16)。然而，cAMP克服Nogo信號傳導(dǎo)的作用的詳細機制尚未知。BDNF (神經(jīng)營養(yǎng)因子神經(jīng)生長因子家族的成員)不僅在體外刺激數(shù)種神經(jīng)細胞的神經(jīng)突生長(17-19，20)，而且部分地促進脊髓損傷的恢復(fù)。使用BDNF預(yù)處理提高了培養(yǎng)的神經(jīng)元中細胞內(nèi)cAMP的水平，甚至在存在髓鞘質(zhì)相關(guān)抑制劑的情況下也允許神經(jīng)元延伸神經(jīng)突05)。另外，BDNF參與海馬中損傷誘導(dǎo)的神經(jīng)突萌發(fā)06)。這些報道表明，甚至在存在神經(jīng)突生長的髓鞘質(zhì)相關(guān)抑制劑的情況下，BDNF也可潛在輔助中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的再生。然而，該作用有限，且不足以實現(xiàn)神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)的完全再生。人神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y顯示了在使用維甲酸(RA)處理5天之后的BDNF 依賴性神經(jīng)突生長(18)。SH-SY5Y細胞響應(yīng)RA啟動向神經(jīng)元樣細胞的分化，并開始表達神經(jīng)元特異性蛋白。然而，通過RA自SH-SY5Y細胞分化的神經(jīng)細胞僅顯示有限的形態(tài)學(xué)變化。對于SH-SY5Y衍生的神經(jīng)細胞的有效神經(jīng)突生長，需要BDNF處理，否則需要使用RA進行較長時間的處理07)。在神經(jīng)元方面已經(jīng)研究了酪蛋白激酶II (CK2)。酪蛋白激酶II 參與神經(jīng)元中兩種不同表面蛋白的磷酸化。這兩種蛋白都與Nogo受體無關(guān)。另外，在該領(lǐng)域中的研究完全依賴于對于酪蛋白激酶II抑制劑的使用。由此，本領(lǐng)域中已經(jīng)研究了細胞內(nèi)CK2的功能。已知細胞內(nèi)CK2活性為神經(jīng)突自身生長所需。已知存在細胞外CK2。然而， 如上所述，關(guān)于細胞外CK2的信息很大程度上尚屬未知。更具體地，有信息表明，淀粉狀蛋白β前體蛋白和神經(jīng)蛋白聚糖Cfceuroglican C)可在神經(jīng)元表面通過內(nèi)源性細胞外CK2 而被磷酸化。然而，這些磷酸化對于神經(jīng)突生長的作用(如果存在的話)尚屬未知。酪蛋白激酶II已經(jīng)在某些體外制劑中用于處理膠原/層粘連蛋白。這些處理從未涉及細胞。這些處理僅涉及諸如膠原或?qū)诱尺B蛋白之類的基質(zhì)蛋白的體外制劑?，F(xiàn)有技術(shù)中，細胞的酪蛋白激酶II處理尚屬未知。將外源性酪蛋白激酶II應(yīng)用于細胞在現(xiàn)有技術(shù)中尚屬未知。Ulloa 等(1993EMB0，卷 12，第 1633-1640 頁)使用了反義寡核苷酸(antisense oligos)和特異性抑制劑來抑制N2A小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞系的CK2活性。在既不使用維甲酸(RA)也不使用BDNF的情況下，N2A細胞也延伸神經(jīng)突。通過使用N2A細胞系，他們發(fā)現(xiàn)， N2A細胞的神經(jīng)突生長受到CK2耗竭的抑制，還發(fā)現(xiàn)CK2耗竭改變了微管相關(guān)蛋白MAPlB的磷酸化。MAPlB是細胞骨架重排所需要的，而細胞骨架重排為神經(jīng)突生長所需。由此，他們得出結(jié)論，MAPlB磷酸化的改變通過CK2耗竭而導(dǎo)致神經(jīng)突生長抑制。MAPlB磷酸化是細胞內(nèi)的。已知與細胞骨架重排相關(guān)的其他蛋白在細胞內(nèi)通過CK2磷酸化。這些細胞內(nèi)磷酸化事件為神經(jīng)突自身生長所需。由于正常神經(jīng)元以及N2A細胞可在不受任何刺激的情況下而延伸神經(jīng)突，推斷這些細胞內(nèi)磷酸化事件是由神經(jīng)元內(nèi)基礎(chǔ)水平的細胞內(nèi)CK2所催化。該論文不涉及Nogo信號傳導(dǎo)。至今尚不了解磷酸化和Nogo信號傳導(dǎo)之間的關(guān)系。迄今，Nogo信號傳導(dǎo)調(diào)節(jié)機制尚未知。本發(fā)明設(shè)法克服現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的問題。

發(fā)明內(nèi)容
成體神經(jīng)組織再生不良或根本不發(fā)生再生是一個問題。這在由諸如損傷或疾病之類的因素引起的損害之后尤其是一個問題。已經(jīng)識別了控制再生抑制的多種機制。一種這樣的機制是通過Nogo的受體信號傳導(dǎo)而抑制神經(jīng)突生長。盡管該途徑中的多種配體和受體得以良好表征，但現(xiàn)有技術(shù)中尚未揭示緩解該抑制的可靠途徑。本發(fā)明已經(jīng)解決了這些問題。通過對于Nogo信號傳導(dǎo)的詳細研究，本發(fā)明人已經(jīng)識別了可抑制所述信號傳導(dǎo)的途徑。另外，本發(fā)明人已經(jīng)識別了對于調(diào)節(jié)Nogo信號傳導(dǎo)來說關(guān)鍵的Nogo受體內(nèi)的特定分子靶。該靶是Nogo受體的絲氨酸觀1。該殘基的磷酸化消除了神經(jīng)突生長抑制劑與受體結(jié)合，由此緩解神經(jīng)再生抑制。另外，本發(fā)明人教導(dǎo)并證實了可通過諸如使用蛋白激酶A和/或酪蛋白激酶II處理而實現(xiàn)該目的的有效途徑。本發(fā)明基于這些令人^C訝的發(fā)現(xiàn)。因此，一方面，本發(fā)明提供了一種用于緩解神經(jīng)元的神經(jīng)突生長抑制的方法，其中所述神經(jīng)元包含Nogo受體，所述方法包括使所述神經(jīng)元與能夠?qū)е翹ogo受體磷酸化的組合物接觸，其中所述組合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶II。合適地，所述組合物包含蛋白激酶A和酪蛋白激酶II。合適地，所述磷酸化是與所述Nogo受體的絲氨酸281對應(yīng)的氨基酸殘基的磷酸化。合適地，所述Nogo受體是人NgRl。另一方面，本發(fā)明涉及蛋白激酶A多肽在制備用于脊髓損傷的藥劑中的用途。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療脊髓損傷的蛋白激酶A多肽。另一方面，本發(fā)明涉及酪蛋白激酶II多肽在制備用于脊髓損傷的藥劑中的用途。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療脊髓損傷的酪蛋白激酶II多肽。另一方面，本發(fā)明涉及用作藥劑的組合物，其包含蛋白激酶A和酪蛋白激酶II。另一方面，本發(fā)明涉及上文所述的組合物在制備用于脊髓損傷的藥劑中的用途。另一方面，本發(fā)明涉及用于治療脊髓損傷的上文所述的組合物。另一方面，本發(fā)明涉及蛋白激酶A多肽或酪蛋白激酶II多肽在制備用于導(dǎo)致神經(jīng)突生長的藥劑中的用途。另一方面，本發(fā)明涉及用于導(dǎo)致神經(jīng)突生長的蛋白激酶A多肽或酪蛋白激酶II多肽。另一方面，本發(fā)明涉及一種治療受試者的脊髓損傷的方法，所述方法包括給所述受試者施用有效量能夠?qū)е翹ogo受體磷酸化的組合物，其中所述組合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶II。合適地，所述施用定位于損傷部位。
具體實施例方式Nogo信號傳導(dǎo)可抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元的神經(jīng)突生長(3，4)、分化(9，10)、 遷移(1 以及突觸形成(11)。因此，Nogo信號傳導(dǎo)已被鑒定為中樞神經(jīng)系統(tǒng)再生(在生理條件下不發(fā)生)的主要抑制因子。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，Nogo受體的磷酸化(例如，通過酪蛋白激酶II(CD))抑制髓鞘質(zhì)相關(guān)蛋白的結(jié)合，所述鞘質(zhì)相關(guān)蛋白抑制諸如神經(jīng)突生長之類的神經(jīng)元再生。本發(fā)明人證實，腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)可任選用于誘導(dǎo)Nogo受體的磷酸化，這阻抑神經(jīng)母細胞瘤衍生的神經(jīng)元的神經(jīng)突生長的Nogo依賴性抑制。在進一步的實施方式中，細胞外CK2處理通過髓鞘質(zhì)相關(guān)蛋白克服了神經(jīng)突生長抑制。這例如在成體大鼠神經(jīng)元中得以證實。因此， 本發(fā)明提供了用于控制Nogo信號傳導(dǎo)并由此調(diào)節(jié)神經(jīng)元再生的新策略。本發(fā)明人首次揭示了磷酸化與Nogo信號傳導(dǎo)之間的關(guān)系。本發(fā)明人首次揭示了胞外結(jié)構(gòu)域磷酸化對于神經(jīng)突生長的Nogo依賴性抑制的作用。Nogo受體的磷酸化可能不為神經(jīng)突自身生長所需，但它是克服神經(jīng)突生長抑制所需要的。神經(jīng)突生長的抑制發(fā)生在體內(nèi)條件下，例如在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷之后。另外，本發(fā)明人揭示了，Nogo信號傳導(dǎo)抑制哺乳動物細胞(例如SH-SY5Y衍生的神經(jīng)細胞)的神經(jīng)突生長，并且該抑制受到使用CK2而無BDNF的細胞外處理的阻抑。CK2 處理抑制Nogo-66、MAG以及OMgp與其受體的結(jié)合，允許在這些神經(jīng)突生長抑制劑的存在下的神經(jīng)突生長。由此，本發(fā)明人有利地揭示了本發(fā)明的BDNF依賴性作用。合適地，BDNF不用于本發(fā)明的方法。合適地，特別從本發(fā)明的方法中省略了 BDNF。合適地，本發(fā)明的組合物不包含BDNF。定義術(shù)語“包含”(包括、含有)應(yīng)理解為在本領(lǐng)域中具有其常規(guī)含義，即，包括指明的特征或特征組，但該術(shù)語不排除還存在任何其他指明的特征或特征組。Nogo 警體從廣義上，“Nogo受體”可指介導(dǎo)神經(jīng)突生長的Nogo依賴性抑制的任何蛋白，不僅特別指在經(jīng)典膜定位意義上的受體(NgR)，還可指任何介導(dǎo)Nogo信號傳導(dǎo)的任何Nogo結(jié)合蛋白(例如通過除NgR家族成員以外的蛋白)；實際上，本發(fā)明人使用正常神經(jīng)元獲得的結(jié)果顯示了 CK2處理可阻斷這種NgR非依賴性Nogo信號傳導(dǎo)，以及NgR依賴性信號傳導(dǎo)。然而，合適地，除非上下文另有指明，術(shù)語“Nogo受體”可具有本領(lǐng)域中的常規(guī)含義。NgRl與其同源性蛋白NgR2和NgR3屬于具有8個富亮氨酸重復(fù)子區(qū)域的糖基磷脂酰肌醇(GPI)連接蛋白的家族，所述蛋白不具有細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。盡管NgRl可與Nogo-A、 MAG以及OMgp相互作用，但NgR2僅以維甲酸依賴性方式與MAG相互作用。該相互作用也可抑制神經(jīng)突生長。尚不知曉NgR3的配體。NgRl使得復(fù)合物包含LING0-1和神經(jīng)營養(yǎng)因子受體p75NTK。可選地，神經(jīng)元中廣泛表達的孤兒腫瘤壞死因子受體成員TAJ/TR0Y代替？75-包含在所述復(fù)合物中。尚不知 NgR2是否可使復(fù)合物具有LING0-1、p75NTK或TAJ/TR0Y(如見于NgRl)。因此，Nogo信號傳導(dǎo)可至少通過少突膠質(zhì)細胞中的至少三種配體啟動，可通過至少兩種受體將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至神經(jīng)元中。Nogo信號傳導(dǎo)中特異性的配體-受體系統(tǒng)對于神經(jīng)突生長抑制的相對作用在不同神經(jīng)細胞類型中可不同。 本發(fā)明涉及存在于細胞表面的Nogo受體。事實上，本發(fā)明的具體教導(dǎo)是，外源性物質(zhì)用于激發(fā)靶細胞的細胞表面上Nogo受體的磷酸化。因此，合適地，本文所使用的術(shù)語 "Nogo受體”是指存在于靶細胞的細胞表面的Nogo受體蛋白。合適地，所述靶細胞是脊椎動物靶細胞，更合適地，是哺乳動物靶細胞，最合適地，是人靶細胞。在一些實施方式中，所述靶細胞最合適地是待治療的受試者所具有的人細胞，例如人神經(jīng)元，例如成體神經(jīng)元。廣義上，術(shù)語“Nogo受體”是指任何已知的Nogo受體(例如NgRl、NgR2或NgR3) 的多肽。另外，在靶向Nogo受體中，多于一種的Nogo受體可被磷酸化。這可給本發(fā)明帶來有利之處，例如緩解不依賴于特定Nogo受體類型(表達于所選的特定靶細胞)的神經(jīng)突生長抑制。另外，可通過靶向多種Nogo受體蛋白而實現(xiàn)較強和/或較迅速的作用。重要的是要注意到各Nogo受體在氨基酸殘基281處具有保守絲氨酸。因此，根據(jù)本發(fā)明的Nogo受體突變體可同樣包括任何已知的NgR多肽，條件是它們具有所討論的特定突變或取代。合適地，根據(jù)本發(fā)明的Nogo受體是NgRl、NgR2或NgR3中的一種或多種。更合適地，根據(jù)本發(fā)明的Nogo受體是NgRl或NgR2中的一種或多種。這樣一個優(yōu)點是這些Nogo 受體表征較好，并因此適于在體內(nèi)產(chǎn)生更特定或確定的作用。最優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的Nogo 受體是NgRl。這具有許多優(yōu)點，其中一些優(yōu)點列出在實施例部分。本發(fā)明主要涉及脊椎動物(例如哺乳動物)應(yīng)用。因此，合適地，本發(fā)明的Nogo受體是脊椎動物(例如哺乳動物)Nogo受體。最合適地，本發(fā)明的Nogo受體是人Nogo受體。人Nogo受體具有與人Nogo受體氨基酸序列對應(yīng)的多肽序列。自然地，根據(jù)本發(fā)明的Nogo 受體多肽可通過任何合適的方法來制備，例如從非人宿主細胞重組制備。然而，為了便于理解，如果其氨基酸序列與人氨基酸序列對應(yīng)，則將非人細胞制備的Nogo受體多肽認為是人 Nogo受體。本文揭示并討論了 Nogo受體突變體。從上述討論應(yīng)理解，這些突變體可包含多種各Nogo受體亞型個體(例如NgRl、NgR2、NgR3等)中的一種。為了便于理解，在Nogo受體參考序列的上下文中討論了特定的氨基酸或特定的突變。參考序列應(yīng)理解，將使用其在多肽上的編號位置來討論特定的氨基酸殘基，這是本領(lǐng)域常規(guī)的方法。當(dāng)使用編號位置來引用特定的氨基酸殘基時，使用人NgRl的氨基酸序列作為參考序列來取編號。最合適地，Nogo受體參考序列是NM023004的人NgRl氨基酸序列MKRASAGGSRLLAWVLWLQAWQVAAPCPGACVCYNEPKVTTSCPQQGLQAVPVGIPAASQRIFLHGNRISHVPAASFRACRNLTILWLHSNVLARIDAAAFTGLALLEQLDLSDNAQLRSVDPATFHGLGRLHTLHLDRCGLQELGPGLFRGLAALQYLYLQDNALQALPDDTFRDLGNLTHLFLHGNRISSVPERAFRGLHSLDRLLLHQNRVAHVHPHAFRDLGRLMTLYLFANNLSALPTEALAPLRALQYLRLNDNPWVCDCRARPLWAWLQKFRGSSSEVPCSLPQRLAGRDLKRLAANDLQGCAVATGPYHPIVWTGRATDEEPLGLPKCCQPDAADKASVLEPGRPASAGNALKGRVPP⑶SPPGNGSGPRHINDSPFGTLPGSAEPPLTAVRPEGSEPPGFPTSGPRRRPGCSRKNRTRSHCRLGQAGSGGGGTCDSEGSGALPSLTCSLTPLGLALVLWTVLGPC如在本領(lǐng)域中所公知的，這用于對目的殘基進行定位。這并非總是嚴(yán)格的計數(shù)-必須注意上下文。例如，如果目的蛋白(例如，人EHD2)的長度稍有不同，則人序列中對應(yīng)于(例如)S281的正確殘基的定位可需要對序列進行比對，且需要選取等同或?qū)?yīng)的殘基，而非僅取目的序列的第281位殘基。這在本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)范圍之內(nèi)。附圖
中給出了示例的比對。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，本發(fā)明主要參考NgRl來舉例說明。應(yīng)注意， NgRl表現(xiàn)出與其他NgR家族多肽具有高序列同源性。因此，在一些方面，本發(fā)明涉及NgRl 在開發(fā)用于應(yīng)用其他NgR家族蛋白的治療劑中的用途。在本發(fā)明的一些方面，期望采用測試特定的多肽是否被認為是NgR家族多肽的功能性試驗。除了(或替代)上文所述基于序列的標(biāo)準(zhǔn)，還可使用下述功能性標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合配體， 例如本文所述的那些配體。另外，還可使用神經(jīng)突生長測定中起作用的能力，例如，通過在實施例部分描述的使用RA處理而導(dǎo)致的SH-SY5Y細胞中的過表達。因此，為了確定特定多肽是否實際上被認為是NgR家族多肽，可檢測該多肽是否在神經(jīng)突生長測定中起作用。如果NgR蛋白支持本文中的Nogo信號傳導(dǎo)，該多肽可被認為是Nogo受體(NgR家族多肽)。 當(dāng)然，本發(fā)明的目的是緩解神經(jīng)突生長抑制，當(dāng)評價NgR蛋白時應(yīng)注意，野生型蛋白在該測定中抑制神經(jīng)突生長，特別在未使用本發(fā)明的激酶處理的情況下。本發(fā)明的Nogo受體突變體本發(fā)明涉及Nogo受體多肽，其特征在于，絲氨酸281被除了絲氨酸以外的任何其他氨基酸取代。合適地，S281被非磷酸基受體氨基酸取代，因此，合適地S281不是S、T或 Y。
合適地，本發(fā)明提供了具有S281A的NogoR，其優(yōu)點在于該位點不可磷酸化。這意味著，該受體具有抵抗配體結(jié)合的CKII/PKA抑制的生物學(xué)特性。換句話說，這樣的突變體具有甚至在存在CKII/PKA的情況下響應(yīng)Nogo配體而進行信號傳導(dǎo)的新功能。合適地，本發(fā)明提供了具有S281D的NogoR，其優(yōu)點在于模仿S281的磷酸化。這意味著該受體具有被永久“關(guān)閉”的生物學(xué)特性，這樣通過使用該受體使得神經(jīng)突生長抑制得以永久緩解。更具體地，該受體不結(jié)合Nogo配體。換句話說，這樣的突變體具有不響應(yīng) Nogo配體而結(jié)合(或信號傳導(dǎo))的新功能，不管是否存在CKII/PKA均如此。合適地，除非特別指明(例如在對應(yīng)于S281的殘基處)，否則本發(fā)明的Nogo受體多肽(NogoR)包含NM023004序列。本發(fā)明還涉及下述NogoR 與NM023004具有至少60%同一性，合適地與NM023004 具有至少70%同一性，合適地與與NM023004具有至少75%同一性，合適地與NM023004具有至少80%同一性，合適地與NM023004具有至少85%同一性，合適地與NM023004具有至少90%同一性，合適地與NM023004具有至少95%同一性，合適地與NM023004具有至少 97%同一性，合適地與NM023004具有至少98%同一性，合適地與NM023004具有至少99% 同一性，所述NogoR總是具有殘基S281不是絲氨酸的特征。合適地，截短形式與跨越所述截短形式的長度的該序列對應(yīng)。合適地，根據(jù)本發(fā)明的NogoR多肽包含至少30個氨基酸，合適地至少80個氨基酸，合適地至少130個氨基酸， 合適地至少180個氨基酸，合適地至少230個氨基酸，合適地至少280個氨基酸，合適地至少330個氨基酸，合適地至少380個氨基酸，合適地至少382個氨基酸(例如，全長NgR2)， 合適地至少402個氨基酸(例如，全長NgR3)，合適地至少417個氨基酸(例如，NgRl)。多肽和突變體Nogo受體序列可以被修飾以用于本發(fā)明。通常，所進行的修飾使包含絲氨酸觀1(或在所述位置的取代)的序列區(qū)域得到保持。所進行的氨基酸取代可以是例如1、2或 3至10、20或30個取代，條件是所修飾的序列保留所需的S281殘基。氨基酸取代可包括使用非天然存在的類似物，例如用于增加治療上施用的多肽的半衰期。修飾同樣適用于本發(fā)明的PKA或CKII多肽，在該情況下總是需要在引入任何突變或取代之后保留PKA/CKII激酶活性。可例如根據(jù)下表來進行保守性取代。第二列中相同區(qū)塊中的氨基酸和優(yōu)選地第三列中相同行中的氨基酸可相互取代
權(quán)利要求
1.一種用于緩解神經(jīng)元的神經(jīng)突生長抑制的方法，其中，所述神經(jīng)元包含Nogo受體， 所述方法包括使所述神經(jīng)元與能夠?qū)е翹ogo受體磷酸化的組合物接觸，其中，所述組合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶II。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述組合物包含蛋白激酶A和酪蛋白激酶II。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述磷酸化是指與所述Nogo受體的絲氨酸 281對應(yīng)的氨基酸殘基的磷酸化。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其中，所述Nogo受體是人NgRl。
5.蛋白激酶A多肽在制備用于脊髓損傷的藥物中的用途。
6.蛋白激酶A多肽，其用于治療脊髓損傷。
7.酪蛋白激酶II多肽在制備用于脊髓損傷的藥物中的用途。
8.酪蛋白激酶II多肽，其用于治療脊髓損傷。
9.一種用作藥物的組合物，其包含蛋白激酶A和酪蛋白激酶II。
10.權(quán)利要求9所述的組合物在制備用于脊髓損傷的藥物中的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其用于治療脊髓損傷。
12.蛋白激酶A多肽或酪蛋白激酶II多肽在制備用于導(dǎo)致神經(jīng)突生長的藥物中的用途。
13.蛋白激酶A多肽或酪蛋白激酶II多肽，其用于導(dǎo)致神經(jīng)突生長。
14.一種治療受試者脊髓損傷的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的能夠?qū)е翹ogo受體磷酸化的組合物，其中，所述組合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶II。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述施用定位于所述損傷部位。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于緩解神經(jīng)元的神經(jīng)突生長抑制的方法，其中所述神經(jīng)元包含Nogo受體，所述方法包括使所述神經(jīng)元與能夠?qū)е翹ogo受體磷酸化的組合物接觸，其中所述組合物包含蛋白激酶A或酪蛋白激酶。
文檔編號A61K38/17GK102341117SQ201080009932
公開日2012年2月1日 申請日期2010年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月6日
發(fā)明者武井義則 申請人:醫(yī)藥研究委員會