專利名稱：用于治療蛋白尿、腎小球硬化癥和腎衰竭的5-β,14-β-雄甾烷衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及17-β-(3-呋喃基)和噠嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物，其用作制備預(yù)防和治療蛋白尿，腎小球硬化癥和腎衰竭的藥物的試劑。
背景技術(shù)：
術(shù)語蛋白尿源于蛋白質(zhì)和尿，其意指尿中存在過量的血清蛋白。蛋白尿可以是腎臟(腎)損害的病征，由于血清蛋白可容易地自尿再吸收，則過量蛋白質(zhì)的存在指出吸收不足或過濾損傷。蛋白尿可以是下述病征的特征腎病綜合征(也即內(nèi)源性腎衰竭)；腎的毒性損傷；膠原血管病(例如，全身性紅斑狼瘡)；腎小球病，比如膜質(zhì)腎小球性腎炎，局灶性節(jié)段性腎小球性腎炎；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)；應(yīng)激；糖尿?。凰幬?例如，NSAIDs，尼古丁，青霉胺，金和其它重金屬，ACE抑制劑，抗生素，阿片類特別是二醋嗎啡)；感染(例如，HIV，梅毒，肝炎， 后-鏈球菌感染)；氨基酸尿癥；高血壓性腎硬化；間質(zhì)性腎炎和腎小球硬化癥。腎小球硬化癥是通用術(shù)語，其描述腎微血管(也即腎小球)結(jié)瘢，腎小球是腎中自血液過濾尿的功能單元?；加心I小球硬化癥的許多患者的病情逐漸惡化直至腎完全衰竭。 該病征稱為腎病的最終階段或ESRD?；加蠩SRD的患者必須進(jìn)行透析(血液透析或腹膜透析)以清潔他們的血液或者通過移植獲得新的腎。腎小球是高度專門的結(jié)構(gòu)，其控制蛋白的血漿超濾。確保上述控制的特定細(xì)胞單元是足細(xì)胞，其功能障礙牽涉蛋白在尿中的大量損失(蛋白尿)。熟知的是足細(xì)胞功能受特定的蛋白調(diào)節(jié)性肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的嚴(yán)格控制。已知的是，編碼上述足細(xì)胞蛋白的基因的突變與腎小球膜屏障的改變有關(guān)，并因而與大量蛋白尿和腎損害有關(guān)。在這些足細(xì)胞蛋白中，去氧腎上腺素是裂孔膜的基礎(chǔ)組分，其通過激活由酪氨酸激酶Fyn介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)，所述激酶屬于Src激酶類(Trends Mol Med. 2007 ； 13 396-403)。內(nèi)收蛋白是細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)，其牽涉在所有細(xì)胞中調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白-血影蛋白動(dòng)力學(xué)。已證實(shí)內(nèi)收蛋白基因的多態(tài)現(xiàn)象與高血壓和腎衰竭進(jìn)展有關(guān)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)指出α和β內(nèi)收蛋白被表達(dá)進(jìn)入腎小球，而其多態(tài)現(xiàn)象牽涉在動(dòng)物模型中某些足細(xì)胞蛋白經(jīng)改變的表達(dá)，蛋白尿和腎損害進(jìn)展，這與其血壓無關(guān)。(J Hypertension 2003，21(Suppl. 4)，abs 4C. 4)。具體來說，血壓正常的突變型β內(nèi)收蛋白敲除小鼠，與對(duì)照小鼠相比，顯示增加的足細(xì)胞蛋白比如去氧腎上腺素、突足蛋白(synaptopodin)、α -輔肌動(dòng)蛋白，F(xiàn)yn和ZO-I 的表達(dá)以及尿蛋白質(zhì)的減少(圖1)，這指出β內(nèi)收蛋白獨(dú)立于血壓控制在調(diào)節(jié)腎小球滲透性中的潛在作用。在血壓正常的同類系NB大鼠中，其中來自親代高血壓MHS品系的突變型β內(nèi)收蛋白基因(QM9R)已被漸摻入血壓正常的麗S背景(BBRC 2004 :562-568)，已發(fā)現(xiàn)在經(jīng)培養(yǎng)足細(xì)胞中測得的某些足細(xì)胞蛋白(去氧腎上腺素，α-輔肌動(dòng)蛋白，裂孔膜蛋白
5(podocyn)和Z0-1)的表達(dá)減少(參見圖2)并且關(guān)聯(lián)于大量蛋白尿和腎損害，上述現(xiàn)象是在與血壓正常的攜帶野生型β內(nèi)收蛋白變種以及來自MHS品系的α突變變種的同類系NA 品系比較的情況下，由成年大鼠的免疫熒光數(shù)據(jù)(參見圖幻所指出的。因此，這些發(fā)現(xiàn)提示突變型β內(nèi)收蛋白對(duì)腎臟功能的病理學(xué)作用，其獨(dú)立于血壓并且受α突變型變種調(diào)節(jié)。在動(dòng)物模型中獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與人類疾病的相關(guān)性受到新近臨床發(fā)現(xiàn)的支持，其顯示，在攜帶與α內(nèi)收蛋白突變變種(Trp)相互作用的β內(nèi)收蛋白突變(CT+TT)的情況下，患有IgA腎病的患者更快地進(jìn)展至腎衰竭最終階段(參見圖4)。內(nèi)源的毒毛花苷G(EO)已被廣泛地視作能夠通過各種機(jī)理并主要通過調(diào)節(jié)腎臟 Na處理來控制血壓的新激素。已發(fā)現(xiàn)EO的高循環(huán)水平與高血壓有關(guān)。17-(3-呋喃基)和(4-噠嗪基)-5_β，14_β -雄甾烷衍生物是已知化合物。ΕΡ0583578Β1描述本申請(qǐng)中要求保護(hù)的β _雄留烷衍生物，制備它們的方法和它們用于治療心血管障礙比如心力衰竭和高血壓的用途。ΕΡ0590271Β1描述17-芳基和17-雜環(huán)基_5_α，14-β -雄留烷，雄留烯和雄甾二烯衍生物，制備它們的方法和它們用于治療心血管障礙比如心力衰竭和高血壓的用途。ΕΡ0590272Β1描述17-芳基和17-雜環(huán)基_5_β，14-β -雄留烷衍生物和它們用于治療心血管障礙比如心力衰竭和高血壓的用途。W02008148812描述17-0-(3-呋喃基)和(4_噠嗪基)_5_ β，14-β -雄甾烷衍生物和它們用于治療在血管形成術(shù)或內(nèi)切削術(shù)(endoartherectomy)之后再狹窄和器官纖維化導(dǎo)致的疾病的用途。上述公開中沒有任何一個(gè)公開5 β，14 β -雄甾烷衍生物用于預(yù)防和/或治療蛋白尿，腎小球硬化癥和腎衰竭的用途。目前發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的17-β-(3-呋喃基)和噠嗪基)-5-β，14-β-雄甾烷衍生物是預(yù)防和治療蛋白尿，腎小球硬化和腎衰竭的有用試劑。發(fā)明詳述因此，本發(fā)明目的是式(I)化合物，
(I)其中符號(hào)二代表單鍵或雙鍵；在位置3的二是雙鍵的情況下，Y是氧或胍基亞氨基；在位置3的二是單鍵并且能夠具有α或β構(gòu)型的情況下，Y是羥基，OR4或SR4 ；R是未經(jīng)取代的或取代的3-呋喃基或4-噠-嗪基；R1是氫；甲基；乙基或正丙基，其被OH或NR5R6取代；
R2是氫或與R3 —起是環(huán)氧乙烷環(huán)的鍵；R3是氫或與R2 —起是環(huán)氧乙烷環(huán)的鍵；R4是氫；甲基；C2-C6烷基或C3-C6烯基或C2-C6酰基，這些烷基、烯基和?；俏唇?jīng)取代的或者被季銨基團(tuán)或一個(gè)或多個(gè)OR7，NR8R9,甲?；?，脒基，胍基亞氨基或NR8R9和羥基取代；R5，R6獨(dú)立地是氫；甲基；C2-C6烷基，其是未經(jīng)取代的或者被一個(gè)NRiqR11,或NRiqR11 和羥基取代，或者R5和R6與氮原子一起形成未經(jīng)取代的或取代的飽和或不飽和的五元或六元單環(huán)雜環(huán)，該雜環(huán)任選地含有選自氧或硫或氮的又一個(gè)雜原子；R7是氧，甲基或C2-C4烷基，該烷基是未經(jīng)取代的或被一個(gè)或多個(gè)NRiqR11或NRiqR11 和羥基取代；R8, R9獨(dú)立地是氫；甲基；C2-C6烷基或C3_C6烯基，這些烷基和烯基是未經(jīng)取代的或者被一個(gè)或多個(gè)NRiqR11,或NRiqR11和羥基取代，或者R8和R9與氮原子一起形成未經(jīng)取代的或取代的飽和或不飽和的五元或六元單環(huán)雜環(huán)，該雜環(huán)任選地含有選自氧或硫或氮的又一個(gè)雜原子，或者R8是氫而R9是脒基；或者NR8R9代表炔丙基氨基；R10, R11獨(dú)立地是氫，C1-C6烷基，或者Rki和R11，與氮原子一起形成飽和或不飽和的五元或六元單環(huán)雜環(huán)；本發(fā)明中還包括(I)的藥學(xué)上可接受的鹽，其保留相應(yīng)堿的生物學(xué)活性并且衍生自已知的藥學(xué)上可接受的酸比如鹽酸，硫酸，磷酸，蘋果酸，酒石酸，馬來酸，檸檬酸，甲磺酸或苯甲酸；烷基和烯基可以是支化的或直鏈基團(tuán)；C1-C6烷基優(yōu)選是C1-C4烷基，例如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基；C2-C6烷基優(yōu)選是C2-C4烷基，例如乙基，正丙基，異丙基，正丁基，仲丁基；C3-C6烯基優(yōu)選是C3-C4烯基，例如2_丙烯基，2_ 丁烯基；
C2-C6?；鶅?yōu)選是C2-C4?；?，例如乙?；?，丙?；□?；季銨基團(tuán)優(yōu)選是三甲基銨基團(tuán)或N-甲基吡咯烷鐺基團(tuán)或N-甲基哌啶鐺基團(tuán)；OR7基團(tuán)優(yōu)選是羥基，2-氨基乙氧基，3-氨基丙氧基，2- 二甲基氨基乙氧基，2_ 二乙基氨基乙氧基，3-二甲基氨基丙氧基，3-氨基-2-羥基丙氧基，2，3-二氨基丙氧基， 2-(1-吡咯烷基)乙氧基，3-(1-吡咯烷基)丙氧基；NR5R6基團(tuán)優(yōu)選是氨基，甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，吡咯烷基，嗎啉代，哌嗪基，1-咪唑基，2-氨基乙基氨基，3-氨基丙基氨基；NR8R9基團(tuán)優(yōu)選是氨基，甲基氨基，乙基氨基，正丙基氨基，異丙基氨基，烯丙基氨基，炔丙基氨基，二甲基氨基，二乙基氨基，吡咯烷基，嗎啉代，哌嗪基，1-咪唑基，1-胍基， 2-氨基乙基氨基，3-氨基丙基氨基，2-(1-吡咯烷基)乙基氨基，3-(1-吡咯烷基)丙基氨基，3-氨基-2-羥基丙基氨基，3-(1-吡咯烷基)2-羥基丙基氨基，2，3- 二氨基丙基氨基， 0-(1-吡咯烷基)乙基)甲基氨基；根據(jù)本發(fā)明的具體化合物的優(yōu)選實(shí)例是17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇；3-β-羥基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3-β-氨基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3-β-(3-氨基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；
3- β - (2-甲基氨基乙氧基)-17- β - (3-呋喃基)_5_ β -雄甾烷-14- β，17- α - 二3-β-0-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β， 17-α-二醇；3-β-(2-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)乙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β， 17-α-二醇；3-β 42-(1-咪唑基)乙氧基)-17_β-(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β， 17-α-二醇；3-β 42-(2-咪唑啉-2-基)乙氧基)_17_β _(3_ 呋喃基)_5_β -雄留烷 _14_β， 17-α-二醇；3-β 42-(2-脒基)乙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β，17-α-二3-β-(242-(1-吡咯烷基)乙氧基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3-β-(2-胍基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)5-β-雄留烷-14-β，17-α-二醇；3-β-(3-胍基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄留烷-14-β，17-α-二醇；3-β_(3-氨基-2-羥基丙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄留烷-14-β， 17-α-二醇；3-β-(2,3- 二氨基丙氧基)-17- β - (3_ 呋喃基)5_ β -雄甾烷-14- β，17- α - 二17-β-(3-呋喃基)-17-α -甲氧基-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；17-β_(3-呋喃基)-17-α-0-(1-吡咯烷基)乙氧基)_5_β -雄甾烷_3_β， 14-β-二醇；17-β-(3-呋喃基)-17-α-(3-氨基丙氧基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17- β -(3_呋喃基)-17- α -甲氧基-5- β -雄甾烷-14-β-醇；3-β，171-二 0-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β-醇；3-β，17-α-二 (3_ 氨基丙氧基)-17-β - (3_ 呋喃基)_5_ β -雄甾烷-14-β -醇；14-β，17-α-二羥基-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-酮;3-胍基亞氨基-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇；3-β-羥基乙氧基)-17-β-噠嗪基)5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3-β-(3-氨基丙氧基)-17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3-β 42-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β_(4-噠嗪基)-5_β-雄甾烷-14-β， 17-α-二醇；
3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17-β_(4-噠嗪基)-5_β-雄甾烷-14-β， 17-α-二醇；17-β-(4-噠嗪基)-17-α-(3-氨基丙氧基)-5-β-雄留烷-3-β，14-β-二醇；3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17- β -(4-噠嗪基)-17- α -甲氧基-5- β -雄甾烷-14-β-醇；3-β 42-(1-吡咯烷基)乙氧基噠嗪基)-17_α-(3-氨基-丙氧基)-5-β-雄甾烷-14-β-醇；14-β，17-α-二羥基-17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-酮；3-胍基亞氨基-17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；羥基乙氧基)-14_β，15-β-環(huán)氧-17-β -(3_ 呋喃基)_5_β -雄甾烷-17-α-醇；3-β-(3-氨基丙氧基)-14_β，15-β-環(huán)氧-17-β -(3_ 呋喃基)_5_β -雄甾烷-17-α-醇；3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-14_β，15-β-環(huán)氧-17_β-(3-呋喃基)-5-β-雄留烷-17-α-醇；3-β-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-14_β，15-β-環(huán)氧-17_β-(3-呋喃基)-5-β-雄留烷-17-α-醇；3-β 42-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17_β-(3-呋喃基)-17_α-甲氧基-14-β， 15-β-環(huán)氧-5-β-雄甾烷；17-α-羥基-17-β-(3-呋喃基)-14-β，15-β-環(huán)氧-5-β-雄甾烷-3-酮;3-胍基亞氨基-17-β-(3-呋喃基)-14_β，15-β-環(huán)氧-5_β-雄甾烷-17-α-醇；14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(4-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；和上述3-β衍生物的3 α衍生物以及其中Y = S的相應(yīng)3 α和3_β硫代衍生物；用作抗蛋白尿的(antiproteuremic)齊[J。根據(jù)本發(fā)明的具體化合物的最優(yōu)選實(shí)例是17-β_(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇，下文稱為〃羅培呋辛(rostafuroxin) 〃 或〃 PST2238"。本發(fā)明式(I)化合物的又一目的是用作抗腎小球硬化的 (antiglomerosclerotic)劑。本發(fā)明式(I)化合物的又一目的是用作抗腎衰竭劑。本發(fā)明的又一目的是式(I)化合物用于制備預(yù)防或治療蛋白尿，腎小球硬化癥和腎衰竭的藥物的用途。本發(fā)明的又一目的是治療罹患蛋白尿，腎小球硬化癥或腎衰竭的哺乳動(dòng)物的方法，包括給藥治療上有效量的式(I)化合物。術(shù)語"治療上有效量"如本文所用是指治療、 改善靶標(biāo)疾病或病癥，或者展示可檢測的治療效果所需要的治療劑的量。對(duì)于任意化合物，治療上有效的劑量能夠在細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中或者動(dòng)物模型通常是小鼠、兔子、狗或豬中進(jìn)行初步估計(jì)。
動(dòng)物模型還可以用來確定適當(dāng)?shù)臐舛确秶徒o藥途徑。然后，這種信息能夠用來確定有用劑量和人類中的給藥途徑。對(duì)于人類受試者的精確有效量將取決于疾病狀況的嚴(yán)重性，受試者的一般健康， 受試者的年齡、體重和性別，膳食，給藥的時(shí)間和頻率，藥物組合，反應(yīng)敏感性，和對(duì)治療的耐受/反應(yīng)。上述量能夠通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)來確定并且在臨床醫(yī)師的判斷之內(nèi)。一般地，每天的有效劑量是0. 05mg至20mg，優(yōu)選0. 5mg至15mg，最優(yōu)選5mg至10mg。根據(jù)醫(yī)師判斷，計(jì)量給藥治療可以是單次給藥方案或多次給藥方案。組合物可以給予單獨(dú)地患者或者可以與其它試劑、藥物或激素組合地給予。藥物還可以含有用于給藥治療劑的藥學(xué)上可接受的載體。上述載體包括抗體和其它多肽，基因和其它治療劑比如脂質(zhì)體，條件是該載體本身不誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)接受組合物的個(gè)體有害的抗體，并且可以不引起過度毒性地進(jìn)行給予。適宜的載體可以是大的、代謝緩慢的大分子比如蛋白，多糖，聚乳酸，聚乙醇酸，聚合型氨基酸，氨基酸共聚物和無活性的病毒顆粒。關(guān)于藥學(xué)上可接受的載體的詳盡論述可參見Remington' s Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co.，N. J. 1991)。治療組合物中的藥學(xué)上可接受的載體可以額外地含有液體比如水，鹽水，甘油和乙醇。額外地，輔劑物質(zhì)比如潤濕劑或乳化劑、PH緩沖物質(zhì)等可以存在于上述組合物中。所述載體使得藥物組合物可以配制為片劑，丸劑，錠劑，膠囊，液體，凝膠，糖漿劑，漿料，懸浮液等，用于患者進(jìn)食。一經(jīng)配制，則本發(fā)明組合物能夠直接給予至受試者。待治療的受試者能夠是動(dòng)物； 尤其是，可以治療人類受試者。本發(fā)明藥物可以通過任意種類的途徑進(jìn)行給予，所述途徑包括但不限于口服，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，髓內(nèi)，鞘內(nèi)，室內(nèi)，透皮或經(jīng)皮施用，皮下，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，腸的，局部，舌下，直腸途徑或者在外科手術(shù)之后局部地給予至患病組織。本發(fā)明化合物還可以施用(包覆)至支架上甚至摻入控釋型基質(zhì)。


圖1展示，與野生型(WT)對(duì)照相比，敲除β內(nèi)收蛋白小鼠(KO)中的尿蛋白質(zhì)分泌水平(mg/6h)。所用雄性小鼠的年齡是11個(gè)月，自飼養(yǎng)于代謝籠中的各小鼠收集尿6小時(shí)，并測量其尿蛋白質(zhì)分泌。數(shù)據(jù)是15只WT和19只KO小鼠的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過 Student t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。該圖顯示，與WT對(duì)照相比，在β內(nèi)收蛋白KO小鼠中6小時(shí)-尿蛋白質(zhì)分泌顯著降低(30%)。圖2展示在得自從同類系NB和NA品系新生(< 10天齡)的大鼠的經(jīng)培養(yǎng)足細(xì)胞中表達(dá)的足細(xì)胞蛋白(去氧腎上腺素，α-輔肌動(dòng)蛋白，Ζ0-1，裂孔膜蛋白(podocin)， α-內(nèi)收蛋白和肌動(dòng)蛋白)的量。通過Western印跡用適當(dāng)抗體(參見柱狀圖頂部的代表性痕跡)對(duì)足細(xì)胞提取物進(jìn)行足細(xì)胞蛋白定量。對(duì)各品系數(shù)次0至對(duì)次)實(shí)驗(yàn)所報(bào)告的數(shù)據(jù)是平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過Mudent t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。該圖顯示，與攜帶野生型變種的NA對(duì)照相比，在來自NB血壓正常的攜帶突變型β-內(nèi)收蛋白的大鼠的足細(xì)胞中， 去氧腎上腺素、α-輔肌動(dòng)蛋白、Ζ0-1、裂孔膜蛋白和α-內(nèi)收蛋白的量顯著降低，而管家蛋
10白質(zhì)肌動(dòng)蛋白的量則相似。圖3展示，與攜帶野生型變種的NA對(duì)照相比，在來自NB血壓正常的攜帶突變型 β -內(nèi)收蛋白的大鼠的腎小球中，通過免疫熒光可檢測的某些足細(xì)胞蛋白(去氧腎上腺素， 突足蛋白，α-輔肌動(dòng)蛋白，Ζ0-1，F(xiàn)yn和波形蛋白)的表達(dá)。該圖顯示，與NA大鼠相比，在 NB中這些蛋白的表達(dá)猛烈降低，而波形蛋白，也即集中于足細(xì)胞細(xì)胞體中的微絲，在所述兩種品系中正常地表達(dá)。圖4顯示，在根據(jù)α-內(nèi)收蛋白(ADDl，Gly460Tyr)和β-內(nèi)收蛋白(ADD2，C399T) 基因型劃分為4組的受IgA腎病影響的患者中，按腎小球過濾速率(GFR)隨時(shí)間(ml.分―1. 年―1)衰減進(jìn)行評(píng)價(jià)的腎衰竭進(jìn)展。發(fā)現(xiàn)兩種基因間對(duì)衰減速率的相互作用是顯著的。圖5展示，在得自從同類系NB品系新生(< 10天齡)大鼠的并與或不與羅培呋辛10-9M —起溫育5天的經(jīng)培養(yǎng)足細(xì)胞中，表達(dá)的足細(xì)胞蛋白(去氧腎上腺素，Z0-1，裂孔膜蛋白，α-內(nèi)收蛋白，突足蛋白和肌動(dòng)蛋白)的量。通過Western印跡用適當(dāng)抗體對(duì)足細(xì)胞提取物進(jìn)行足細(xì)胞蛋白定量。數(shù)據(jù)報(bào)告為數(shù)個(gè)實(shí)驗(yàn)的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差。通過Mudent t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。該圖顯示，在ΙΟ—Ι羅培呋辛存在下培養(yǎng)的足細(xì)胞中，去氧腎上腺素，ZO-I，裂孔膜蛋白，α -內(nèi)收蛋白和突足蛋白的量有所增加，但不包括肌動(dòng)蛋白。圖6展示，與輸注鹽水的對(duì)照大鼠或者用羅培呋辛100 μ g/kg/天經(jīng)口處理8周的 OS大鼠比較，長期輸注毒毛花苷G并用媒介物處理的大鼠(0 的收縮壓(SBP)，尿蛋白質(zhì)分泌和來自腎皮質(zhì)的去氧腎上腺素量。對(duì)各組，數(shù)據(jù)報(bào)告為8只大鼠的平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差。 通過Mudent t試驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。該圖顯示，羅培呋辛顯著降低SBP和尿蛋白質(zhì)分泌， 同時(shí)其增加OS大鼠中的去氧腎上腺素表達(dá)，從而對(duì)抗毒毛花苷G腎效果。下述非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例1為了試驗(yàn)本發(fā)明化合物防止足細(xì)胞蛋白損失的活性，使用攜帶β內(nèi)收蛋白突變的同類系 NB 大鼠(Tripodi G.等人 Effect of Addl gene transfer on blood pressure in reciprocal congenic strains of Milan rats. BBRC 2004 ;324 :562-568)。所述NB大鼠是非高血壓大鼠并且可以得自Prassis Research Institute，Sigma-tau，意大利。將7至10天齡的NB大鼠用于足細(xì)胞分離和培養(yǎng)。在不加(NB對(duì)照，η = 4)和加 IO-9M的羅培呋辛(NB η = 5)的情況下，將來自NB大鼠的足細(xì)胞溫育5天。在5天溫育結(jié)束時(shí)，通過Western印跡定量足細(xì)胞蛋白。對(duì)各足細(xì)胞標(biāo)記物，重復(fù)Western印跡定量2至 3次。表IA和IB顯示各條件下所分析的最終足細(xì)胞樣品數(shù)，其是重復(fù)測試的平均值(NB對(duì)照，n = 4 ；NB+羅培呋辛，η =幻。按人為指定單位將密度分析定量為光密度。足細(xì)胞分離和經(jīng)培養(yǎng)足細(xì)胞中的蛋白質(zhì)定量通過過篩將腎小球分離自NB腎，并進(jìn)一步手工純化。然后，在37°0于5%0)2氣氛下，將腎小球接種于培養(yǎng)瓶(Corning，Sigma-Aldrich，米蘭，意大利)中，預(yù)包覆有IV型膠原(Sigma-Aldrich)。在第4至5天，足細(xì)胞開始生長，在第8天，將腎小球用胰蛋白酶-EDTA 脫除。將光顯微技術(shù)檢查為>90%純的第二代足細(xì)胞接種在培養(yǎng)瓶和腔室玻片上。通過 Western印跡技術(shù)進(jìn)行足細(xì)胞蛋白質(zhì)定量(10 μ g蛋白質(zhì)/道)，使用針對(duì)去氧腎上腺素、裂孔膜蛋白、Z0-1、內(nèi)收蛋白、突足蛋白和肌動(dòng)蛋白的特定抗體。獲得的結(jié)果報(bào)告于下表1A，IB和圖5中
表IA
權(quán)利要求
1.式⑴化合物，
2.權(quán)利要求1的式(I)化合物，用作抗腎小球硬化劑。
3.權(quán)利要求1的式(I)化合物，用作抗腎衰竭劑。
4.權(quán)利要求1的式⑴化合物，選自17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇； 3- β - (2-羥基乙氧基)-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α - 二醇; 3- β - (2-氨基乙氧基)-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇； 3- β - (3-氨基丙氧基)-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇； 3-β-(2-甲基氨基乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄留烷-14-β，17-α-二醇； 3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17- β -(3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α -二3-β-(2-(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3- β -(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17- β -(3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α -二醇；3- β -(2-(1-咪唑基)乙氧基)-17- β -(3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α - 二醇；3-β 42-(2-咪唑啉-2-基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄留烷-14-β， 17-α-二醇；3-β 42-(2-脒基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇； 3-β-(242-(1-吡咯烷基)乙氧基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；3- β - (2-胍基乙氧基)-17- β - (3-呋喃基)5- β -雄甾烷-14- β，17- α - 二醇; 3- β - (3-胍基丙氧基)-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇； 3- β - (3-氨基-2-羥基丙氧基)-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α - 二醇；3-β-(2,3- 二氨基丙氧基)-17- β - (3-呋喃基)5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇；17-β-(3-呋喃基)-17-α -甲氧基-5-β-雄甾烷-3-β，14-β-二醇；17- β -(3-呋喃基)-17- α -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)_5_ β -雄甾烷_3_ β，14- β -二醇；17- β - (3-呋喃基)-17- α - (3-氨基丙氧基)_5_ β -雄甾烷_3_ β，14- β - 二醇； 3-β 42-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-17-α-甲氧基-5_β-雄甾烷-14-β-醇；3-β，17-α- 二(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-14-β-醇；3-β，17-α-二(3-氨基丙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-14-β-醇；14-β，17-α - 二羥基-17-β - (3-呋喃基)-5-β -雄甾烷-3-酮；3-胍基亞氨基-17- β - (3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇；17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇；3- β - (2-羥基乙氧基)-17- β - (4-噠嗪基)5- β -雄甾烷-14- β，17- α - 二醇；3- β - (3-氨基丙氧基)-17- β - (4-噠嗪基)-5- β -雄甾烷-14- β ,17-α- 二醇；3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17- β -(4-噠嗪基)-5- β -雄甾烷-14- β，17- α -二醇；3-β -(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-17-β -(4-噠嗪基)-5-β -雄甾烷-14-β，17- α -二醇；17- β - (4-噠嗪基)-17- α - (3-氨基丙氧基)_5_ β -雄甾烷-3- β，14- β - 二醇； 3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17- β -噠嗪基)-17- α -甲氧基-5- β -雄甾烷-14-β-醇；3-β-(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(4-噠嗪基)-17-α-(3-氨基-丙氧基)-5_β-雄甾烷-14-β-醇；14-β，17-α-二羥基-17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-酮;3-胍基亞氨基-17-β-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-14-β，17-α-二醇；14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；3-β-(2-羥基乙氧基)-14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-17-α-醇；3-β-(3-氨基丙氧基)-14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(3-呋喃基)-5_β-雄甾烷-17-α-醇；3- β -(2-(1-吡咯烷基)乙氧基)-14- β，15- β -環(huán)氧-17- β -(3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-17-α-醇；3- β -(3-(1-吡咯烷基)丙氧基)-14- β，15- β -環(huán)氧-17- β -(3-呋喃基)-5- β -雄甾烷-17-α-醇；3-β 42-(1-吡咯烷基)乙氧基)-17-β-(3-呋喃基)-17-α -甲氧基_14_β， 15-β-環(huán)氧-5-β-雄甾烷；17- α -羥基-17- β - (3-呋喃基)-14- β，15- β -環(huán)氧-5- β -雄甾烷 _3_ 酮；3-胍基亞氨基-17- β - (3-呋喃基)-14- β，15- β -環(huán)氧-5- β -雄甾燒-17- α -醇;14-β，15-β-環(huán)氧-17-β-(4-噠嗪基)-5-β-雄甾烷-3-β，17-α-二醇；和上述3-β衍生物的3 α衍生物以及其中Y = S的相應(yīng)3 α和3-β硫代衍生物。
5.權(quán)利要求1的式(I)化合物的用途，其用于制備預(yù)防和/或治療蛋白尿，腎小球硬化癥和腎衰竭的藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中優(yōu)選化合物是17-β-(3-呋喃基)-5-β-雄甾烷-3-β，14-β，17-α-三醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述化合物以0.05mg至20mg每天的劑量給予。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中所述化合物以0.5mg至15mg的劑量給予。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述化合物以5mg至IOmg的劑量給予。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9的用途，其中所述化合物以單次給藥方案給予。
11.根據(jù)權(quán)利要求7-9的用途，其中所述化合物以多次給藥方案給予。
12.根據(jù)權(quán)利要求5的用途，其中所述藥物用于口服，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，髓內(nèi)，鞘內(nèi)，室內(nèi)，透皮，經(jīng)皮，皮下，腹膜內(nèi)，鼻內(nèi)，腸道，局部，舌下或直腸給藥。
全文摘要
式(I)化合物，其中符號(hào)具有說明書中所報(bào)告的含義；用于制備預(yù)防和/或治療蛋白尿，腎小球硬化癥或腎衰竭的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/58GK102361643SQ201080013042
公開日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2010年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月23日
發(fā)明者G·畢安其, M·費(fèi)蘭迪, P·費(fèi)拉里 申請(qǐng)人:希格馬托制藥工業(yè)公司