專利名稱：用于治療癌癥的組合物和方法
用于治療癌癥的組合物和方法
背景技術(shù)：
磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信號(hào)傳遞途徑對(duì)于許多不同類型的人惡性腫瘤中的癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活而言是重要的。參見，Granville CA等人，“Handicapping the Race to Develop Inhibitors of the Phosphoinositide 4-Kinase/Akt/Mammalian Target of Rapamycin Pathway, "Clin Cancer Res, 2006; 12(3) 679-89。該途徑接受來自配體-受體相互作用(諸如表皮生長(zhǎng)因子受體和胰島素-樣生長(zhǎng)因子受體)的上游輸入，并通過諸如雷帕霉素的哺乳動(dòng)物靶標(biāo)(mTOR)等下游效應(yīng)物發(fā)信號(hào)。mTOR是一種關(guān)鍵的下游效應(yīng)分子， 其調(diào)節(jié)對(duì)于細(xì)胞周期進(jìn)程和許多其它重要的細(xì)胞生長(zhǎng)過程而言關(guān)鍵的蛋白的生產(chǎn)。參見， Abraham RT禾口Gibbons, JJ, "The mammalian target of rapamycin signaling pathway: twists and turns in the road to cancer therapy". Clin Cancer Res, 2007； 13(11) 3109-14。PI3激酶軸(axis)的失調(diào)在人癌癥中是常見的，這是由于過度活躍的生長(zhǎng)因子受體信號(hào)傳遞、激活PI3K的突變、PTEN腫瘤抑制基因喪失功能和幾種其它的導(dǎo)致mTOR激酶活性活化的機(jī)理。在臨床上，PII軸的成功的藥理學(xué)抑制已經(jīng)集中于PI3激酶的上游生長(zhǎng)因子受體和下游效應(yīng)物，諸如mTOR?，F(xiàn)在有大量臨床證據(jù)表明，mTOR抑制劑可以為具有晚期惡性腫瘤的患者提供臨床益處。胰島素-樣生長(zhǎng)因子受體1 (IGF-1R，胰島素受體家族的一種酪氨酸激酶受體) 參與細(xì)胞增生、分化，并在許多類型的癌癥的惡性細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和維持中起重要作用。參見， Baserga, R 等人，"Mini Review: The IGF-IR receptor in cancer biology, " Int. J. Cancer 2003; 107: 873-77。IGR-IR和它的配體IGF-2在許多類型的晚期癌中過表達(dá)， 且配體-刺激的受體信號(hào)傳遞會(huì)在體外促進(jìn)癌細(xì)胞的增生。重要的是，IGF-IR信號(hào)傳遞與 PII軸緊密相關(guān)。IGF-IR抑制已經(jīng)在臨床前研究中表現(xiàn)出有效的抗癌作用，且許多IGF-IR 抑制劑目前處于臨床開發(fā)中。通過抑制PII軸中的上游和下游分子靶標(biāo)，mTOR和IGF-IR抑制劑的組合可以提供協(xié)同效應(yīng)。mTOR的抑制可以導(dǎo)致反饋環(huán)的活化，所述反饋環(huán)激活A(yù)kt癌基因，后者在體外和在取自用mTOR抑制劑治療的患者的腫瘤活組織檢查中，表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞中增強(qiáng)水平的磷酸-Akt。參見，Sun, S-Y 等人，“Priority Report: Activation of Akt and eIF4E survival pathways by rapamycin-mediated mammalian target of rapamycin inhibition, ” Cancer Res 2005; 65(16) : 7052-58，和 Gardner, H 等人，“Biomarker analysis of a phase II double-blind randomized trial of daily oral RADOOl (everolimus) plus letrozole or placebo plus letrozole as neoadjuvant therapy for patients with estrogen receptor positive breast cancer, ” San Antonio Breast Cancer Symposium. San Antonio, TX, 2007 年 12 月 13-16 日.2006 年摘要。該反饋環(huán)可以通過IGF-IR和胰島素受體底物參與信號(hào)傳遞，且被IGF-IR抑制劑抑制。結(jié)果，臨床前研究已經(jīng)證實(shí)，IGF-IR抑制劑和mTOR抑制劑的組合會(huì)在體外產(chǎn)生累加的或協(xié)同的抗腫瘤活性。最近，2個(gè)研究組已經(jīng)獨(dú)立地報(bào)道了在人肉瘤的異種移植物模型中組合雷帕霉素和抗-IGF-IR抗體的結(jié)果。參見，Kurmasheva RT等人，Poster: "Combination of CP-751871, a human monoclonal antibody against the IGF-I receptor with rapamycin results in highly effective therapy for xenografts derived from childhood sarcomas, ，，EORTC 2007，禾口 Darko, IA 等人，Abstract: "Evaluation of combined insulin-like growth factor receptor type I (IGF-IR) and mTOR pathway blockade in sarcoma xenograft models”· AACR年會(huì) 2007，4760。在這些研究之一中， 觀察到建立的尤因肉瘤和骨肉瘤異種移植物的完全消退，同時(shí)觀察到其它有效的抗腫瘤活性(具有來自組合的至少累加益處)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述的癌癥的方法非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內(nèi)膜癌，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。


圖1: 使用Ridaforolimus + MK-0646組合提高致癌的PII信號(hào)傳遞的靶向。 使用MK-0646和Ridaforolimus的聯(lián)合治療會(huì)增加PII途徑抑制，并阻斷癌細(xì)胞增生。 (A)圖解負(fù)反饋環(huán)的PI3激酶信號(hào)傳遞途徑；(B)證實(shí)mTOR抑制會(huì)導(dǎo)致患者腫瘤中升高的AKT-P的公開數(shù)據(jù)；(C)在體外H2122細(xì)胞中響應(yīng)于Ridaforolimus (IOnM)、MK-0646 (10ug/ml)或組合的途徑信號(hào)傳遞；(D)指示在細(xì)胞中的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞死亡的FACS 分析數(shù)據(jù)，所述細(xì)胞用在C中使用的濃度處理M小時(shí)。圖2: Ridaforolimus和MK-0646組合在體外會(huì)增加效力。在有MK-0646或 ridaforolimus或組合存在下，在軟瓊脂中培養(yǎng)肺癌細(xì)胞系。使用熒光染料(LavaCell) 定量軟瓊脂菌落形成，并使用圖象采集和分析平臺(tái)(Isocyte)計(jì)算菌落面積和數(shù)目。A) 繪制96孔板的孔中的相對(duì)菌落面積。組合顯著增強(qiáng)A549和H2122細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制 (P<0. 02)。在下面指示了通過P-RTK陣列測(cè)得的RTK的活化狀態(tài)和KRAS中的活化突變。B) 繪制了 9個(gè)NSCLC細(xì)胞系中響應(yīng)于Ridaforolimus (10 nM)或MK-0646 (10ug/ml)或組合的相對(duì)軟瓊脂菌落形成。基于KRAS中的活化突變，區(qū)分細(xì)胞系。圖3: Ridaforolimus和MK-0646組合在突變型-KRAS異種移植物腫瘤中的抗腫瘤活性。使用MK-0646和Ridaforolimus的聯(lián)合治療可以有效地阻斷A549異種移植物生長(zhǎng)。通過2路ANOVA分析測(cè)得，在多個(gè)濃度的MK-0646和Ridaforolimus組合的聯(lián)合治療組中，觀察到顯著的腫瘤生長(zhǎng)抑制。圖4:與Ridaforolimus組合的高濃度的MK-0646會(huì)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上減小腫瘤重量。 給小鼠施用單獨(dú)的或與Ridaforolimus (0.1 mpk)組合的MK-0646 (20 mpk) 3周。在與 Ridaforolimus組合的更高劑量的MK-0646時(shí)，腫瘤重量(參見上面)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上更小，這突出了腫瘤的消退。圖5: A549異種移植物模型對(duì)厄洛替尼治療是抗性的。與載體相比，在厄洛替尼治療組中沒有觀察到顯著的生長(zhǎng)抑制。圖6: IGFl受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。靶向磷脂酰-肌醇3-激酶(PIK3CA)途徑和Ras途徑的篩選命中(hits)分別具有紅色或藍(lán)色框。圖7:通過菌落試驗(yàn)進(jìn)行的命中驗(yàn)證證實(shí)，靶向PII途徑調(diào)節(jié)物的shRNA會(huì)強(qiáng)烈地影響MK-0646效能。通過在Alpha圖像儀上掃描平板，測(cè)定菌落數(shù)(A)和菌落面積(B)。 MK-0646的頂部的3個(gè)最強(qiáng)的增強(qiáng)劑是沉默PII途徑的效應(yīng)物的shRNA(用紅色突出顯示)，而靶向PTEN的shRNA賦予抗藥性。圖8: HT29結(jié)腸癌細(xì)胞中PTEN的穩(wěn)定沉默會(huì)賦予對(duì)MK-0646的抗性。制備了表達(dá)靶向PTEN或CSK或MAPI的不同shRNA的穩(wěn)定的Η ^9細(xì)胞，并在菌落形成試驗(yàn)中測(cè)試了對(duì)ΜΚ-0646的敏感度。PTEN的沉默證實(shí)ΜΚ-0646的減少的生長(zhǎng)抑制。圖9: PII的沉默，而不是PDPKl或MELK的沉默，會(huì)重新使PTEN-缺陷型肌四細(xì)胞對(duì)ΜΚ-0646的作用敏感。RNAi介導(dǎo)的PTEN的敲低(knock-down)會(huì)賦予對(duì)MK-0646介導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制的抗性(參見圖7和8)。通過MK-0646和PI3K RNAi對(duì)IGFlR和PIK3CA的聯(lián)合抑制，可以阻斷PTEN-敲低的細(xì)胞的生長(zhǎng)。圖10: PII和Ras途徑激酶在MK-0646增強(qiáng)劑篩選的前列共同命中(top consensus hits)中是突出的。PII和Ras途徑的標(biāo)準(zhǔn)的和假定的激酶調(diào)節(jié)物分別用紅色和藍(lán)色突出顯示。進(jìn)行定量PCR分析，以評(píng)估靶標(biāo)沉默效率。使用在圖7和8中所述的菌落形成試驗(yàn)或短期生長(zhǎng)試驗(yàn)，進(jìn)行命中驗(yàn)證。圖11:證實(shí)的MK-0646敏化命中。在下面顯示了在暴露于藥物的一個(gè)滴度(啊 titration of drug)以后，在菌落生長(zhǎng)試驗(yàn)中(> 2-倍)或在72-小時(shí)阿爾瑪(Alamar)試驗(yàn)中(p<0.05)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)MK-0646的敏感度的篩選命中。應(yīng)當(dāng)指出，由于在沒有藥物存在時(shí)的毒性，在任一個(gè)試驗(yàn)中不能驗(yàn)證某些載體。彩色編碼與在圖10中的定義相同。圖12: 患者對(duì)ridaforolimus-dalotuzumab組合做出應(yīng)答的CT圖像。圖像來自具有向肝臟(如圖所示)和其它部位轉(zhuǎn)移的雌激素受體陽(yáng)性的乳腺癌的56歲女性?；颊咭呀?jīng)經(jīng)歷過多次先前的化療和激素治療。上圖顯示了在肝臟左葉的大腫瘤，下圖顯示了在與 dalotuzumab相組合的ridaforolimus的1期臨床試驗(yàn)中治療2個(gè)周期以后的相同腫瘤，其大小顯著減小?；颊哌_(dá)到在超過8個(gè)月的研究治療以后進(jìn)行的部分應(yīng)答。
具體實(shí)施例方式作為刻苦研究的結(jié)果，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過使用與抗-IGF-IR抗體組合的mTOR 抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽，可以實(shí)現(xiàn)協(xié)同地優(yōu)良的抗癌活性，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。本發(fā)明特別適用于治療選自下述的癌癥非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內(nèi)膜癌。但是，本發(fā)明可以用于治療不同的其它癌癥，諸如腦癌、顱頸癌、食管癌、甲狀腺癌、小細(xì)胞肺癌、肺癌、胃癌、膽囊/膽管癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、絨毛膜癌、 子宮體癌、宮頸癌、腎盂/輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、胎兒癌、Wilms癌、 皮膚癌、惡性黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、尤因瘤、軟部肉瘤(soft part sarcoma)、急性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病和霍奇金淋巴瘤。
因此，本發(fā)明涉及用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述的癌癥的方法 非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內(nèi)膜癌，其中所述mTOR抑制劑是 ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司、雷帕霉素-類似物或其組合，且所述抗-IGF-IR抗體是 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 或 Amgen AMG479。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述mTOR抑制劑是ridaforol imus。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗-IGF-IR抗體包含至少一個(gè)非人起源的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和至少一個(gè)源自非人來源的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其中結(jié)合IGF-IR 的抗體具有至少一種選自下述的性質(zhì)a)結(jié)合IGF-1R，但是不結(jié)合結(jié)合包含胰島素受體和胰島素生長(zhǎng)因子受體的雜合受體(IR/IGF-1R雜合-R)，但是不結(jié)合單獨(dú)的抑制人IGF-IR和IGF-I和/或IGF-2之間的結(jié)合；(d)以小于100 nM的抑制常數(shù)和/或 IC50,結(jié)合雜合-R和它的天然配體，優(yōu)選地在本文中命名為IGFl和/或IGF2和/或胰島素；(e)特異性地抑制所述IGF-IR的酪氨酸激酶活性；(f)特異性地抑制所述雜合-R的酪氨酸激酶活性；(g)對(duì)所述雜合-R具有10 nM或更小的結(jié)合親和力；(h)下調(diào)IGF-IR表達(dá)；(i)下調(diào)雜合-R表達(dá)；(j)抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。在本發(fā)明的一個(gè)類別中，重鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 4、5或6的氨基酸序列， 且輕鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 1、2或3的氨基酸序列。在本發(fā)明的另一個(gè)類別中，人源化的抗體或它的功能片段之一包含含有選自SEQ ID No. 7或8的氨基酸序列的輕鏈，或含有選自SEQ ID NO. 9、10或11的氨基酸序列的重鏈。在本發(fā)明的另一個(gè)類別中，所述抗-IGF-IR抗體是dalotuzumab。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，所述mTOR抑制劑是ridaforo 1 imus，且所述抗-IGF-IR 抗體是 dalotuzumab。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，以10 mg至40 mg的劑量施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個(gè)類別中，每周施用ridaforolimus 5次。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，以10 mg/kg的劑量，靜脈內(nèi)地施用抗-IGF-IR抗體。在本發(fā)明的一個(gè)類別中，每周施用抗-IGF-IR抗體1次。在本發(fā)明的另一個(gè)類別中，每隔一周施用抗-IGF-IR抗體1次?？梢灾苽鋗TOR抑制劑和抗-IGF-1R抗體，用于同時(shí)、分別或連續(xù)施用。對(duì)上述的優(yōu)選實(shí)施方案的提及意在包括特定和優(yōu)選組的所有組合，除非另有說明。下面描述了在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)的含義，且在下文中更詳細(xì)地描述了本發(fā)明。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“同時(shí)”是指，本發(fā)明的藥物制劑在時(shí)間上同時(shí)施用。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“分別”是指，本發(fā)明的藥物制劑在共同的治療時(shí)間表中的不同時(shí)間施用。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“連續(xù)”是指，在施用一種藥物制劑以后，施用其它藥物制劑；在施用一種藥物制劑以后，可以基本上在第一種藥物制劑之后立即施用第二種藥物制劑，或可以在第一種藥物制劑以后的有效時(shí)間段之后施用第二種藥物制劑；且所述有效時(shí)間段是為了實(shí)現(xiàn)施用第一種藥物制劑的最大益處而給出的時(shí)間量。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“癌癥”包括不同的肉瘤和癌，且包括實(shí)體癌和造血癌。本文提及的實(shí)體癌包括，例如，腦癌、顱頸癌、食管癌、甲狀腺癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、胃癌、膽囊/膽管癌、肝癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、卵巢癌、 絨毛膜癌、子宮體癌、子宮宮頸癌、腎盂/輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、胎兒癌、威爾曼瘤、皮膚癌、惡性黑素瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨肉瘤、尤因瘤、軟部肉瘤。另一方面， 造血癌包括，例如，急性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、真性紅細(xì)胞增多癥、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“治療癌癥”是指，將抗癌劑施用于癌癥患者，從而抑制患者中癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。優(yōu)選地，治療導(dǎo)致癌癥生長(zhǎng)消退，或換而言之，它減小可檢測(cè)的癌的大小。更優(yōu)選地，治療導(dǎo)致癌癥的完全消失。mTOR 抑制劑
在當(dāng)前的臨床開發(fā)中的mTOR抑制劑是雷帕霉素的結(jié)構(gòu)類似物。本發(fā)明的mTOR抑制劑包括ridaforolimus、坦羅莫司、依維莫司、雷帕霉素-類似物和它們的組合。Ridaforolimus (也稱作 AP 23573、MK-8669 和 deforolimus)是雷帕霉素的獨(dú)特的、非前藥類似物，其在體外在廣范圍的人腫瘤細(xì)胞系中和在使用人腫瘤細(xì)胞系的鼠腫瘤異種移植物模型中具有抗增生活性。已經(jīng)將Ridaforolimus施用給具有晚期癌癥的患者，且目前處于不同晚期惡性腫瘤的臨床開發(fā)中，包括在具有晚期軟組織或骨肉瘤的患者中的研究。迄今，這些試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，ridaforolimus通常被較好地耐受，具有可預(yù)測(cè)的和可控制的不利事件特性，且在廣范圍的癌癥中具有抗腫瘤活性。在授權(quán)給Ariad Gene Therapeutics, Inc.的美國(guó)專利號(hào)7，091，213 (它通過引用整體并入)中，描述了 ridaforolimus的介紹和制備。坦羅莫司(也稱作Torisel )目前被銷售用于治療腎細(xì)胞癌。在授權(quán)給American Home Products Corporation的美國(guó)專利號(hào)5，362，718 (它通過引用整體并入)中，描述了坦羅莫司的介紹和制備。與雷帕霉素(西羅莫司)相比，依維莫司(也稱作Certican 或RAD001，由 Novartis銷售)在有機(jī)溶劑中具有更大的穩(wěn)定性和提高的溶解度，以及更有利的藥物動(dòng)力學(xué)和更少的副作用。依維莫司已經(jīng)與微乳劑環(huán)孢素(Neoral ，Novartis)聯(lián)合使用，用于增加免疫抑制方案的效能。本發(fā)明的mTOR抑制劑也可以作為不同的晶體、無定形物質(zhì)、藥學(xué)上可接受的鹽、 水合物和溶劑化物而存在。此外，本發(fā)明的mTOR抑制劑可以作為前藥來提供。一般而言，這樣的前藥是本發(fā)明的mTOR抑制劑的功能衍生物，其可以被活體容易地轉(zhuǎn)化成需要的化合物。因此，在本發(fā)明的不同癌癥的治療方法中，術(shù)語(yǔ)“施用”不僅包括特定化合物的施用，而且包括這樣的化合物的施用，所述化合物在施用給患者以后可以在活體中轉(zhuǎn)化成特定化合物。用于選擇和生產(chǎn)合適的前藥衍生物的常規(guī)方法描述在，例如，“Design of Prodrugs", H. Bundgaard編，Elsevier，1985，它在本文中提及，并且整體并入本文，作為本說明書的一部分?；衔锏拇x物可以包括將化合物放入生物環(huán)境中生成的活性化合物，且在本發(fā)明化合物的范圍內(nèi)?？?IGF-IR抗體
本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體是分離的抗體或其功能片段，其中所述抗體或它的所述片段之一能夠特異性地結(jié)合人胰島素-樣生長(zhǎng)因子I受體，且如果必要，優(yōu)選地此外能夠抑制配體IGFl和/或IGF2與IGF-IR的結(jié)合，和/或能夠特異性地抑制使至少一種配體結(jié)合所述IGF-IR受體的信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián)。本發(fā)明的IGF-IR抗體包括能夠特異性地結(jié)合IGF-IR 的單克隆和/或多克隆抗體。本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體包括dalotuzumab、figitumumab、 cixutumumab、SHC 717454、Roche R1507、EM164 和 Amgen AMG479。Dalotuzumab的特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈包含至少一個(gè)選自氨基酸序列SEQ ID No. 1、2或3的⑶R的互補(bǔ)性決定區(qū)⑶R，或至少一個(gè)其序列在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的CDR，或特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈包含至少一個(gè)選自氨基酸序列SEQ ID No. 4、5和6的 ⑶R的⑶R，或至少一個(gè)其序列在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 4、5和6具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的CDR。制備和使用所述抗-IGF-IR抗體的方法描述在美國(guó)專利號(hào)7，214，444中，它通過引用整體并入本文。在本說明書中，術(shù)語(yǔ)“結(jié)合”和“連接”具有相同的含義，且是可互換的。在本說明書中，與抗體化合物或它們的序列相結(jié)合的術(shù)語(yǔ)多肽、多肽序列、肽和蛋白是可互換的。在本文必須理解，本發(fā)明不涉及天然形式的抗體，也就是說，它們不是在它們的天然環(huán)境中，但是已經(jīng)能夠通過從天然來源的純化而分離或得到，或者通過基因重組或通過化學(xué)合成而得到，它們還可以含有在將來要描述的非天然的氨基酸。⑶R區(qū)或⑶R意在指示免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的高變區(qū)，如由Kabat等人 (Kabat 等人，Sequences of proteins of immunological interest,第 5 版，美國(guó)健康和人類服務(wù)部，NIH，1991，和更晚的版本)所定義的。存在3個(gè)重鏈⑶R和3個(gè)輕鏈 ⑶R。術(shù)語(yǔ)⑶R在本文中用于表示(根據(jù)情況)這些區(qū)域之一或這些區(qū)域中的幾個(gè)或甚至全部，所述區(qū)域含有負(fù)責(zé)抗體對(duì)它識(shí)別的抗原或表位的結(jié)合親和力的大部分氨基酸殘基。在本發(fā)明的意義上，2個(gè)核酸或氨基酸序列之間的“同一性百分比”意在表示，在最好比對(duì)(最佳比對(duì))后得到的在要對(duì)比的2個(gè)序列之間相同的核苷酸或氨基酸殘基的百分比，該百分比純粹是統(tǒng)計(jì)學(xué)的，2個(gè)序列之間的差異在它們的整個(gè)長(zhǎng)度上隨機(jī)分布。傳統(tǒng)地，如下進(jìn)行2個(gè)核酸或氨基酸序列之間的序列對(duì)比在已經(jīng)以最佳方式比對(duì)它們以后， 對(duì)比這些序列，所述對(duì)比能夠按照區(qū)段或按照“對(duì)比窗”來進(jìn)行。除了手工地進(jìn)行序列的最佳比對(duì)以外，還可以借助于Smith和Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482]的局部同源性算法,借助于Neddleman和Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48: 443]的局部同源性算法，借助于 Pearson 和 Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444)的相似性搜索方法，借助于使用這些算法的計(jì)算機(jī)軟件(在威斯康星遺傳學(xué)軟件包中的GAP、 BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，Genetics Computer Group, 575 Science Dr. , Madison, WI, 或通過BLAST N或BLAST P對(duì)比軟件)。如下確定2個(gè)核酸或氨基酸序列之間的同一性百分比通過對(duì)比以最佳方式比對(duì)的這2個(gè)序列，且其中要對(duì)比的核酸或氨基酸序列可以包含相對(duì)于參照序列的添加或刪除，所述參照序列用于這2個(gè)序列之間的最佳比對(duì)。如下計(jì)算同一性百分比確定2個(gè)序列之間具有相同核苷酸或氨基酸殘基的相同位置的數(shù)目，將該相同位置的數(shù)目除以對(duì)比窗中的位置總數(shù)，并將得到的結(jié)果乘以100，以便得到這2個(gè)序列之間的同一性百分比。例如，可能使用BLAST 程序、“BLAST 2 序列”(Tatusova 等人，“Blast 2sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences，，， FEMS Microbiol Lett. 174:247-250), ^01 ^ http://www. ncbi. nlm. nih. gov/ gorf/ bl2. html上得到，使用的參數(shù)是默認(rèn)給出的那些(具體地，對(duì)于參數(shù)“開放間隙罰分” 5， “延伸間隙罰分2 ；選擇的矩陣是，例如，該程序建議的矩陣“BL0SUM 62”)，通過程序直接地計(jì)算要對(duì)比的2個(gè)序列之間的同一性百分比。與參照氨基酸序列具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列是指，相對(duì)于參照序列具有某些修飾的氨基酸序列，具體地，至少一個(gè)氨基酸的刪除、添加或置換、截短或延長(zhǎng)是優(yōu)選的。在置換一個(gè)或多個(gè)連續(xù)或不連續(xù)氨基酸的情況下，其中用“等效”氨基酸替換被置換的氨基酸的置換是優(yōu)選的。表述“等效氨基酸”在本文中目的在于表示，能夠被基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)的氨基酸之一置換的任意氨基酸，但是基本上沒有改變對(duì)應(yīng)的抗體的生物活性，諸如在以后特別是在實(shí)施例中所定義的。依賴于它們與它們替換的氨基酸的結(jié)構(gòu)同源性，或能夠?qū)崿F(xiàn)的不同抗體之間的生物活性的對(duì)比試驗(yàn)的結(jié)果，可以確定這些等效氨基酸。通過實(shí)施例，可以闡述能夠進(jìn)行的置換的可能性，而不導(dǎo)致對(duì)應(yīng)的修飾的抗體的生物活性的深遠(yuǎn)改變。因而可能用纈氨酸或異亮氨酸替換亮氨酸、用谷氨酸替換門冬氨酸、 用天冬酰胺替換谷氨酰胺、用賴氨酸替換精氨酸等，在相同的條件下，可以自然地預(yù)見到反向置換。根據(jù)本發(fā)明的抗體優(yōu)選地是特異性的單克隆抗體，特別是鼠、嵌合的或人源化的起源的單克隆抗體，它們可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)方法得到。一般而言，為了制備單克隆抗體或它們的功能片段(特別是鼠起源的)，可能參考在手冊(cè)"Antibodies，，(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY,第 726 頁(yè),1988)中具體描述的技術(shù)，或Kohler和Milstein (Nature, 256:495-497，197 描述的從雜交瘤制備的技術(shù)。例如，從針對(duì)IGF-IR受體(或它的片段之一，其含有根據(jù)本發(fā)明的所述單克隆抗體所特異性地識(shí)別的表位)免疫的動(dòng)物細(xì)胞，可以得到根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體。根據(jù)常見的工作方法，通過基因重組(從編碼IGF4R受體的cDNA序列的所含有的核酸序列開始)， 或通過肽合成(從IGF4R受體的肽序列中所包含的氨基酸序列開始)，可以具體地生產(chǎn)所述 IGF-IR受體或它的所述片段之一?？梢栽诶缬H和柱上，純化根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體，在所述親和柱上，已經(jīng)預(yù)先固定化了被根據(jù)本發(fā)明的所述單克隆抗體特異性地識(shí)別的IGF-IR受體或它的含有表位的片段之一。更具體地，可以如下純化所述單克隆抗體通過在蛋白A和/或G上的色譜法， 其后有或沒有離子交換色譜法(目的在于消除殘余蛋白污染物以及DNA和LPS)，其本身后面有或沒有在瓊脂糖凝膠上的排阻色譜法(以便消除由于二聚體或其它多聚體的存在造成的潛在聚集體)。以甚至更優(yōu)選的方式，這些技術(shù)整體可以同時(shí)地或連續(xù)地使用。根據(jù)本發(fā)明的抗體同樣包括嵌合的或人源化的抗體。嵌合抗體意在表示這樣的抗體，其含有源自給定物種的抗體的天然可變(輕鏈和重鏈)區(qū)，所述可變區(qū)與所述給定物種的異種物種的抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)相組合。使用基因重組技術(shù)，可以制備根據(jù)本發(fā)明的抗體或它們的嵌合類型的片段。例如， 通過克隆重組DNA，可以制備嵌合抗體，所述重組DNA含有啟動(dòng)子、編碼根據(jù)本發(fā)明的非人類的(特別是鼠的)單克隆抗體的可變區(qū)的序列、和編碼人抗體的恒定區(qū)的序列。由這樣的重組基因編碼的本發(fā)明的嵌合抗體是，例如，小鼠-人嵌合體，該抗體的特異性由源自鼠 DNA的可變區(qū)決定，它的同種型由源自人DNA的恒定區(qū)決定。關(guān)于嵌合抗體的制備方法，可能參考例如文件 Verhoeyn 等人(BioEssays, 8:74，1988)。人源化的抗體意在表示這樣的抗體，其含有源自非人起源的抗體的CDR區(qū)，所述抗體分子的其它部分源自一種(或幾種)人抗體。此外，可以修飾骨架(稱作FR)的區(qū)段的一些殘基，以便保持結(jié)合親和力(Jones等人，Nature, 321:522-525, 1986; Verhoeyen 等人，Science, 239:1534-1536，1988; Riechmann 等人，Nature, 332:323-327， 1988)。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)(例如，在下述文獻(xiàn)中描述的那些=Singer等人，J. Immun. 150:2844—2857，1992; Mountain 等人，Biotechnol. Genet. Eng. Rev. , 10: 1-142，1992；或 Bebbington 等人，Bio/technology, 10:169-175，1992)， 可以制備根據(jù)本發(fā)明的人源化的抗體或它們的片段。對(duì)于它們?cè)隗w外診斷方法中的應(yīng)用， 或在或體內(nèi)預(yù)防和/或治療性處理中，根據(jù)本發(fā)明的這樣的人源化的抗體是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的抗體的功能片段意在特別地表示這樣的抗體片段，諸如Fv、scFv (sc表示單鏈)、Fab、F(ab，)2、Fab\ scFv-Fc片段或雙特異抗體或已經(jīng)通過化學(xué)修飾(諸如添加聚(亞烷基)乙二醇諸如聚(亞乙基)乙二醇(“聚乙二醇化”))或通過摻入脂質(zhì)體中增加了其半衰期的任意片段(聚乙二醇化的片段稱作Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、 F(ab' )2-PEG或Fab，-PEG) ( “PEG”表示聚(亞乙基)乙二醇)，所述片段具有根據(jù)本發(fā)明的序列SEQ ID No. 1、2、3、4、5或6的特征⑶R中的至少一個(gè)，且具體地，它能夠以一般方式發(fā)揮它的來源抗體的甚至部分活性，諸如具體地，識(shí)別和結(jié)合IGF-IR受體的能力，和如果必要，抑制IGF-IR受體的活性的能力。優(yōu)選地，所述功能片段構(gòu)成或包含它們的來源抗體的重或輕可變鏈的部分序列， 所述部分序列足以保持與它的來源抗體相同的對(duì)IGF-IR受體的結(jié)合特異性和足夠的親和力，優(yōu)選至少等于它的來源抗體的1/100、更優(yōu)選至少1/10。這樣的功能片段含有它的來源抗體的序列的最少5個(gè)氨基酸，優(yōu)選10、15、25、50
和100個(gè)連續(xù)氨基酸。優(yōu)選地，這些功能片段是Fv、scFv、Fab、F(ab，)2、F(ab，)、scFv-Fc型的片段或雙特異抗體，其通常具有與它們的來源抗體相同的結(jié)合特異性。根據(jù)本發(fā)明，通過諸如酶消化(諸如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化)和/或經(jīng)由化學(xué)還原來切割二硫鍵等方法，從諸如上述的抗體開始，可以得到本發(fā)明的抗體片段。以另一個(gè)方式，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員同樣眾所周知的基因重組技術(shù)，或通過肽合成(借助于例如自動(dòng)的肽合成儀，諸如由Applied Biosystems公司等提供的那些)，可以得到在本發(fā)明中包含的抗體片段。以一個(gè)更優(yōu)選的方式，本發(fā)明包含根據(jù)本發(fā)明的抗體或它們的功能片段，尤其是通過基因重組或通過化學(xué)合成得到的嵌合的或人源化的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的主題是根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含含有至少一個(gè)序列SEQ ID No. 6的⑶R的重鏈，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 6具有至少80%同一性的序列。在6個(gè)短的⑶R序列中，重鏈的第三個(gè)⑶R (⑶RH3)具有更大的尺寸變異性(更大的多樣性，主要是由于產(chǎn)生它的基因的排列的機(jī)理)。它可以短至2個(gè)氨基酸，盡管已知的最長(zhǎng)尺寸是沈。在功能上，⑶RH3在抗體特異性的確定中起部分作用(Segal等人，PNAS， 71:4298-4302, 1974; Amit 等人，Science, 233:747-753，1986; Chothia 等人，J. Mol. Biol. , 196:901-917, 1987; Chothia 等人，Nature, 342:877-883，1989; Caton 等人，J. Immunol. , 144:1965-1968，1990; Sharon 等人，PNAS, 87:4814-4817， 1990; Sharon 等人，J. Immunol. , 144:4863-4869，1990; Kabat 等人，J. Immunol., 147:1709-1719, 1991)。已知，僅低百分比的⑶R氨基酸促成抗體結(jié)合部位的構(gòu)建，但是這些殘基必須維持非常特異性的三維構(gòu)象。以一個(gè)更優(yōu)選的方式，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈含有序列SEQ ID No. 4、5和6的3個(gè)⑶R中的至少 2個(gè)或3個(gè)⑶R，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 4、5和6分別具有至少80%同一性的 3個(gè)⑶R序列中的至少2個(gè)或3個(gè)⑶R。在一個(gè)同樣優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的主題是根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有選自序列SEQ ID No. 1、2或3的 ⑶R中的至少一個(gè)⑶R，或在最佳比對(duì)后其序列與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80% 同一性的CDR。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的主題是根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有序列SEQ ID No. 1、2和3的3個(gè)⑶R 中的至少2個(gè)或3個(gè)⑶R，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 1、2和3分別具有至少80% 同一性的3個(gè)CDR序列中的至少2個(gè)或3個(gè)⑶R。以一個(gè)更優(yōu)選的方式，根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一的特征在于，它包含這樣的重鏈，所述重鏈含有序列SEQ ID No. 4、5和6的3個(gè)⑶R，或在最佳比對(duì)后與序列 SEQ ID No. 4、5和6分別具有至少80%同一性的3個(gè)⑶R序列，且特征在于，它另外包含這樣的輕鏈，所述輕鏈含有序列SEQ ID No. 1、2和3的3個(gè)⑶R，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 1、2和3分別具有至少80%同一性的3個(gè)CDR序列。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明的主題是根據(jù)本發(fā)明的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，它不結(jié)合或它不以顯著的方式結(jié)合人胰島素受體頂。以一個(gè)優(yōu)選的方式，根據(jù)本發(fā)明的所述功能片段選自片段FV、SCFV、Fab、(Fab’)2、 Fab\ scFv-Fc或雙特異抗體或已經(jīng)通過化學(xué)修飾(特別是通過聚乙二醇化)或通過摻入脂質(zhì)體中增加了其半衰期的任意功能片段。根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及能夠分泌根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體的鼠雜交瘤，尤其是鼠起源的雜交瘤，諸如于2001年9月19日在編號(hào)1-2717下保藏在Centre National de Culture De Microorganisme (CNCM,) (Institut Pasteur, Paris, France)的雜交瘤。所述單克隆抗體(在本文中稱作7C10)或它的功能片段之一的特征在于，所述抗體是由在2001年9月19日在編號(hào)1-2717下保藏在CNCM的雜交瘤分泌，且當(dāng)然是本發(fā)明的一部分?！癉alotuzumab”、“h7C10”、“MK-0646” 或“F50035” 可互換地用于描述人源化的抗體，所述抗體被表征為結(jié)合IGF-IR以及結(jié)合IR/IGF-1雜合受體。這樣的抗體可以包括在例如美國(guó)系列號(hào) 10/7；35，916 (US20050084906,它是 PCT/FR03/00178 和 / 或 US20050M9730 的部分繼續(xù)申請(qǐng))中描述的抗體，其中所述抗體是人源化的抗體或其片段，且包含這樣的輕鏈和/或重鏈，其中所述輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4分別源自人抗體輕鏈和 /或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4。人源化的抗體可以包含至少一個(gè)輕鏈和至少一個(gè)重鏈，所述輕鏈包含至少一個(gè)或多個(gè)源自非人來源且具有選自SEQ ID NO: 1、2或3的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)，所述重鏈包含至少一個(gè)或多個(gè)具有選自SEQ ID NO 4、5或6的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)。所述輕鏈可以包含一個(gè)或多個(gè)如在SEQ ID No. 7或8之一中所述的氨基酸序列，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 7或8具有至少80%同一性的序列。同樣地， 所述重鏈包含一個(gè)或多個(gè)如在SEQ ID No. 9、10或11之一中所述的氨基酸序列，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 9、10或11具有至少80%同一性的序列。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的鼠抗體或它的功能片段之一， 其特征在于，所述抗體包含這樣的輕鏈序列，其含有氨基酸序列SEQ ID No. 12，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 12具有至少80%同一性的序列，或/和特征在于，它包含這樣的重鏈序列，其含有氨基酸序列SEQ ID No. 13，或在最佳比對(duì)后與序列SEQ ID No. 13具有至少80%同一性的序列。Figitumumab (也稱作CP 751，871)是由Pfizer研究的一種全人抗體。在授權(quán)給 Abgenix, Inc和Pfizer, he.的美國(guó)專利號(hào)7，037，498 (它通過引用整體并入本文)中， 描述了 figitumumab的介紹和制備。Cixutumumab (也稱作IMC A-12)是由ImClone研究的一種全人抗體。在美國(guó)專利公開號(hào)US2008/0025990 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 cixutumumab的介紹和制備。SHC717454 (也稱作 CP 751，871)是由 Schering Plough (現(xiàn)在為 Merck & Co·, Inc.)研究的一種全人抗體。在授權(quán)給Schering Corporation的美國(guó)專利號(hào)7，217，796 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 SHC7174M的介紹和制備。Roche R1507 由 Hoffmann-LaRoche 研制。在授權(quán)給 HofTmann-Laroche，Inc.的美國(guó)專利號(hào)7，378，503 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 Roche R1507的介紹和制備。EM164 由 Immuogen 研制。在 Imunogen, Inc.的國(guó)際專利公開 W003/106621 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 EM164的介紹和制備。Amgen AMG479 由 Amgen, he 研制。在 Amgen, he 的國(guó)際專利公開 W006/069202 (它通過引用整體并入本文)中，描述了 Amgen AMG479的介紹和制備。根據(jù)一個(gè)類似的具體方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的嵌合抗體或它的功能片段之一，其特征在于，所述抗體另外包含源自小鼠異源物種(特別是人)的抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)，且以優(yōu)選的方式，特征在于，源自人抗體的輕鏈和重鏈恒定區(qū)分別是κ和Υ-1、Υ-2 或Y -4區(qū)。根據(jù)一個(gè)類似的具體方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的人源化的抗體或它的功能片段之一，其特征在于，所述抗體包含輕鏈和/或重鏈，其中所述輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段 FRl至FR4 (諸如下面在實(shí)施例12和13中、在表5和6中所定義的)分別源自人抗體輕鏈和/或重鏈的骨架區(qū)段FRl至FR4。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的人源化的抗體或它的功能片段之一的特征在于，所述人源化的抗體包含含有氨基酸序列SEQ ID No. 8的輕鏈，且特征在于，它包含含有氨基酸序列 SEQ ID No. 10 或 11 (優(yōu)選 SEQ ID No. 11)的重鏈序列。在本發(fā)明中無區(qū)別地使用的術(shù)語(yǔ)核酸或核酸序列、多核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸序列、核苷酸序列意在表示修飾的或未修飾的精確核苷酸連接，其允許確定核酸的片段或區(qū)域，其含有或不含有非天然的核苷酸，且能夠?qū)?yīng)雙鏈DNA、單鏈DNA，恰如對(duì)應(yīng)所述DNA 的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物一樣好。在本文中還必須理解，本發(fā)明不涉及在它們的天然染色體環(huán)境中(也就是說在它們的天然狀態(tài))的核苷酸序列。它涉及已經(jīng)分離和/或純化的序列，也就是說，已經(jīng)直接地或間接地選擇它們(例如通過拷貝)，它們的環(huán)境已經(jīng)被至少部分地改變。因而在本文中同樣意在表示通過基因重組(借助于例如宿主細(xì)胞)得到的或通過化學(xué)合成得到的分離的核酸。在最佳比對(duì)后與優(yōu)選序列具有至少80%、優(yōu)選85%、90%、95%和98%的同一性百分比的核酸序列意在表示，與參照核酸序列相比，具有某些修飾(例如，具體地，刪除、截短、延長(zhǎng)、嵌合的融合物和/或置換，特別是點(diǎn)置換)的核酸序列。它優(yōu)選地涉及這樣的序列，其中所述序列編碼與參照序列相同的氨基酸序列，這與遺傳密碼的簡(jiǎn)并性有關(guān)，或涉及能夠與參照序列特異性地雜交的互補(bǔ)序列，優(yōu)選地在高嚴(yán)謹(jǐn)性條件下，特別是諸如下面定義的條件。在高嚴(yán)謹(jǐn)性條件下的雜交表示，以使它們?cè)试S維持互補(bǔ)DNA的2個(gè)片段之間的雜交的方式，選擇溫度條件和離子強(qiáng)度條件。作為例證，用于定義上述多核苷酸片段的目的， 雜交步驟的高嚴(yán)謹(jǐn)性條件有利地如下所述。在2個(gè)步驟中進(jìn)行DNA-DNA或DNA-RNA雜交(1)在含有5 χ SSC (1 χ SSC對(duì)應(yīng)于0.15 M NaCl + 0.015 M檸檬酸鈉溶液)、50%的甲酰胺、7%的十二烷基硫酸鈉(SDS)、 10 X Denhardt，s、5%的硫酸葡聚糖和1%的鮭魚精DNA的磷酸鹽緩沖液(20 mM, pH 7.5) 中在42°C預(yù)雜交3小時(shí)；(2)在依賴于探針大小的溫度(即對(duì)于〉100個(gè)核苷酸的探針大小，42°C )實(shí)際雜交20小時(shí)，隨后是在2 χ SSC + 2%的SDS中在20°C洗滌20分鐘2次， 在0. 1 χ SSC + 0. 1%的SDS中在20°C洗滌20分鐘1次。最后一次洗滌是在0. 1 χ SSC + 0. 1%的SDS中在60°C進(jìn)行30分鐘(對(duì)于> 100個(gè)核苷酸的探針大小)。對(duì)于更大或更小尺寸的寡核苷酸，根據(jù) Sambrook 等人(1989，Molecular cloning: a laboratory manual. 第2版.Cold Spring Harbor)的教導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以調(diào)節(jié)對(duì)于確定大小的多核苷酸的如上所述的高嚴(yán)謹(jǐn)性雜交條件。給藥劑量和途徑
關(guān)于本發(fā)明的mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體，可以選擇不同的制劑形式，其實(shí)例包括口服制劑諸如片劑、膠囊、散劑、顆?；蛞后w，或滅菌的液體腸胃外制劑諸如溶液或懸浮液、 栓劑、軟膏等。mTOR抑制劑可作為藥學(xué)上可接受的鹽得到。使用藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，制備本發(fā)明的mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體。在本說明書中使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指常見的藥學(xué)上可接受的鹽。例如，當(dāng)化合物具有羥基或酸性基團(tuán)諸如羧基和四唑基時(shí)，則它可以在羥基或酸性基團(tuán)處形成堿加成鹽；或當(dāng)化合物具有氨基或堿性雜環(huán)基團(tuán)時(shí)，則它可以在氨基或堿性雜環(huán)基團(tuán)處形成酸加成鹽。堿加成鹽包括，例如，堿金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽；堿土金屬鹽，如鈣鹽、鎂鹽；銨鹽； 和有機(jī)胺鹽，如三甲胺鹽、三乙胺鹽、二環(huán)己胺鹽、乙醇胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、普魯卡因鹽、N，N’ - 二芐基乙二胺鹽。酸加成鹽包括，例如，無機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、高氯酸鹽；有機(jī)酸鹽，如馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、抗壞血酸鹽、三氟乙酸鹽；和磺酸鹽， 如甲磺酸鹽、羥乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑”表示賦形劑[例如，脂肪、蜂蠟、半固體和液體多元醇、天然的或氫化的油等]；水(例如，蒸餾水、特別是注射用蒸餾水等)、生理鹽水、 醇(例如，乙醇)、甘油、多元醇、葡萄糖水溶液、甘露醇、植物油等)；添加劑[例如，擴(kuò)張劑、 崩解劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑或芳香劑、濃縮劑、稀釋劑、緩沖物質(zhì)、溶劑或增溶劑、用于實(shí)現(xiàn)儲(chǔ)存效果的化學(xué)品、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽、包衣劑或抗氧化劑]等。固體制劑可以制成不含有任何添加劑的片劑、膠囊劑、顆粒劑和散劑的形式，或使用適當(dāng)?shù)妮d體(添加劑)來制備。這樣的載體(添加劑)的實(shí)例可以包括糖類諸如乳糖或葡萄糖；玉米、小麥或大米的淀粉；脂肪酸諸如硬脂酸；無機(jī)鹽諸如硅鋁酸鎂(magnesium metasilicate aluminate)或無水磷酸鈣；合成的聚合物諸如聚乙烯吡咯烷酮或聚亞烷基乙二醇；醇諸如十八烷醇或苯甲醇；合成的纖維素衍生物諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素、 乙基纖維素或羥丙基甲基纖維素；和其它常規(guī)使用的添加劑諸如明膠、滑石粉、植物油和阿拉伯樹膠。這些固體制劑(諸如片劑、膠囊劑、顆粒劑和散劑)通?？梢院欣?. 1-100% (按重量計(jì)算)、優(yōu)選5-98% (按重量計(jì)算)的mTOR抑制劑(基于每種制劑的總重量)。液體制劑可以制成混懸液、糖漿劑、注射劑和點(diǎn)滴輸注劑(靜脈內(nèi)流體)的形式， 其中使用在液體制劑中常規(guī)使用的適當(dāng)添加劑，諸如水、醇或植物-衍生的油，諸如大豆油、花生油和芝麻油。具體地，當(dāng)以肌肉內(nèi)注射劑、靜脈內(nèi)注射劑或皮下注射劑的形式腸胃外地施用制劑時(shí)，適當(dāng)?shù)娜軇┗蛳♂寗┛梢杂孟率鑫镔|(zhì)例證注射用蒸餾水，鹽酸利多卡因的水溶液 (用于肌肉內(nèi)注射)，生理鹽水，葡萄糖水溶液，乙醇，聚乙二醇，丙二醇，用于靜脈內(nèi)注射的液體(例如，檸檬酸、檸檬酸鈉等的水溶液)或電解質(zhì)溶液(用于靜脈內(nèi)點(diǎn)滴輸注和靜脈內(nèi)注射)，或它們的混合溶液。這樣的注射劑可以是初步溶解的溶液的形式，或粉末本身或與合適的載體(添加齊U)結(jié)合的粉末的形式(其可以在使用時(shí)溶解)?；诿糠N制劑的總重量，注射液可以含有例如0. 1-10% (按重量計(jì)算)的活性成分。基于每種制劑的總重量，液體制劑(諸如用于口服給藥的懸浮液或糖漿劑)可以含有例如0. 1-10% (按重量計(jì)算)的活性成分。根據(jù)常規(guī)方法或普通技術(shù)，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以制備本發(fā)明中的每個(gè)制齊U。例如，如果制劑是口服制劑，可以如下制備例如，通過混合適當(dāng)量的本發(fā)明化合物和適當(dāng)量的乳糖，將該混合物裝入適合口服給藥的硬明膠膠囊中。另一方面，如果含有本發(fā)明化合物的制劑是注射劑，可以如下制備例如，通過混合適當(dāng)量的本發(fā)明化合物和適當(dāng)量的
140.9%生理鹽水，將該混合物裝入注射用管形瓶中。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐，本發(fā)明的組分可以單獨(dú)地或者與藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑組合地在藥物組合物中施用給哺乳動(dòng)物，包括人。所述組分可以口服給藥或腸胃外給藥，包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、直腸和局部給藥途徑。合適的劑量是醫(yī)學(xué)從業(yè)人員已知的，且當(dāng)然取決于特定疾病狀態(tài)、施用的組合物的比活、和接受治療的特定患者。在有些情況下，為了達(dá)到希望的治療量，可能必須提供重復(fù)施用，即，重復(fù)地單次施用特定監(jiān)測(cè)的或計(jì)量的劑量，其中重復(fù)單次施用，直到達(dá)到希望的日劑量或效果。下面提供了關(guān)于合適的劑量的其它信息。關(guān)于本發(fā)明組分的術(shù)語(yǔ)“施用”及其變體(例如，“施用”化合物)是指，將組分或組分的前藥導(dǎo)入需要治療的動(dòng)物的系統(tǒng)中。當(dāng)與一種或多種活性劑(例如，mTOR抑制劑) 組合地提供本發(fā)明的組分或其前藥時(shí)，“施用”及其變體各自意在包括同時(shí)和先后導(dǎo)入組分或其前藥和其它藥劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)“組合物”意在包括包含指定量的指定成分的產(chǎn)品，以及直接或間接由指定量的指定成分的組合所產(chǎn)生的任何產(chǎn)品。本文使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指可以在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人體內(nèi)引起生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的活性化合物或藥劑的量，所述響應(yīng)是研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的。將合適量的mTOR抑制劑施用給接受癌癥治療的患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，以約10 mg - 40 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，以10 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，以20 mg/天的劑量，施用mTOR抑制齊U。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，以30 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，以40 mg/天的劑量，施用mTOR抑制劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述mTOR抑制劑可以每周施用5次。例如， ridaforolimus在第1天開始，并在指定的劑量水平繼續(xù)連續(xù)5天，然后2天不進(jìn)行 ridaforolimus治療。然后繼續(xù)Ridaforolimus的這種每周5天的計(jì)劃。根據(jù)已知的方法，將包含本發(fā)明的抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的組合治療劑施用給人患者，諸如作為推注靜脈內(nèi)施用，或通過在一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)輸注，通過肌肉內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、腦脊髓內(nèi)的、皮下的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、滑膜內(nèi)的、鞘內(nèi)的、口服的、局部的或吸入的途徑。 抗體的靜脈內(nèi)或皮下施用是優(yōu)選的。預(yù)見到3種不同的遞送方案可用于遞送根據(jù)本發(fā)明的抗體。據(jù)推測(cè)，常規(guī)的靜脈內(nèi)遞送是大多數(shù)腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)遞送技術(shù)。但是，關(guān)于某些腫瘤，諸如在腹腔中的那些(由卵巢、膽管、其它管等的腫瘤來例證)，腹膜內(nèi)給藥可能有利地用于在腫瘤處得到高劑量的抗體，并使抗體清除最小化。以類似的方式，某些實(shí)體腫瘤具有適合局部灌注的脈管系統(tǒng)。局部灌注允許在腫瘤部位保留(Obtention)高劑量的抗體，并使抗體的短期清除最小化。象任何基于蛋白或抗體輸注的治療劑一樣，安全性問題主要涉及(i)細(xì)胞因子釋放綜合征，即，低血壓、發(fā)熱、搖動(dòng)、惡寒，(ii)對(duì)所述物質(zhì)的免疫原性應(yīng)答的發(fā)展(即， 患者形成針對(duì)抗體治療劑的人抗體，或HAHA或HACA應(yīng)答)，和(iii)對(duì)表達(dá)EGF受體的正常細(xì)胞的毒性，例如，表達(dá)EGFR和/或IGF-IR的肝細(xì)胞?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)和隨訪來監(jiān)測(cè)這些安全性問題中的每一種。具體地，在臨床試驗(yàn)過程中，經(jīng)常監(jiān)測(cè)肝功能，以便評(píng)估對(duì)肝臟的損害(如果有的話)。為了預(yù)防或治療疾病，抗體的適當(dāng)劑量取決于要治療的疾病的類型(如上面所定義)、疾病的嚴(yán)重性和病程、抗體是為了預(yù)防還是治療目的而施用、以前的治療、患者的病歷和對(duì)抗體的應(yīng)答、以及主治醫(yī)師的判斷。合適地，一次性地或在一系列治療中，將抗體施用給患者。在聯(lián)合治療方案中，以治療上有效的或協(xié)同的量，施用本發(fā)明的組合物。本文使用的治療有效量是，抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的共同施用或本發(fā)明的組合物的施用會(huì)導(dǎo)致靶向的疾病或病癥的減輕或抑制的量。治療協(xié)同量是，協(xié)同地或顯著地減輕或消除與特定疾病有關(guān)的病癥或癥狀所必需的抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的量。在一個(gè)寬的實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療包含抗-IGF-IR抗體和mTOR抑制劑的聯(lián)合施用。聯(lián)合施用包括使用分開的制劑或單個(gè)藥物制劑的共同施用和任意次序的連續(xù)施用，其中優(yōu)選地，存在兩種(或所有)活性劑同時(shí)地發(fā)揮它們的生物活性的時(shí)間段。根據(jù)生產(chǎn)商的說明書，可以使用這樣的化學(xué)治療劑的準(zhǔn)備和給藥計(jì)劃，或由熟練的從業(yè)人員以經(jīng)驗(yàn)為主地確定。在 Chemotherapy Service Ed. , Μ. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, Md. (1992)中，也描述了化療的準(zhǔn)備和給藥計(jì)劃。可以在施用抗體之前或之后，施用mTOR抑制劑，或可以與其同時(shí)施用。本發(fā)明的治療組合的臨床給藥劑量可能受到不良反應(yīng)程度的限制。根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重性，約1 yg/kg-50 mg/kg (例如0· 1-20 mg/kg)的抗體是施用給患者的初始候選劑量，例如，通過一次或多次單獨(dú)的施用，或通過連續(xù)輸注。典型的日劑量范圍可以是約1 yg/kg至約100 mg/kg或更多，取決于上述的因素。對(duì)于在幾天或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)重復(fù)施用，根據(jù)病癥，持續(xù)進(jìn)行治療，直到發(fā)生疾病癥狀的理想抑制。但是， 其它劑量方案可能是有用的。在一個(gè)方面，以范圍為約5 mg/kg至約15 mg/kg的劑量，每周施用本發(fā)明的抗體， 或可以每2-3周施用。在有些方面，化療方案包括傳統(tǒng)的高劑量間歇施用。在某些其它的方面，使用更小的劑量和更高的頻率，施用化學(xué)治療劑，且不存在有計(jì)劃的中斷(“節(jié)拍化療”)。通過常規(guī)技術(shù)和試驗(yàn)，可以容易地監(jiān)測(cè)本發(fā)明的治療進(jìn)程。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時(shí)施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時(shí)每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內(nèi)施用dalotuzumab，同時(shí)每天施用10 mg ridaforolimus。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時(shí)施用mTOR抑制劑——例如，每天施用ridaforolimus，同時(shí)每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地， 在10 mg/kg的劑量每周靜脈內(nèi)施用dalotuzumab，同時(shí)每天施用20 mg ridaforolimus。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時(shí)施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時(shí)每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內(nèi)施用dalotuzumab，同時(shí)每天施用30 mg ridaforolimus 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述給藥次序包括，與IGF-IR抗體同時(shí)施用mTOR抑制劑—— 例如，每天施用ridaforolimus，同時(shí)每周施用IGF-1R抗體(dalotuzumab)。具體地，在10 mg/kg的劑量每周靜脈內(nèi)施用dalotuzumab,同時(shí)每天施用40 mg ridaforolimus。IGF-IR抗體的替代給藥方案如下(a) 15 mg/kg負(fù)載，隨后每周7. 5 mg/kg ； (b) 每周 7. 5 mg/kg ； (c)每周 10. 0 mg/kg ； (d)隔周 7. 5 mg/kg ； (e)隔周 10. 0 mg/kg ； (f)隔周 20 mg/kg ； (g)每 3 周 30 mg/kg。所述組合的實(shí)例給藥方案如下
權(quán)利要求
1.一種使用mTOR抑制劑和抗-IGF-IR抗體治療選自下述癌癥的方法非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、軟組織或骨肉瘤和子宮內(nèi)膜癌，其中所述mTOR抑制劑選自ridaforolimus、依維莫司、坦羅莫司和它們的組合，且所述抗-IGF-IR抗體選自 dalotuzumab、figitumumab、cixutumumab、SHC 717454、Roche Rl507 禾口 Amgen AMG479。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述mTOR抑制劑是ridaforolimus。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗-IGF-IR抗體包含至少一個(gè)非人起源的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和至少一個(gè)源自非人來源的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其中結(jié)合IGF-IR的抗體具有至少一種選自下述的性質(zhì)(a)結(jié)合IGF-1R，但是不結(jié)合頂；(b)結(jié)合包含胰島素受體和胰島素生長(zhǎng)因子受體的雜合受體aR/IGF-lR雜合-R)，但是不結(jié)合單獨(dú)的頂；(c) 抑制人IGF-IR和IGF-I和/或IGF-2之間的結(jié)合；(d)以小于100 nM的抑制常數(shù)和/或 IC50，結(jié)合雜合-R和它的天然配體，優(yōu)選地在本文中命名為IGFl和/或IGF2和/或胰島素；(e)特異性地抑制所述IGF-IR的酪氨酸激酶活性；(f)特異性地抑制所述雜合-R的酪氨酸激酶活性；(g)對(duì)所述雜合-R具有10 nM或更小的結(jié)合親和力；(h)下調(diào)IGF-IR表達(dá)；(i)下調(diào)雜合-R表達(dá)；(j)抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述重鏈CDR包含選自SEQID NO. 4、5或6的氨基酸序列，且所述輕鏈⑶R包含選自SEQ ID NO. 1、2或3的氨基酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述人源化的抗體或它的功能片段之一包含含有選自SEQ ID No. 7或8的氨基酸序列的輕鏈，或含有選自SEQ ID NO. 9、10或11的氨基酸序列的重鏈。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述抗-IGF-IR抗體是dalotuzumab。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述mTOR抑制劑是ridaforolimus，且所述抗-IGF-IR 抗體是 dalotuzumab。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中以10mg至40 mg的劑量施用ridaforolimus。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中每周施用ridaforolimus5次。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中以10mg/kg的劑量，靜脈內(nèi)地施用dalotuzumab。
11.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每周施用dalotuzumab1次。
12.如權(quán)利要求7所述的方法，其中每隔一周施用dalotuzumab1次。
全文摘要
公開了使用mTOR抑制劑和抗-IGF-1R抗體治療癌癥的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102481361SQ201080016929
公開日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月16日
發(fā)明者溫特 C., 克林霍菲 R., 薩思亞納拉亞南 S. 申請(qǐng)人:默沙東公司