專利名稱：提供一種Th1-偏向性應答的免疫納米療法的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多種合成納米載體組合物，以及相關方法，用于治療其中希望產(chǎn)生Thl-偏向性免疫應答的疾病。
背景技術：
存在很多其中在介導疾病中免疫系統(tǒng)自身實際上似乎起到重要作用的疾病。這可以發(fā)生在當免疫刺激引起活化的CD4T細胞分化為Th2細胞、然后Th2細胞分泌Th2_相關細胞因子時，這些細胞因子例如白細胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10jPIL-13。在Th2細胞因子存在下受刺激的B細胞優(yōu)選通過產(chǎn)生某些抗體同型(特別是IgE)進行響應。針對某些抗原和Th2細胞因子的作用的IgE依賴性免疫應答可能引起與特應性癥狀有關的臨床癥狀，例如變態(tài)反應癥、哮喘、以及特應性皮炎。此外，在某些癥狀(例如某些慢性傳染性疾病和癌癥)下，希望放大的Thl應答以產(chǎn)生對于這些癥狀的更好的結果。雖然已知一些用于其特征在于不希望的Th2偏向性免疫應答的癥狀的療法，需要改進的療法。此外，對于其中受試者的免疫系統(tǒng)的Thl-偏向性應答是欠佳或無效的疾病，還需要改進的療法。因此，對于Th2_介導的疾病以及對于其中希望受試者的免疫系統(tǒng)的增強的Thl偏向性應答的疾病，需要改進的組合物和相關方法來提供改進的療法。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及用于治療一種癥狀的一種組合物，這些組合物包括合成納米載體，包括(I) 一個免疫特征表面，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；其中該免疫特征表面并不包括處于足以激發(fā)對與治療該癥狀有關的抗原的適應性免疫應答的量的與治療該癥狀有關的抗原。另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，包括識別患有一種癥狀的受試者；提供一種包括合成納米載體的組合物，這些納米載體包括(I) 一種APC靶向特征，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；并且將該組合物給予受試者；其中該組合物的給藥并不進一步包括同時給予一種與治療該癥狀有關的抗原。仍另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，包括提供一種包括合成納米載體的組合物，該納米載體包括一種Thl偏向性免疫刺激劑和一種APC靶向特征；將該組合物給予受試者；并且在不同于將該組合物給予該受試者的時間將一種抗原給予其中希望有Thl偏向性應答的受試者；其中該抗原的給藥包括被動給藥或主動給藥。附圖
簡要說明圖I示出BALF嗜酸細胞的細胞分類計數(shù)(占總細胞數(shù)的％ )。
圖2示出在最終卵清蛋白激發(fā)18小時以后，BALF中的細胞因子。發(fā)明詳細說明在詳細說明本發(fā)明以前，已理解本發(fā)明并不局限于具體舉例說明的材料或工藝參數(shù)，因為這些當然可以變化。還已理解在此使用的術語只是為了說明本發(fā)明的具體實施方案的目的，并不旨在限制使用可替代的術語來說明本發(fā)明。在此引用的所有出版物、專利和專利申請，無論在前或在后，都出于所有目的通過引用以其全文結合在此。如在本說明書和附加權利要求中使用的那樣，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該”包括復數(shù)指示物，除非該內容清楚地另外指明。例如，引用“一種聚合物”包括兩種或更多種這樣的分子的混合物，引用“一種溶劑”包括兩種或更多種這樣的溶劑的混合物，引用“一種粘合劑”包括兩種或更多種這樣的材料的混合物，并且以此類推。 A.序論本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地并且令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過實踐在此披露的本發(fā)明，可以克服以上提到的問題和限制。特別是，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)有可能提供組合物和方法，這些方法涉及一種用于治療一種癥狀的組合物，這些組合物包括合成納米載體，包括(I) 一個免疫特征表面，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；其中該免疫特征表面并不包括處于足以激發(fā)對與治療該癥狀有關的抗原的適應性免疫應答的量的與治療該癥狀有關的抗原。此外，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)有可能提供組合物和方法，這些方法涉及的方法包括識別患有一種癥狀的受試者；提供一種包括合成納米載體的組合物，該納米載體包括(I) 一種APC靶向特征，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；并且將該組合物給予受試者；其中該組合物的給藥并不進一步包括同時給予一種與治療該癥狀有關的抗原。此外，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)有可能提供組合物和方法，這些方法涉及的方法包括提供一種包括合成納米載體的組合物，該納米載體包括一種Thl偏向性免疫刺激劑和一種APC靶向特征；將該組合物給予受試者；并且在不同于將該組合物給予該受試者的時間將一種抗原給予其中希望有Thl偏向性應答的受試者；其中該抗原的給藥包括被動給藥或主動給藥。一種用于預防或治療其特征在于不希望的Th2偏向性應答、或欠佳的/無效的Thl應答的疾病的方法是對抗Th2細胞的分化和Th2細胞因子作用的免疫干預?？梢酝ㄟ^將身體暴露于導致產(chǎn)生Thl細胞和Thl相關細胞因子(包括干擾素Y、IL-12和IL-18)的條件達到這一點。這些條件被稱為“Thl偏向性應答?！痹谧儜约膊〉恼T導和維持這兩者中，并且還在治療誘導的到Thl應答的轉換中，樹突細胞被認為起到重要作用。因此，針對促進樹突細胞提升Thl應答的能力的樹突細胞的治療代表了用于變態(tài)反應癥和哮喘的機理性治療的有希望的方法。在本發(fā)明中，本發(fā)明的諸位發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，在會正常產(chǎn)生或者是Th2偏向性應答、或者是欠佳的/無效的偏向性應答的條件下，可以利用某些類型的免疫納米療法來誘導Thl偏向性應答。通過使用以下包括免疫納米療法的組合物來完成這一點，(I)使用APC靶向特征，將這些組合物靶向至抗原遞呈細胞，以及(2)并不包括與治療該癥狀有關的抗原。改為，抗原并不同時給藥；而是通常在不同于給予一種本發(fā)明的組合物的時間，單獨給予受試者。在某些相關實施方案中，可以或者主動或者被動給予該抗原。在給予一種本發(fā)明的組合物以后，Thl偏向性狀態(tài)一般持續(xù)一段時間,該時段對于將與治療該癥狀有關的抗原或者主動地、或者被動地給予受試者是足夠長的。在實施方案中，該Thl偏向性狀態(tài)可以長久持續(xù)，無論該抗原是否主動地或被動地給予。實例1-7詳細說明了本發(fā)明的若干不同的具體實施方案，包括本發(fā)明的納米載體、以及它們的應用。實例8詳細說明了在治療實驗性哮喘中本發(fā)明的一個實施方案的用途?，F(xiàn)在將更詳細地說明本發(fā)明。B.定義“主動給藥”是指給予一種物質(例如一種抗原)，通過將該物質直接給予受試者， 或者采取導致受試者暴露于該物質的積極行動。例如，注射、或口服給藥，從而將一種變應原或一種慢性傳染物抗原給予受試者是主動給藥的實施方案。在另一個實施方案中，以導致產(chǎn)生腫瘤抗原(使受試者暴露于該抗原)的方式，從而在受試者中誘導腫瘤細胞死亡，這是主動給藥的一個實施方案?！敖o予”或“給藥”是指⑴以藥理學上有用的方式，將藥理學活性材料(例如本發(fā)明的組合物)給予受試者，(2)以藥理學上有用的方式，指導將這些材料給予受試者，或(3)以藥理學上有用的方式，指導受試者自身給予這些材料?！白儜笔侵敢鹚侔l(fā)型超敏反應的物質，其特征在于結合變應原特異性IgE，并且激活IgE受體細胞，導致Th2型模式的細胞因子應答連同組胺釋放。包括在這些速發(fā)型超敏反應中的是例如變態(tài)反應癥和變應性哮喘的適應癥。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫特征表面并不包括一種變應原?！芭c治療該癥狀有關的抗原”是指一種抗原，在將該抗原給予受試者以后，對于它的適應性免疫應答(如區(qū)別的，例如來自一種先天免疫應答)會治療或減輕受試者中的具 體癥狀。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫特征表面并不包括與治療該癥狀有關的抗原。在一個實施方案中，給予該組合物并不進一步包括給予一種與治療該癥狀有關的抗原，其中該抗原可以偶合到納米載體上亦或不偶合到納米載體上。在一個實施方案中，在不同于給予該組合物的時間給予與治療該癥狀有關的抗原。在實施方案中，被治療的癥狀并不需要詳細說明，因為要求是該抗原是已知的、或者期待它與治療該癥狀有關。“給予對于他Thl偏向性應答是臨床有益的受試者的抗原”是指一種會典型地引起來自受試者的Th2型細胞因子應答的抗原，但是對于他，特征在于Thl型細胞因子應答的應答偏向會是臨床有用的。在一個實施方案中，在不同于給予該組合物的時間，將對于他Thl偏向性應答是臨床有益的受試者的抗原給予受試者?！癆PC靶向特征”是指本發(fā)明的合成納米載體所包括的一個或多個部分，這一個或多個部分靶向合成納米載體至專職抗原遞呈細胞(“APCs”)(例如但并不局限于樹突細胞、SCS巨噬細胞、濾泡樹突細胞、以及B細胞)。在實施方案中，APC靶向特征可以包括一個或多個免疫特征表面和/或多個靶向部分，這些靶向部分將已知靶結合在APCs上。在實施方案中，用于在巨噬細胞(“Mphs”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達和/或存在于巨噬細胞上(即被膜下竇-Mph標記)。示例性的SCS-Mph標記包括，但并不局限于，CD4 (L3T4, W3/25, T4) ;CD9(p24，DRAP-I, MRP-1) ;CDlla(LFA_l a , aL^聯(lián)蛋白鏈);CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3，Mol，C3niR，Mac-l) ;CDllc ( a X 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ；CDwl2(p90-120) ;CD13(APN，gpl50, EC 3. 4. 11. 2) ;CD14(LPS_R) ；CD15(X-半抗原，Lewis, X，SSEA-1,3-FAL) ;CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3 '磺基 Lewis X)；CD15su(6 磺基唾液酰Lewis X) ;CD16a (FCRIIIA) ;CD16b (FcgRIIIb) ;CDwl7 (乳糖酶基神經(jīng)銷氛醇，LacCer) ;CD18(整聯(lián)蛋白 ￠2, CDlla, b, c 0 -亞基)；CD26 (DPP IV ectoeneyme,ADA 結合蛋白)；CD29 (血小板 GPIIa, P -I 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1，Endocam)；CD32(FCyRII) ；CD33(gp67) ;CD35(CR1，C3b/C4b 受體);CD36(GpIIIb，GPIV, PASIV)；CD37 (gp52-40) ；CD38 (ADP-核糖基環(huán)化酶，TlO) ；CD39 (ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-I)；CD40 (Bp50) ;CD43(涎蛋白，增白細胞蛋白);CD44(EMCRII，H_CAM，Pgp-1) ;CD45 (LCA，T200，B220, Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0(UCHL-1) ;CD46(MCP) ;CD47(gp42，IAP, 0A3,神經(jīng)纖毛蛋白)；CD47R(MEM-133) ;CD48 (Blast-1，Hulym3，BCM-1，OX-45) ;CD49a(VLA-1 a，a I 整聯(lián)蛋白)；CD49b (VLA-2 a，gpla, a 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 a , a 3 整聯(lián)蛋白)；CD49e (VLA-5 a，a 5 整聯(lián)蛋白);CD49f (VLA-6 a，a 6 整聯(lián)蛋白，gplc) ；CD50 (ICAM-3)；CD51 (整聯(lián)蛋白 a，VNR- a，V玻連蛋白-R a) ；CD52 (CAMPATH-1，HE5) ；CD53 (OX-44)；CD54 (ICAM-I) ;CD55 (DAF) ;CD58(LFA_3) ;CD59(lF5Ag，H19，保護素，MACIF, MIRL, P_18)；CD60a (GD3) ；CD60b (9-0-乙?；?GD3) ；CD61 (GP Ilia, 3 3 整聯(lián)蛋白)；CD62L(L-選擇素，LAM-I, LECAM-I，MEL-14, Leu8, TQl) ;CD63(UMP，MLAl，gp55, NGA, LAMP-3，ME491)；CD64 (Fe y RI) ；CD65 (神經(jīng)酰胺，VIM-2) ;CD65s (唾液酸化的-CD65，VIM2) ；CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2) ;CD74(Ii，恒定鏈);CD75 (唾液掩蔽的乳糖胺)；CD75S ( a 2，6 唾液酸化的乳糖胺)；CD80(B7, B7-1, BBl) ；CD81 (TAPA-I) ；CD82(4F9, C33, IA4, KAII, R2)；CD84(p75，GR6) ;CD85a(ILT5，LIR2, HL9) ;CD85d(ILT4，LIR2, MIR10) ;CD85j(ILT2，LIRl，MIR7) ;CD85k(ILT3， LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ;CD87(uPAR) ;CD88(C5aR) ；CD89(IgAFe 受體，F(xiàn)caR) ;CD91(a2M-R，LRP) ；CDw92(p70) ；CDw93 (GRll) ;CD95(AP0_1，EAS,TNFRSF6) ；CD97(BL-KDD/F12) ;CD98(4F2， FRP-I, RL-388) ;CD99(MIC2， E2) ;CD99R(CD99Mab 限制的);CD100(SEMA4D) ；CD101(IGSF2, P126, V7) ；CD102(ICAM-2) ；CD111(PVRL1,HveC, PRRl， Nectin 1， HIgR) ;CD112(HveB， PRR2, PVRL2,粘合素 2) ;CD114(CSF3R，G-CSRF, HG-CSFR) ;CD115(c-fms，CSF-1R，M-CSFR) ;CD116(GMCSFRa ) ;CDwl19(IFNY R，IFN y RA) ;CD120a(TNFRI，p55) ;CD120b (TNFRII，p75, TNFR p80) ;CD121b (類型 2IL-1R)；CD122(IL2RP) ；CD123(IL-3Ra ) ；CD124 (IL-4R a ) ;CD127(p90，IL-7R，IL_7Ra)；CD128a(IL-8Ra, CXCRl，(暫時重命名為 CD181)) ;CD128b (IL_8Rb，CSCR2,(暫時重命名為 CD182)) ;CD130(gpl30) ；CD131(公共 P 亞基)；CD132(公共 Y 鏈，IL-2Ry)；CDwl36(MSP-R, RON, pl58-ron) ;CDwl37 (4-1BB，I LA) ;CD139 ;CD141 (血栓調節(jié)素，胎兒調節(jié)素)；CD147(Basigin，EMMPRIN, M6, 0X47) ;CD148 (HPTP-n，p260, DEP-1) ;CD155(PVR)；CD156a(CD156，ADAM8, MS2) ;CD156b (TACE，ADAMl7, cSVP) ；CDwl56C (ADAMlO) ;CD157(Mo5，BST-1) ;CD162(PSGL-I) ;CD164(MGC-24，MUC-24) ;CD165(AD2，gp37) ;CD168(RHAMM，IHABP， HMMR) ;CD169(唾液酸粘附素，涎免凝集素-I) ;CD170 (涎免凝集素5) ;CD171 (L1CAM，MLE)；CD172(SIRP-1a，MyD-1) ；CD172b(SIRP^) ;CD180(RP105，Bgp95, Ly64) ;CD181 (CXCR1，(以前稱為 CDI28a)) ；CD182(CXCR2,(以前稱為 CDI28b)) ；CD184(CXCR4, NPY3R)；CD191(CCRl) ；CD192(CCR2) ；CD195(CCR5) ；CDwl97(CCR7(是 CDwl97)) ;CDwl98(CCR8)；CD204(MSR) ;CD205 (DEC-25) ;CD206(MMR) ;CD207(胰島蛋白);CDw210(CK) ;CD213a(CK)；CDw217(CK) ;CD220(胰島素 R) ;CD221(IGF1 R) ;CD222 (M6P-R，IGFII-R) ;CD224(GGT)；CD226(DNAM-1, PTAI) ;CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ;CD232(VESP-R) ;CD244(2B4， P38,NAIL) ;CD245(p220/240) ;CD256 (APRIL，TALL2，TNF (配體)超家族，成員 13) ;CD257(BLYS，TALLl，TNF (配體)超家族，成員 13b) ；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 10a)；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 10b) ;CD263 (TRAIL-R3，TNBF-R 超家族，成員 10c)；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 10d) ;CD265 (TRANCE-R，TNF-R 超家族，成員 11a)；CD277 (BT3. I，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ;CD280 (TEM22, END0180) ;CD281 (TLR1, TOLL-樣受體 I) ;CD282(TLR2，TOLL-樣受體 2) ;CD284(TLR4，TOLL-樣受體 4) ;CD295 (LEPR)；CD298(ATP1B3, Na K ATP 酶，P 3 亞基)；CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A)；CD300e (CMRF-35L1) ；CD302 (DCLl) ；CD305 (LAIRl) ；CD312(EMR2) ；CD315(CD9P1)； CD317(BST2) ；CD321 (JAMl) ;CD322(JAM2) ;CDw328 (涎免凝集素 7) ;CDw329 (涎免凝集素9) ；CD68 (gp 110，巨涎蛋白(Macrosialin));和/或甘露糖受體；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。在實施方案中，用于在樹突細胞(“DCs”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達和/或存在于DCs上(即一種DC標記)。示例性的DC標記包括，但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ； CDlb (Rl) ;CDlc(M241，R7) ；CDld(R3) ;CDle(R2) ;CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol, C3niR, Mac-1) ;CDllc ( a X 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ;CDwll7(乳糖酶基神經(jīng)鞘氨醇，LacCer) ;CD19 (B4) ;CD33 (gp67) ；CD 35 (CR1，C3b/C4b 受體)；CD36(GpIIIb, GPIV, PASIV) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-I) ;CD40(Bp50) ;CD45(LCA，T200, B220, Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-1) ;CD49d (VLA-4 a，a 4 整聯(lián)蛋白);CD49e (VLA-5 a，a5 整聯(lián)蛋白);CD58(LFA_3) ;CD64(FcyRI) ;CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2) ;CD73 (Ecto-5，nucloticlase) ；CD74(Ii,恒定鏈);CD80(B7，B7-1，BBl) ;CD81 (TAPA-I) ；CD83(HB15) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10)；CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HMI8) ；CD86(B7-2/B70) ；CD88(C5aB)；CD97(BL-KDD/F12) ;CD101(IGSF2，P126, V7) ；CD116(GM-CSFRa ) ;CD120a(TMFRI，p55)；CD120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD123(IL-3Ra ) ;CD139 ;CD148(HPTP-打，DEP-1)；CD150(SLAM, IP0-3) ;CD156b (TACE，ADAMl7, cSVP) ；CD157(Mo5, BST-1) ;CD167a(DDR1，trkE, cak) ；CD168 (RHAMM, IHABP, HMMR) ;CD169(唾液酸黏附素，涎免凝集素-I)；CD170(涎免凝集素-5) ;CD171(L1CAM，NILE) ;CD172 (SIRP-1 a，MyD-1) ;CD172b (SIRP 3 )；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD193(CCR3) ；CD196(CCR6)；CD197(CCR7 (ws CDwl97)) ;CDwl97(CCR7，EBII, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205)；CD206(MMR) ;CD207(胰島蛋白)；CD208 (DC-LAMP) ；CD209 (DCSIGN) ；CDw218a(IL18Ra )；CDw218b(IL8R^ ) ;CD227 (MUC1，PUM，PEM，EMA) ;CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ;CD252 (0X40L，TNF (配體)超家族，成員 4) ;CD258 (LIGHT，TNF (配體)超家族，成員 14) ;CD265 (TRANCE-R，TNF-R 超家族，成員 11a) ;CD271(NGFR，p75, TNFR 超家族，成員 16) ;CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1, PDLI) ;CD275(B7H2，ICOSL) ;CD276(B7H3) ;CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳月旨蛋白 3) ;CD283(TLR3，TOLL-樣受體 3) ;CD289(TLR9，TOLL-樣受體 9) ;CD295 (LEPR)；CD298(ATP1B3, Na K ATP 酶 P 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A)；CD301 (MGL1, CLECSF14) ；CD302 (DCLl) ；CD303 (BDCA2) ;CD304(BDCA4) ；CD312(EMR2)；CD317(BST2) ;CD319 (CRACC，SLAMF7) ;CD320(8D6)；以及 CD68(gpllO,巨涎蛋白)；II 類MHC ；BDCA-1 ;涎免凝集素-H ;其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。在實施方案中，可以通過特異性地結合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成靶向，這些實體顯著表達和/或存在于B細胞上(即B細胞標記)。示例性的B細胞標記包括，但并不局限于，⑶lc(M241，R7) ;raid(R3) ;OT2(E-花環(huán) R，Tll，LFA-2) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1, Ly-1) ；CD6 (T12) ；CD9(p24, DRAP-I, MRP-1)；CDlla(LFA-l a，a L 整聯(lián)蛋白鏈);CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol，C3niR, Mac-1)；CDllc(aX 整聯(lián)蛋白，P150，95，AXb2) ;CDwl7(乳糖胺，LacCer) ;CD18(整聯(lián)蛋白 3 2，CDlla, b, cP -亞基；CD19(B4) ;CD20(B1，Bp35) ;CD21(CR2，EBV-R, C3dR) ;CD22 (BL-CAM，Lyb8，涎免凝集素-2) ；CD23(FceRII, B6, BLAST-2, Leu-20) ;CD24(BBA_1，HSA) ；CD25( Tac抗原，IL-2Ra，P55) ;CD26(DPP IV ectoeneyme, ADA 結合蛋白)；CD27(T14，S152)；CD29(血小板 GPIIa, 3-I 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1, Endocam) ;CD32 (FCyRII)；CD35(CR1, C3b/C4b 受體);CD37 (gp52_40) ;CD38 (ADP 核糖基環(huán)化酶，TlO) ;CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-I) ;CD40(Bp50) ;CD44(ECMRII，H-CAM，Pgp-1) ;CD45(LCA，T200, B220,Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-1) ;CD46 (MCP) ;CD47(gp42，IAP，0A3,抗人神經(jīng)菌毛素)；CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, OX-45) ；CD49b (VLA-2 a，gpla, a 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 a，a 3 整聯(lián)蛋白)；CD49d(VLA_4 a，a 4 整聯(lián)蛋白);CD50(ICAM-3) ；CD52(CAMPATH-1, HES) ；CD53(OX-44) ；CD54(ICAM-I) ；CD55(DAF)；CD58 (LFA-3) ;CD60a (⑶3) ；CD62L(L-選擇素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQl)；CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2，Lyb-2) ;CD73(Ecto_5 '-核苷酸酶)；CD74(Ii,恒定鏈)；⑶75 (唾液掩蔽的乳糖胺)<D75S ( a 2，6唾液酸化的乳糖胺)；OT77 (Pk抗原，BLA,CTH/Gb3) ;CD79a(Iga，MBl) ;CD79b(IgP，B29) ；CD80 ；CD81 (TAPA-I) ；CD82(4F9, C33,IA4, KAII, R2) ；CD83(HB15) ；CD84(P75, GR6) ；CD85j (ILT2, LIR1, MIR7) ；CDw92(p70)；CD95(AP0-1, FAS, TNFRSF6) ;CD98 (4F2，F(xiàn)RP-1，RL-388) ;CD99 (MIC2，E2) ;CD100 (SEMA4D)；CD102 (ICAM-2) ;CD108(SEMA7A，JMH 血型抗原)；CDwll9 (IFN Y R，IFN Y Ra) ;CD120a(TNFRI，p55) ; CD 120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD121b(類型 2 IL-1R) ;CD122 (IL2R 3 )；CD124(IL-4Ra ) ;CD130 (gpl30) ;CD132(公共 Y 鏈，IL-2Ry ) ；CDwl37 (4-1BB, I LA)；CD139 ；CD147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD150(SLAM, IP0-3) ；CD162(PSGL-I)；CD164 (MGC-24, MUC-24) ；CD166(ALCAM, KG-CAM, SC-1, BEN, DM-GRASP) ;CD167a(DDR1，trkE, cak) ;CD171(L1CMA，NILE) ;CD175s(唾液酰-Tn(S-Tn)) ;CD180(RP105，Bgp95,Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD192(CCR2) ；CD196(CCR6) ；CD197(CCR7(wasCDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205) ;CDw210(CK)；CD213a(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Ra ) ；CDw218b(IL18R^ ) ;CD220(胰島素 R);CD221(IGF1 R) ；CD222(M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT) ；CD225(Leul3) ;CD226(DNAM-1，PTAI) ;CD227(MUC1，PUM, PEM, EMA) ;CD229(Ly9) ；CD230(朊病毒蛋白(Prp))；CD232 (VESP-R) ;CD245(p220/240) ;CD247(CD3 Zeta 鏈);CD261(TRAIL-R1，TNF-R 超家族，成員 10a) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 10b) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 10c) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 10d) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 11a) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ;CD268 (BAFFR，TNF-R 超家族，成員13C) ;CD269(BCMA，TNF-R 超家族，成員 16) ;CD275(B7H2，ICOSL) ;CD277 (BT3. I. B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3 Na K ATP 酶 3 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H)；CD300c (CMRF-35A) ；CD305 (LAIRl) ；CD307 (IRTA2) ；CD315(CD9P1) ；CD316 (EW12)；CD317(BST2) ;CD319 (CRACC，SLAMF7) ;CD321 (JAMl) ;CD322(JAM2) ;CDw327 (涎免凝集素 6，CD33L) ;CD68(gp 100，巨涎蛋白)；CXCR5 ；VLA-4 ;II 類MHC ;表面 IgM ;表面 IgD ；APRL ;和 /或BAFF-R ;其中在括號中列出的名字代表可替代 的名字。標記的實例包括在其他地方提供的那些。在一些實施方案中，可以通過特異性地結合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成B細胞靶向，這些實體顯著表達和/或存在于經(jīng)活化的B細胞上(即活化的B細胞標記)。示例性的活化的B細胞標記包括,但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ；CDlb(Rl) ;CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3/ 磺基 Lewis X)；CD15su(6 磺基-唾液酰 Lewis X) ;CD30 (Ber_H2，Ki_l) ;CD69(AM，EA 1，MLR3, gp34/28,VEA) ;CD70(Ki-24，CD27 配體);CD80 (B7，B7-1，BBl) ;CD86 (B7-2/B70) ；CD97 (BLKDD/F12)；CD125(IL-5Ra) ;CD126 (IL-6R a ) ;CD138 (多配體聚糖-1，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)；CD152(CTLA-4) ;CD252 (0X40L，TNF (配體)超家族，成員 4) ;CD253 (TRAIL，TNF (配體)超家族，成員 10) ；CD279 (PDl) ;CD289(TLR9，T0LL-樣受體 9);以及 CD312 (EMR2);其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。標記的實例包括在其他地方提供的那些?！奥詡魅疚锟乖笔侵敢环N產(chǎn)生慢性感染的傳染物的抗原，該慢性感染特征在于對于抗原，Th2-型模式的細胞因子應答或欠佳的和/或無效的Thl-型應答。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫特征表面并不包括慢性傳染物抗原。在實施方案中，慢性傳染物抗原包括衍生自利什曼原蟲寄生蟲、白色念珠菌、煙曲霉、瘧原蟲寄生蟲、鼠弓形體、分枝桿菌、HIV、HBV、HCV、EBV、CMV和血吸蟲的抗原?！巴瑫r給予”或“同時給藥”是指在給予受試者與治療該癥狀有關的抗原24小時或更短時間內、優(yōu)選在12小時或更短時間內、更優(yōu)選在6小時或更短時間內將本發(fā)明的合成納米載體給予受試者。同時給藥可以通過以相同的劑型或以分開的劑型給藥而進行?！芭己系摹笔侵父街交虬诤铣杉{米載體內。在一些實施方案中，該偶合是共價的。在一些實施方案中，通過一個或多個鍵介導共價偶合。在一些實施方案中，該偶合是非共價的。在一些實施方案中，通過電荷相互作用、親和相互作用、金屬配位、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用、和/或它們的組合來介導該非共價偶合。在實施方案中，使用常規(guī)技術，在合成納米載體內的封裝的背景中，可能出現(xiàn)該偶合。在實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，免疫刺激劑、T細胞抗原、以及這些部分，它的免疫特征表面可以每個都是各自的、或者在它們的任何組合中，與一種合成納米載體偶合?！皠┬汀笔侵杆幬镌谶m合給予受試者的一種介質、載體、媒介物、或裝置中。“識別患有一種癥狀的受試者”是指診斷或檢測或查明受試者是否具有或可能具有具體醫(yī)學癥狀?！懊庖咛卣鞅砻妗笔侵敢粋€包括多個部分的表面，其中⑴該免疫特征表面排除了一種是抗體的Fe段的部分；并且(2)該部分以對提供基于親合力的結合到哺乳動物抗原遞呈細胞的有效量存在?；谟H合力的結合是基于親合力效應的結合(這一類型的結合也可以稱為“高親和力”結合)。在一個優(yōu)選的實施方案中，可以使用體內測定，隨后進行如下體外測定確定免疫特征表面的存在(雖然在實踐本發(fā)明中，還可以使用查明基于一種親和力效應的結合(即“高親和力”結合)的存在的其他方法。)體內測定使用兩套攜帶不同熒光標記的合成納米載體，其中一套合成納米載體具有免疫特征表面，并且另一套用作對照。為了測試在體內該免疫特征表面是否可以靶向合成納米載體到抗原遞呈細胞，將這兩套合成納米載體按I : I混合，并且注射到小鼠 的足墊中。在納米載體注射以后I至4小時和24小時之間的一個時間點，通過采集注射小鼠的胭淋巴結引流，分別測量在樹突細胞和被膜下淋巴竇巨噬細胞上的合成納米載體累積。加工淋巴結用于冰凍切片的共聚焦熒光免疫組織學，用對小鼠⑶Ilc(克隆HL3，BDBIOSCIENCES )或小鼠⑶169(來自SEROTEC 的克隆3D6. 112)的熒光抗體復染，并且通過使用合適的圖像處理軟件(例如ADOBE PHOTOSHOP )的面積法分析。如果與對照納米載體相比，合成納米載體包括頻繁程度多至少I. 2倍、優(yōu)選多至少I. 5倍、更優(yōu)選多至少2倍的與樹突細胞和/或被膜下淋巴竇巨噬細胞有關的免疫特征表面，那么建立了通過免疫特征表面的抗原遞呈細胞的靶向。在優(yōu)選的實施方案中，伴隨體內測定的體外測定確定在用免疫特征表面所包括的部分、亦或用對于體外抗原遞呈細胞表達的表面抗原特異性的抗體(對于人樹突細胞來自 Miltenyi BIOTEC 抗 CDlc (BDCA-1)克隆 AD5-8E7，對于小鼠樹突細胞:抗 CDllc(aX整聯(lián)蛋白)克隆HL3，BDBI0SCIENCES ，或對于鼠被膜下淋巴竇巨噬細胞來自SEROTEC 的抗CD169克隆3D6. 112)包被的生物相容性表面上，人或鼠的樹突細胞或鼠的被膜下淋巴竇巨噬細胞(共同稱為“體外抗原遞呈細胞”)的固定，這樣(i) 一個對應體外抗原遞呈細胞到該表面的最大固定的最佳包被密度，已經(jīng)用免疫特征表面所包括的部分包被該表面，該最佳包被密度或者不能探測，或者占觀察到抗體包被表面的部分的至少10%，優(yōu)選至少20%，更優(yōu)選至少25% ;以及(ii)如果通過免疫特征表面，體外抗原遞呈細胞的固定是可檢測的，那么將被測試的免疫特征表面以免疫特征表面所包括的部分的包被密度支持半最大結合，與支持半最大結合的抗體包被密度相比，上述包被密度高至少2倍，優(yōu)選高至少3倍，更優(yōu)選高至少4倍。在pH = 7. 2-7. 4下,免疫特征表面可以是帶正電的、帶負電的或不帶電的。可以由相同部分或不同部分的混合物構成免疫特征表面。在實施方案中，這些免疫特征表面可以包括B細胞抗原。在免疫特征表面中，可能有用的部分的實例包括煙堿及其衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基(例如叔胺)、唾液乳糖、親和素和/或親和素衍生物(例如中性鏈親和素)、以及任何以上物質的殘基。在一個實施方案中，免疫特征表面所包括的部分被偶合到本發(fā)明的納米載體的表面上。在另一個實施方案中，該免疫特征表面被偶合到本發(fā)明的納米載體的表面上。應當注意到，免疫特征表面所包括的部分賦予高親和力結合。如在本定義中明確定義的那樣，并且普遍貫穿本說明書所說明的，并不是所有能夠存在于納米載體上的部分將賦予高親和力結合。因此，即使一個表面可以包括多個部分(有時稱為一個“陣列”)，這仍然不是指這樣一個表面固有地是免疫特征表面，缺少數(shù)據(jù)示出這樣一個表面賦予根據(jù)本定義和披露的結合。“免疫刺激劑”是指一種調節(jié)對抗原的免疫應答的媒介物，但是并不是抗原或者衍生自抗原。如在此使用的那樣，“調節(jié)”是指誘導、增強、抑制、指導、或重新定向免疫應答。這樣的媒介物包括刺激(或促進)對抗原的免疫應答的免疫刺激劑，但不是抗原或衍生自抗原。因此，免疫刺激劑包括佐劑。在一些實施方案中，該免疫刺激劑在納米載體的表面上，和/或合并在合成納米載體內。在實施方案中，該免疫刺激劑偶合到合成納米載體上。 在一些實施方案中，所有合成納米載體的免疫刺激劑都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載體包括大量不同類型的免疫刺激劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多種獨自的免疫刺激劑，所有這些都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載 體正好包括一個類型的免疫刺激劑。在一些實施方案中，合成納米載體正好包括兩個不同類型的免疫刺激劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多于兩個的不同類型的免疫刺激劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括脂膜(例如脂質雙分子層、脂質單分子層、等)，其中至少一種類型的免疫刺激劑與該脂膜偶合。在一些實施方案中，至少一種類型的免疫刺激劑嵌入到該脂膜內。在一些實施方案中，至少一種類型的免疫刺激劑嵌入到脂質雙分子層的內腔內。在一些實施方案中，合成納米載體包括至少一種類型的與該脂膜的內表面偶合的免疫刺激劑。在一些實施方案中，至少一種類型的免疫刺激劑封裝在合成納米載體的脂膜內。在一些實施方案中，至少一種類型的免疫刺激劑可以位于合成納米載體的多個位置。本領域的一位普通技術人員將認識到以上實例只是很多不同方式的代表，其中多種免疫刺激劑可以與合成納米載體的不同場所偶合。多種免疫刺激劑可以位于合成納米載體的各場所的任何組合。“合成納米載體的最大尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的納米載體的最大尺寸。“合成納米載體的最小尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的合成納米載體的最小尺寸。例如，對于球形(spheriodal)合成納米載體,合成納米載體的最大和最小尺寸會是基本相同的，并且會是它的直徑的大小。類似地,對于立方體合成納米載體,合成納米載體的最小尺寸會是它的高、寬、或長中最小的，同時合成納米載體的最大尺寸會是它的高、寬、或長中最大的。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75 %、優(yōu)選至少80 %、更優(yōu)選至少90 %的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75 %、優(yōu)選至少80 %、更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于5 ym。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最小尺寸是大于llOnm、更優(yōu)選大于120nm、更優(yōu)選大于130nm、并且仍更優(yōu)選大于150nm。優(yōu)選地,基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于3 u m、更優(yōu)選等于或小于2 u m、更優(yōu)選等于或小于I y m、更優(yōu)選等于或小于800nm、更優(yōu)選等于或小于600nm、并且仍更優(yōu)選等于或小于500nm。在優(yōu)選的實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最大尺寸是等于或大于lOOnm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、更優(yōu)選等于或大于140nm、并且仍更優(yōu)選等于或大于150nm。通過將這些合成納米載體懸浮在一種液體(通常是水性)介質中，并且使用動態(tài)光散射(例如使用一臺Brookhaven ZetaPALS儀器)獲得合成納米載體大小的測量值?！胺强乖悦庖咛卣鞅砻妗笔侵府敶嬖谟诤铣杉{米載體表面上時，不包括使T細胞或B細胞活化的部分的免疫特征表面，或者當存在于合成納米載體表面上時，包括使T細胞或B細胞活化的部分,但是這些部分的量不足以使合成納米載體活化T細胞或B細胞。在一個實施方案中，可以通過對細胞表面“活化標記”的分析來檢測人和小鼠淋巴細胞的活化。例如，CD69(非常早期的活化抗原)是在活化的T細胞和B細胞上高度表達的細胞表面分子，但是不存在于靜息的非活化的細胞上。使用熒光色素結合的抗CD69抗體并且使用流式細胞計數(shù)分析，可以檢測來自人外周血單核細胞(PBMC)或來自小鼠脾臟的T細胞和B細胞的活化。與非活化對照淋巴細胞相比，活化的淋巴細胞示出大于2倍的熒光強度增長。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫特征表面包括非抗原性免疫特征表面。
“被動給藥”是指通過指導，或安排受試者以會導致受試者暴露于該抗原的方式引導他們自身，從而給予一種物質(例如一種抗原)。例如，在一個實施方案中，通過指導受試者允許他自身或她自身暴露于存在于環(huán)境中的變應原(即“環(huán)境變應原”)，發(fā)生一種變應原的被動給藥?！八帉W上可接受的賦形劑”是指一種藥理學上無活性的物質，該物質被添加到一種本發(fā)明的組合物中來進一步協(xié)助該組合物的給藥。沒有限制，藥學上可接受的賦形劑的實例包括碳酸鈣、磷酸鈣、不同的稀釋劑、不同的糖和各種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油以及聚乙二醇?！笆茉囌摺笔侵敢环N動物，包括哺乳動物例如人和靈長目動物；鳥；家養(yǎng)動物或家畜(例如貓、狗、綿羊、山羊、牛、馬和豬)；實驗動物(例如小鼠、大鼠和豚鼠)；魚；以及類似動物。“一種或多種合成納米載體”是指在自然界不能找到的并且至少擁有在大小上小于或等于5微米的尺寸的離散物。白蛋白納米顆粒清楚地包括在合成納米載體內。
合成納米載體可以是，但并不局限于，一種或多種脂基納米顆粒、聚合物納米顆粒、金屬納米顆粒、表面活性劑基納米顆粒、樹枝狀化合物、巴基球、納米線、病毒狀顆粒、肽或蛋白基顆粒(例如白蛋白納米顆粒)和/或使用一種納米材料的組合(例如脂聚合物納米顆粒)開發(fā)的納米顆粒。合成納米載體可以具有多種不同的形狀，包括但并不局限于球形、立方形、錐形、橢圓形、圓柱形、環(huán)形、以及類似形狀。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體包括一個或多個表面?？梢赃m合用于實踐本發(fā)明的示例性的合成納米載體包括(I)在Gref等人的美國專利5，543，158中披露的生物可降解的納米顆粒，(2) Saltzman等人的公開美國專利申請20060002852中的聚合物納米顆粒,或(4)DeSimone等人的公開美國專利申請20090028910中的壓印構建的納米顆粒。根據(jù)本發(fā)明的合成納米顆粒具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括具有使補體活化的羥基的表面，或者可替代地包括基本由不是使補體活化的羥基的部分組成的表面。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米顆粒具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括實質上使補體活化的表面，或者可替代地包括基本由不實質上活化補體的部分組成的表面。在更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米顆粒具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括使補體活化的表面,或者可替代地包括基本由不使補體活化的部分組成的表面?！癟細胞抗原”是指通過T細胞中的免疫應答來識別的并且觸發(fā)T細胞中的免疫應答的任何抗原(例如，經(jīng)由遞呈結合到I類或II類主要組織相容性復合物分子(MHC)上的、或者結合到CDl復合物上的抗原或它的一部分,通過在T細胞或NKT細胞上的T細胞受體來特異性識別的抗原)。在一些實施方案中，是T細胞抗原的抗原也是B細胞抗原。在其他實施方案中，T細胞抗原并不也是B細胞抗原。T細胞抗原一般是蛋白或多肽。T細胞抗原可以是刺激⑶8+T細胞應答、⑶4+T細胞應答、或二者的抗原。因此，在一些實施方案中，這些納米載體可以有效刺激這兩種類型的應答。在一些實施方案中，T細胞抗原是“通用”T細胞抗原(即通過刺激輔助性T細胞，可以產(chǎn)生對無關的B細胞抗原的增強的應答的抗原)。在實施方案中，通用T細胞抗原可以包括一種或多種衍生自破傷風類毒素、愛潑斯 坦-巴爾病毒、流感病毒、或Padre肽的肽?！癟hl偏向性免疫刺激劑”是指(I)使來自特征在于Th2_型細胞因子應答的免疫應答偏向至特征在于Thl-型細胞因子應答的應答，或(2)放大欠佳的和/或無效的Thl-型應答的免疫刺激劑。在某些實施方案中，Thl偏向性免疫刺激劑可以是白細胞介素、干擾素、細胞因子等。在特定的實施方案中，Thl偏向性免疫刺激劑可以是對于Toll樣受體(TLR)的天然的或合成的激動劑(例如 TLR-I、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9、TLR-10、以及TLR-Il激動劑)。在特定的實施方案中，合成納米載體合并了對于to 11樣受體(TLRs) 7&8的激動劑("TLR 7/8激動劑”)。它的效用是Tomai等人的美國專利6，696，076中披露的TLR 7/8激動劑化合物，包括但是不局限于咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺。優(yōu)選的Thl偏向性免疫刺激劑包括咪喹莫特和R848。在特定的實施方案中，合成納米載體合并了對于Toll樣受體(TLR)_9的配體，例如包括CpGs的免疫刺激DNA分子，它誘導類型I干擾素分泌，并且刺激T細胞和B細胞活化，導致增加的抗體產(chǎn)生和細胞毒性的T細胞應答(Krieg等人，CpG motifsin bacterial DNA trigger direct B cell activation. Nature. 1995. 374 :546-549 ；Chu 等人，CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on T helper
I(Thl)immunity. J. Exp. Med. 1997. 186 1623-1631 ；Lipford 等人，CpG-containingsynthetic oligonucleotides promote B and cytotoxic T cell responses to proteinantigen a new class of vaccine adjuvants. Eur. J. Immunol. 1997. 27 :2340-2344 ；Roman 等人，Immunostimulatory DNA sequences function as T helper-l-promotingadjuvants. Nat. Med. 1997. 3 :849-854 ；Davis 等人，CpG DNA is a potent enhancerof specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis B surfaceantigen. J. Immunol. 1998. 160 :870-876 ;Lipford 等人，Bacterial DNA as immune cellactivator. Trends Microbiol. 1998. 6 :496-500)。在實施方案中，CpGs 可以包括旨在增強穩(wěn)定性的修飾(例如硫代磷酸酯鍵)，或其他修飾(例如修飾的堿基)。參見，例如美國專利5，663，153.6, 194，388.7, 262，286、或7，276，489。在某些實施方案中，為了剌激免疫性而不是耐受性，合成納米載體合并了促進DC成熟(對于引發(fā)幼稚T細胞而言是需要的)以及細胞因子(例如類型I干擾素，它促進抗體應答和抗病毒免疫性)的產(chǎn)生的免疫刺激齊U。在一些實施方案中，免疫刺激劑可以是TLR-4激動劑(例如細菌脂多糖(LPS)、VSV-G、和/或HMGB-1)。在一些實施方案中，免疫刺激劑是細胞因子，它是由細胞釋放的小的蛋白或生物因子(在5kD-20kD的范圍內)，并且具有關于細胞-細胞相互作用、通訊以及其他細胞的行為的特定效應。在一些實施方案中，免疫刺激劑可以是從壞死細胞釋放的促炎刺激物(例如尿酸鹽晶體)。在一些實施方案中，免疫刺激劑可以是補體級聯(lián)的活化組分(例如⑶21、⑶35、等)。在一些實施方案中，免疫刺激劑可以是免疫復合物的活化組分。這些免疫刺激劑還包括補體受體激動劑(例如結合到⑶21或⑶35上的分子)。在一些實施方案中，該補體受體激動劑誘導了納米載體的內源補體調理素作用。免疫刺激劑還包括細胞因子受體激動劑(例如細胞因子)。在一些實施方案中，該細胞因子受體激動劑是小分子、抗體、融合蛋白、或適體。在實施方案中，免疫刺激劑還可以包括免疫刺激RNA分子(例如但并不局限于dsRNA 或聚 I: C (TLR3 刺激劑)、和 / 或在 F. Heil 等人，“Species-Specific Recognitionof Single-Stranded RNA via Toll-like Receptor 7 and 8” Science 303(5663)，1526-1529 (2004) ； J. Vollmer 等人，“Immune modulation by chemically modifiedribonucleosides and oligoribonucIeotidesWO 2008033432 A2 ；A. Forsbach 等人，“Immunostimulatory oligoribonucIeotides containing specific sequencemotif (s) and targeting the Toll-like receptor 8 pathwayWO 2007062107A2 ；E.Uhlmann 等人，“Modified oligoribonucIeotide analogs with enhancedimmunostimulatory activity” U. S. Pat. Appl. Publ. US 2006241076 ；G. Lipford 等人，“Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides and use for treating cancer andinfections” WO 2005097993 A2 ;G. Lipford 等人，“Immunostimulatory G, U-containingoligoribonucleotides, compositions, and screening methods^ WO 2003086280 A2 中披露的那些。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了包括與一種或多種佐劑一起配制的疫苗納米載體的藥物組合物。如在此使用的那樣，術語“佐劑”是指并不構成特異性抗原，但是促進對給予的抗原的免疫應答的試劑。在一些實施方案中，疫苗納米載體是與一種或多種佐劑(例如凝膠型佐劑(例如氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣、等)、微生物佐劑(例如包括CpG基序的免疫調節(jié)DNA序列；免疫刺激RNA分子；內毒素例如單磷酰基脂A ;外毒素例如霍亂毒素、大腸桿菌不耐熱毒素、以及百日咳毒素；胞壁酰二肽、等)；油乳液和乳化劑基佐劑(例如弗氏佐劑、MF59[Novartis]、SAF、等)；微粒佐劑(例如脂質體、生物可降解微球、皂苷等)；合成佐劑(例如非離子嵌段共聚物、胞壁酰肽類似物、聚磷腈、合成多核苷酸、等)，和/或它們的組合)一起配制的?！安煌诮o藥的時間”或“不同于給予該組合物的時間的時間”是指或者在給藥前或者在給藥后多于約30秒、優(yōu)選或者在給藥前或者在給藥后多于約I分鐘、更優(yōu)選或者在給藥前或者在給藥后多于5分鐘、仍更優(yōu)選或者在給藥前或者在給藥后多于I天、仍更優(yōu)選 或者在給藥前或者在給藥后多于2天、仍更優(yōu)選或者在給藥前或者在給藥后多于I周、并且仍更優(yōu)選或者在給藥前或者在給藥后多于I個月的時間。
“腫瘤抗原”是指在其中存在腫瘤的受試者中誘導特異性免疫應答的腫瘤的細胞表面抗原。在一個實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的免疫特征表面并不包括腫瘤抗原?！拜d體效應”是指對于合成納米載體、而不是對于與治療該癥狀有關的合成納米載體上的抗原建立不需要的免疫應答。當該合成納米載體的材料由于它的化學組成或結構從而能夠刺激強體液免疫反應時，可以發(fā)生載體效應。在一種情況下，誘導一種載體效應的合成載體將用除了與治療該癥狀有關的抗原外的抗原“淹沒”免疫系統(tǒng)，結果是對相關抗原的弱應答。在另一種情況下，所不需要的免疫應答是對納米載體自身的強應答，這樣使得對于在相同的受試者中的隨后使用，該納米載體是無效的，并且可能甚至是危險的。因此，在某些實施方案中，并不是主要或基本從引起載體效應的材料(例如像病毒外殼蛋白)形成合成納米載體的一個或多個表面。然而應當理解，強免疫原性材料(例如病毒外殼蛋白)可以用于制造本發(fā)明的合成納米載體，并且在其中可以避免載體效應的情況下，然后可以修飾這些合成納米載體自身來減少或消除載體效應。例如載體效應誘導材料(例如用于病毒狀顆粒的病毒外殼蛋白)可以被安置在遠離該合成納米載體的表面的地方，或者用改變免疫的分子(例如聚乙二醇)包被，用來使納米載體的實際表面免疫原性更低，并且因此避免 會另外發(fā)生的載體效應。C.本發(fā)明的免疫納米療法的組合物根據(jù)本發(fā)明，可以使用寬泛種類的合成納米載體。在一些實施方案中，合成納米載體是球體或扁球體。在一些實施方案中，合成納米載體是扁平的或盤狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是立方體或立方形的。在一些實施方案中，合成納米載體是卵形或橢圓形的。在一些實施方案中，合成納米載體是圓柱體、椎體、或錐形。通常希望使用一群在大小、形狀、和/或構成方面較一致的合成納米載體，這樣每一合成納米載體具有類似特性。例如，至少80 %、至少90 %、或至少95 %的合成納米載體可以具有落在5%、10%或20%的平均直徑或平均尺寸內的最小尺寸或最大尺寸。在一些實施方案中，一群合成納米載體可以關于大小、形狀、和/或構成是不均勻的。合成納米載體可以是實心的或空心的，并且可以包括一個或多個層。在一些實施方案中，相對于其他一層或多層，每一層具有獨特的構成和獨特的特性。為了給出但是一個實例，合成納米載體可以具有一個核/殼結構，其中核是一層(例如一個聚合物核)并且殼是一個第二層(例如一個脂質雙分子層或單分子層)。合成納米載體可以包括多個不同的層。在一些實施方案中，合成納米載體可以任選地包括一種或多種脂。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種脂質體。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質雙分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質單分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種微膠粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個核，該核包括被一個脂質層(例如脂質雙分子層、脂質單分子層、等)環(huán)繞的聚合物基質。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括被一個脂質層(例如脂質雙分子層、脂質單分子層、等)環(huán)繞的非聚合物核(例如金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒性顆粒、蛋白、核酸、碳水化合物、等)。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種或多種聚合物基質。在一些實施方案中，可以由包被層(例如脂質體、脂質單分子層、微膠粒、等)環(huán)繞這樣一種聚合物基質。在一些實施方案中，合成納米載體的不同元件可以與該聚合物基質偶合。在一些實施方案中，一個免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激劑可以與聚合物基質共價締合。在一些實施方案中，由一個連接物介導共價締合作用。在一些實施方案中，一個免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激劑可以與聚合物基質非共價締合。例如，在一些實施方案中，一個免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激劑可以被封裝在聚合物基質內、被聚合物基質環(huán)繞、和/或被分散遍及聚合物基質?？商娲鼗蝾~外地，一個免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激劑可以通過疏水性相互作用、電荷相互作用、范德華力、等與聚合物基質締合。由此在藥物遞送領域中，用于從其形成聚合物基質的寬泛種類的聚合物和方法是已知的。通常，一種聚合物基質包括一種或多種聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包括兩種或更多種單體的共聚物。在序列方面，共聚物可以是隨機的、嵌段的，或者包括隨機序列和嵌段序列的組合。典型地，根據(jù)本發(fā)明的聚合物是有機聚合物。 適合用于本發(fā)明的聚合物的實例包括，但并不局限于聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1,3- 二噁烷-2酮))、聚酐(例如聚(癸二酸酐))、聚羥基酸(例如聚(P -羥基烷酸酯))、聚丙基延胡索酸酯(polypropylfumerate)、聚己內酯、聚酰胺(例如聚己內酰胺)、聚縮醒、聚醚、聚酯(例如聚丙交酯、聚乙二醇)、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、以及聚胺。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物包括在21C.F.R. § 177. 2600下已經(jīng)由美國食品與藥品管理局(FDA)批準用于人的聚合物，包括但并不局限于聚酯(例如聚乳酸、聚(乳酸乙醇酸共聚物)、聚己內酯、聚戊內酯、聚(1，3_二噁烷-2酮))；聚酐(例如聚(癸二酸酐))；聚醚(例如聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；以及聚氰基丙烯酸酯。在一些實施方案中，聚合物可以是親水的。例如，聚合物可以包括陰離子基團(例如磷酸根、硫酸根、羧酸根)；陽離子基團(例如季胺基團)；或極性基團(例如羥基、硫醇基團、胺基團)。在一些實施方案中，包括親水的聚合物基質的合成納米載體在合成納米載體內產(chǎn)生親水環(huán)境。在一些實施方案中，聚合物可以是疏水的。在一些實施方案中，包括疏水的聚合物基質的合成納米載體在合成納米載體內產(chǎn)生疏水環(huán)境。在合成納米載體內，選擇親水性或疏水性聚合物可以影響要合并(例如偶合)材料的性質。在一些實施方案中，聚合物可以用一個或多個部分和/或官能團改性。根據(jù)本發(fā)明，可以使用多個部分或官能團。在一些實施方案中，可以用聚乙二醇(PEG)、用碳水化合物、和/或用衍生自多糖類的非環(huán)狀聚縮醒來將聚合物(Papisov, 2001, ACS SymposiumSeries, 786 :301)改性。在一些實施方案中，可以用脂類或脂肪酸基團改性聚合物。在一些實施方案中，脂肪酸基團可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸、或廿四烷酸中的一種或多種。在一些實施方案中，脂肪酸基團可以是棕櫚烯酸、油酸、異油酸、亞麻酸、a-亞麻酸、Y-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、或芥酸中的一種或多種。在一些實施方案中，聚合物可以是聚酯，包括共聚物，這些共聚物包括乳酸和乙醇酸單元(例如聚(乳酸乙醇酸共聚物)和聚(聚丙交酯乙交酯共聚物))，在此統(tǒng)稱為“PLGA”；以及包括乙醇酸單元的均聚物，在此稱為“PGA”，以及乳酸單元(例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯、以及聚-D，L-丙交酯)，在此統(tǒng)稱為“PLA”。在一些實施方案中，示例性的聚酯包括，例如多羥基酸；PEG共聚物和丙交酯與乙交酯的共聚物(例如PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物)，以及它們的衍生物)。在一些實施方案中，聚酯包括，例如聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己內酯)、聚(己內酯)-PEG共聚物、聚賴氨酸、聚賴氨酸-PEG共聚物、聚(亞乙基亞胺)、聚(亞乙基亞胺)-PEG共聚物、聚(L-丙交酯賴氨酸共聚物)、聚(絲氨酸酯)、聚(4-羥基-L-脯氨酸酯)、聚[a - (4-氨基丁基)-L-乙醇酸]、以及它們的衍生物。在一些實施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是一種生物相容的并且生物可降解的乳酸和乙醇酸的共聚物，并且多種形式的PLGA特征在于乳酸乙醇酸的比率。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸、或D，L-乳酸。可以通過改變乳酸乙醇酸的比率調整PLGA的降解速 率。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，將使用的PLGA特征在于約85 15、約75 25、約60 40、約50 50、約40 60、約25 75、或者約15 85約的乳酸乙醇酸比率。在一些實施方案中，聚合物可以是一種或多種丙烯酸聚合物。在某些實施方案中，丙烯酸聚合物包括，例如丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物、聚腈基丙烯酸酯、以及包括一種或多種以上聚合物的組合。該丙烯酸聚合物可以包括具有低含量的季銨基團的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的充分聚合的共聚物。在一些實施方案中，聚合物可以是陽離子聚合物。通常，陽離子聚合物能夠縮合和/或保護核酸(例如DNA、RNA、或它們的衍生物)帶負電的鏈。含有胺的聚合物(例如聚(賴氨酸)(Zauner 等人，I"8, Adv. Drug Del. Rev. , 3O :97 ;以及 Kabanov 等人，I995，Bioconjugate Chem. ,6 :7)、聚(亞乙基亞胺)(PEI ;Boussif■等人，1995,Proc. Natl. Acad.Sci.，USA, 1995，92 :7297)、以及聚(酰胺基胺)樹枝狀化合物(Kukowska-Latallo等人，1996, Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 93 :4897 ；Tang 等人，1996, Bioconjugate Chem.，7 :703 ；以及Haensler等人，1993,Bioconjugate Chem. ,4 :372))在生理pH下是帶正電的，在多種細胞系中與核酸形成離子對，并且介導轉染。在一些實施方案中，聚合物可以是帶有陽離子側鏈的可降解的聚酯(Putnam等A 1999, Macromolecules, 32 :3658 ；Barrera 等人，1993, J. Am. Chem. Soc. , 115 11010 ；Kwon 等人，1989, Macromolecules, 22 :3250 ；Lim 等人，1999, J. Am. Chem. Soc.，121 :5633 ；以及Zhou等人，1990, Macromolecules, 23 :3399)。這些聚合物的實例包括聚(L-丙交酯 L-賴氨酸共聚物)(Barrera 等人，1993, J. Am. Chem. Soc. , 115 :11010)、聚(絲氨酸酯)(Zhou 等人，1990, Macromolecules, 23 :3399)、聚(4-輕基-L-腦氨酸酯)(Putnam 等人,1999，Macromolecules, 32 :3658 ;以及 Lim 等人，1999，J. Am. Chem. Soc.，121 :5633)、以及聚(4-輕基-L-月甫氨酸酉旨)(Putnam 等人，1999,Macromolecules, 32 :3658 ；以及 Lim 等人，1999, J. Am. Chem. Soc.，121 :5633)。
在本領域，這些和其他聚合物的特性以及用于制備它們的方法是熟知的(參見，例如美國專利 6，123，727 ;5，804，178 ;5，770，417 ;5，736，372 ;5，716，404 ;6，095，148 ；5，837，752 ;5，902，599 ;5，696，175 ;5，514，378 ;5，512，600 ;5，399，665 ;5，019，379 ；5，010，167 ;4，806，621 ;4，638，045 ;以及 4，946，929 ；ffang 等人，2001, J. Am. Chem. Soc.，123 :9480 ；Lim 等人，2001, J. Am. Chem. Soc. , 123 :2460 ；Langer, 2000, Acc. Chem. Res.，33 94 ；Langer, 1999, J. Control. Release,62 :7 ；以及 Uhrich 等人，1999, Chem. Rev. ,99 3181) o 更一般地，在 Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Aminesand Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press,1980 中；在 Principles ofPolymerization by Odian,John Wiley & Sons,Fourth Edition,2004中；在ContemporaryPolymer Chemistry by Allcock et al.,Prentice-Hall, 1981中；^Deming et al. ,1997,Nature, 390 :386 中；以及在美國專利 6，506，577,6, 632，922,6, 686，446、以及 6，818，732中說明了用于合成某些合適的聚合物的多種方法。在一些實施方案中，聚合物可以是直鏈的或分支的聚合物。在一些實施方案中，聚合物可以是樹枝狀化合物。在一些實施方案中，聚合物可以是實質上彼此交聯(lián)的。在一些實施方案中，聚合物可以實質上不交聯(lián)。在一些實施方案中，聚合物可以根據(jù)本發(fā)明進行使 用而不經(jīng)過交聯(lián)步驟。進一步理解，本發(fā)明的合成納米載體可以包括嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物、和/或任何以上及其他聚合物的加合物。本領域的那些技術人員將認識到，在此列出的聚合物代表根據(jù)本發(fā)明可以使用的聚合物的示例性的、而不是全面的清單。在一些實施方案中，合成納米載體可以不包括聚合組分。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、等。在一些實施方案中，非聚合物的合成納米載體是非聚合組分的聚集體(例如金屬原子(例如金原子)的聚集體)。在一些實施方案中，合成納米載體可以任選地包括一種或多種兩親實體。在一些實施方案中，兩親實體可以促進產(chǎn)生具有增加的穩(wěn)定性、改進的均勻性、或增加的粘度的合成納米載體。在一些實施方案中，兩親實體可以與脂質膜(例如脂質雙分子層、脂質單分子層、等)的內表面有關。根據(jù)本發(fā)明，在本領域已知的很多兩親實體可以適合用于制造合成納米載體。這樣的兩親實體包括，但并不局限于，磷酸甘油酯；磷脂酰膽堿；二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC) ;二油烯基磷脂?；掖及?DOPE) ;二油烯基氧丙基三乙基銨(DOTMA) ;二油酰基磷脂酰膽堿；膽固醇；膽固醇酯；二酰基甘油；二?；视顽晁狨?；二磷脂酰基甘油(DPPG);十六烷醇；脂肪醇(例如聚乙二醇(PEG));聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸(例如棕櫚酸或油酸)；脂肪酸；脂肪酸甘油單酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脫水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)甘氨膽酸酯；脫水山梨糖醇單月桂酸酯(Span 20);聚山梨醇酯20 (Tween 20);聚山梨醇酯60 (Tween 60);聚山梨醇酯65 (Tween 65);聚山梨醇酯80 (Tween 80);聚山梨醇酯85 (Tween 85);聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；poloxomer ;脫水山梨糖醇脂肪酸酯(例如脫水山梨糖醇三油酸酯)；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；雙十六烷基磷酸酯；二棕櫚酰磷脂酰甘油；硬脂酰胺；十二烷胺；十六烷胺；乙?；貦八狨?；蓖麻油酸甘油酯；十八酸十六烷基酯；肉豆蘧酸異丙酯；四丁酚醛(tyloxapol);聚(乙二醇)5000磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑特性的合成的和/或天然的洗滌劑；脫氧膽酸酯；環(huán)糊精；離液序列高的鹽；離子對試劑；以及它們的組合。兩親實體組分可以是不同兩親實體的混合物。本領域的那些技術人員將認識到，這是具有表面活性劑活性的物質的示例性的、而不是全面的清單。在產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明將被使用的合成納米載體中可以使用任何兩親實體。 在一些實施方案中，合成納米載體可以任選地包括一種或多種碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生的天然碳水化合物。在某些實施方案中，碳水化合物包括單糖或二糖，包括但并不局限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖(cellbiose)、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺、以及神經(jīng)氨酸。在某些實施方案中，碳水化合物是一種多糖，包括但并不局限于支鏈淀粉、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥基纖維素(HC)、甲基纖維素(MC)、右旋糖酐、環(huán)葡聚糖、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、角叉菜聚糖、多聚糖(glycon)、直鏈淀粉、殼聚糖、N，0-羧甲基殼聚糖、褐藻膠和海藻酸、淀粉、甲殼質、肝素、魔芋、葡萄甘露聚糖(gluc0_annan)、石臍素、肝素、透明質酸、凝膠多糖、以及黃原膠。在某些實施方案中，該碳水化合物是一種糖醇，包括但并不局限于甘露醇、山梨醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、以及乳糖醇。在一個實施方案中，本發(fā)明的合成納米載體包括聚合物基質、免疫特征表面，該免疫特征表面包括煙堿、以及包括R848的Thl偏向性免疫刺激劑，其中通過封裝在合成納米載體內的方式，該R848偶合到合成納米載體上。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包括以上提到的合成納米載體，與按適合給予受試者的劑型存在的藥學上可接受的賦形劑結合在一起。在以上實施方案中，這些合成納米載體是球形的，具有全部平均為250nm的最大尺寸、最小尺寸、和直徑。在另一個實施方案中，本發(fā)明的合成納米載體包括聚合物基質、包括通過吸附偶合到合成納米載體表面上的抗CDllc抗體的靶向部分、以及包括R848的Thl偏向性免疫刺激劑，其中通過封裝在合成納米載體內的方式，該R848偶合到合成納米載體上。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包括以上提到的合成納米載體，與按適合給予受試者的劑型存在的藥學上可接受的賦形劑結合在一起。在以上實施方案中，這些合成納米載體是圓柱形的，具有300nm的最大尺寸和150nm的最小尺寸。根據(jù)本發(fā)明的組合物包括與藥學上可接受的賦形劑結合的本發(fā)明的合成納米載體?？梢允褂贸Ｒ?guī)藥學制造和配料技術制造該組合物，以達到有用的劑型。在一個實施方案中，本發(fā)明的合成納米載體懸浮在無菌鹽溶液中，用于與防腐劑一起注射。D.制造和使用本發(fā)明的免疫納米療法的方法可以使用寬泛種類的本領域已知的方法制備合成納米載體。例如，可以通過如納米沉淀、使用流體通道的流動聚焦、噴霧干燥、單和雙乳液溶劑蒸發(fā)、溶劑萃取、相分離、研磨、微乳液步驟、微型品制造、納米制造、犧牲層、簡單和復雜凝聚法的方法，以及本領域的那些普通技術人員熟知的其他方法形成合成納米載體?？商娲鼗蝾~外地，已經(jīng)說明了用于單分散半導體，傳導性的、磁性的、有機的、以及其他納米材料的水性和有機溶劑合成(Pellegrino 等人，2005, Small, I 48 ；Murray 等人，2000, Ann. Rev. Mat. Sci.，30 :545 ；以及Trindade等人，2001, Chem. Mat. , 13 :3843)。在文獻中已經(jīng)說明了附加方法(參見，例如 Doubrow, Ed. , “Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,，，CRCPress, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz 等人，1987, J. Control. Release, 5 :13 ；Mathiowitz等人，1987, Reactive Polymers, 6 :275 ；以及 Mathiowitz 等人，1988, J. Appl. PolymerSci.，35 755,以及還有美國專利 5578325 和 6007845)。在某些實施方案中，通過納米沉淀工藝或噴霧干燥來制備合成納米載體?？梢愿淖冊谥苽浜铣杉{米載體中使用的條件以產(chǎn)生具有希望的大小和特性(例如疏水性、親水性、外部形態(tài)學、“粘性”、形狀、等)的顆粒。制備合成納米載體的方法和使用的條件(例如溶劑、溫度、濃度、空氣流速、等)可以取決于有待偶合到合成納米載體上的材料和/或該聚合物基質的構成。如果通過任何以上方法制備的顆粒具有在希望的范圍外的大小范圍，那么可以按大小分類這些顆粒，例如使用一個篩。可以按多種不同的方式達到偶合，并且可以是共價的或非共價的。這些偶合可 以安排在一個表面上或安排在本發(fā)明的合成納米載體內。本發(fā)明的合成納米載體的元件(例如免疫特征表面所包括的部分、靶向部分、聚合物基質、以及類似物質)可以直接彼此偶合，例如通過一個或多個共價鍵，或者可以借助一個或多個連接物進行偶合?？梢詮腟altzman等人的公開美國專利申請2006/0002852、DeSimone等人的公開美國專利申請2009/0028910、或Murthy等人的公開國際專利申請W0/2008/127532 Al改變官能化合成納米載體的附加方法。根據(jù)本發(fā)明，可以使用任何合適的連接物。連接物可以用于形成酰胺鍵、酯鍵、二硫鍵、等。連接物可以含有碳原子或雜原子(例如氮、氧、硫、等)。在一些實施方案中，連接物是脂肪族的或雜脂肪族的連接物。在一些實施方案中，該連接物是聚烷基連接物。在某些實施方案中，該連接物是聚醚連接物。在某些實施方案中，該連接物是聚乙烯連接物。在某些特定實施方案中，該連接物是聚乙二醇(PEG)連接物。在一些實施方案中，該連接物是可切割的連接物。為了給出但是一些實例，可切割的連接物包括蛋白酶可切割的肽連接物、核酸酶敏感的核酸連接物、脂肪酶敏感的脂質連接物、糖苷酶敏感的碳水化合物連接物、PH敏感的連接物、低氧敏感的連接物、可以光切割的連接物、不耐熱的連接物、可以酶切割的連接物(例如可以酯酶切割的連接物)、超聲波敏感的連接物、可以X射線切割的連接物、等。在一些實施方案中，該連接物不是可切割的連接物。多種方法可以用于偶合連接物或合成納米載體的其他元件與該合成納米載體。一般的策略包括被動吸附(例如經(jīng)由靜電相互作用)、多價螯合作用、特異性結合對的成員之間的高親和力非共價結合、共價鍵形成、等(Gao等,2005, Curr. Op. Biotechnol. ,16 :63)。在一些實施方案中，可以使用點擊化學來締合材料與合成納米載體?？梢圆捎梅枪矁r特異結合相互作用。例如，可以用生物素官能化一種顆粒、亦或一種生物分子，該生物素具有其他被鏈霉親和素官能化的物質。這兩部分彼此非共價特異性結合并且具有高親和力，因此締合顆粒和生物分子?？梢灶愃频厥褂闷渌禺愋越Y合對?？商娲兀M氨酸標記的生物分子可以與結合鎳-次氮基三乙酸(Ni-NTA)的顆粒締合。對于關于偶合的額外綜合信息，參見期刊Bioconjugate Chemistry,由American Chemical Society 出版，Columbus OH, PO Box 3337, Columbus, OH,43210 ；“Cross-Linking,，，Pierce Chemical Technical Library,在 Pierce 網(wǎng)址和 1994-95Pierce Catalog中的初次出版中可得，以及其中引用的參考文獻；Wong SS, Chemistry ofProtein Conjugation and Cross-linking, CRC Press Publishers, Boca Raton,1991 ;以及 Hermanson, G. T. , Bioconjugate Techniques, Academic Press, Inc. , San Diego,1996。可替代地或額外地，合成納米載體可以被偶合到免疫特征表面、靶向部分、免疫刺激劑、和/或其他直接或間接經(jīng)由非共價相互作用的元件。非共價相互作用包括但并不局限于電荷相互作用、親和相互作用、金屬配位、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用、和/或它們的組合。這些偶合可以安排在一個表面上或安排在本發(fā)明的納米載體內。已理解可以按任何合適的方式制造這些本發(fā)明的組合物，并且本發(fā)明絕不局限于可以使用在此說明的方法生產(chǎn)的組合物。選擇適當方法可以要求關注有關的具體部分的特性。 在一些實施方案中，在無菌條件下制造本發(fā)明的合成納米載體。這可以確保生成的組合物是無菌的并且非傳染性的，因此在與非無菌組合物比較時改進了安全性。這提供了有價值的安全措施，特別是當接受合成納米載體的受試者具有免疫缺陷、遭受感染，和/或對感染敏感時。在一些實施方案中，本發(fā)明的合成納米載體可以被凍干并儲存在懸浮液中、或作為凍干的粉末，這取決于針對不失活的延長時段的配制策略?？梢酝ㄟ^多種給藥途徑給予本發(fā)明的組合物，包括但并不局限于腸胃外的(例如皮下、肌內、靜脈內、或真皮內)；口服的、經(jīng)鼻的、經(jīng)粘膜的、直腸的、眼的、或經(jīng)皮的給藥。使用本發(fā)明的組合物可以治療的適應癥包括但并不局限于那些適應癥，在這些適應癥中從Th2模式細胞因子釋放偏向Thl模式細胞因子釋放是所希望的。這樣的適應癥包括特應性癥狀，例如但并不局限于變態(tài)反應癥、變應性哮喘、或特應性皮炎；哮喘；慢性阻塞性肺病(C0PD，例如肺氣腫或慢性支氣管炎)；以及由于慢性傳染物(例如慢性利什曼病、念珠菌病或血吸蟲病)的慢性感染，以及由原形體、鼠弓形體、分枝桿菌、HIV、HBV、HCV、EBV或CMV、或以上的任何一種、或以上的任何亞類引起的感染。其他使用本發(fā)明的組合物可以治療的適應癥包括但并不局限于其中受試者的Thl應答是欠佳的和/或無效的適應癥?？梢允褂帽景l(fā)明增強受試者的Thl免疫應答。這些適應癥包括不同的癌癥，以及具有缺乏免疫力的或欠佳的免疫性的人群，例如嬰兒、老年人、癌癥病人、接受免疫抑制藥物或輻射的個體、血液透析病人以及具有遺傳的或原發(fā)性免疫機能障礙的那些人。在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明的組合物以與常規(guī)免疫療法不同的方式發(fā)揮作用。在常規(guī)免疫療法中，同時給予抗原和免疫刺激劑。相反，在本發(fā)明的實施方案中，對于它而言希望適應性免疫應答的抗原不被合并到本發(fā)明的組合物中。在優(yōu)選的實施方案中，從本發(fā)明的免疫特征表面排除這樣的抗原，這樣使得免疫特征表面并不包括與治療該癥狀有關的抗原。進一步，在本發(fā)明的實施方案中，給予本發(fā)明的組合物并不進一步包括給予一種與治療該癥狀有關的抗原，其中該抗原可以偶合到納米載體上、亦或不偶合到納米載體上。在某些實施方案中，在不同于給予該組合物的時間，給予對于它而言希望Thl偏向性應答的抗原；其中該抗原的給藥包括被動給藥或主動給藥。
在每一實例中，不希望與給予一種或多種抗原在時間上分開給予的一種或多種免疫刺激劑提供針對給予一種或多種抗原的Thl偏向性應答。E.實例實例I :PLA_R848 結合物向裝備有攪拌棒和冷凝器的雙頸圓底燒瓶添加咪唑喹啉瑞喹莫德(R_848、100mg，3. 18X10_4摩爾)、D/L丙交酯(5. 6gm, 3. 89X10_2摩爾)和無水硫酸鈉(4. Ogm)。在50°C，真空下干燥該燒瓶和內容物8小時。然后用氬氣沖洗該燒瓶并且添加甲苯(IOOmL)。在設定在120°C的油浴中攪拌該反應直至丙交酯已經(jīng)溶解，然后經(jīng)由移液管添加乙基己酸錫(75mg，60UL)。然后在氬氣下持續(xù)加熱16小時。在冷卻以后，添加水(20mL)并且持續(xù)攪拌30分鐘。用添加的甲苯(200mL)稀釋該反應，并且然后用水洗滌(200mL)。然后依次用含有5%濃鹽酸的10%氯化鈉溶液(200mL)洗滌該甲苯溶液，隨后用飽和碳酸氫鈉(200mL)洗滌。TLC(硅石，10%在二氯甲烷中的甲醇)示出該溶液不含有游離的R-848。在硫酸鎂上干燥該溶液，過濾并在真空下蒸發(fā)以給出3. 59克聚乳酸-R-848結合物。在堿中水解一部分聚合物，并且通過HPLC檢查R-848含量。通過與R-848濃度相對HPLC反應的標準曲線比較，確定該聚合物含有4. 5Img R-848每克聚合物。通過GPC確定該聚合物的分子量為約19，000。
實例2 :煙堿-PEG-PLA結合物按以下步驟合成3-煙堿-PEG-PLA聚合物首先，將來自JenKem 的具有3.5KD分子量的單氨基聚(乙二醇)(0. 20gm，5. 7X10—5摩爾)和過量的4-羧基可替寧(0.126gm，5. 7X10—4摩爾)溶解于二甲基甲酰胺(5. OmL)中。攪拌該溶液并且添加二環(huán)己基碳二亞胺(0. 124gm,6. 0X10_4摩爾)。在室溫下攪拌這一溶液過夜。添加水(0. IOmL)并且繼續(xù)攪拌額外的15分鐘。通過過濾除去二環(huán)己基脲的沉淀，并且在真空下蒸發(fā)濾液。在二氯甲烷(4. OmL)中溶解剩余物并且將這一溶液添加到乙醚(IOOmL)中。在冰箱中冷卻該溶液2小時，并且通過過濾分離沉淀的聚合物。在用乙醚洗滌以后，在高真空下干燥該固體白色聚合物。產(chǎn)量為0. 188gm。不經(jīng)進一步純化，將這一聚合物用于下一步。 在氮氣下將該可替寧/PEG聚合物(0. 20gm，5. 7X10_5摩爾)溶解于干四氫呋喃(IOmL)中，并且攪拌該溶液，同時添加在四氫呋喃中的氫化鋁鋰溶液(1.431^的2.0皿，2. 85X10_3摩爾)。添加氫化鋁鋰引起該聚合物沉淀為凝膠狀塊。在緩慢流的氮氣下，加熱該反應至80°C，并且允許四氫呋喃蒸發(fā)。然后在80°C下加熱剩余物2小時。冷卻以后，小心添加水(0. 5mL)。一旦氫釋放已經(jīng)停止，添加在二氯甲烷中的10%甲醇(50mL)，并且攪拌該反應混合物直至該聚合物溶解。通過Celite⑧牌硅藻土(從EMD Inc.可得，如Celite 545，區(qū)域#CX0574-3)過濾這一混合物，并且在真空下蒸干濾液。在二氯甲烷(4. OmL)中溶解剩余物并且將這一溶液緩慢添加到乙醚(IOOmL)中。聚合物分離為白色絮凝固體，并且通過離心分離。在用乙醚洗滌以后，在真空下干燥該固體。產(chǎn)量為0. 129gm。接下來，將PEG/煙堿聚合物(0. 081gm，2. 2X10—5摩爾)、D/L丙交酯(0. 410gm,2. 85X10_3摩爾)和無水硫酸鈉(0. 380gm)加料至一個裝備有攪拌棒和回流冷凝器的IOOmL圓底燒瓶。在55°C，在真空下干燥這些反應物8小時。然后用氬氣冷卻并沖洗該燒瓶并且然后添加干燥的甲苯(10mL)。將該燒瓶置于設定在120°C的油浴中，并且一旦丙交酯已經(jīng)溶解，添加乙基己酸錫(5. 5mg, I. 36X10_5摩爾)。允許該反應在120°C繼續(xù)進行16小時。在冷卻至室溫以后，添加水(15mL)并且持續(xù)攪拌30分鐘。添加二氯甲烷(200mL)，并且在分液漏斗中攪動以后，允許這些相沉降。分離二氯甲烷層，并且在無水硫酸鎂上干燥。在過濾以除去干燥劑以后，在真空下蒸發(fā)濾液以給出作為一種無色泡沫的聚合物。在四氫呋喃(IOmL)中溶解該聚合物，并且在攪拌下將這一溶液緩慢添加到水(150mL)中。通過離心分離沉淀的聚合物，并且在二氯甲烷(IOmL)中溶解該固體。在真空下除去二氯甲烷，并且在真空下干燥剩余物。3-煙堿-PEG-PLA聚合物產(chǎn)量為0. 38gm。實例3 :預言的納米載體配制品-變態(tài)反應癥根據(jù)Gerster等人的美國專利5,389,640的實例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。根據(jù)實例2制備PLA-PEG-煙堿結合物。通過使用D，L-丙交酯(MW =約15KD-18KD)的開環(huán)聚合制備PLA。通過NMR證實PLA結構。從VWR scientific購買聚乙烯醇(Mw= 11KD-31KD, 85 水解)。從 Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street,Torrance CA 90505.區(qū)域#4064565)獲得卵清蛋白肽323-339。這些用于制備以下溶液I 在二氯甲烷中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL 2.在二氯甲烷中的 PLA-PEG-煙堿 @100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。在小管形瓶中結合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在50%振幅聲處理該混合物40秒。向這一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在35%振幅聲處理40秒，形成第二乳液。添加這一乳液至一個含有水(30mL)的燒杯，并且在室溫下攪拌這一混合物2小時以形成納米載體。用水(14mL)稀釋一部分納米載體分散體(I. OmL)，并且在一臺具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra離心過濾設備中，通過離心將其濃縮。在體積約為250 u L時，添加水(15mL)，并且使用該Amicon設備將這些顆粒再一次濃縮至約250 u L0以相同方式，用磷酸鹽緩沖鹽水(pH = 7.5，15mL)進行二次洗滌，并且用磷酸鹽緩沖鹽水稀釋最終濃縮物至總體積為I. OmL0這給出濃度為約2. 7mg/mL的最終納米載體分散體。然后通過肌肉注射，將這些合成納米載體給予受試者。指導該受試者，允許他們自身隨后暴露于環(huán)境變應原，例如豕草花粉。在暴露于環(huán)境變應原后，通過另一次暴露于環(huán)境變應原激發(fā)該受試者。記錄針對環(huán)境變應原激發(fā)的任何產(chǎn)生的Thl-偏向性應答。實例4 :預言的納米載體配制品-變態(tài)反應癥根據(jù)Gerster等人的美國專利5，389，640的實例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。使用生成PLA-C00H(目標MW= 15-18KD)的D，L-丙交酯開環(huán)聚合制備羧基化聚乳酸。通過NMR證實結構。使用甲氧基-PEG(聚乙二醇甲醚,來自Aldrich Chemical的項20509，大約PEG的MW = 2KD)制備PLA-PEG-甲氧基聚合物，甲氧基-PEG用于引發(fā)D，L-丙交酯的開環(huán)聚合(最終聚合物麗目標=18-20KD)。通過NMR證實結構。從BachemAmericas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505.區(qū)域 #4064565)獲得卵清蛋白肽323-339。從VWR scientific購買聚乙烯醇(Mw= 11KD-31KD，85%水解)。這些用于制備以下溶液
I.在二氯甲烷中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL2.在二氯甲烷中的PLA-PEG-甲氧基@100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA-C00H@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。
在小管形瓶中結合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在50%振幅聲處理該混合物40秒。向這一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在35%振幅聲處理40秒，形成第二乳液。添加這一乳液至一個含有水(30mL)的燒杯，并且在室溫下攪拌這一混合物2小時以形成納米載體。用水(14mL)稀釋一部分納米載體分散體(I. OmL)，并且在一臺具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra離心過濾設備中，通過離心將其濃縮。在體積約為250 ii L時，添加水(15mL)，并且使用該Amicon設備將這些顆粒再一次濃縮至約250 u L0以相同方式，用磷酸鹽緩沖鹽水(pH = 6. 5，15mL)進行二次洗滌，并且用磷酸鹽緩沖鹽水(pH = 6. 5)稀釋最終濃縮物至總體積為5. OmL。這給出濃度為約0. 6mg/mL的最終納米載體分散體。向該納米載體分散體添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N’ -乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC，200mg)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS，70m)，并且在室溫培養(yǎng)這一混合物1/2小時。通過離心，用PBS洗滌這些納米載體三次。在最后一次洗滌后，用PBS稀釋這些顆粒至I. OmL的體積，以給出具有3. Omg/mL的大致濃度的NHS-活化納米載體的懸浮液。向這一懸浮液添加抗-⑶Ilc抗體(50 V- Li5 V- g/mL,從Miltenyi Biotec可得的抗-QHlc抗體克隆MJ4-27G12)。在冰箱中培養(yǎng)該懸浮液過夜。通過在PBS中離心，洗滌生成的取代的納米載體三次。在最后一次洗滌后，用PBS稀釋這些顆粒至I. OmL的體積，以給出具有2. 7mg/mL的大致濃度的抗-CD169取代的納米載體的懸浮液。然后通過肌肉注射，將這些合成納米載體給予受試者。指導該受試者，允許他們自身隨后暴露于環(huán)境變應原，例如豕草花粉。在暴露于環(huán)境變應原后，通過另一次暴露于環(huán)境變應原激發(fā)該受試者。記錄針對環(huán)境變應原激發(fā)的任何產(chǎn)生的Thl-偏向性應答。實例5 :預言的納米載體配制品-變態(tài)反應癥根據(jù)如下美國公開專利申請2009/0028910的修改的傳授制備合成的梯形納米載體通過傾倒含有I-羥基環(huán)己基苯基甲酮的PFPE- 二甲基丙烯酸酯(PFPE-DMA)到具有200-nm梯形圖案的硅基質上產(chǎn)生有圖案的全氟聚醚(PFPE)模具。聚(二甲基硅氧烷)模具用于限定該液體PFPE-DMA在希望的區(qū)域內。同時在氮氣吹掃下，該裝置然后經(jīng)受UV光(365nm) 10分鐘。然后從硅母料釋放充分固化的PFPE-DMA模具。分別地，聚(乙二醇)(PEG)二丙烯酸酯(n = 9)與lwt%的光敏引發(fā)劑，I-羥基環(huán)己基苯基甲酮共混。以基于納米載體中總聚合物重量lwt%的量添加瑞喹莫德(R848，根據(jù)Gerster等人的美國專利5，389，640的實例99中提供的合成而合成)，將其添加到這一 PEG- 二丙烯酸酯單體溶液，并且充分混合該組合。通過在一臺干燥器中，經(jīng)由汽相沉積，用三氯(1H，1H，2H，2H-全氟辛基)硅烷處理用“piranha”溶液(I I濃硫酸30%過氧化氫(aq)溶液)清潔的硅晶片20分鐘，產(chǎn)生平的、均勻的、非-潤濕表面。在這以后，然后將50 y L的PEG 二丙烯酸酯/R848/類毒素溶液置于處理的硅晶片上，并且將有圖案的PFPE模具置于它的頂部。然后將該基質置于模制裝置中，并且施用小的壓力以推出過量PEG- 二丙烯酸酯/R848/類毒素溶液。同時在氮氣吹掃下，該整個裝置然后經(jīng)受UV光(365nm)十分鐘。然后從該模具移出這些合成納米載體,并且添加到一個盛有5￥〖％在丙酮中的羰基二咪唑溶液的燒瓶中。輕輕攪拌這些合成納米載體24小時，隨后從該丙酮溶液分離合成納米載體，并且在室溫下懸浮在水中。向這一懸浮液添加過量抗-CDlIc抗體(從Miltenyi Biotec可得的克隆MJ4-27G12)，并且加熱該懸浮液至37攝氏度，并且輕輕攪拌24小時。然后從該懸浮液分離這些標記的合成納米載體。然后通過肌肉注射，將這些合成納米載體給予受試者。指導該受試者，允許他們自身隨后暴露于環(huán)境變應原，例如豕草花粉。在暴露于環(huán)境變應原后，通過另一次暴露于環(huán)境變應原激發(fā)該受試者。記錄針對環(huán)境變應原激發(fā)的任何產(chǎn)生的Thl-偏向性應答。實例6 :預言的納米載體配制品-癌癥根據(jù)Gerster等人的美國專利5，389，640的實例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。通過使用D，L-丙交酯(MW =約15KD-18KD)的開環(huán)聚合制備PLA。通過NMR證實結構。使用甲氧基_PEG(聚乙二醇甲醚，來自Aldrich Chemical的項20509，大約PEG的麗=2KD)制備PLA-PEG-甲氧基聚合物，甲氧基-PEG用于引發(fā)D，L-丙交酯的開環(huán)聚合(最終聚合物MW目標=18-20KD) o通過NMR證實結構。從Bachem Americas Inc. (3132Kashiwa Street, Torrance CA 90505.區(qū)域 #4064565)獲得卵清蛋白肽 323-339。從 VWRscientific購買聚乙烯醇(Mw = 11KD-31KD，85%水解)。這些用于制備以下溶液I.在二氯甲燒中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL2.在二氯甲烷中的PLA-PEG-甲氧基@100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。在小管形瓶中結合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在50%振幅聲處理該混合物40秒。向這一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一臺Branson數(shù)字超聲波儀250在35%振幅聲處理40秒，形成第二乳液。添加這一乳液至一個含有水(30mL)的燒杯，并且在室溫下攪拌這一混合物2小時以形成納米載體。用水(14mL)稀釋一部分納米載體分散體(I. OmL)，并且在一臺具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra離心過濾裝置中，通過離心將其濃縮。在體積約為250 ii L時，添加水(15mL)，并且使用該Amicon裝置將這些顆粒再一次濃縮至約250 u L0以相同方式，用磷酸鹽緩沖鹽水(pH = 7.5，15mL)進行二次洗滌，并且用磷酸鹽緩沖鹽水稀釋最終濃縮物至總體積為I. OmL0這給出濃度為約2. 7mg/mL的最終納米載體分散體。然后通過肌肉注射，將這些合成納米載體給予具有一種實體瘤的受試者。在注射這些納米載體四十八小時以后，受試者暴露于足夠的輻射以引起實體瘤的破裂。記錄產(chǎn)生的任何抗-腫瘤細胞毒性的T-細胞。實例7 :預言的納米載體配制品-慢性利什曼病根據(jù)如下美國公開專利申請20060002852的修改的傳授制備合成納米載體10mg/ml的親和素與在含有2%脫氧膽酸鹽緩沖劑PBS中的10倍過量的NHS-棕櫚酸反應。簡短地聲處理該混合物，并且在37攝氏度輕輕混合12小時。為了除去過量脂肪酸和水解的酯，針對含有0. 15%脫氧膽酸鹽的PBS透析反應物。使用修改的雙乳液法用于制備脂肪酸PLGA顆粒。在這一方法中，在IOOii L的PBS中，以基于納米載體中總聚合物重量lwt%的量添加瑞喹莫德(R848，根據(jù)Gerster等人的美國專利5，389，640的實例99中提供的合成而合成)，將其滴加到渦動的PLGA溶液(在2ml MeCl2中IOOmg PLGA)中。然后在冰上，以10-秒鐘間隔聲處理這一混合物三次。這時，緩慢添加4ml的親和素-棕櫚酸酯/PVA混合物(在2ml的5 % PVA中的2ml親和素-棕櫚酸酯)到PLGA溶液中。然后在冰上，以10-秒鐘間隔聲處理這一混合物三次。在聲處理以后，滴加該材料到攪拌中的IOOml的0. 3% PVA中。在恒定的室溫下，這一混合物經(jīng)受有力攪拌4小時，以蒸發(fā)二氯甲烷。然后通過以12，OOOg的速度離心15分鐘，接下來用去離子水洗滌三次，純化生成物乳液。按以下方法制備生物素?；目?CDllc抗體。剛好在使用前，以lmg/ml的濃度 將生物素-NHS溶解在DMSO中。以1/10的稀釋，添加抗-CDllc抗體(從Miltenyi Biotec可得的克隆MJ4-27G12)到該溶液中，并且在用于生物素-NHS的pH7. 5-8. 5的條件下，在冰上培養(yǎng)30分鐘，或者在室溫培養(yǎng)2小時。PBS或HEPES可以用作緩沖劑。用Tris猝滅該反應。然后在室溫下，在水中懸浮生成的合成納米載體，并且添加過量的生物素?；目?⑶169抗體(50 u Li5 u g/mL,如以上說明制備)至該懸浮液。加熱該懸浮液至37攝氏度，并且輕輕攪拌24小時。然后從該懸浮液分離這些標記的合成納米載體。然后通過肌肉注射，將這些合成納米載體給予患有慢性利什曼病的受試者，該病的特征在于細胞因子表達的Th2_偏向性模式。記錄產(chǎn)生的任何適當?shù)目贵w。實例8 :使用具有R848的納米載體治療哮喘含有R848的合成納米載體用于確定含有R848的納米載體是否可以用于將哮喘應答從Th2表型改性為Thl表型。在第0天，用卵清蛋白預先致敏小鼠(BALB/c ;每組5只小鼠)，以及在第14天，向腹膜內地(i.p.)用在200 ii L PBS中的20iig卵清蛋白和2mgImject 帆(Pierce, Rockford, IL)預先致敏小鼠(組3_9 ;參見按用于說明實驗組小鼠的表I和表2，以及包括納米載體組合物的各自處理。對照小鼠接受i. p的200 u L PBS (組I)、亦或接受i.P的在200 ii L PBS中的2mg Imject 礬(組2)。在第27、28、和29天，用PBS (對于處理的陰性對照)(組1-4)、CpG (0D 1826，i.p.在100 y L中30 y g ;對于處理的陽性對照)(組5)、具有R848的煙堿-納米載體(i. p.在100 ii L中100 y g)(組6)、具有R848的煙堿-納米載體(鼻內地(i. n.)在60 ii L中100 y g)(組7)、無R848的煙堿-納米載體(i.p.在IOOii L中的IOOiig)(組8)處理小鼠，亦或用無R848的煙堿-納米載體(i.n.在60 ii L中的IOOii g)(組9)處理小鼠。具有R848的煙堿-納米載體含有4. 4%R848。結合R848至PLGA (Mw 4. IkD)。一般根據(jù)實例1_3的傳授制造該納米載體聚合物組合物，并且包括25% PLA-PEG-煙堿和75% PLA聚合物(是來自Boehringer Ingelheim的R202H，亦或是來自Lakeshore Biomaterials的100DL 2A ;這兩個版本都具有20kD的Mw和游離羧酸末端)。為了測量肺白細胞浸潤，在第28、29、和30天，用i.n.在60 y L PBS中的50yg卵清蛋白激發(fā)小鼠(組2和4-9)。對照小鼠(組I和3)接受i. n. 60 u L PBS0在第32天，最后一次卵清蛋白激發(fā)48小時以后，處死小鼠并且收集樣品。為了細胞因子分析，在第31天(在最后一次卵清蛋白激發(fā)18小時以后)收集樣品。用ImL含有3mM EDTA的PBS灌洗肺3次來收集用于細胞離心涂片器的支氣管肺泡灌洗液(BALF)，用于細胞分類計數(shù)和細胞因子分析。用Diff-Quik (Dade Behring)染色BALF的細胞離心涂片器切片，并且進行細胞分類計數(shù)。在_20°C儲存BALF的剩余物，直至需要用于細胞因子分析。按照制造商(BDBiosciences and R & D Systems)的說明書，通過 ELISA 測量 BALF 細胞因子(IL_12p40、IL-4、IL-13、和 IL-5)。
權利要求
1.一種用于治療一種癥狀的組合物，該組合物包括 合成納米載體，包括(I) 一個免疫特征表面，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑； 其中該免疫特征表面并不包括處于足以激發(fā)對與治療該癥狀有關的抗原的一種適應性免疫應答的量的與治療該癥狀有關的抗原。
2.如權利要求I所述的組合物，其中該免疫特征表面不包括與治療該癥狀有關的抗原。
3.如權利要求I所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種變應原。
4.如權利要求I所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種腫瘤抗原。
5.如權利要求I所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種慢性傳染物抗原。
6.如權利要求I所述的組合物，其中該免疫特征表面包括一個非抗原免疫特征表面。
7.如權利要求I所述的組合物，其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
8.如權利要求I所述的組合物，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
9.如權利要求I所述的組合物，其中該Thl偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
10.如權利要求I所述的組合物，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
11.如權利要求I所述的組合物，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
12.如權利要求I所述的組合物,其中基于一個樣品中合成納米載體的總數(shù),該樣品中至少75%的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。
13.如權利要求12所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種變應原。
14.如權利要求12所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種腫瘤抗原。
15.如權利要求12所述的組合物，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種慢性傳染物抗原。
16.如權利要求12所述的組合物，其中該免疫特征表面包括一個非抗原免疫特征表面。
17.如權利要求12所述的組合物,其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
18.如權利要求12所述的組合物，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
19.如權利要求12所述的組合物，其中該ThI偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-I中的一種或多種。
20.如權利要求12所述的組合物，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
21.如權利要求12所述的組合物，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
22.—種方法,包括 將如權利要求I所述的組合物給予受試者。
23.如權利要求22所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種變應原。
24.如權利要求22所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種腫瘤抗原。
25.如權利要求22所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種慢性傳染物抗、原。
26.如權利要求22所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一個非抗原免疫特征表面。
27.如權利要求22所述的方法，其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
28.如權利要求22所述的方法，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
29.如權利要求22所述的方法，其中該Thl偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
30.如權利要求22所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
31.如權利要求22所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
32.如權利要求22所述的方法，其中基于一個樣品中合成納米載體的總數(shù)，該樣品中至少75%的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。
33.如權利要求32所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種變應原。
34.如權利要求32所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種腫瘤抗原。
35.如權利要求32所述的方法，其中與治療該癥狀有關的抗原包括一種慢性傳染物抗原。
36.如權利要求32所述的方法，其中該免疫特征表面包括一個非抗原免疫特征表面。
37.如權利要求32所述的方法，其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
38.如權利要求32所述的方法，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
39.如權利要求32所述的方法，其中該Thl偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
40.如權利要求32所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
41.如權利要求32所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
42.一種方法，包括識別患有一種癥狀的受試者； 提供一種包括合成納米載體的組合物，這些合成納米載體包括(I) 一個APC祀向特征，以及(2) —種偶合到這些合成納米載體上的Thl偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；并且 將該組合物給予該受試者； 其中給予該組合物并不進一步包括同時給予一種與治療該癥狀有關的抗原。
43.如權利要求42所述的方法，其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
44.如權利要求42所述的方法，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
45.如權利要求42所述的方法，其中該ThI偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑 并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2_橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
46.如權利要求42所述的方法，其中該APC靶向特征包括一個免疫特征表面。
47.如權利要求46所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
48.如權利要求42所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
49.如權利要求42所述的方法，其中基于一個樣品中合成納米載體的總數(shù)，該樣品中至少75%的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。
50.如權利要求49所述的方法，其中在不同于給予該組合物的時間給予與治療該癥狀有關的抗原。
51.如權利要求49所述的方法，其中這些合成納米載體進一步包括一種T-細胞抗原。
52.如權利要求49所述的方法，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
53.如權利要求49所述的方法，其中該ThI偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2_橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-I中的一種或多種。
54.如權利要求49所述的方法，其中該APC靶向特征包括一個免疫特征表面。
55.如權利要求54所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
56.如權利要求49所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
57.—種方法,包括 提供一種包括合成納米載體的組合物，這些合成納米載體包括一種Thl偏向性免疫刺激劑和一個APC靶向特征； 將該組合物給予受試者；并且 在不同于向該受試者給予該組合物的時間，將給予對于他一個Thl偏向性應答是臨床有益的一種抗原給予該受試者； 其中該抗原的給藥包括被動給藥或主動給藥。
58.如權利要求57所述的方法，其中這些合成納米載體包括一種聚合物基質。
59.如權利要求57所述的方法，其中該ThI偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
60.如權利要求57所述的方法，其中該APC靶向特征包括一個免疫特征表面。
61.如權利要求57所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘基。
62.如權利要求57所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
63.如權利要求57所述的方法，其中基于一個樣品中合成納米載體的總數(shù)，該樣品中 至少75%的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。
64.如權利要求63所述的方法，其中該合成納米載體包括一種聚合物基質。
65.如權利要求63所述的方法，其中該ThI偏向性免疫刺激劑包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-橋接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一種或多種。
66.如權利要求63所述的方法，其中該APC靶向特征包括一個免疫特征表面。
67.如權利要求63所述的方法，其中該免疫特征表面包括煙堿和它的衍生物、甲氧基基團、帶正電的胺基、唾液乳糖、以及親和素和/或親和素衍生物、以及任何以上物質的殘 基。
68.如權利要求63所述的方法，其中這些合成納米載體包括球狀的、立方體的、圓柱體的、椎體的、或錐形的合成納米載體。
全文摘要
在此披露了合成納米載體組合物，以及相關方法，用于治療其中希望產(chǎn)生Th1-偏向性免疫應答的疾病。一方面，本發(fā)明涉及用于治療一種癥狀的一種組合物，所述組合物包括合成納米載體，包括(1)一個免疫特征表面，以及(2)一種偶合到這些合成納米載體上的Th1偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；其中該免疫特征表面并不包括處于足以激發(fā)對與治療該癥狀有關的抗原的適應性免疫應答的量的與治療該癥狀有關的抗原。另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，包括識別患有一種癥狀的受試者；提供一種包括合成納米載體的組合物，這些納米載體包括(1)一種APC靶向特征，以及(2)一種偶合到這些合成納米載體上的Th1偏向性免疫刺激劑；以及一種藥學上可接受的賦形劑；并且將該組合物給予受試者；其中該組合物的給藥并不進一步包括同時給予一種與治療該癥狀有關的抗原。仍另一方面，本發(fā)明涉及一種方法，包括提供一種包括合成納米載體的組合物，該納米載體包括一種Th1偏向性免疫刺激劑和一種APC靶向特征；將該組合物給予受試者；并且在不同于將該組合物給予該受試者的時間將一種抗原給予其中希望有Th1偏向性應答的受試者；其中該抗原的給藥包括被動給藥或主動給藥。
文檔編號A61P39/00GK102686244SQ201080017898
公開日2012年9月19日 申請日期2010年4月21日 優(yōu)先權日2009年4月21日
發(fā)明者格雷森·B·利甫福德, 羅伯特·L·布拉茨勒 申請人:西萊克塔生物科技公司