專利名稱：：甲狀旁腺素肽和甲狀旁腺素相關(guān)蛋白肽及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并涉及激活甲狀旁腺素受體的肽或多肽以及使用這些肽或多肽以提高骨生長(例如治療骨質(zhì)疏松癥)或治療癌癥的方法。
背景技術(shù)：
：甲狀旁腺素受體(PTHlR)是B類G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，其轉(zhuǎn)導(dǎo)來自在骨生物學(xué)中具有不同功能的以下兩個相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的信號甲狀旁腺素(PTH)和甲狀旁腺素相關(guān)蛋白(PTHrPK(I)；綜述參見0，3)]。PTH是84個氨基酸的多肽內(nèi)分泌激素，它由甲狀旁腺產(chǎn)生，并在響應(yīng)低鈣水平時被分泌到循環(huán)中[綜述參見G-6)]。PTH的典型作用受在骨和腎組織中表達(dá)的PTHlR介導(dǎo)，包括刺激破骨細(xì)胞骨吸收以維持鈣穩(wěn)態(tài)和刺激鈣重吸收、合成1，25_二羥基維生素D3以及腎中的磷酸鹽排泄。自相矛盾的是，PTH對導(dǎo)致骨形成的成骨細(xì)胞也有刺激作用[綜述參見(7)]，為PTH作為骨質(zhì)疏松癥的合成代謝療法的臨床應(yīng)用提供了分子基礎(chǔ)(8)。合成代謝PTH療法需要間歇性給予以避免隨著循環(huán)中PTH的持續(xù)升高而占優(yōu)勢的骨吸收作用。PTHrP為141個氨基酸的多肽，最初作為造成惡性體液性高鈣血癥的因子分離出來(9-12)，隨后表明是調(diào)節(jié)軟骨內(nèi)骨形成的決定性的發(fā)育因子[(13，14)；綜述參見(15)]。PTHrP局部產(chǎn)生，并以旁分泌/自分泌方式起作用激活軟骨細(xì)胞上表達(dá)的PTHlR以調(diào)節(jié)其增殖和分化。PTHrP當(dāng)給予骨質(zhì)疏松癥患者時還具有合成代謝作用(16)，但是比起通過將骨吸收與骨形成解偶聯(lián)而產(chǎn)生的PTH，似乎更純粹是合成代謝的(17)。PTH和PTHrP可通過PTHlR激活若干下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以介導(dǎo)其作用，但是通過Gαs偶聯(lián)的cAMP/PKA途徑的活化占優(yōu)勢，并負(fù)責(zé)骨合成代謝作用(18)。PTH和PTHrPN端34個殘基的肽片段足以結(jié)合并激活PTHlR至與天然分子相同的程度，而且ΡΤΗ-(1-34)和PTHrP-(1-34)對于激活cAMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)同樣有效(1)。其與受體的相互作用遵循“二結(jié)構(gòu)域”模型。殘基1-14與嵌入膜中的7-跨膜(7-TM)螺旋結(jié)構(gòu)域相互作用，而殘基15-34與受體的N端胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)相互作用(19，20)。PTH和PTHrP的1_14片段有8個氨基酸的序列同一性，反映了這個片段在激活受體方面所起的決定性作用00)。15-34片段賦予與受體結(jié)合的高親和力，但是PTH和PTHrP的這個部分不太保守，僅有3個氨基酸的同一性。PTH和PTHrP在溶液中形成類似的α-螺旋結(jié)構(gòu)(21，22)。雖然PTH和PTHrP具有共有的二結(jié)構(gòu)域受體結(jié)合機(jī)制、共同的二級結(jié)構(gòu)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的均等激活，但是它們與兩種藥理上截然不同的PTHlR構(gòu)象結(jié)合的能力不同，所述構(gòu)象通過G蛋白偶聯(lián)存在與否來區(qū)分。各個肽以類似的高親和力與G蛋白偶聯(lián)受體(RG構(gòu)象狀態(tài))結(jié)合，但是不存在G蛋白偶聯(lián)(R0構(gòu)象狀態(tài))時，PTHrP結(jié)合顯著減弱，而PTH結(jié)合僅稍有降低(23-25)。因此，與PTH相比，PTHrP對RG的選擇性更大。PTH和PTHrP的不同RO/RG選擇性特征與對cAMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同時間效應(yīng)有關(guān)。在配體洗出后，PTH比PTHrP誘導(dǎo)較長久的cAMP信號03)。趨異殘基5(PTH中的IIe，PTHrP中的His)是肽的R0/RG選擇性差異的關(guān)鍵性決定因素03，25)，但是PTH的15-34片段有助于其強(qiáng)RO結(jié)合03，沈)，這就表明與ECD的相互作用有助于cAMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的持續(xù)。重要的是，cAMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的時間差異在體內(nèi)可能具有重大作用。在接受每日注射的小鼠中，與野生型PTH相比，表現(xiàn)出RO結(jié)合提高的PTH類似物在細(xì)胞中誘導(dǎo)持續(xù)的cAMP反應(yīng)，并導(dǎo)致骨小梁體積增加和骨皮質(zhì)吸收增加06)。這些研究表明PTH和PTHrP的R0/RG選擇性特征有助于肽的不同生理和治療作用，并強(qiáng)調(diào)了詳細(xì)理解PTH和PTHrP與受體結(jié)合如何不同的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)的重要性。本發(fā)明人之前開發(fā)了使他們能夠測定與PTH[PTH(15-34)NH2]的C端酰胺化15-34片段復(fù)合的PTHlRE⑶的高分辨率晶體結(jié)構(gòu)的方法07)。E⑶在大腸桿菌(E.coli)中表達(dá)為與細(xì)菌麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)的C端連接的融合蛋白。在為適當(dāng)形成3個二硫鍵所需的體外二硫鍵改組反應(yīng)期間，MBP使E⑶增溶，并有利于融合蛋白結(jié)晶。PTHlRE⑶形成在B類GPCRE⑶中保守的折疊08-30)，并且由N端α-螺旋接著2個反向平行的β-折疊和1個短的C端α-螺旋組成，通過3個二硫鍵全部保持在一起。PTH(15-34)ΝΗ2形成與二級結(jié)構(gòu)元件的界面處的疏水溝結(jié)合的兩親性α-螺旋。發(fā)明簡述本發(fā)明人開發(fā)出與PTHlR的胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)結(jié)合的PTHrP的高分辨率晶體結(jié)構(gòu)，并將其與PTH-PTH1RE⑶復(fù)合物進(jìn)行了比較。類似于PTH，PTHrP形成與E⑶中的疏水溝結(jié)合的兩親性α-螺旋，然而PTH形成連續(xù)的直的螺旋，而PTHrP螺旋在C端輕微彎曲并“展開”，在肽的C端和ECD之間引起顯著不同的接觸。受體通過改變肽結(jié)合部位的2個殘基的構(gòu)象而適應(yīng)不同的結(jié)合模式。受此結(jié)構(gòu)引導(dǎo)，本發(fā)明人設(shè)計了雜合肽，該肽在決定不同結(jié)合模式的位置上含有PTH和PTHrP殘基交換；表現(xiàn)出ECD-結(jié)合減弱的雜合肽對細(xì)胞膜中PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力也降低，但是保持與G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)的正常結(jié)合。RG選擇性肽有效地刺激細(xì)胞中cAMP的積累，但在配體洗出后產(chǎn)生較短期的反應(yīng)，這就表明它們可能通過在受體上提供有效但脈動的作用而具有治療價值。本發(fā)明人已證實(shí)PTH和PTHrP以類似親和力與E⑶結(jié)合，并且提出與MBP-PTH1RECD融合蛋白復(fù)合的PTHrP[PTHrP(12-34)NH2]C端酰胺化12-34片段的高分辨率晶體結(jié)構(gòu)。PTH結(jié)合結(jié)構(gòu)和PTHrP結(jié)合結(jié)構(gòu)的比較揭示肽的E⑶結(jié)合模式的顯著差異(主要在肽的C端)。本發(fā)明人采用PTH結(jié)合結(jié)構(gòu)和PTHrP結(jié)合結(jié)構(gòu)作為指導(dǎo)設(shè)計PTH和PTHrP肽類似物，其中一些是在決定不同ECD結(jié)合模式的位置上含有殘基交換的雜合PTH/PTHrP肽，使他們能夠獲得以時間上較短的反應(yīng)有效刺激cAMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的RG選擇性肽。這些類似物可作為缺乏高血鈣副作用的更純粹的合成代謝PTH類似物，通過在受體上提供有效但脈動的作用而具有治療潛力。根據(jù)前文，本發(fā)明提供PTH肽，其包含在肽C端部分(例如SEQIDNO:9的氨基酸15-34)內(nèi)的位置上具有氨基酸取代的野生型PTH(SEQIDNO9)的氨基酸序列。正如本文首次表明的一樣，與野生型PTH相比，本公開內(nèi)容的PTH肽表現(xiàn)改變的生物學(xué)性質(zhì)(例如與野生型PTH對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，同時PTH肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并且能夠刺激細(xì)胞中cAMP的積累；與PTHlR的ECD的結(jié)合減弱)。據(jù)相信這種改變的生物學(xué)性質(zhì)提高這些PTH肽的治療潛力。在一些方面，PTH肽包含在氨基酸位置12、14、16、17和27的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTH(SEQIDNO9)的氨基酸序列或其包含二硫鍵的類似物。在一些方面，PTH肽包含在SEQIDNO9的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTH的C端部分(SEQIDNO9的氨基酸15-34)。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTH(SEQIDNO:9)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTH肽表現(xiàn)出對甲狀旁腺素受體(PTHlR)的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，但仍保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在其它方面，PTH肽包含SEQIDNO:9的氨基酸15-34，其中在20、21、23、24、27、28和34位的一個或多個上具有氨基酸取代。在具體的實(shí)施方案中，與野生型PTH與PTHlR的E⑶結(jié)合相比，PTH肽表現(xiàn)出與PTHlR的胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)的結(jié)合減弱。本文還提供PTHrP肽，所述PTHrP肽包含在肽C端部分(例如SEQIDNO79的氨基酸12-34)內(nèi)的位置上具有氨基酸取代的野生型PTHrP(SEQIDNO79)的氨基酸序列。正如本文首次表明的一樣，與野生型PTHrP相比，本公開內(nèi)容的PTHrP肽表現(xiàn)出改變的生物學(xué)性質(zhì)(例如與野生型PTHrP對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，同時PTHrP肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并且能夠刺激細(xì)胞中cAMP的積累；與PTHlR的ECD的結(jié)合減弱)。據(jù)相信這種改變的生物學(xué)性質(zhì)提高這些PTHrP肽的治療潛力。在一些方面，PTHrP肽包含在SEQIDNO79的23、27、沘和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTHrP的C端部分(SEQIDNO79的氨基酸12-34)。在具體方面，與野生型PTHrP(SEQIDNO79)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTHrP肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，但仍保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在某些方面，PTHrP肽包含SEQIDNO79的氨基酸12-34，其中在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代。在具體方面，與野生型PTHrP與E⑶或PTHlR的結(jié)合相比，PTHrP肽表現(xiàn)出與PTHlR的E⑶的結(jié)合減弱。在具體的實(shí)施方案中，本文所述PTH肽和PTHrP肽(或多肽類似物)包含SEQIDNO:1-101中任一個的氨基酸序列。本文還提供其變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物(peptidomimetic)、擬肽和化學(xué)衍生物。這類PTH或PTHrP肽或多肽融合蛋白可包括PTH或PTHrP肽或多肽類似物之一、任選接頭區(qū)和與PTH或PTHrP肽或多肽類似物連接或者與接頭區(qū)連接的第二多肽，所述第二多肽不與PTH或PTHrP肽或多肽類似物天然連接。同樣，PTH或PTHrP肽或多肽類似物可與促進(jìn)進(jìn)入細(xì)胞的其它肽連接。在示例性的實(shí)施方案中，PTH肽(或多肽類似物)包含SEQIDNO1-78中任一個的氨基酸序列及其變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物、擬肽和化學(xué)衍生物。在具體的實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO55的氨基酸序列。在其它示例性的實(shí)施方案中，PTHrP肽(或多肽類似物)包含SEQIDNO:79-101中任一個的氨基酸序列及其變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物、擬肽和化學(xué)衍生物。在具體的實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO81的氨基酸序列。本發(fā)明還提供用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥盒。在一些方面，藥盒含有選自本文所述的PTH肽或類似物和本文所述的PTHrP肽的肽，以及將所述肽給予患有骨質(zhì)疏松癥的受治療者的說明書。本文所述的PTH肽、PTHrP肽和類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體肽可用于制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。因此，本發(fā)明還提供包含本文所述的PTH或PTHrP肽(或多肽類似物、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體肽等)和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的組合物，例如藥物組合物。還包括本發(fā)明用于在細(xì)胞中激活PTH受體的方法，所述方法包括將上述PTH或PTHrP肽或多肽類似物導(dǎo)入細(xì)胞，使得肽或多肽引起所述PTH受體激活。這種方法可在活的動物中進(jìn)行，所述細(xì)胞可以是成骨細(xì)胞，所述導(dǎo)入可以通過口服遞送或注射。此外，本發(fā)明包括用于治療患有非所需骨損失相關(guān)疾病或病癥的哺乳動物受治療者的方法，所述方法包括將有效量的上述藥物組合物給予患有非所需骨損失的受治療者，從而治療所述受治療者。對于該方法，所述受治療者可以是人，所述疾病可以是骨質(zhì)疏松癥。本發(fā)明此外還提供改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的方法、延緩受治療者的骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的方法和使受治療者的骨再生的方法，所述方法各包括以有效改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀、延緩受治療者的骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展或使受治療者的骨再生的量，將本文所述藥物組合物給予受治療者。下面更詳細(xì)地描述本發(fā)明的其它方面和實(shí)施方案。結(jié)合附圖閱讀時，可更好地理解前面的概述以及下面的發(fā)明詳述。為了說明本發(fā)明的目的，用圖表、本發(fā)明優(yōu)選的某些實(shí)施方案來說明。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明不限于所顯示的精確排列和手段。圖1A-1D表示與PTHlRECD結(jié)合的PTH和PTHrP。圖IA和圖IB顯示用Alphakreen發(fā)光鄰近測定(luminescentproximityassay)評價所示的PTH(圖1A)或PTHrP(圖1B)肽與N端生物素化PTH(7-34)NH2(23nM)和MBP-PTHIRECD融合蛋白(23nM)的締合競爭的能力。數(shù)據(jù)表示一式兩份樣品的平均值。圖IC和圖ID顯示用OctetRed系統(tǒng)獲得的實(shí)時結(jié)合數(shù)據(jù)的穩(wěn)態(tài)分析。將生物素化PTHlRE⑶固定在鏈霉抗生物素傳感器觸頭(tip)上，并對PTH(1-34)NH2(圖1C)和PTHrP(1-34)NH2(圖1D)結(jié)合進(jìn)行了評價。組IC和圖ID中的曲線顯示反應(yīng)對從原始結(jié)合數(shù)據(jù)(圖6)得到的肽濃度曲線。PTH和PTHrP的Kd值分別為2.8μΜ禾口0.99μΜ。圖2Α-2Ι顯示與PTHrP(12-34)復(fù)合的PTHlRECD的結(jié)構(gòu)和PTH結(jié)合的PTHlRECD的比較。圖2Α顯示PTHrP-E⑶復(fù)合物的全貌圖，其中E⑶為石板藍(lán)色，PTHrP為品紅色。在電子密度圖中未觀察到殘基57-101。為了清楚，未顯示ΜΒΡ。圖2Β顯示E⑶的分子表面，顯示了由PTHrP的F23'、L24'、L27'和128'接觸的疏水溝。表面按原子類型著色碳為灰色，氮為藍(lán)色，氧為紅色。圖2C是PTHrP的省略電子密度圖。F。-F。省略圖用等值線為3σ的綠色網(wǎng)格線表示，2F。-F。省略圖用等值線為Io的藍(lán)色網(wǎng)格線表示。圖2D顯示PTHrP-E⑶界面的細(xì)節(jié)圖。PTHrP用品紅色線圈表示，選定的側(cè)鏈用小棒表示。紅色短劃線表示氫鍵，紅色球體是水分子。圖2E是包括PTHrP的殘基32-34的氫鍵網(wǎng)的近視圖。圖2F顯示PTHrP-ECD復(fù)合物和PTH-E⑶復(fù)合物的結(jié)構(gòu)比對(PDB碼3C4M)。PTHrP-E⑶復(fù)合物的著色如上，PTH為黃色，PTH結(jié)合的ECD為綠色。選定的側(cè)鏈用小棒表示。PTHrP-ECD復(fù)合物的氫鍵用紅色破折號表示，PTH-ECD復(fù)合物的用綠色破折號表示。圖2G是人PTH和PTHrP殘基1_34的氨基酸序列比對，其中α-螺旋長度標(biāo)于序列上方和下方。圖2Η顯示AlphaScreen單點(diǎn)競爭測定(singlepointcompetitionassay)的結(jié)果，該測定評價PTH(15-34)NH2丙氨酸掃描肽(alanine-scanpeptide)(20μΜ)與生物素_ΡΚ23ηΜ)和MBP_PTHlR-EOK23nM)的相互作用競爭的能力。結(jié)果是一式兩份樣品的平均值。圖21顯示除PTHrP(12-34)NH2丙氨酸掃描肽外與組2H相同的Alphakreen測定的結(jié)果。圖3A-3D表示雜合PTH/PTHrP肽與MBP-PTH1RECD蛋白的結(jié)合。圖3A顯示AlphaScreen單點(diǎn)競爭測定的結(jié)果，該測定評價PTH(15_34)NH2支架(20μM)中的雜合肽與生物素-ΡΚ23ηΜ)和MBP-PTH1R-EOT的相互作用競爭的能力。結(jié)果是一式兩份樣品的平均值。圖3Β顯示除PTHrP(12-34)ΝΗ2支架中的雜合肽外與組3Α相同的AlphaScreen測定的結(jié)果。圖3C是由PTH-ECD結(jié)構(gòu)中的W23‘和Κ27'形成的范德瓦爾斯接觸的近視圖。圖3D是由PTHrP-E⑶結(jié)構(gòu)中的F23’和L27’形成的范德瓦爾斯接觸的近視圖。圖4Α和圖4Β表示雜合PTH/PTHrP(1-34)NH2肽與細(xì)胞膜中PTHlR的RO和RG狀態(tài)的結(jié)合。圖4A顯示PTH(1-34)NH2支架中的所示雜合肽與RO和RG受體狀態(tài)的結(jié)合。圖4B顯示PTHrP(1-34)NH2支架中的所示雜合肽與RO和RG受體狀態(tài)的結(jié)合。圖5A和圖5B顯示RG選擇性的雜合PTH/PTHrP(l-34)NH2肽的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)性質(zhì)。圖5A顯示cAMP積累的劑量反應(yīng)測定的結(jié)果。將瞬時表達(dá)PTHlR的COS細(xì)胞用所示肽于37°C刺激30分鐘，之后將細(xì)胞裂解，并評價cAMP含量。數(shù)據(jù)是一式兩份樣品的平均值，并標(biāo)準(zhǔn)化至在野生型PTH(1-34)NH2存在下觀察到的最高cAMP水平?；A(chǔ)cAMP為0.24pmol/孔，PTH誘導(dǎo)的最大cAMP為6.Ipmol/孔。PTH、PTH(W23'F/V31'I)、PTHrP和PTHrP(L27K)的EC50值分別為71.6ρΜ、41·5ρΜ、67·7ρΜ和44.4ρΜ。圖5Β顯示配體洗出測定的結(jié)果。將細(xì)胞用所示肽于室溫刺激10分鐘，洗出配體，并在洗出后的所示時間評價cAMP積累。結(jié)果是一式兩份樣品的平均值，并標(biāo)準(zhǔn)化至最初刺激期間誘導(dǎo)的cAMP水平?；A(chǔ)cAMP為約0.24pmol/孔，而最初刺激誘導(dǎo)的最大cAMP為約2.9pmol/孔。圖6A和圖6B顯示PTH和PTHrP與PTHlRECD結(jié)合的OctetRed實(shí)時分析。圖6A顯示將生物素化PTHlRE⑶固定在鏈霉抗生物素傳感器觸頭上，并在下列濃度評價PTH(1-34)NH2的結(jié)合:156.25nM、312.5nM、625nM、l.25μM、2.5μΜ、5μΜ、10μΜ。圖6Β表示除評價PTHrP(l-34)NH2的結(jié)合以外與圖6A相同的組圖。圖7A和圖7B表示PTH類似物的螢光素酶測定的結(jié)果。各PTH類似物都有以##-##-##-##-SBSL形式給出的標(biāo)識符。圖7A和圖7B(0.InM和0.03nM)中，各PTH類似物用##-##-SBSL標(biāo)示(例如“07-12-18-40-SBSL”表示為“18-40，，)。發(fā)明詳述總則應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明不限于下述本發(fā)明的具體實(shí)施方案，因?yàn)榭蓪唧w實(shí)施方案進(jìn)行變動并仍落入隨附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。還應(yīng)當(dāng)理解的是，所采用的術(shù)語用于描述具體實(shí)施方案的目的，并無意進(jìn)行限制。相反，本發(fā)明的范圍應(yīng)由隨附權(quán)利要求書來確定。除非另有說明，否則本文使用的所有科技術(shù)語都具有本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。一般來講，本文使用的命名法和下文描述的細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、有機(jī)化學(xué)和核酸化學(xué)的實(shí)驗(yàn)室規(guī)程是眾所周知和本領(lǐng)域通常使用的。雖然類似或等同于本文所述方法、裝置和材料的任何方法、裝置和材料都可用于實(shí)施或檢驗(yàn)本發(fā)明，但是下面描述優(yōu)選的方法、裝置和材料。在本說明書和隨附權(quán)利要求書中，單數(shù)形式包括相關(guān)的復(fù)數(shù)，除非文中清楚地另外說明。除非文中明確地另外規(guī)定，否則應(yīng)當(dāng)理解的是當(dāng)提供數(shù)值范圍時，在該范圍的上限和下限之間的至下限單位的十分之一程度的每個中間值和任何其它規(guī)定值或在該規(guī)定范圍的中間值都包括在本發(fā)明內(nèi)。這些較小范圍的上限和下限可獨(dú)立包括在更小的范圍內(nèi)，并且也包括在本發(fā)明內(nèi)，受該規(guī)定范圍中任何具體排除在外的界限的約束。如果該規(guī)定范圍包括一個或兩個界限，則不包括這些所包括的界限中任一個或兩個的范圍也包括在本發(fā)明中。本申請中提及的所有參考文獻(xiàn)、專利、專利出版物、論文和數(shù)據(jù)庫都通過引用全部結(jié)合到本文中，如同各自具體和單獨(dú)地通過弓I用結(jié)合到本文中一樣。結(jié)合這類專利、專利出版物、論文和數(shù)據(jù)庫用于描述和公開在這些專利、專利出版物、論文和數(shù)據(jù)庫中描述過的本發(fā)明的主題組成部分的目的，所述組成部分可與現(xiàn)描述的發(fā)明相關(guān)聯(lián)地使用。并非承認(rèn)本文提供的信息是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)，而只是提供來幫助讀者理解。在附圖和下面的描述中給出了本發(fā)明的一個或多個實(shí)施方案的詳情。從說明書和附圖、實(shí)施例、序列表和權(quán)利要求書來看，本發(fā)明的其它特征、實(shí)施方案和優(yōu)勢將是顯而易見的。通過參照下文所包括的具體實(shí)施方案、實(shí)施例和序列表的下列詳細(xì)描述，可更容易地理解本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。為了公開內(nèi)容清楚起見，而非意在限制，將本發(fā)明的詳細(xì)說明分成以下小節(jié)。PTH肽和PTHrP肽PTH和PTHrP通過激活其共同的受體PTHlR來誘導(dǎo)截然不同的生物效應(yīng)。理解肽如何與受體結(jié)合的高分辨結(jié)構(gòu)對闡明負(fù)責(zé)通過PTH調(diào)節(jié)無機(jī)離子穩(wěn)態(tài)和骨重建以及通過PTHrP調(diào)節(jié)骨發(fā)育的生化機(jī)制是重要的，并且還實(shí)際應(yīng)用于輔助合理設(shè)計用于治療目的的肽類似物。本發(fā)明人對與PTHlRE⑶復(fù)合的PTHrP的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。結(jié)合PTH-PTH1RE⑶復(fù)合物的現(xiàn)有結(jié)構(gòu)(27)，本發(fā)明人掌握了PTHlRE⑶所采用的識別PTH和PTHrP的結(jié)構(gòu)機(jī)制的全貌。所述肽作為接觸ECD中的疏水溝的兩親性α-螺旋與ECD結(jié)合。在15-34片段上的3個不變殘基中的2個即R20'和L24'錨定相互作用。在殘基L24'后，所述肽趨異(diverge)使得其C端與ECD有顯著不同的接觸(圖2F)，這是通過我們的ECD結(jié)合數(shù)據(jù)預(yù)測的結(jié)果，該數(shù)據(jù)表明PTH而非PTHrP的C端酰胺基的對E⑶結(jié)合重要(圖1)。15-34片段的第3個不變殘基H32'在PTHrP結(jié)合結(jié)構(gòu)中為受體提供決定性的氫鍵，但是在PTH結(jié)合結(jié)構(gòu)中暴露于溶劑。令人感興趣的是，R20'和L24'在TIP39(—種激活PTH2型受體的肽)中是保守的(36)，但Η32'卻不是，這與本發(fā)明人的觀察結(jié)果一致，即15-34片段的N端部分提供肽-ECD相互作用的錨定點(diǎn)，而C端部分在其與受體的相互作用中變化。受體以相對較小的改變(包括Ilell5在響應(yīng)PTHrP彎曲時的移動和L41旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體撥動開關(guān)機(jī)制(toggleswitchmechanism))適應(yīng)稍有不同的結(jié)合模式，以保持與配體的范德瓦爾斯接觸，而不管配體在23位不同的側(cè)鏈體積(圖3C和圖3D)。至于E⑶結(jié)合，PTHrP—般比PTH更耐受變動。PTHrP的4個單交換突變體有3個保持與E⑶正常結(jié)合，但是PTH單交換突變體中只有一個保持與E⑶正常結(jié)合。PTH相互作用可能對保守取代更敏感，因?yàn)槠渑cECD較高的表面互補(bǔ)性和較大的埋入表面區(qū)域，這在響應(yīng)突變時為界面調(diào)節(jié)留下較小的空間。這就表明，PTHrP可提供更好的支架，以在其中引入用于治療性類似物開發(fā)的改變。本發(fā)明人最初懷疑PTH和PTHrP的不同E⑶結(jié)合模式可能有助于其不同的R0/RG選擇性特征。雖然這似乎不是實(shí)情，但高分辨結(jié)構(gòu)的可獲得性的確引導(dǎo)他們合理設(shè)計了最終使他們獲得對G蛋白偶聯(lián)受體有高選擇性的肽的交換改變。意料不到的是，RG選擇性由于減弱ECD結(jié)合的交換突變而提高。然而，與只是ECD親和力相比，R0/RG選擇性更復(fù)雜。與PTH(1-34)相比，顯示ECD結(jié)合降低的PTH(1-)的RG選擇性更大，而與PTH(1_34)相比，RG親和力卻同樣降低06)。顯然，殘基四-34必定有助于RG選擇性雜合PTH/PTHrP(l-34)肽保持正常RG結(jié)合的能力。因此，有至少兩種不同的改變給定PTH或PTHrP肽的R0/RG選擇性特征的方法。RG選擇性可通過5位上的His(據(jù)推測經(jīng)由與受體的7-TM結(jié)構(gòu)域的相互作用)而提高，且也通過由肽的C端部分引起的ECD結(jié)合減弱而提高，但是殘基四-34對保持正常RG結(jié)合是重要的。RG選擇性肽有效地刺激cAMP積累，但具有較短的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)壽命(圖幻，這就表明這些肽對受體提供脈動作用。雖然造成較短信號轉(zhuǎn)導(dǎo)持續(xù)時間的基礎(chǔ)生化機(jī)制尚不明了，但是這些肽在藥理上可用作“有偏”藥劑，其可誘導(dǎo)對骨的合成代謝作用，同時限制由受體的持續(xù)刺激而產(chǎn)生的骨吸收作用。實(shí)際上，比起PTH，PTHrP似乎是更純粹的合成代謝劑(anabolicagent)，缺乏有害的高血鈣副作用(17)。如果PTHrP的RO親和力降低有助于這種作用，那么本文提供的RG選擇性肽，特別是PTHrP(1-34)[L27K]，可具有作為用于治療骨質(zhì)疏松癥的更純粹的合成代謝類似物的治療潛力。根據(jù)前文，本發(fā)明提供PTH肽，其包含在肽C端部分(例如SEQIDNO9的氨基酸15-34)內(nèi)的位置上具有氨基酸取代的野生型PTH(SEQIDNO9)的氨基酸序列。正如本文首次表明的一樣，與野生型PTH相比，本公開內(nèi)容的PTH肽表現(xiàn)出改變的生物學(xué)性質(zhì)(例如與野生型PTH對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，同時PTH肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并且能夠刺激細(xì)胞中cAMP的積累；與PTHlR的ECD的結(jié)合減弱)。據(jù)相信這種改變的生物學(xué)性質(zhì)提高這些PTH肽的治療潛力。在一些方面，本文提供的PTH肽包含在SEQIDNO:9的氨基酸位置12、14、16、17和27的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTH(SEQIDNO9)的氨基酸序列或其包含二硫鍵的類似物。在一些實(shí)施方案中，SEQIDNO:9特定位置的一個或多個上的氨基酸取代是對SEQIDNO:9而言是天然的氨基酸的保守氨基酸取代。在具體的實(shí)施方案中，保守氨基酸取代是符合本文所述教導(dǎo)的保守氨基酸取代。參見“變體肽”。在示例性的實(shí)施方案中，保守氨基酸取代是下列組別之一中的一個氨基酸被另一個氨基酸替換I.小的脂肪族非極性或略有極性的殘基Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；II.極性的帶負(fù)電荷的殘基及其酰胺和酯ASp、ASn、Glu、Gln、半胱磺酸和高半胱磺酸；III.極性帶正電荷的殘基His,Arg,Lys；鳥氨酸(Orn)；IV.大的脂肪族非極性殘基Met、Leu、lie、Val、Cys、正亮氨酸(We)、高半胱氨酸；V.大的芳族殘基ΡΙκ^ΤγΝρ、乙?；奖彼?。在其它實(shí)施方案中，氨基酸取代不是保守氨基酸取代，例如是非保守氨基酸取代。因此，在具體的實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的PTH肽包含SEQIDN0:53的序列，其中12位上的氨基酸為Gly、VaUAla或其保守取代，其中14位上的氨基酸為His、Phe,Leu或其保守取代，其中16位上的氨基酸為AsruThr或其保守取代，其中17位上的氨基酸為義！·、Asp.Asn或其保守取代，其中27位上的氨基酸為Lys、LeU或其保守取代。在更具體的實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的PTH肽包含SEQIDNO1-10和13-20中任一個的氨基酸序列.在一些方面，本公開內(nèi)容的PTH肽包含在SEQIDNO:9的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTH的C端部分(SEQIDNO9的氨基酸15-34)。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTH(SEQIDNO:9)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTH肽表現(xiàn)出對甲狀旁腺素受體(PTHlR)的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，但仍保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTH與PTHlR的E⑶的結(jié)合相比，PTH肽表現(xiàn)出與PTHlR的胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)的結(jié)合也減弱。在具體的實(shí)施方案中，SEQIDNO9的23、27、觀和31位的一個或多個上的氨基酸被SEQIDNO:79相應(yīng)位置上的氨基酸置換。例如，SEQIDNO:9的23位的氨基酸被SEQIDNO79相應(yīng)位置上的氨基酸置換是Trp被SEQIDNO79的23位上的氨基酸(Phe)置換。同樣，例如，SEQIDNO:9的19位上的氨基酸被SEQIDNO:79相應(yīng)位置上的氨基酸置換是Glu被SEQIDNO79的19位上的氨基酸(Arg)置換。在一些實(shí)施方案中，PTH肽包含在SEQIDNO9的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:9的氨基酸15-34，并且在PTH肽的N端還包含SEQIDNO:9的氨基酸1-14。在這類實(shí)施方案中，PTH肽包含在SEQIDNO:9的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:9的氨基酸1-34。因此，在一些實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO:57-66中任一個的氨基酸序列。在一些方面沖^肽包含在20、21、23、24、27、觀和；34位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO9的氨基酸15-34。在具體的實(shí)施方案中，與野生型PTH與PTHlR的E⑶的結(jié)合相比，PTH肽表現(xiàn)出與PTHlR的胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)的結(jié)合減弱。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTH(SEQIDNO9)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTH肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中PTH肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)的結(jié)合，且其中PTH肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在一些實(shí)施方案中，PTH肽包含在23或28位或者在23和觀位兩者上的氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，PTH肽另包含在21、27和34位的一個或多個上的氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO9的氨基酸15-34，其中在SEQIDNO9的20、21、23、24、27、觀和34位的一個或多個上具有氨基酸取代，并且在PTH肽的N端還包含SEQIDNO:9的氨基酸1-14。在這類實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO:9的氨基酸1-34，其中在20、21、23、24、27、觀和34位的一個或多個上具有氨基酸取代。在規(guī)定位置上的氨基酸取代可以是本文描述的保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。在具體的實(shí)施方案中，氨基酸取代是規(guī)定位置上的天然氨基酸的氨基酸被Ala置換。因此，在具體的實(shí)施方案中，？^肽在20、21、23、24、27、觀和34位的一個或多個上包含Ala。因此，在一些實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO:68_71、73、74和78中任一個的氨基酸序列。除本文描述的PTH肽以外，本發(fā)明還提供PTHrP肽，其包含在肽C端部分(例如SEQIDNO:79的氨基酸12-34)內(nèi)的位置上具有氨基酸取代的野生型PTHrP(SEQIDNO79)的氨基酸序列。正如本文首次表明的一樣，與野生型PTHrP相比，本公開內(nèi)容的PTHrP肽表現(xiàn)出改變的生物學(xué)性質(zhì)(例如與野生型PTHrP對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，同時PTHrP肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)的結(jié)合，并且能夠刺激細(xì)胞中cAMP的積累；與PTHlR的ECD的結(jié)合減弱)。據(jù)相信這種改變的生物學(xué)性質(zhì)提高這些PTHrP肽的治療潛力。在一些方面，PTHrP肽包含在SEQIDNO79的23、27、沘和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的野生型PTHrP的C端部分(SEQIDNO79的氨基酸12-34)。在具體方面，與野生型PTHrP(SEQIDNO79)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTHrP肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，但仍保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，并刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTHrP與E⑶或PTHlR的結(jié)合相比，PTHrP肽表現(xiàn)出與PTHlR的E⑶的結(jié)合也減弱。在具體的實(shí)施方案中，在SEQIDNO:79的23、27、觀和31位的一個或多個上的氨基酸被SEQIDNO9相應(yīng)位置上的氨基酸取代。例如，SEQIDNO79的23位上的氨基酸被SEQIDNO9相應(yīng)位置上的氨基酸置換是Phe被SEQIDNO9的23位的氨基酸(Trp)置換。同樣，例如，SEQIDNO:79的5位上的氨基酸被SEQIDNO:9相應(yīng)位置上的氨基酸置換是His被SEQIDNO:9的5位上的氨基酸(He)置換。在一些實(shí)施方案中，PTHrP肽包含在SEQIDNO79的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:79的氨基酸12-34，并且在PTHrP肽的N端還包含SEQIDNO79的氨基酸1-11。在這類實(shí)施方案中，PTHrP肽包含在SEQIDNO79的23、27、沘和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:79的氨基酸1-34。因此，在一些實(shí)施方案中，PTHrP肽包含SEQIDNO:80-90中任一個的氨基酸序列。在一些方面，PTHrP肽包含SEQIDNO79的氨基酸12-34，其中在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代。在具體方面，與野生型PTHrP與E⑶或PTHlR的結(jié)合相比，PTHrP肽表現(xiàn)出與PTHlR的E⑶的結(jié)合減弱。在一些實(shí)施方案中，與野生型PTHrP(SEQIDNO79)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，PTH肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中PTHrP肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)的結(jié)合，且其中PTHrP肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累。在一些實(shí)施方案中，PTHrP肽包含在22或27位或者在22和27位兩者上的氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，PTHrP肽包含SEQIDNO79的氨基酸12-34，其中在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代，并且在PTHrP肽的N端還包含SEQIDNO79的氨基酸1-11。在這類實(shí)施方案中，PTHrP肽包含在SEQIDNO79的20、21、23、對、27、觀、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:79的氨基酸1-34。在規(guī)定位置上的氨基酸取代可以是本文描述的保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。在具體的實(shí)施方案中，氨基酸取代是規(guī)定位置上的天然氨基酸的氨基酸被Ala置換。因此，在具體的實(shí)施方案中，PTHrP肽在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上包含Ala。因此，在一些實(shí)施方案中，PTHrP肽包含SEQIDNO:93_98、100和101中任一個的氨基酸序列。PTH肽和PTHrP肽的活性在本公開內(nèi)容的一些方面，PTH肽、其類似物和PTHrP肽是PTHlR的有效激動劑。在示例性的實(shí)施方案中，PTH肽、其類似物和PTHrP肽表現(xiàn)出對PTHlR的EC50與野生型PTH或PTHrP對PTHlR受體的EC50至少相同或者大致相同。在一些實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的PTH肽或PTHrP肽的功效(通過以本公開內(nèi)容PTH肽或PTHrP肽的EC50除野生型PTH或PTHrP對PTHlR的EC50，然后將這個數(shù)值乘以100%來計算)，為至少或約10%、至少或約15%、至少或約20%、至少或約25%、至少或約30%、至少或約35%、至少或約40%、至少或約45%、至少或約50%、至少或約55%、至少或約60%、至少或約65%、至少或約70%、至少或約75%、至少或約80%、至少或約85%、至少或約90%、至少或約95%、至少或約100%、至少或約200%、至少或約500%、至少或約1000%。如本文所述，PTHlR被PTH和PTHrP激活導(dǎo)致細(xì)胞(例如成骨細(xì)胞)中cAMP的積累。在本公開內(nèi)容的一些方面，PTH肽、其類似物和PTHrP肽是PTHlR的有效激動劑，并導(dǎo)致細(xì)胞中顯著量cAMP的積累。在具體的實(shí)施方案中，與野生型PTH(SEQIDNO9)或野生型PTHrP(SEQIDNO79)的cAMP反應(yīng)相比，由PTH肽和PTHrP肽或其類似物刺激的對PTHlR的反應(yīng)是較短期的cAMP反應(yīng)。在一些具體的實(shí)施方案中，PTH肽包含SEQIDNO:64。在一些具體的實(shí)施方案中，PTHrP肽包含SEQIDNO:81。PTH肽和PTHrP肽的類似物本文還提供本文所述的PTH肽的類似物(例如包含在氨基酸位置12、14、16、17和27的一個或多個上具有氨基酸取代的野型PTH(SEQIDNO9)的氨基酸序列的PTH肽)，所述類似物包含連接兩個非連續(xù)氨基酸的分子內(nèi)橋。在具體的實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋?yàn)槎蜴I。在類似物包含二硫鍵的一些實(shí)施方案中，PTH肽還包含其中對SEQIDNO:9而言是天然的氨基酸被含硫氨基酸(例如Cys(例如L-Cys、D-Cys)、半胱磺酸、高半胱磺酸等)取代的氨基酸取代。因此，在一些實(shí)施方案中，類似物包含SEQIDNO:54_56中任一個的氨基酸序列，其中19、22和25位上的氨基酸中兩個由二硫鍵連接。在具體的實(shí)施方案中，二硫鍵連接19位的氨基酸與22位的氨基酸。在其它更具體的實(shí)施方案中，19位的氨基酸為D-Cys，22位的氨基酸為Cys。在其它具體的實(shí)施方案中，類似物的二硫鍵連接22位的氨基酸與25位的氨基酸，而在更具體的實(shí)施方案中，22和25位上的氨基酸各為Cys。如上所述，在某些實(shí)施方案中，類似物包含SEQIDNO:11、12和21-52中任一個的氨基酸序列。本文還提供本文所述的PTHrP肽的類似物(例如PTHrP肽，其包含在PTHrP肽的C端部分(SEQIDNO:79的氨基酸12-34)內(nèi)的一個或多個氨基酸上有氨基酸取代的野生型PTHrP(SEQIDNO:79)的氨基酸序列，所述類似物包含連接兩個非連續(xù)氨基酸的分子內(nèi)橋。在具體的實(shí)施方案中，分子內(nèi)橋?yàn)槎蜴I。在類似物包含二硫鍵的一些實(shí)施方案中，PTHrP肽還包含其中對SEQIDNO:79而言是天然的氨基酸被含硫氨基酸(例如Cys(例如L-Cys、D-Cys)、半胱磺酸、高半胱磺酸等)取代的氨基酸取代。在一些實(shí)施方案中，類似物在19和22位上或在22和25位上包含二硫鍵。變體肽PTH或PTHrP肽或多肽類似物的“變體”是指與所述肽或多肽類似物基本上相同的分子，其中一個或多個氨基酸殘基已被取代(取代變體)，或者缺失(缺失變體)或添加(添加變體)一個或多個殘基。優(yōu)選這類取代、添加或缺失導(dǎo)致生物活性得到改進(jìn)或臨床性質(zhì)得到改進(jìn)而又不顯著降低所需要的生物效應(yīng)或生化作用。評價所給出的一個或多個殘基的取代、添加或缺失是否會對肽產(chǎn)生所需影響盡在本領(lǐng)域技術(shù)人員的掌握之中。有關(guān)蛋白質(zhì)化學(xué)和結(jié)構(gòu)的詳細(xì)描述，參見khulz，G.E.等，！PrinciplesofProteinStructure,Springer-Verlag,NewYork,1979以及Creighton,Τ.Ε.,ProteinsStructureandMolecularPrinciples,W.H.Freeman&Co.,SanFrancisco,1984,所述文獻(xiàn)通過弓|用結(jié)合到本文中?？稍诒景l(fā)明的肽分子中進(jìn)行的取代類型是保守取代，本文定義為下列組別之一內(nèi)的交換1.小的脂肪族非極性或略有極性的殘基例如Ala、Ser,Thr、Gly；2.極性帶負(fù)電荷的殘基及其酰胺例如Asp、Asn,Glu,Gln；3.極性帶正電荷的殘基例如His、Arg.Lys；Pro,由于其不尋常的幾何結(jié)構(gòu)，而緊緊地約束鏈。通過選擇較不保守的取代，例如在上述各組(或上文未顯示的兩個其它氨基酸組別)之間而非組內(nèi)，對功能性質(zhì)進(jìn)行相當(dāng)?shù)母淖儯@將引起對維持以下方面的作用的更顯著的不同(a)取代區(qū)域中肽主鏈的結(jié)構(gòu)，(b)靶部位上分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的體積。本發(fā)明的大多數(shù)取代是在肽分子的特征方面不產(chǎn)生根本改變的取代。即使難以在這樣做之前預(yù)測取代的確切作用，本領(lǐng)域的技術(shù)人員也應(yīng)理解可通過常規(guī)篩選測定，優(yōu)選本文所述的生物學(xué)測定和生化測定，來評價這種作用。通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的方法測定肽性質(zhì)的改進(jìn)，包括氧化還原或熱穩(wěn)定性、疏水性、對蛋白酶降解的易感性或與載體聚集或聚集成多聚體的趨勢。變體與本發(fā)明PTH或PTHrP肽或多肽類似物之一可有50%序列同一性，或者與PTH或PTHrP肽或多肽類似物有60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。PTH肽或PTHrP肽的其它修飾本發(fā)明還包括其中一個或多個L-氨基酸被一個或多個D-氨基酸取代的肽和多肽。另外，還可提供修飾氨基酸或氨基酸的化學(xué)衍生物，使得所述肽含有通常不是天然蛋白質(zhì)部分的其它化學(xué)部分或修飾氨基酸。這類衍生化部分可改進(jìn)溶解度、吸收、生物半衰期等。能夠介導(dǎo)這些作用的部分公開于例如Remington'sPharmaceuticalSciences，第16版，MackPublishingCo.,Easton,Pa.(1980)。本文進(jìn)一步描述了化學(xué)衍生物。參見“化學(xué)衍生物”?？墒贡疚乃枋龅碾奶腔Ⅴ０坊?、羧化、磷酸化、酯化、N-?；?、環(huán)化(通過例如二硫橋)或轉(zhuǎn)化成酸加成鹽和/或任選二聚體化或多聚體化或綴合化。C端酰胺化如本文進(jìn)一步的論述一樣，在一些實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽或其類似物包含替換C端羧酸的C端酰胺基。在這種情況下，C端殘基的骨架包含N-Ca-CONH215鹽在一些實(shí)施方案中，PTH肽或PTHrP肽(包括其類似物或變體)為鹽的形式，例如藥學(xué)上可接受的鹽。本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保持母體化合物的生物活性的化合物的鹽，所述鹽不是生物學(xué)或其它方面不合乎需要的。這類鹽可在類似物的最后分離和純化期間原位制備，或者通過使游離堿官能團(tuán)與合適的酸反應(yīng)來單獨(dú)制備。本文公開的許多化合物能夠借助氨基和/或羧基或其類似基團(tuán)的存在來形成酸式鹽和/或堿式鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可由無機(jī)酸和有機(jī)酸制備。代表性的酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥乙磺酸鹽(異硫代硫酸鹽)、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽(palmitoate)、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3_苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、磷酸鹽、谷氨酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽和i^一烷酸鹽。由包括以下無機(jī)酸得到的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由包括以下有機(jī)酸得到的鹽乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸等。可用來形成藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的酸的實(shí)例包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸等無機(jī)酸，和草酸、馬來酸、琥珀酸和檸檬酸等有機(jī)酸。堿加成鹽還可在水楊酸來源的最后的分離和純化期間原位制備，或者通過使含羧酸部分與合適的堿(例如藥學(xué)上可接受的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或者與氨或有機(jī)伯胺、仲胺或叔胺反應(yīng)制備。藥學(xué)上可接受的鹽尤其包括但不限于基于堿金屬或堿土金屬(例如鋰、鈉、鉀、鈣、鎂)的陽離子和鋁鹽等和無毒季銨(quaternaryammonia)和胺陽離子，包括銨、四甲基銨、四乙基銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、三乙基銨、二乙基銨和乙基銨等。用于形成堿加成鹽的其它代表性的有機(jī)胺包括例如乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。由有機(jī)堿得到的鹽包括但不限于伯胺、叔胺和仲胺的鹽。此外，含堿性氮的基團(tuán)可用本公開內(nèi)容的PTH肽或PTHrP肽季銨化為低級烷基鹵化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)；長鏈鹵化物(例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)；芳基烷基鹵化物(如芐基和苯乙基溴化物等)。由此獲得水溶性或油溶性產(chǎn)物或可分散產(chǎn)物。化學(xué)衍生物PTH或PTHrP肽或多肽類似物的“化學(xué)衍生物”是指含有通常不是PTH或PTHrP蛋白部分的其它化學(xué)部分的分子。蛋白質(zhì)的共價修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？赏ㄟ^使靶向的氨基酸殘基與能夠與選定的側(cè)鏈或末端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生劑反應(yīng)，將這類修飾引入分子中。這類化學(xué)上的衍生化部分可改進(jìn)蛋白質(zhì)的溶解度、吸收、生物半衰期等。這些改變可在體內(nèi)消除或減弱PTH或PTHrP肽或多肽類似物的不合乎需要的副作用。能夠介導(dǎo)這些作用的部分公開于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPublishingCompany,EastonPa.(Germaro第18版，1990)。下述加帽肽是“天然”未加帽肽的優(yōu)選的化學(xué)衍生物的實(shí)例。本發(fā)明的取代、添加或缺失變體的任何組合都可用任何本文公開的加帽基團(tuán)加帽?；瘜W(xué)部分作為化學(xué)衍生物一部分的化學(xué)部分可以是任何化學(xué)部分，包括天然存在的或非天然存在的生物分子、化合物，例如小分子量化合物，其在一些實(shí)施方案中對PTH肽或PTHrP肽是化學(xué)惰性的。一般來講，化學(xué)部分是不會降低肽的活性的部分。備選地，化學(xué)部分是這樣的化學(xué)部分其改變(例如改進(jìn)或提高)PTH肽或PTHrP肽的性質(zhì)，例如提高穩(wěn)定性、溶解度和/或肽的效能，縮短對PTHlR作用的持續(xù)時間，提高對RG的選擇性，降低對RO的親和力。在一個具體的實(shí)施方案中，化學(xué)部分為聚合物、碳水化合物、氨基酸、肽或脂質(zhì)，例如脂肪酸或類固醇。在一些實(shí)施方案中，化學(xué)部分是氨基酸。氨基酸可以是本領(lǐng)域已知的20種普通氨基酸中的任一種(Ala、Cys>Asp、Glu、Phe>Gly、His、lie、Lys>Leu、Met、Asn、Pro、Arg、kr、Thr、Val、Trp、Tyr)或任何已知的非天然存在的氨基酸。用于本文目的的合適的合成氨基酸包括但不限于β-丙氨酸(β-Ala)、Ν_α-甲基-丙氨酸(Me-Ala)、氨基丁酸(Abu)、Y-氨基丁酸(Y-Abu)、氨基己酸(ε-Ahx)、氨基異丁酸(Aib)、氨基甲基吡咯甲酸、氨基哌啶甲酸、氨基絲氨酸(Ams)、氨基四氫吡喃-4-甲酸、精氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、β-天冬氨酸(β-Asp)、氮雜環(huán)丁烷甲酸、3-(2-苯并噻唑基)丙氨酸、α-叔丁基甘氨酸、2-氨基-5-脲基-正戊酸(瓜氨酸、Cit)、β-環(huán)己基丙氨酸(Cha)、乙酰氨基甲基-半胱氨酸、二氨基丁酸(Dab)、二氨基丙酸(Dpr)、二羥基苯丙氨酸(DOPA)、二甲基噻唑烷(DMTA)、Y-谷氨酸(Y-Glu)、高絲氨酸(Hse)、羥脯氨酸(Hyp)、異亮氨酸N-甲氧基-N-甲基酰胺、甲基-異亮氨酸(MeIle)、六氫異煙酸(Isn)、甲基-亮氨酸(MeLeu)、甲基-賴氨酸、二甲基-賴氨酸、三甲基-賴氨酸、橋亞甲基脯氨酸(methanoproline)、甲硫氨酸-亞砜(Met(0))、甲硫氨酸-砜(Met(O2))、正亮氨酸(Nle)、甲基-正亮氨酸(Me-Nle)、正纈氨酸(Nva)、鳥氨酸(Orn)、對氨基苯甲酸(PABA)、青霉胺(Pen)、甲基苯丙氨酸(MePhe)、4_氯苯丙氨酸(PheG-Cl))、4-氟苯丙氨酸(PheG-F))、4-硝基苯丙氨酸(PheQ-NO2))、4-氰基苯丙氨酸((Wie(4-CN))、苯基甘氨酸(Phg)、哌啶基丙氨酸、哌啶基甘氨酸、3，4-二氫脯氨酸、吡咯烷基丙氨酸、肌氨酸(Sar)、硒代半胱氨酸(Sec)、0_芐基-磷酸絲氨酸、4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸(Ma)、4_氨基-5-環(huán)己基-3-羥基戊酸(ACHPA)、4_氨基-3-羥基-5-苯基戊酸(AHPPA)、1，2，3，4-四氫-異喹啉-3-甲酸(Tic)、四氫吡喃甘氨酸、噻吩基丙氨酸(Thi)、0-芐基-磷酸酪氨酸、0-磷酸酪氨酸、甲氧基酪氨酸、乙氧基酪氨酸、0-(雙-二甲基氨基-膦?；?_酪氨酸、酪氨酸硫酸四丁胺(tyrosinesulfatetetrabutylamine)、甲基-纈氨酸(MeVal)和烷基化3_巰基丙酸。氨基酸可以是氨基酸的D-異構(gòu)體或L-異構(gòu)體。在一些實(shí)施方案中，化學(xué)部分是肽，例如50個氨基酸以下的肽，例如二肽、三肽、4聚體、5聚體、6聚體、7聚體、8聚體、9聚體、10聚體、15聚體、20聚體、25聚體、30聚體、35聚體、40聚體、45聚體、50聚體。肽可包含本領(lǐng)域已知的任何氨基酸，例如本文所述的任何氨基酸。聚合物可以是任何聚合物。聚合物可以是以下任一種的衍生化聚合物聚酰胺；聚碳酸酯；聚亞烷基類及其衍生物，包括聚亞烷基二醇、聚環(huán)氧烷、聚對苯二甲酸亞烷基酯；丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物，包括聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)和聚(丙烯酸十八酯)；聚乙烯聚合物，包括聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯鹵化物、聚(乙酸乙烯酯)和聚乙烯吡咯烷酮；聚乙交酯；聚硅氧烷；聚氨酯及其共聚物；纖維素，包括烷基纖維素、羥基烷基纖維素、纖維素醚、纖維素酯、硝基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丁基甲基纖維素、乙酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、醋酸鄰苯二甲酸纖維素、羧乙基纖維素、三乙酸纖維素和硫酸纖維素鈉鹽；聚丙烯；聚乙烯，包括聚(乙二醇)、聚(環(huán)氧乙烷)和聚(對苯二甲酸乙二酯)以及聚苯乙烯。聚合物可以是生物可降解的聚合物，包括合成的生物可降解聚合物(例如乳酸和乙醇酸的聚合物、聚酐、聚(原酸)酯、聚氨酯、聚(丁酸(buticacid))、聚(戊酸)和聚(丙交酯-己內(nèi)酯共聚物))以及天然的生物可降解聚合物(例如藻酸鹽和其它多糖包括葡聚糖和纖維素、膠原、其化學(xué)衍生物(取代、添加化學(xué)基團(tuán)(例如烷基、亞烷基)、羥基化、氧化和本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)進(jìn)行的其它修飾)、白蛋白和其它親水蛋白質(zhì)(例如玉米醇溶蛋白和其它谷醇溶蛋白及疏水蛋白質(zhì))以及其任何共聚物或混合物?？傮w說來，這些材料通過體內(nèi)酶促水解或暴露于水、通過表面或大塊蝕解而降解。聚合物可以是生物黏附的聚合物，例如H.S.Sawhney，C.P.Pathak和J.A.Hubbell披露于Macromolecules，1993，26，581-587(所述教導(dǎo)結(jié)合到本文中)的生物侵蝕的水凝膠；聚透明質(zhì)酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白、聚酐、聚丙烯酸、藻酸鹽、脫乙酰殼多糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸異丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸異癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸異丙酯)、聚(丙烯酸異丁酯)和聚(丙烯酸十八酯)。在一些實(shí)施方案中，聚合物是水溶性聚合物。合適的水溶性聚合物是本領(lǐng)域已知的，包括例如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素(HPC;KlUCel)、羥丙基甲基纖維素(HPMC;Methocel)、硝基纖維素、羥丙基乙基纖維素、羥丙基丁基纖維素、羥丙基戊基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素(Ethocel)、羥乙基纖維素、各種烷基纖維素和羥基烷基纖維素、各種纖維素醚、乙酸纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素鈣、乙酸乙烯酯/巴豆酸共聚物、聚甲基丙烯酸羥基烷基酯、甲基丙烯酸羥基甲酯、甲基丙烯酸共聚物、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸甲酯、馬來酐/甲基乙烯基醚共聚物、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉和聚丙烯酸鈣、聚丙烯酸、酸式羧基聚合物、羧聚乙烯、羧基乙烯基聚合物、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、聚甲基乙烯基醚-馬來酐共聚物、羧基甲基酰胺、甲基丙烯酸鉀二乙烯基苯共聚物、聚氧化亞乙基二醇、聚環(huán)氧乙烷及其衍生物、鹽和組合。碳水化合物可以是任何碳水化合物。碳水化合物可以是例如單糖(例如葡萄糖、半乳糖、果糖)、二糖(例如蔗糖、乳糖、麥芽糖)、寡糖(例如棉子糖、水蘇糖)、多糖(淀粉、直鏈淀粉(amylase)、支鏈淀粉、纖維素、殼多糖、胼胝質(zhì)、昆布多糖、木聚糖、甘露聚糖、墨角藻聚糖、半乳甘露聚糖。脂質(zhì)可以是任何脂質(zhì)，例如脂肪酸(例如C4-C30脂肪酸、類二十烷酸、前列腺素、白三烯、血栓烷、N-酰基乙醇胺)、甘油脂(例如單、二、三取代甘油)、甘油磷酸脂(例如磷脂酰膽堿、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸)、鞘脂(例如鞘氨醇、神經(jīng)酰胺)、甾醇脂質(zhì)(例如類固醇、膽固醇)、異戊烯醇脂(prenollipid)、糖脂、聚酮化合物、油、蠟、膽固醇、留醇、脂溶性維生素、單甘油酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂。可通過使肽的靶向氨基酸殘基與能夠與選定的側(cè)鏈或者這些靶向氨基酸的N端或C端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生劑反應(yīng)，使肽與化學(xué)部分通過直接的共價鍵連接。肽或化學(xué)部分上的反應(yīng)基團(tuán)包括例如醛、氨基、酯、巰基、α-鹵代乙?；?、馬來酰亞胺基或胼基。衍生劑包括例如馬來酰亞胺基苯甲?；腔牾啺孵?通過半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀酰亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酐或其它本領(lǐng)域已知的衍生劑。最通常使半胱氨酰殘基與α-鹵代乙酸(和相應(yīng)的胺)(例如氯乙酸、氯乙酰胺)反應(yīng)，得到羧基甲基衍生物或羧基酰氨基甲基衍生物。半胱氨酰殘基還通過與以下化合物反應(yīng)而衍生化溴三氟丙酮、α-溴-β_(5-咪唑基(imidozoyl))丙酸、氯乙酰基磷酸酯、N-烷基馬來酰亞胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、對氯汞苯甲酸、2-氯汞基-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧雜-1，3-二唑。組氨酰殘基通過與焦碳酸二乙酯于pH5.5-7.0下反應(yīng)而衍生化，因?yàn)檫@種衍化劑對組氨酰側(cè)鏈具有相對特異性。對溴苯酰甲基溴同樣有用；該反應(yīng)優(yōu)選在0.IM卡可基酸鈉中于PH6.0下進(jìn)行。賴氨酰殘基和氨基末端殘基用琥珀酸酐或其它羧酸酐衍生化。用環(huán)狀羧酸酐的衍生化具有逆轉(zhuǎn)賴氨酰殘基的電荷的作用。用于衍生化含quadrature氨基的殘基的其它合適試劑包括亞氨酸酯例如甲基吡啶亞胺甲酯(methylpicolinimidate)、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氫化物、三硝基苯磺酸、0-甲基異脲、2，4_戊二酮；以及轉(zhuǎn)氨酶催化的與乙醛酸的反應(yīng)。精氨酰殘基通過與一種或幾種常規(guī)試劑反應(yīng)來修飾，其中有苯基乙二醛、2，3-丁二酮、1，2_環(huán)己二酮和茚三酮。精氨酸殘基的衍生化需要在堿性條件下進(jìn)行反應(yīng)，因?yàn)殡夜倌軋F(tuán)的高的pKa。此外，這些試劑可與賴氨酸的基團(tuán)以及精氨酸ε-氨基反應(yīng)?？赏ㄟ^與芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應(yīng)來進(jìn)行酪氨酰殘基的特定修飾，其中將光譜標(biāo)記引入酪氨酰殘基特別有益。最常見地，使用N-乙?；溥蚝退南趸淄橐苑謩e形成0-乙酰基酪氨酰物類和3-硝基衍生物。羧基側(cè)基天冬氨?；蚬劝滨？赏ㄟ^與1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉基-(4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮鐺-4，4-二甲基戊基)碳二亞胺等碳二亞胺(R-N=C=N-R')反應(yīng)來進(jìn)行選擇性修飾。此外，可通過與氨反應(yīng)將天冬氨酰和谷氨酰殘基轉(zhuǎn)化成天冬酰胺酰和谷氨酰胺酰殘基。其它修飾包括脯氨酸和賴氨酸的羥基化、絲氨?；蛱K氨酰殘基的羥基的磷酸化、賴氨酸的氨基的甲基化(Creighton，同上，第79-86頁)、N端胺的乙?；虲端羧基的酰胺化。另一種共價修飾類型包括用化學(xué)方法或酶促方法使糖苷與肽偶聯(lián)。糖可連接于(a)精氨酸和組氨酸，(b)游離羧基，(c)游離巰基，例如半胱氨酸的游離巰基，(d)游離羥基，例如絲氨酸、蘇氨酸或羥脯氨酸的游離羥基，(e)芳族殘基，例如酪氨酸或色氨酸的芳族殘基，或者(f)谷氨酰胺的酰胺基。這些方法可參見1987年9月11日公布的W087/05330及Aplin和Wriston，CRCCrit.Rev.Biochem.，第259-306頁(1981)?；瘜W(xué)部分可通過接頭與肽間接連接。本文使用的“接頭”為使兩個單獨(dú)的實(shí)體彼此連接的化學(xué)鍵、分子或分子的基團(tuán)。接頭可提供兩個實(shí)體的最適間距，或者還可供給允許兩個實(shí)體彼此分隔的不穩(wěn)定鍵。不穩(wěn)定鍵包括光可裂解基團(tuán)、酸不穩(wěn)定部分、堿不穩(wěn)定部分和酶可切割基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，接頭是中間載體，例如多糖或多肽載體。多糖載體的實(shí)例包括氨基葡聚糖。合適多肽載體的實(shí)例包括聚賴氨酸、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、其共聚物和這些氨基酸和其它氨基酸(例如為所得荷載載體提供所需要的溶解度性質(zhì)的絲氨酸)的混合聚合物等。融合蛋白本發(fā)明包括“融合蛋白”，其包含與賦予融合蛋白有用性質(zhì)的另一種肽或多肽融合的PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)。例如可將PTH或PTHrP肽或多肽類似物與促進(jìn)PTH或PTHrP肽或多肽類似物被細(xì)胞攝取的多肽融合。在一些實(shí)施方案中，PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)與其它肽或多肽直接融合。在具體的實(shí)施方案中，PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)位于其它肽或多肽的N端。在其它實(shí)施方案中，PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)位于其它肽或多肽的C端。在一些實(shí)施方案中，PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)通過接頭與其它肽或多肽融合。合適的接頭是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于氨基酸(例如本文所述的任何氨基酸)和肽(二肽、三肽、4聚體、5聚體、6聚體、7聚體、8聚體、9聚體、10聚體、15聚體、20聚體、25聚體、30聚體、35聚體、40聚體、45聚體、50聚體)。合適的氨基酸和肽包括本領(lǐng)域已知的氨基酸和肽(例如在本文“化學(xué)部分”中描述的任何氨基酸和肽)。PTH肽或PTHrP(或其類似物或變體)與之融合的其它肽可以是血漿蛋白質(zhì)、分泌信號、靶向部分、細(xì)胞因子、可溶性因子或者免疫球蛋白或其部分(例如可變區(qū)、CDR或Fc區(qū))。已知的免疫球蛋白(Ig)類型包括IgG、IgA、IgE、IgD或IgM。Fc區(qū)是Ig重鏈的C端區(qū)，其負(fù)責(zé)與Fc受體結(jié)合，F(xiàn)c受體完成例如再循環(huán)(這導(dǎo)致半衰期延長)、依賴抗體的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)和依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒性(CDC)等活性。例如，按照某些定義，人IgG重鏈Fc區(qū)從重鏈的Cys2^延伸到C端?！般q鏈區(qū)”一般由人IgGl的Glu216延伸到Pro230(可通過比對參與半胱氨酸鍵合的半胱氨酸，來將其它IgG同種型的鉸鏈區(qū)與IgGl序列進(jìn)行比對)。IgG的Fc區(qū)包括2個恒定結(jié)構(gòu)域CH2和CH3。人IgGFc區(qū)的CH2結(jié)構(gòu)域通常從氨基酸231延伸到氨基酸341。人IgGFc區(qū)的CH3結(jié)構(gòu)域常常從氨基酸342延伸到447。所提及的免疫球蛋白或者免疫球蛋白片段或區(qū)域的氨基酸編號全部基于Kabat等，1991,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,U.S.DepartmentofPublicHealth,Bethesda,Md。在一個有關(guān)的實(shí)施方案中，F(xiàn)c區(qū)可包含一個或多個天然或修飾的免疫球蛋白重鏈的恒定區(qū)(CHl除外)，例如IgG和IgA的CH2和CH3區(qū)或IgE的CH3和CH4區(qū)。20PTH肽或PTHrP肽與之融合的合適的其它肽包括免疫球蛋白序列的部分(其包含F(xiàn)cRn結(jié)合部位)。Fcfoi，一種補(bǔ)救受體，負(fù)責(zé)使免疫球蛋白再循環(huán)并使其返回血液中的循環(huán)。根據(jù)X射線晶體學(xué)，描述了與Fcfoi受體結(jié)合的IgGFc部分的區(qū)域(Burmeister等1994，Nature372:379)。Fc與Fcfoi的主要接觸區(qū)域接近CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的接點(diǎn)。Fc-Fcfoi接觸全在單Ig重鏈內(nèi)。主要的接觸部位包括CH2結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基對8、250-257、272、285、288、290-291、308-311和314以及CH3結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基385-387,428和433-436。有的可包括或不包括FcγR結(jié)合部位。FcγR負(fù)責(zé)ADCC和⑶C。與FcγR直接接觸的Fc區(qū)內(nèi)的位置的實(shí)例為氨基酸234-239(下鉸鏈區(qū))、氨基酸265-269(B/C環(huán))、氨基酸297-299(C，/E環(huán))和氨基酸327-332(F/G)環(huán)(Sondermann等，Nature406:267-273,2000)。IgE的下鉸鏈區(qū)也參與FcRI結(jié)合(Henry等，Biochemistry36，15568-15578，1997)。參與IgA受體結(jié)合的殘基參見Lewis等(JImmunol.175:6694-701，2005)。參與IgE受體結(jié)合的氨基酸殘基參見Sayers等(JBiolChem.279(34):35320_5，2004)?？蓪γ庖咔虻鞍椎腇c區(qū)進(jìn)行氨基酸修飾。這類變體Fc區(qū)在Fc區(qū)的CH3結(jié)構(gòu)域(殘基342-447)中包含至少一個氨基酸修飾和/或在Fc區(qū)的CH2結(jié)構(gòu)域(殘基231-341)中包含至少一個氨基酸修飾。被認(rèn)為賦予提高的對Fcfoi的親和力的突變包括T256A、T307A、E380A和N434A(Shields等，2001，J.Biol.Chem.276:6591)。其它突變可降低Fc區(qū)與FcγRI、FcγRIIA,FcγRIIB和/或FcγRIIIA的結(jié)合而又不顯著降低對Fcfoi的親和力。例如，F(xiàn)c區(qū)297位上的Asn被Ala或另一個氨基酸取代去除高度保守的N-糖基化位點(diǎn)，并可引起免疫原性降低伴隨Fc區(qū)的半衰期延長，以及與FcγR的結(jié)合降低(Routledge等，1995,Transplantation60:847；Friend等1999,Transplantation681632；Shields等1995，J.Biol.Chem.276:6591)。還對IgGl的233-236位的氨基酸進(jìn)行了修飾以降低與FcγR的結(jié)合(Ward禾口Ghetie1995，TherapeuticImmunology2:77，以及Armour等，1999，Eur.J.Immunol.292613)。一些示例性的氨基酸取代參見美國專利7，355,008和7，381，408，各通過引用全部結(jié)合到本文中。多聚體本發(fā)明還包括“多聚體肽”，即較長的肽或多肽，其中PTH或PTHrP肽或多肽類似物的基本肽序列重復(fù)約2-約100次，含有或不含間插間隔物或接頭。在一個實(shí)施方案中，肽SEQIDN0:10的多聚體(在本節(jié)中象征性地稱為“JJJ”，其中J、J和J不代表單個氨基酸)由以下公式化實(shí)例表示(JJJ-Xm)n-JJJ,其中m=0或l，n=l-100，X為間隔基，優(yōu)選C1-C2tl烷基、C1-C2tl烯基、C1-C2tl炔基、含有高達(dá)9個氧原子的C1-C2tl聚醚或Glyz(z=1-10)。應(yīng)當(dāng)理解的是，這類多聚體可由本文所述的任何肽或多肽構(gòu)建。此外，這類多聚體可包含肽單體及其已公開的變體的不同組合。這類寡聚體肽或多聚體肽可通過化學(xué)合成或通過本文所述的重組DNA技術(shù)制備。如以化學(xué)法產(chǎn)生，則寡聚體優(yōu)選具有2-8個基本肽序列的重復(fù)。如以重組法產(chǎn)生，則多聚體可具有與表達(dá)系統(tǒng)允許的一樣多的重復(fù)，例如2-約100個重復(fù)。肽模擬物用于這個方面的另一類化合物是低分子量“肽模擬化合物”(該術(shù)語也包括肽模擬物)?？赏ㄟ^結(jié)構(gòu)研究鑒定這類肽模擬物，該結(jié)構(gòu)研究對PTH或PTHrP肽或多肽類似物之一在候選肽模擬物存在或不存在時與PTH受體的共結(jié)晶進(jìn)行比較。PTH或PTHrP肽或多肽類似物的肽模擬物模擬PTH或PTHrP肽或多肽類似物之一的生物效應(yīng)。肽模擬物可以是具有PTH或PTHrP肽或多肽類似物的立體化學(xué)性質(zhì)的非天然肽或非肽物質(zhì)，使得其具有肽的結(jié)合活性或生物活性。因此，本發(fā)明包括其中肽模擬化合物與其它肽偶聯(lián)的化合物。肽模擬物可以是再現(xiàn)PTH或PTHrP肽或多肽類似物的結(jié)合元件的立體空間性質(zhì)的非天然肽或非肽物質(zhì)，使得其具有PTH或PTHrP肽或多肽類似物的結(jié)合活性或生物活性。與相當(dāng)于PTH或PTHrP肽或多肽類似物的線性肽類似，肽模擬物可具有結(jié)合面(其與PTH受體相互作用)和非結(jié)合面。此外，與PTH或PTHrP肽或多肽類似物的線性肽類似，肽模擬物的非結(jié)合面可含有可被各種治療部分修飾但不修飾肽模擬物的結(jié)合面的官能團(tuán)。模擬物的一個實(shí)施方案可在分子的非結(jié)合面含有苯胺。苯胺的NH2-基團(tuán)的pKa為約4.5，因此可被任何NH2選擇性試劑修飾卻又不修飾肽模擬物結(jié)合面上的任何NH2官能團(tuán)。其它肽模擬物在其結(jié)合面上可能無任何NH2官能團(tuán)，因此，不考慮pKa，任何NH2都可出現(xiàn)在非結(jié)合面上作為綴合部位。此外，其它的可修飾官能團(tuán)(例如一SH和一C00H)中可被摻入肽模擬物的非結(jié)合面中作為綴合部位。治療部分還可在肽模擬物合成期間直接摻入，且優(yōu)選出現(xiàn)在分子的非結(jié)合面上。本發(fā)明還包括保持部分肽特征的化合物。例如，本發(fā)明肽內(nèi)的任何蛋白水解不穩(wěn)定的鍵都可被非肽元件例如電子等排物(N-甲基化；Sl位點(diǎn)上的D-氨基酸)或者還原肽鍵選擇性置換，同時分子的其余部分仍保持其肽性質(zhì)。已披露了許多生物活性肽的肽模擬化合物激動劑、底物或抑制劑，所述生物活性肽例如阿片肽、VIP、凝血酶、HIV蛋白酶等。用于設(shè)計和制備肽模擬化合物的方法是本領(lǐng)域已知的((Hruby,V.J.，Biopolymers33:1073-1082(1993)；Wiley,R.Α.等，Med.Res.Rev.13:327-384(1993)；Moore等，Adv.inPharmacol33:91-141(1995)；Giannis等，Adv.inDrugRes.四1_78(1997)，所述參考文獻(xiàn)通過引用全部予以結(jié)合)。這些方法用于制備具有至少環(huán)肽的結(jié)合能力和特異性并優(yōu)選還具有生物活性的肽模擬物?？紤]到本公開內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的肽化學(xué)和普通有機(jī)化學(xué)的知識足以設(shè)計和合成這類化合物。例如，可通過檢查本發(fā)明的肽(或游離或與PTH受體復(fù)合而結(jié)合)的獲自晶體學(xué)的三維結(jié)構(gòu)，來鑒定這類肽模擬物。備選地，可采用核磁共振波譜法獲得與PTH受體結(jié)合的本發(fā)明肽的結(jié)構(gòu)。更好地理解肽與其結(jié)合配偶體相互作用的立體化學(xué)可供合理設(shè)計這類肽模擬物。擬肽本發(fā)明還包括是N-取代甘氨酸的寡聚體的“擬肽”(SimonRJ等，ProcNatlAcadSciUSA,199289:9367-9371)。設(shè)計非肽、小分子激動劑和拮抗劑的“擬肽”方法也可參見HorwellDC,TrendsBiotechnol，1995，13:132_134。PTH或PTHrP肽或多肽類似物的擬肽包括一個或多個這類N-取代甘氨酸的取代或添加。取代基可以是4-氨基苯酚、異丁胺、丁二胺(NH2(CH2)3NH2)、環(huán)己烷甲胺、氨基甲基環(huán)丙烷、芐胺、甲胺、異丙胺、R(+)-(L-甲基芐胺)、5-(-1_α-甲基芐胺、N-3-胍基丙基等。Nguyen.J.Τ.等人(Science1998,2822088-2092)之前已證實(shí)，這類取代基導(dǎo)致SH3結(jié)合擬肽的生物活性提高。然而，取代基實(shí)際上可以是在甘氨酸的N位置取代的任何取代基，只要N-甘氨酸產(chǎn)物可在擬肽中進(jìn)一步偶聯(lián)。本發(fā)明的PTH或PTHrP肽或多肽類似物(例如SEQIDNO10的肽)可在氨基端和羧基端分別用例如與氨基端N結(jié)合的乙?；?“Ac”)和酰氨基(與C端羧基結(jié)合的一NH2(“Am”))阻斷或加帽。這種肽可在表示封閉基團(tuán)為Ac基和Am基的單字母碼中提及Ac-SEQIDNO:10的殘基-Am。N端加帽官能團(tuán)優(yōu)選與末端氨基官能團(tuán)連接，并可選自甲?；痪哂?-10個碳原子的烷?；?，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基；具有1-10個碳原子的烯酰基，例如己-3-烯?；?；具有1-10個碳原子的炔酰基，例如己-5-炔?；环减；绫郊柞；?-萘甲酰基；雜芳?；?，例如3-吡咯甲?；?-喹啉?；?；烷基磺?；缂淄榛酋；?；芳基磺酰基，例如苯磺酰基或磺胺?；浑s芳基磺?；?，例如吡啶-4-磺酰基；具有1-10個碳原子的取代烷酰基，例如4-氨基丁酰基；具有1-10個碳原子的取代烯酰基，例如6-羥基-己-3-烯?；?；具有1-10個碳原子的取代炔?；?-羥基-己-5-炔?；?；取代芳?；?-氯苯甲?；?-羥基-萘-2-?；蝗〈s芳?；?，例如2，4-二氧代-1，2，3，4-四氫-3-甲基-喹唑啉-6-?；?；取代烷基磺酰基，例如2-氨基乙烷磺?；蝗〈蓟酋；?，例如5-二甲基氨基-1-萘磺酰基；取代雜芳基磺?；?，例如1-甲氧基-6-異喹啉磺?；话被柞；蛄虼奔柞；?；取代氨基甲酰基(R'-NH-C0)或取代硫代氨甲?；?R'-NH-CS)，其中R'為烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、取代烷基、取代烯基、取代炔基、取代芳基或取代雜芳基；取代氨基甲?；?R'-NH-C0)或取代硫代氨甲?；?R'-NH-CS)，其中R'是烷?；?、烯?；?、炔?；⒎减；?、雜芳?；?、取代烷酰基、取代烯酰基、取代炔?；⑷〈减；蛉〈s芳酰基，全部如上定義；C端加帽官能團(tuán)可與末端羧基位于酰胺鍵中或與末端羧基位于酯鍵中。提供酰胺鍵的加帽官能團(tuán)標(biāo)為NR1R2,其中R1和R2可獨(dú)立選自以下基團(tuán)氫；優(yōu)選具有1-10個碳原子的烷基，例如甲基、乙基、異丙基；優(yōu)選具有1-10個碳原子的烯基，例如丙-2-烯基；優(yōu)選具有1-10個碳原子的炔基，例如丙-2-炔基；具有1-10個碳原子的取代烷基，例如羥基烷基、烷氧基烷基、巰基烷基、烷基硫代烷基、商代烷基、氰基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷?；榛?、羧基烷基、氨基甲?；榛?；具有1-10個碳原子的取代烯基，例如羥基烯基、烷氧基烯基、巰基烯基、烷基硫代烯基、商代烯基、氰基烯基、氨基烯基、烷基氨基烯基、二烷基氨基烯基、烷?；┗Ⅳ然┗?、氨基甲?；┗?；具有1-10個碳原子的取代炔基，例如羥基炔基、烷氧基炔基、巰基炔基、烷基硫代炔基、商代炔基、氰基炔基、氨基炔基、烷基氨基炔基、二烷基氨基炔基、烷?；不?、羧基炔基、氨基甲酰基炔基；具有至多10個碳原子的芳?；榛?，例如苯甲酰甲基或2-苯甲?；一?；芳基，例如苯基或1-萘基；雜芳基，例如4-喹啉基；具有1-10個碳原子的烷?；缫阴；蚨□；?；芳?；?，例如苯甲?；浑s芳?；?，例如3-喹啉?；?；OR'或NR'R"，其中R'和R〃獨(dú)立地為氫、烷基、芳基、雜芳基、?；?、芳?；?、磺?；?、亞磺?；换騍02-R"’或S0-R"’，其中R"’是取代或未取代的烷基、芳基、雜芳基、烯基或炔基。本文所述的PTH或PTHrP肽或多肽類似物的所有前述變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物、擬肽和化學(xué)衍生物，必須具有以下的PTH或PTHrP肽或多肽類似物的生物活性或生化活性至少為下文實(shí)施例的測定中測定的PTH或PTHrP肽或多肽類似物的活性的約20%、30%、40%、50%、60、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。備選地或此夕卜，當(dāng)在結(jié)合測定中用完整細(xì)胞、細(xì)胞流分、分離的含有PTH受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)或肽或者任何其它結(jié)合分子測試時，PTH或PTHrP肽或多肽類似物的前述變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物、擬肽和化學(xué)衍生物應(yīng)與標(biāo)記的PTH或PTHrP肽或多肽類似物競爭結(jié)合PTH受體。逆反肽(retroinversopeptide)對于本文公開的每個肽和多肽序列，本發(fā)明包括相應(yīng)的逆-反序列，其中肽鏈的方向是倒轉(zhuǎn)的，且其中所有的氨基酸屬于D型。指定用于L型肽的N端加帽基團(tuán)的整個范圍和C端加帽基團(tuán)的整個范圍也旨在用于D型肽。構(gòu)建方法本發(fā)明的肽和多肽可采用重組DNA技術(shù)制備。也可采用固相合成制備，例如由MerrifieldQ.Amer.Chem.Soc,85:2149-54(1963))概述的固相合成，但是本領(lǐng)域已知的其它等同的化學(xué)合成也是有用的?？赏ㄟ^使受保護(hù)的α-氨基酸與合適的樹脂偶聯(lián)，從肽的C端開始固相肽合成?？赏ㄟ^將α-氨基受保護(hù)的氨基酸經(jīng)由酯鍵與氯代甲基化樹脂或與羥基甲基樹脂連接，或者經(jīng)由酰胺鍵與BHA樹脂或MBHA樹脂連接，來制備這類起始原料。羥甲基樹脂的制備參見Bodansky等，Chem.Ind.,381597-98(1966)。氯代甲基化樹脂是市售的，可獲自BioRadLaboratories,Richmond,Calif以及獲自Lab.Systems,Inc0這類樹脂的制備參見Mewart等，“SolidPhasePeptideSynthesis"(Freeman&Co.,SanFrancisco1969)，第1章，1-6。BHA和MBHA樹脂支持體是市售的，一般只有當(dāng)待合成的所需多肽在C端具有未取代的酰胺時才使用。可采用本領(lǐng)域眾所周知的用于肽鍵形成的技術(shù)，使氨基酸與延伸的肽鏈偶聯(lián)。例如，一種方法包括使氨基酸轉(zhuǎn)化成可使氨基酸的羧基對與延伸肽鏈的游離N端氨基的反應(yīng)更易感的衍生物。具體而言，可通過使C端與氯甲酸乙酯、氯甲酸苯酯、氯甲酸仲丁酯、氯甲酸異丁酯或新戊酰氯等酰基氯反應(yīng)，將受保護(hù)的氨基酸的C端轉(zhuǎn)化成混合酐?；蛘?，可將氨基酸的C端轉(zhuǎn)化成活性酯，例如2，4，5-三氯苯酯、五氯苯酯、五氟苯酯、對硝基苯酯、N-羥基琥珀酰亞胺酯或由1-羥基苯并三唑形成的酯。另一種偶聯(lián)方法包括使用合適的偶聯(lián)劑，例如N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺或N，N'-二異丙基碳二亞胺。對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的其它合適的偶聯(lián)劑公開于Gross等，ThePeptidesAnalysis,Structure,Biology,第I卷，"MajorMethodsofPeptideBondFormation"(AcademicPress1979)。在偶聯(lián)反應(yīng)期間必須保護(hù)用于肽合成的各個氨基酸的α-氨基以防止涉及其活性α-氨基官能團(tuán)的副反應(yīng)。某些氨基酸含有反應(yīng)性側(cè)鏈官能團(tuán)(例如巰基、氨基、羧基和羥基)，這類官能團(tuán)也必須用合適的保護(hù)基保護(hù)以防止在起始和后續(xù)偶聯(lián)步驟兩者期間發(fā)生在以下部位的化學(xué)反應(yīng)(1)α-氨基部位，或O)反應(yīng)性側(cè)鏈部位。在選擇用于合成肽的具體保護(hù)基時，通常要遵循下列通則。具體而言，α-氨基保護(hù)基(1)在用于偶聯(lián)反應(yīng)的條件下應(yīng)賦予α-氨基官能團(tuán)惰性，(2)在不會脫去側(cè)鏈保護(hù)基和不會改變肽片段的結(jié)構(gòu)的條件下，在偶聯(lián)反應(yīng)后應(yīng)容易脫去，和(3)在臨偶聯(lián)前，應(yīng)充分降低激活時消旋的可能性。另一方面，側(cè)鏈保護(hù)基(1)在用于偶聯(lián)反應(yīng)的條件下應(yīng)賦予側(cè)鏈官能團(tuán)惰性，(2)在用于脫去α-氨基保護(hù)基的條件下應(yīng)是穩(wěn)定的，和C3)在不會改變肽鏈的結(jié)構(gòu)的反應(yīng)條件下，應(yīng)容易地從所需完全裝配的肽上脫去。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，已知用于肽合成的保護(hù)基隨用于其脫去的試劑而在反應(yīng)性方面不同。例如某些保護(hù)基，例如三苯基甲基和2_(對聯(lián)苯基)異丙氧基羰24基，是非常不穩(wěn)定的，在溫和酸條件下可被裂解。叔丁氧基羰基(BOC)、叔戊氧基羰基、金剛烷基氧基羰基和對甲氧基芐氧基羰基等其它保護(hù)基的不穩(wěn)定性較低，其脫去需要中等強(qiáng)度的酸，例如三氟乙酸、鹽酸或三氟化硼的乙酸溶液。芐氧基羰基(CBZ或Z)、鹵代芐氧基羰基、對硝基芐氧基羰基、環(huán)烷基氧基羰基和異丙氧基羰基等其它保護(hù)基的不穩(wěn)定性甚至更低，其脫去需要甚至更強(qiáng)的酸，例如氟化氫、溴化氫或三氟乙酸硼的三氟乙酸溶液。本領(lǐng)域己知的合適保護(hù)基參見Gross等，ThePeptides=Analysis,Structure,Biology，第3卷“ProtectionofFunctionalGroupsinPeptideSynthesis"(AcademicPress1981)。一些α-氨基保護(hù)基是BOC和FM0C。對于存在于Lys上的側(cè)鏈氨基，可通過上文(1)中提及的任何基團(tuán)予以保護(hù)，例如B0C、2-氯芐氧基羰基等。對于Arg的胍基，可通過硝基、甲苯磺?；BZ、金剛烷基氧基羰基、2，2,5,7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；?、2，3，6-三甲基-4-甲氧基苯基磺酰基或BOC基團(tuán)提供保護(hù)。對于Ser或Thr的羥基，可通過例如叔丁基；芐基(BZL)；或取代的BZL，例如對甲氧基芐基、對硝基芐基、對氯芐基、鄰氯芐基和2，6_二氯芐基予以保護(hù)。對于Asp或Glu的羧基，可使用諸如BZL、叔丁基、環(huán)己基、環(huán)戊基等這類基團(tuán)，通過例如酯化予以保護(hù)。對于His的咪唑氮，適宜用芐氧基甲基(BOM)或甲苯磺?；?tosyi)部分作為保護(hù)基。對于Tyr的酚羥基，適宜采用例如四氫吡喃基、叔丁基、三苯甲基、BZL、氯芐基、4-溴芐基和2，6_二氯芐基等保護(hù)基。優(yōu)選的保護(hù)基為溴芐氧基羰基。對于Asn或Gln的側(cè)鏈氨基，優(yōu)選使用咕噸基(Xan)。對于Met，優(yōu)選氨基酸是未保護(hù)的。對于Cys的巰基，通常使用對甲氧基芐基。其它標(biāo)準(zhǔn)的α-氨基脫保護(hù)試劑(例如HCl/二噁烷)和用于脫去特定氨基保護(hù)基的條件為本領(lǐng)域技術(shù)人員所掌握，例如Lubke等，ChemieundBiochemiederAminosauren,PeptideundProteineI,第II-I章，102-117(GeorgThiemeVerlagStuttgart1975)中描述的那些。在脫去α-氨基保護(hù)基后，未保護(hù)的α-氨基，一般仍是側(cè)鏈?zhǔn)鼙Ｗo(hù)的，可在預(yù)定序列中以逐步方式偶聯(lián)。逐步方法的備選方法是片段縮合方法，其中使預(yù)形成的長度短的肽(各代表所需序列的部分)與結(jié)合固相支持體的延伸氨基酸鏈偶聯(lián)。對于這種逐步方法，特別合適的偶聯(lián)試劑是Ν，Ν'-二環(huán)己基碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺。同樣，對于片段方法，選擇偶聯(lián)試劑以及選擇為使所需性質(zhì)和大小的片段偶聯(lián)所需要的斷裂方式對于成功是重要的，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。通常將各個受保護(hù)的氨基酸或氨基酸序列以超過化學(xué)計算量的量導(dǎo)入固相反應(yīng)器中，且偶聯(lián)適宜在有機(jī)溶劑中進(jìn)行，例如二甲基甲酰胺(DMF)、CH2C12或其混合物。如果發(fā)生不完全偶聯(lián)，則通常在準(zhǔn)備與下一個氨基酸偶聯(lián)中脫去N-氨基保護(hù)基之前，重復(fù)偶聯(lián)步驟。在脫去α-氨基保護(hù)基后，其余的α-氨基和側(cè)鏈?zhǔn)鼙Ｗo(hù)的氨基酸可在預(yù)定序列中以逐步方式偶聯(lián)?？梢员O(jiān)測每個合成階段中偶聯(lián)反應(yīng)的成功。監(jiān)測合成的優(yōu)選方法是通過茚三酮反應(yīng)，參見Kaiser等，Anal.Biochem.，34:595(1970)。也可采用眾所周知的市售方法和裝置自動進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，例如Beckman990PeptideSynthesizer。在完成所需要的肽序列時，必須將受保護(hù)的肽從樹脂支持體上切割下來，并且必須脫去所有的保護(hù)基。保護(hù)基的切割反應(yīng)和脫去適宜與脫保護(hù)反應(yīng)同時或相繼完成。如果將肽錨定在樹脂上的鍵是酯鍵，則可通過能夠破壞酯鍵并能夠滲入樹脂基質(zhì)的任何試劑切割。一種有用的方法是通過用液態(tài)無水氟化氫處理。這種試劑一般不僅僅將肽從樹脂上切割下來，而且還將脫去所有的酸不穩(wěn)定保護(hù)基，因此，將直接提供完全脫保護(hù)的肽。如果不是酸不穩(wěn)定的其它保護(hù)基存在時，則必須進(jìn)行其它脫保護(hù)步驟?？砂凑站唧w需要和情況，在上述氟化氫處理之前或之后進(jìn)行這些步驟。如果需要切割肽而不脫去保護(hù)基，則可對受保護(hù)的肽-樹脂進(jìn)行甲醇分解，因此產(chǎn)生受保護(hù)的肽，其中C端羧基是甲基化的。這種甲基酯隨后可在溫和的堿性條件下水解，得到游離C端羧基。然后可通過用強(qiáng)酸(例如液態(tài)氟化氫)處理脫去肽鏈上的保護(hù)基。甲醇分解的一種特別有用的技術(shù)是Moore等，Peptides,Proc.FifthAmer.Pept.Symp.，518-521(Goodman等編輯，1977)中的技術(shù)，其中受保護(hù)的肽-樹脂在冠醚存在下用甲醇和氰化鉀處理。如果采用氯代甲基化樹脂，則用于將受保護(hù)的肽從樹脂上切割下來的其它方法包括(1)氨解，和(2)胼解。如有需要，可將所得C端酰胺或酰胼水解成游離C端羧基部分，并按常規(guī)方法脫去保護(hù)基?？稍趯⑹鼙Ｗo(hù)的肽從支持體上切割下來之前或之后，脫去存在于N端α-氨基上的保護(hù)基。通常采用層析技術(shù)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明肽的純化，例如制備HPLC(包括反相HPLC)、凝膠滲透層析、離子交換層析、分配層析、親和層析(包括單克隆抗體柱)等，或者其它常規(guī)技術(shù)，例如反流分布法等。藥物組合物、制劑、途徑和劑量本發(fā)明的藥物組合物在本領(lǐng)域本身已知的制劑中包含PTH或PTHrP肽或多肽類似物(及其變體、融合蛋白、多聚體肽、肽模擬物、擬肽和化學(xué)衍生物)。本發(fā)明的藥物制劑按已知方法制備，例如通過常規(guī)混合、制粒、溶解或凍干步驟。合適的賦形劑可包括填充劑、粘合劑、崩解劑、助劑和穩(wěn)定劑，所有這些都是本領(lǐng)域已知的。用于胃腸外給藥的合適制劑包括水溶性形式(例如水溶性鹽)的蛋白質(zhì)的水溶液劑。另外，可以給予活性化合物的混懸劑作為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸浠鞈覄?。合適的親脂性溶劑或溶媒包括脂肪油(例如芝麻油)或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯。水性注射混懸劑可含有可增加混懸劑的粘度的物質(zhì)。絕對必要的是，溶媒、載體或賦形劑以及配制組合物的條件不得不利地影響PTH或PTHrP肽或多肽類似物的生物活性或藥物活性。組合物可呈凍干微粒材料、滅菌或無菌產(chǎn)生的溶液劑、片劑、安瓿劑等形式?？纱嬖谌苊剑缢?優(yōu)選緩沖至生理上可接受的ΡΗ，例如在磷酸緩沖鹽溶液中)或其它惰性固體或液體材料，例如生理鹽水或各種緩沖劑。具體的溶媒不是決定性的，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解哪種溶媒可用作本文所述的任何具體用途。本發(fā)明的其它藥學(xué)上可接受的載體為脂質(zhì)體，活性蛋白包含在其中的藥物組合物分散或不同地存在于小體中，小體由附在脂質(zhì)層上的水性同心層組成?；钚缘鞍變?yōu)選存在于內(nèi)部或外部的水層和脂質(zhì)層中，或者在任何情況下，都存在于一般稱為脂質(zhì)體混懸液的非均質(zhì)系統(tǒng)中。疏水層或脂質(zhì)層一般但并非排它地包含磷脂(例如卵磷脂和鞘磷脂)、類固醇(例如膽固醇)、或多或少的離子型表面活性物質(zhì)(例如磷酸聯(lián)十六烷酯、硬脂胺或磷脂酸)和/或具有疏水性質(zhì)的其它材料?？膳渲票景l(fā)明的全身給藥的藥物制劑用于腸內(nèi)、胃腸外或局部給藥，且可同時使用所有三種類型的制劑以實(shí)現(xiàn)活性成分的全身給藥。除藥理活性肽或多肽類似物以外，在一些方面，藥物組合物含有合適的藥學(xué)上可接受的載體，所述載體包括賦形劑和助劑，其有利于將活性化合物加工成可在藥學(xué)上使用的制劑，如本領(lǐng)域眾所周知的。通過注射或口服給予的合適溶液劑可含有約0.01-99%活性化合物以及賦形劑。表述“藥學(xué)上可接受的”是指生理上容許的并且給予人時一般不會產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)或類似不良反應(yīng)(例如胃反應(yīng)(gastricupset)、眩暈等)的分子實(shí)體和組合物。優(yōu)選本文使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指經(jīng)過聯(lián)邦政府或州政府管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)或者登錄于美國藥典或其它普遍公認(rèn)的藥典，可用于動物、更特別用于人?？赏ㄟ^實(shí)現(xiàn)其預(yù)定目的的任何方法給予本發(fā)明的藥物組合物。治療任何具體疾病的臨床領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可容易地確定給藥的量和方案。優(yōu)選的量如下所述。本發(fā)明的方法包括通過胃腸外途徑給藥，胃腸外途徑包括皮下(s.c.)、靜脈內(nèi)(i.v.)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、經(jīng)皮、局部或吸入途徑。優(yōu)選的途徑是通過注射。備選地或者同時地，可通過口服途徑給予。所給予的劑量將取決于接受者的年齡、健康狀況和體重、同時治療的種類(如有的話)、治療頻率和所需效果的性質(zhì)。在本發(fā)明的方法中，組合物可給予一次，但也可給予6-12次(甚至更多次，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員憑經(jīng)驗(yàn)所掌握的一樣)。治療可每天進(jìn)行，但也可每兩天或每三天或者如一周一次不頻繁地進(jìn)行，這取決于在受治療者中觀察到的有益作用和任何毒性作用?？蓪⒈疚墓_的藥物制劑設(shè)計成下文所述的短效、速釋、長效或緩釋的。還可配制藥物制劑用于即釋、控釋或慢釋。本發(fā)明的組合物還可包括例如微團(tuán)或脂質(zhì)體或某些其它微囊形式，或者可以緩釋形式給予以提供長期保存和/或遞送效果。可按照任何方案，包括例如每日(每天1次、每天2次、每天3次、每天4次、每天5次、每天6次)、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每兩周、每三周、每月或每兩月一次地給予本公開內(nèi)容的藥物制劑。按照一些實(shí)施方案，提供一種藥物組合物，其包含本文所公開的優(yōu)選無菌的且優(yōu)選純度水平為至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的任何PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)和藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。這類組合物可含有濃度至少為A的PTH肽或PTHrP肽，其中A為0.001mg/ml、0.01mg/ml、0.lmg/ml、0.5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、1lmg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml、16mg/ml、17mg/ml、18mg/ml、19mg/ml、20mg/ml、2lmg/ml、22mg/ml、23mg/ml,24mg/ml,25mg/ml或更高。在其它實(shí)施方案中，這類組合物可含有濃度至多為B的PTH月太或PTHrP肽,其中B為30mg/ml、25mg/ml、24mg/ml、23mg/ml、22mg/ml、2lmg/ml、20mg/ml、19mg/ml、18mg/ml、17mg/ml、16mg/ml、15mg/ml、14mg/ml、13mg/ml、12mg/ml、1lmg/ml、IOmg/ml、9mg/ml、8mg/ml、7mg/ml、6mg/ml、5mg/ml、4mg/ml、3mg/ml、2mg/ml、lmg/ml或0.lmg/ml。在一些實(shí)施方案中，組合物可含有濃度范圍為A-Bmg/ml的PTH肽或PTHrP肽，例如0.001-30.Omg/ml。在一個實(shí)施方案中，藥物組合物包含滅菌并任選保存在各種容器中的水溶液。本公開內(nèi)容的PTH肽或PTHrP肽可用于一個實(shí)施方案以制備即用于注射的預(yù)配制溶液劑。在其它實(shí)施方案中，藥物組合物包含凍干粉?？蓪⑺幬锝M合物進(jìn)一步包裝作為本文另描述的藥盒的一部分，藥盒包括將組合物給予患者的一次性裝置。容器或藥盒可標(biāo)明保存在環(huán)境室溫下或保存在冷凍溫度下。藥物組合物可包含任何藥學(xué)上可接受的成分，包括例如酸化劑、添加劑、吸附劑、氣霧劑拋射劑、排氣劑、堿化劑、防結(jié)塊劑、抗凝血劑、抗微生物防腐劑、抗氧化劑、抗菌劑、基質(zhì)、粘合劑、緩沖劑、螯合劑、包衣劑、著色劑、干燥劑、洗滌劑、稀釋劑、消毒劑、崩解劑、分散齊、促溶劑、染料、軟化劑、乳化劑、乳液穩(wěn)定劑、填充劑、成膜劑、增味劑、矯味劑、促流動劑、膠凝劑、成粒劑、濕潤劑、潤滑劑、粘膜粘著劑、軟膏基質(zhì)、軟膏、油性溶媒、無機(jī)基質(zhì)、軟錠劑基質(zhì)、色素、增塑劑、磨光劑、防腐劑、掩蔽劑、皮膚滲透劑、增溶劑、溶劑、穩(wěn)定劑、栓劑基質(zhì)、表面活性劑、表面活性物質(zhì)、助懸劑、甜味劑、治療劑、增稠劑、張度劑、毒性劑、增粘劑、吸水劑、水可混溶性共溶劑、水軟化劑或潤濕劑。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物包含下列組分的任一種或組合阿拉伯膠、乙酰舒泛鉀、檸檬酸乙酰基三丁酯、檸檬酸乙酰基三乙酯、瓊脂、白蛋白、醇、無水醇、變性醇、稀釋酒精、油桐酸、海藻酸、脂肪族聚酯、氧化鋁、氫氧化鋁、硬脂酸鋁、支鏈淀粉、α-直鏈淀粉、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、阿司帕坦、注射用抑菌水、皂土、皂土乳漿、苯扎氯銨、芐索氯銨、苯甲酸、苯甲醇、苯甲酸芐酯、溴硝丙二醇、丁羥茴醚、丁羥甲苯、羥苯丁酯、羥苯丁酯鈉、藻酸鈣、抗壞血酸鈣、碳酸鈣、環(huán)拉酸鈣、無水磷酸氫鈣、磷酸氫鈣二水合物(dibasicdehydratecalciumphosphate)、磷酸三鈣、丙酸鈣、硅酸鈣、山梨酸鈣、硬脂酸鈣、硫酸鈣、硫酸鈣半水合物、卡諾拉油(canolaoil)、卡波姆、二氧化碳、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、胡蘿卜素、角叉菜膠、蓖麻油、氫化蓖麻油、陽離子乳化蠟、乙酸纖維素、醋酞纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、粉狀纖維素、硅化微晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、十六醇十八醇混合物、溴化十六烷基三甲銨、鯨蠟醇、氯己定、三氯叔丁醇、氯甲酚、膽固醇、醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定、一氯二氟乙烷(HCFC)、一氯二氟甲烷、氯氟烴(CFC)、氯苯氧乙醇、氯二甲苯酚、玉米糖漿固體、無水檸檬酸、檸檬酸一水合物、可可脂、著色劑、玉米油、棉籽油、甲酚、間甲酚、鄰甲酚、對甲酚、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、交聚維酮、環(huán)拉酸、環(huán)糊精、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、葡萄糖、無水葡萄糖、二唑烷基脲(diazolidinylurea)、鄰苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、二乙醇胺、鄰苯二甲酸二乙酯、二氟乙烷(HFC)、二甲基-β-環(huán)糊精、環(huán)糊精型化合物(例如Captisol⑧)、二甲醚、鄰苯二甲酸二甲酯、依地酸二鉀(dipotassiumedentate)、依地酸二鈉、磷酸氫二鈉、多庫酯鈣、多庫酯鉀、多庫酯鈉、沒食子酸十二醇酯、十二烷基三甲基溴銨、依地酸鈣二鈉、依地酸(edticacid)、乙葡胺、乙醇、乙基纖維素、沒食子酸乙酯、月桂酸乙酯、乙基麥芽酚、油酸乙酯、羥苯乙酯、羥苯乙酯鉀、羥苯乙酯鈉、乙香草醛、果糖、液狀果糖、碾磨果糖、無熱原果糖、粉狀果糖、富馬酸、明膠、葡萄糖、液狀葡萄糖、飽和植物脂肪酸的甘油酯混合物、甘油、甘油二十二烷酸酯、甘油單油酸酯、甘油單硬脂酸酯、自乳化甘油單硬脂酸酯、檸檬酸硬脂酸甘油酯、甘氨酸、二醇類、glycofurol、瓜爾膠、五氟丙烷(HFC)、十六烷基三甲基溴化銨、高果糖漿、人血清白蛋白、烴(HC)、稀鹽酸、II型氫化植物物、羥乙基纖維素、2-輕乙基-β-環(huán)糊精、羥丙基纖維素、低取代羥丙基纖維素、2-羥丙基-β-環(huán)糊精、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、咪脲、靛胭脂、離子交換劑、氧化鐵、異丙醇、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、等滲鹽水、高嶺土、乳酸、拉克替醇、乳糖、羊毛脂、羊毛脂醇類、無水羊毛脂、卵磷脂、硅酸鎂鋁、碳酸鎂、正常碳酸鎂、無水碳酸鎂、堿式碳酸鎂、氫氧化鎂、月桂基硫酸鎂、氧化鎂、硅酸鎂、硬脂酸鎂、三硅酸鎂、無水三硅酸鎂、蘋果酸、麥芽、麥芽糖醇、麥芽糖醇溶液、麥芽糖糊精、麥芽酚、麥芽糖、甘露醇、中鏈甘油三酯、葡甲胺、薄荷腦、甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯、油酸甲酯、羥苯甲酯、羥苯甲酯鉀、羥苯甲酯鈉、微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉、礦物油、輕質(zhì)礦物油、礦物油和羊毛脂醇、油、橄欖油、單乙醇胺、蒙脫石、沒食子酸辛酯、油酸、棕櫚酸、石蠟、花生油、凡士林、凡士林和羊毛脂醇、藥用釉料、苯酚、液化苯酚、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯基乙醇、醋酸苯汞、硼酸苯汞、硝酸苯汞、聚克立林、聚克立林鉀、泊洛沙姆、聚葡萄糖、聚乙二醇、聚環(huán)氧乙烷、聚丙烯酸脂、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚甲基丙烯酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸鉀、苯甲酸鉀、碳酸氫鉀、亞硫酸氫鉀、氯化鉀、檸檬酸鉀、無水檸檬酸鉀、磷酸氫鉀、焦亞硫酸鉀、磷酸二氫鉀、丙酸鉀、山梨酸鉀、聚維酮、丙醇、丙酸、碳酸丙烯、丙二醇、丙二醇藻酸酯、沒食子酸丙酯、羥苯丙酯、羥苯丙酯鉀、羥苯丙酯鈉、硫酸魚精蛋白、油菜籽油、林格氏液、糖精、糖精銨、糖精鈣、糖精鈉、紅花油、皂石、血清蛋白、芝麻油、膠態(tài)硅石、膠態(tài)二氧化硅、藻酸鈉、抗壞血酸鈉、苯甲酸鈉、碳酸氫鈉、亞硫酸氫鈉、氯化鈉、無水檸檬酸鈉、檸檬酸鈉二水合物(sodiumcitratedehydrate)、氯化鈉、環(huán)拉酸鈉、依地酸鈉、十二烷基硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、磷酸三鈉、無水丙酸鈉、丙酸鈉、山梨酸鈉、羥基乙酸淀粉鈉、硬脂酰醇富馬酸鈉、亞硫酸鈉、山梨酸、山梨坦酯(脂肪酸山梨坦酯)、山梨糖醇、山梨糖醇溶液70%、大豆油、鯨蠟、淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、預(yù)糊化淀粉、可滅菌玉米淀粉、硬脂酸、純化硬脂酸、硬脂醇、蔗糖、糖、可壓糖、糖果劑的糖、糖球、轉(zhuǎn)化糖、蔗糖-轉(zhuǎn)化糖聚合物(Sugartab)、SunsetYellowFCF、合成石蠟、滑石粉、酒石酸、酒石黃、四氟乙烷(HFC)、可可油、硫柳汞、二氧化鈦、α生育酚、醋酸維生素Ε、α琥珀酸維生素Ε、β-生育酚、δ-生育酚、Y-生育酚、西黃蓍膠、三醋精、檸檬酸三丁酯、三乙醇胺、檸檬酸三乙酯、三甲基-β-環(huán)糊精、三甲基十四烷基溴化銨、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、依地酸三鈉、香草醛、I型氫化植物油、水、軟水、硬水、無二氧化碳水、無熱原水、注射用水、無菌吸入用水、注射用無菌水、沖洗用無菌水、蠟、陰離子乳化蠟、巴西棕櫚蠟、陽離子乳化蠟、十六烷基酯蠟、微晶蠟、非離子乳化蠟、栓劑蠟、白蠟、黃蠟、白礦脂、羊毛脂、黃原膠、木糖醇、玉米醇溶蛋白、丙酸鋅、鋅鹽、硬脂酸鋅或通過引用全部予以結(jié)合的HandbookofPharmaceuticalExcipients,第3版，A.H.Kibbe(PharmaceuticalPress,London,UK,2000)中的任何賦形劑。Remington'sPharmaceuticalSciences，第16版，Ε.W.Martin(MackPublishingCo.，Easton,Pa.，1980)(其通過引用全部予以結(jié)合)公開了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種組分和用于其制備的已知技術(shù)。除非任何常規(guī)物質(zhì)與藥物組合物不相容，否則包括其在藥物組合物中的用途。還可將補(bǔ)充活性成分摻入組合物中。在一些實(shí)施方案中，前述組分可以任何濃度存在于藥物組合物中，例如至少A，其中A為0.0001%w/v、0.001%w/v、0.01%w/v、0.1%w/v,l%w/v,2%w/v,5%w/v.10%w/v,20%w/v,30%w/v,40%w/v,50%w/v,60%w/v,70%w/v,80%w/v或90%w/v。在一些實(shí)施方案中，前述組分可以任何濃度存在于藥物組合物中，例如至多B，其中B為90%w/v,80%w/v,70%w/v,60%w/v,50%w/v,40%w/v,30%w/v,20%w/v.10%w/v,5%w/v,2%w/v、l%w/v、0.1%w/v,0.001%w/v或0.0001%。在其它實(shí)施方案中，前述組分可以任何濃度范圍存在于藥物組合物中，例如約A-約B。在一些實(shí)施方案中，A為0.0001%，B為90%。可配制藥物組合物以達(dá)到生理上相容的pH。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物的pH可為至少5、至少5.5、至少6、至少6.5、至少7、至少7.5、至少8、至少8.5、至少9、至少9.5、至少10或至少10.5直到并包括pH11，這取決于制劑和給藥途徑。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物可包含緩沖劑以達(dá)到生理上相容的pH。緩沖劑可包括能夠在所需要的pH下緩沖的任何化合物，例如磷酸緩沖劑(例如PBQ、三乙醇胺、Tris、N-二(羥乙基)甘氨酸、TAPS、曲辛、HEPES、TES、MOPS、PIPES、卡可基酸鹽、MES等。在某些實(shí)施方案中，緩沖劑的強(qiáng)度為至少0.5mM、至少ImM、至少5mM、至少10mM、至少20mM、至少30mM、至少40mM、至少50mM、至少60mM、至少70mM、至少80mM、至少90mM、至少lOOmM、至少120mM、至少150mM或至少200mM。在一些實(shí)施方案中，緩沖劑的強(qiáng)度不超過300mM(例如至多200mM、至多l(xiāng)OOmM、至多90mM、至多80mM、至多70mM、至多60mM、至多50mM、至多40mM、至多30mM、至多20mM、至多10mM、至多5mM、至多ImM)。給藥途徑有關(guān)給藥途徑的下列論述僅提供用于舉例說明示例性的實(shí)施方案，不應(yīng)理解為以任何方式限制范圍。適于口服給予的制劑可包括(a)液體溶液劑，例如溶于水、鹽水或橙汁等稀釋劑中的有效量的本公開內(nèi)容的類似物；(b)各含有預(yù)定量的作為固體或顆粒的活性成分的膠囊劑、小藥囊劑、片劑、糖錠劑和錠劑；(c)散劑；(d)合適液體中的混懸劑；和(e)合適的乳劑。液體制劑可包括稀釋劑，例如水和醇，例如乙醇、苯甲醇和聚乙二醇，含或不含添加的藥學(xué)上可接受的表面活性劑。膠囊劑形式可以是普遍的硬殼或軟殼明膠類型，其含有例如表面活性劑、潤滑劑和惰性填充劑，例如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉。片劑形式可包含以下的一種或多種乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸和其它賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、濕潤劑、防腐劑、矯味劑和其它藥理上相容的賦形劑。除含有本領(lǐng)域已知的這類賦形劑以外，糖錠劑形式可在調(diào)料中包含本公開內(nèi)容的類似物，調(diào)料通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠，以及軟錠劑在惰性基質(zhì)中包含本公開內(nèi)容的類似物，惰性基質(zhì)例如明膠和甘油，或者蔗糖和阿拉伯樹膠、乳劑、凝膠等。本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)，可單獨(dú)或與其它合適的組分聯(lián)合通過經(jīng)肺給藥遞送，并且可制成氣霧劑以通過吸入給予?？蓪⑦@些氣霧劑制劑裝入加壓的可接受的拋射劑中，例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮等。它們也可配成用于非加壓制劑(例如噴霧器或霧化器中)中的藥物。這類噴霧劑制劑還可用來噴淋粘膜。在一些實(shí)施方案中，將PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)配成粉末混合物或配成微?；蚣{米粒。合適的經(jīng)肺制劑是本領(lǐng)域已知的。參見例如QianIntJPharm366:218-220(2009)；Adjei禾口Garren,PharmaceuticalResearch,7(6):565-569(1990)；Kawashima等，JControlledRelease62(1-2):279-287(1999)；Liu等，PharmRes10(2):2沘_232(1993)；國際專利申請公開號WO2007/133747和WO2007/141411。適于胃腸外給藥的制劑包括含水和無水的等滲無菌注射溶液劑，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使制劑與預(yù)期接受者血液等滲的溶質(zhì)；以及含水和無水的無菌混懸30劑，其可包括助懸劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。術(shù)語“胃腸外”是指不通過消化道而通過某些其它途徑，例如皮下、肌內(nèi)、脊柱內(nèi)或靜脈內(nèi)。本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)可與藥用載體中的生理上可接受的稀釋劑一起給予，藥用載體例如無菌液體或液體混合物，包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和有關(guān)糖溶液、醇(例如乙醇或十六醇)、二醇(例如丙二醇或聚乙二醇)、二甲亞砜、甘油、縮酮(例如2，2_二甲基-153-二氧雜環(huán)戊烷-4-甲醇)、醚、聚(乙二醇)400、油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油酯、或含或不含添加的以下藥學(xué)上可接受的表面活性劑的乙酰化脂肪酸甘油酯例如皂或洗滌劑、助懸劑(例如果膠，卡波姆，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素)或乳化劑和其它藥用輔料。可用于胃腸外制劑的油包括石油、動物油、植物油或合成油。油的具體實(shí)例包括花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、凡士林油和礦物油。用于胃腸外制劑的合適的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸異丙酯是合適的脂肪酸酯的實(shí)例。用于胃腸外制劑的合適的皂包括脂肪堿金屬鹽、銨鹽和三乙醇胺鹽，和合適的洗滌劑包括(a)陽離子洗滌劑，例如二甲基二烷基鹵化銨和烷基吡啶鍋1鹵化物，(b)陰離子洗滌劑，例如烷基磺酸鹽、芳基磺酸鹽和烯烴磺酸鹽、烷基硫酸鹽、烯烴硫酸鹽、醚硫酸鹽和甘油一硫酸酯鹽以及磺基琥珀酸鹽，(c)非離子洗滌劑，例如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺和聚氧乙烯聚丙烯共聚物，(d)兩性洗滌劑，例如烷基-β-氨基丙酸鹽和2-烷基-咪唑啉季銨鹽，和(e)其混合物。胃腸外制劑通常在溶液中含有約0.5%-約25%重量的本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)?？梢允褂梅栏瘎┖途彌_劑。為了最小化或消除對注射部位的刺激，這類組合物可含有一種或多種親水-親脂平衡(HLB)為約12-約17的非離子表面活性劑。這類制劑中表面活性劑的量通常為約5%-約15%重量。合適的表面活性劑包括聚乙二醇脫水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脫水山梨糖醇單油酸酯和環(huán)氧乙烷與通過環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的疏水性基質(zhì)的高分子量加合物。胃腸外制劑可以單位劑量或多劑量密封容器存在，例如安瓿和小瓶，并且可保存在冷凍干燥(凍干)條件下，臨用前只需要加入注射用無菌液體賦形劑，例如水。臨時注射溶液劑和混懸劑可由前述各種無菌散劑、顆粒劑和片劑制備。注射制劑與本發(fā)明的一致。注射組合物的有效藥用載體的要求為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知(參見例如PharmaceuticsandPharmacyPractice,J.B.LippincottCompany,Philadelphia,PA,Banker和Chalmers編著，第238-250頁(1982)；以及ASHPHandbookonInjectableDrugs,Toissel，第4版，第622-630頁(1986))。另外，可通過與各種基質(zhì)(例如乳化基質(zhì)或水溶性基質(zhì))混合將本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)制成用于直腸給藥的栓劑。適于陰道給藥的制劑可呈除活性成分以外含有本領(lǐng)域已知合適的載體的陰道栓劑、塞子、乳膏劑、凝膠、糊劑、泡沫劑或噴霧劑制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解的是，除上述藥物組合物以外，可將本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)配制成包合絡(luò)合物(例如環(huán)糊精包合絡(luò)合物)或脂質(zhì)體。劑量本發(fā)明范圍內(nèi)的藥物組合物包括其中肽或多肽類似物的含有量足以達(dá)到預(yù)定目的的所有組合物。雖然個體的需要有變化，但是各組分的有效量的最佳范圍的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的掌握之中。通常劑量包括0.l-100mg/kg/體重。對于本公開內(nèi)容的目的，所給予的本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的量或劑量在合理的時限內(nèi)在受治療者或動物中應(yīng)足以實(shí)現(xiàn)例如治療或預(yù)防反應(yīng)。例如，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的劑量應(yīng)在從給藥時起約1-4分鐘、1-4小時或1-4周或更長(例如5-20或更多周)的時間內(nèi)，足以刺激本文所述cAMP的細(xì)胞分泌或在細(xì)胞中積累或者足以激活細(xì)胞中的PTH受體、治療患有骨損失相關(guān)疾病或病癥的受治療者、改善骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀、延緩骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展或者使骨再生。在某些實(shí)施方案中，時間可能甚至更久?？筛鶕?jù)本公開內(nèi)容的具體PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的功效和待治療的動物(例如人)的狀況以及動物(例如人)的體重，來確定劑量。用于確定所給予的劑量的許多測定是本領(lǐng)域已知的。對于本文的目的，可采用以下測定來確定要給予哺乳動物的起始劑量包括在一組哺乳動物中比較當(dāng)將規(guī)定劑量的本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)給予哺乳動物時由細(xì)胞刺激cAMP的程度，所述一組哺乳動物各給予不同劑量的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)。測試刺激cAMP產(chǎn)生的程度的方法是本領(lǐng)域已知的，并包括本文實(shí)施例1中描述的方法。還可通過給予本公開內(nèi)容的具體類似物可能伴發(fā)的任何不良副作用的存在情況、性質(zhì)和程度，來確定本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的劑量。主治醫(yī)師通常將考慮例如年齡、體重、一般健康狀況、飲食、性別、待給予的本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)、給藥途徑和待治療疾病的嚴(yán)重程度等各種因素，以確定用于治療各個體患者的本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的劑量。通過實(shí)例且不旨在限制本發(fā)明，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的劑量可為約0.0001-約lg/kg待治療受治療者體重/天、約0.0001-約0.001g/kg體重/天或約0.Olmg-約lg/kg體重/天。靶向形式本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易理解的是，可用許多方式對本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)進(jìn)行修飾，使得通過修飾提高本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的治療或預(yù)防功效。例如，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)可與靶向部分直接綴合或通過接頭間接綴合。將化合物，例如本文所述的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)與靶向部分綴合的操作是本領(lǐng)域已知的。參見例如Wadhwa等，JDrugTargeting,3,111-127(1995)和美國專利號5，087，616。本文使用的術(shù)語“靶向部分”是指特異性識別和結(jié)合細(xì)胞表面受體，使得靶向部分引導(dǎo)本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)遞送到表面受體在其上表達(dá)的細(xì)胞群中的任何分子或物質(zhì)。靶向部分包括但不限于抗體或其片段、肽、激素、生長因子、細(xì)胞因子和與細(xì)胞表面受體結(jié)合的任何其它天然或非天然的配體(例如上皮生長因子受體(EGFR)、1~細(xì)胞受體(TCR)工細(xì)胞受體(BCR)、□^8、血小板衍生生長因子受體(PDGF)、煙堿乙酰膽堿受體(nAChR)等)。本文使用的“接頭”為使兩個分離的實(shí)體彼此結(jié)合的鍵、分子或分子基團(tuán)。接頭可提供兩個實(shí)體的最適間距，或者還可提供允許兩個實(shí)體彼此分開的不穩(wěn)定鍵。不穩(wěn)定鍵包括光可裂解基團(tuán)、酸不穩(wěn)定部分、堿不穩(wěn)定部分和酶可切割基團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語“接頭”是指使本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)與靶向部分橋接的任何物質(zhì)或分子。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員知道，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)上對于本公開內(nèi)容的類似物的功能不是必需的部位是用于與接頭和/或靶向部分連接的理想部位，前提是，一旦與本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)連接，接頭和/或靶向部分不會干擾本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的功能，即刺激cAMP從細(xì)胞分泌、治療骨質(zhì)疏松癥或癌癥的能力?？蒯屩苿﹤溥x地，可將本文所述PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)修飾成貯庫制劑形式，使得相對于時間和機(jī)體內(nèi)的位置控制將本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)釋放到其被給予的機(jī)體內(nèi)的方式(參見例如美國專利號4，450，150)。本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的貯庫制劑形式可為例如可植入組合物，所述可植入組合物包含本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)和多孔或非多孔材料(例如聚合物)，其中本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)被所述材料和/或降解的非多孔材料包封或擴(kuò)散到整個材料和/或降解的非多孔材料中。然后將貯庫制劑植入機(jī)體內(nèi)的所需部位，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)以預(yù)定速率從植入物中釋放出來。在某些方面，藥物組合物經(jīng)修飾以具有任何類型的體內(nèi)釋放特征。在一些方面，藥物組合物為即釋、控釋、緩釋、延釋、遲釋或兩階段釋放制劑。配制用于控釋的肽的方法是本領(lǐng)域已知的。參見例如Qian等，JPharm374=46-52(209)和國際專利申請公開號WO2008/130158、W02004/033036、W02000/032218和WO1999/040942。本發(fā)明的組合物還可包含例如微團(tuán)或脂質(zhì)體，或者某些其它的包封形式，或者可以緩釋形式給予以提供長期保存和/或遞送效果。本公開的藥物制劑可按照任何方案給予，包括例如每日(每天1次、每天2次、每天3次、每天4次、每天5次、每天6次)、每兩天、每三天、每四天、每五天、每六天、每周、每兩周、每三周、每月或每兩月一次。組合本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)可與另一種活性成分聯(lián)合使用。例如本文公開的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)可與另一種抗骨質(zhì)疏松癥藥一起配制，所述另一種抗骨質(zhì)疏松癥藥包括以下的任一種二膦酸鹽類，例如阿侖膦酸鹽(Fosamax)、伊班膦酸鹽(Boniva)、利塞膦酸鹽(Actonel)和唑來膦酸(Reclast)，其減慢骨變薄速度并可導(dǎo)致骨密度提高；雷洛昔芬(Evista)，一種減慢骨變薄并引起骨厚度某種提高的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)；降鈣素(Calcimar或Miacalcin)，一種有助于調(diào)節(jié)機(jī)體中鈣水平并且是骨構(gòu)建過程的部分的天然存在激素；甲狀旁腺素(特立帕肽[Forteo])，通過注射給予；雌激素(例如含有或不含孕激素)；睪酮(注射劑、凝膠劑、貼劑)；在一些實(shí)施方案中，本公開內(nèi)容的PTH肽、PTHrP肽(或相關(guān)類似物或變體或化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)與抗癌藥一起配制。合適的抗癌藥是本領(lǐng)域已知的，包括任一種下列化療藥物鉬配位化合物、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗生素、抗有絲分裂生物堿和二氟核苷。在一些實(shí)施方案中，鉬配位化合物為順-二氨二水合鉬(II)-離子(diamminediaquoplatinum(II)-ion)；氯(二亞乙基三胺)_氯化鉬(II)；二氯(乙二胺)_合鉬(II)、二氨(1，1_環(huán)丁烷二羧根)合鉬(II)(卡鉬)；螺鉬；異丙鉬；二氨(2-乙基丙二酸根)_合鉬(II)；乙二胺丙二酸根合鉬(II)；水合(1，2-二氨基環(huán)己烷(dyclohexane))-硫酸根合鉬(II)；(1，2_二氨基環(huán)己烷)丙二酸根鉬(II)；(4-羧基鄰苯二甲酸根)(1，2_二氨基環(huán)己烷)合鉬(II)；(1，2_二氨基環(huán)己烷)-(異檸檬酸根)合鉬(II)；(1，2_二氨基環(huán)己烷)順(丙酮酸根)合鉬(II)；(1，2-二氨基環(huán)己烷)草酸根合鉬(II)；奧馬鉬和四鉬。在一些實(shí)施方案中，順鉬是用于本發(fā)明的組合物和方法的鉬配位化合物。順鉬是在名PLATIN0L下由BristolMyers-SquibbCorporation市售，可作為散劑獲得，用于與水、無菌鹽水或其它合適的溶媒一起配制。適用于本發(fā)明的其它鉬配位化合物是已知的，并且是市售可獲得的和/或可通過常規(guī)技術(shù)制備。順鉬或順式-二氯二氨合鉬II，在治療各種人實(shí)體惡性腫瘤中已成功用作化療藥物多年。最近，在治療各種人實(shí)體惡性腫瘤中，其它二氨基-鉬絡(luò)合物也具有作為化療藥物的功效。這類二氨基-鉬絡(luò)合物包括但不限于螺鉬和卡鉬。雖然順鉬和其它二氨基-鉬絡(luò)合物廣泛用于人用化療藥物，但是不得不以可導(dǎo)致毒性問題(例如腎損害)的高劑量水平遞送。在一些實(shí)施方案中，化療藥物為拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。拓?fù)洚悩?gòu)酶是能夠改變真核細(xì)胞中DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)的酶。它們對細(xì)胞功能和細(xì)胞增殖是決定性的。一般來講，真核細(xì)胞中有兩類拓?fù)洚悩?gòu)酶，即I型和II型。拓?fù)洚悩?gòu)酶I是分子量約為100，000的單體酶。該酶與DNA結(jié)合，引入暫時的單鏈缺口，解開雙螺旋(或使其得以解開)，并隨后在與DNA鏈解離前重新封閉缺口。最近的研究表明各種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑在患有卵巢癌、食管癌或非小細(xì)胞肺癌的人的治療中具有臨床功效。在一些方面，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑為喜樹堿或喜樹堿類似物。喜樹堿是由中國鄉(xiāng)土樹喜樹(Camptothecaaccuminata)和印度鄉(xiāng)土樹臭味假柴龍樹(Nothapodytesfoetida)產(chǎn)生的水不溶性細(xì)胞毒生物堿。喜樹堿表現(xiàn)出針對多種腫瘤細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞生長抑制活性。喜樹堿類似物類的化合物通常是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I的特異性抑制劑。術(shù)語“拓?fù)洚悩?gòu)酶的抑制劑”是指在結(jié)構(gòu)上與喜樹堿相關(guān)的任何腫瘤細(xì)胞生長抑制化合物。喜樹堿類似物類的化合物包括但不限于托泊替康、伊立替康和9-氨基-喜樹堿。用途雖然不受任何特定理論束縛，但是如本文首次描述一樣，預(yù)期本文所述PTH肽和PTHrP肽表現(xiàn)出改變的性質(zhì)，這種改變的性質(zhì)賦予提高的治療潛力。在這一方面，本發(fā)明提供治療非所需骨損失相關(guān)疾病或病癥的方法。所述方法包括以有效治療受治療者的量將本文所述藥物組合物給予有需要的受治療者。本發(fā)明還提供治療受治療者的癌癥的方法，所述方法包括以有效治療受治療者的量將本文所述藥物組合物給予有需要的受治療者。術(shù)語“治療”是指將包含PTH或PTHrP肽或多肽類似物(變體或化學(xué)衍生物)的藥物組合物給予受治療者。本文使用的術(shù)語“治療”不一定意味著100%或完全治愈。更確切地說，存在本領(lǐng)域普通技術(shù)人員視之為具有潛在益處或治療效果的不同的治療程度。在這方面，本發(fā)明的方法可提供治療哺乳動物的骨質(zhì)疏松癥或癌癥的任何水平的任何量。此外，本發(fā)明方法所提供的治療可包括治療疾病或病癥(例如待治療的骨質(zhì)疏松癥或癌癥)的一種或多種病況或癥狀，和/或可包括延緩疾病或病癥的進(jìn)展。例如治療骨質(zhì)疏松癥，包括改善骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀、延緩骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展和使骨再生。治療包括將所述藥物給予在出現(xiàn)臨床疾病的跡象之前處于發(fā)生骨質(zhì)疏松癥或癌癥風(fēng)險的受治療者，以及尚未進(jìn)行治療或已通過其它方法治療的確診有骨質(zhì)疏松癥或癌癥的受治療者。因此，本發(fā)明可用于預(yù)防或抑制骨質(zhì)疏松癥或癌癥。因此，本發(fā)明還提供改善骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的方法。在一些實(shí)施方案中，骨質(zhì)疏松癥的癥狀是疼痛、背痛、脊柱、腕或髖骨折和身高損失。所述方法包括以有效改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的量將本文所述藥物組合物給予有需要的受治療者。本發(fā)明還提供延緩骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的方法。所述方法包括以有效延緩骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的量將本文所述藥物組合物給予有需要的受治療者。骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展(或消退)可通過本領(lǐng)域已知方法監(jiān)測，包括例如雙X射線吸光光度法(dualx-rayabsorptiometry,DXA或DEXA)、超聲和定量計算體層攝影術(shù)(QCT)。本發(fā)明還提供使骨再生的方法。所述方法包括以有效使骨再生的量將本文所述藥物組合物給予有需要的受治療者?？赏ㄟ^本文已知方法監(jiān)測骨再生，包括例如測量受治療者的骨礦物密度。用于治療骨損失(例如骨質(zhì)疏松癥或癌癥)的PTH或PTHrP肽或多肽類似物的有效量或劑量的范圍為約0.l-100mg/kg/體重?？蓛?yōu)選通過體外注射細(xì)胞或體內(nèi)注射活的動物來測定有效劑量，以便采用本文描述的各種方法確定最佳劑量范圍。所給予的劑量將部分取決于接受者的健康狀況和體重、其它并行治療的存在(如有的話)、治療頻率和所需效果的性質(zhì)。本文使用的表述“有效量”或“對...有效的量”是指足以治療或預(yù)防的量，且優(yōu)選足以在血壓升高、發(fā)熱或白細(xì)胞計數(shù)等病理特征方面減少至少約25%、更優(yōu)選至少50%、最優(yōu)選至少90%，這是臨床上顯著的變化，正如可伴隨其存在和活性的。在涉及本發(fā)明時，該術(shù)語還可指足以改善或逆轉(zhuǎn)骨損失或癌癥的量。在一些實(shí)施方案中，非所需骨損失相關(guān)疾病或病癥是骨質(zhì)減少或骨質(zhì)疏松癥。對于本文的目的，癌癥可以是任何癌癥。本文使用的術(shù)語“癌癥”是指由異常和不受控制的細(xì)胞分裂引起的任何惡性生長或腫瘤，其可通過淋巴系統(tǒng)或血流擴(kuò)散到機(jī)體的其它部分。癌癥可以是任何癌癥，包括以下的任一種急性淋巴細(xì)胞癌、急性髓細(xì)胞白血病、小泡狀橫紋肌肉瘤、骨癌、腦癌、乳腺癌、肛門、肛管或直腸肛門的癌、眼癌、肝內(nèi)膽管癌、關(guān)節(jié)癌、頸、膽囊或胸膜的癌、鼻、鼻腔或中耳的癌、口腔癌、外陰癌、慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性骨髓癌、結(jié)腸癌、食管癌、宮頸癌、胃腸類癌瘤、霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma)、喉咽癌、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌、惡性間皮瘤、黑色素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、鼻咽癌、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、腹膜、網(wǎng)膜和腸系膜的癌、咽癌、前列腺癌、直腸癌、腎癌(例如腎細(xì)胞癌(RCC))、小腸癌、軟組織癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、輸尿管癌和膀胱癌。受治療者本文使用的術(shù)語“受治療者”是指任何多細(xì)胞的活的有機(jī)體。在一些實(shí)施方案中，受治療者是哺乳動物。哺乳動物可以是任何哺乳動物，包括但不限于小鼠和倉鼠等嚙齒目(Rodentia)哺乳動物以及兔等兔形目(Logomorpha)哺乳動物。在一些實(shí)施方案中，哺乳動物來源于食肉目(Carnivora)，包括貓科(Feline)(貓)和犬科(Canine)(狗)。在一些實(shí)施方案中，哺乳動物來源于偶蹄目(Artiodactyla)，包括?？?Bovine)(牛)和豬科(Swine)(豬)或奇蹄目(Perssodactyla)，包括馬科(Equine)(馬)。在一些實(shí)施方案中，哺乳動物是靈長目(Primate)、Ceboid或Simoid(猴)或類人猿目(Anthropoid)(人和類人猿)的動物。本發(fā)明的優(yōu)選動物受治療者是哺乳動物。本發(fā)明特別用于治療人受治療者。除上述治療方法以外，可使用PTH肽和PTHrP肽(以及變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)激活細(xì)胞中的PTH受體。所述方法包括將PTH肽或PTHrP肽(或其變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)給予細(xì)胞使得激活PTH受體。在一些實(shí)施方案中，這類方法在體外或離體進(jìn)行。在這一方面，所述方法可用來監(jiān)測受治療者(例如人)的細(xì)胞或組織對PTH肽和PTHrP肽(以及變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的反應(yīng)性。在一些實(shí)施方案中，進(jìn)行所述方法用于基礎(chǔ)研究目的或臨床研究目的。在一些實(shí)施方案中，這類方法在體內(nèi)進(jìn)行，使得細(xì)胞是活動物細(xì)胞，并且將PTH肽和PTHrP肽(以及變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)給予活的動物，例如人。在某些情況下，細(xì)胞是成骨細(xì)胞。當(dāng)成骨細(xì)胞在活動物內(nèi)時，所述方法可為治療方法。在成骨細(xì)胞不是在活動物內(nèi)的實(shí)施方案中，可進(jìn)行所述方法用于基礎(chǔ)研究或臨床研究目的。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞在活動物內(nèi)，而且細(xì)胞是淋巴細(xì)胞或白細(xì)胞?？赏ㄟ^活動物以這種方式產(chǎn)生對PTH肽和PTHrP肽(以及變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)有特異性的抗體。本文預(yù)期抗PTH肽和PTHrP肽(以及變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽、肽模擬物、擬肽、逆反肽)的抗體。藥盒本發(fā)明還提供包括本文所述PTH肽、PTHrP肽、變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽的任一種和使用說明書的藥盒。在一些實(shí)施方案中，藥盒包括將PTH肽、PTHrP肽、變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽給予受治療者(例如人)的說明書。在一些實(shí)施方案中，說明書包括給予患有骨質(zhì)疏松癥或癌癥的受治療者的說明。在一些實(shí)施方案中，藥盒包括將PTH肽、PTHrP肽、變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽或多聚體多肽給予受治療者的裝置，例如注射器針頭、筆(pen)裝置、射流注射器或其它無針注射器。備選地或者此外，藥盒可包括一個或多個容器，例如小瓶、管、瓶、單室或多室預(yù)灌裝注射器、針筒、輸注泵(外用或可植入)、射流注射器、預(yù)灌裝筆裝置等，任選預(yù)包裝有凍干形式或水溶液劑的PTH肽、PTHrP肽、變體、類似物、化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽?，F(xiàn)已對本發(fā)明進(jìn)行了一般性描述，通過參照下列實(shí)施例可更容易地理解本發(fā)明，所述實(shí)施例通過舉例說明而提供，并無意限制本發(fā)明，除非另有規(guī)定。實(shí)施例實(shí)施例1實(shí)施例2-5的材料與方法蛋白質(zhì)純化和肽合成。之前描述了含有與MBP的C端融合的PTHlR的殘基四-187的MBP-PTH1RECD-(His)6融合蛋白、2)。如補(bǔ)充方法所述，制備了無MBP且在N端生物素化標(biāo)簽的單個位點(diǎn)上經(jīng)生物素化的分離的PTHlRE⑶(殘基23-191)。委托SynBioSci(Livermore，CA)合成了用于E⑶結(jié)合研究和結(jié)晶的肽，并進(jìn)行了HPLC純化。由MassachusettsGeneralHospitalBiopolymerCoreΙΙ^)n^i^TPTH/PTHrP(1-34)NH2合肽，并進(jìn)行了HPLC純化。所有肽都是C端酰胺化的，除非另有說明。E⑶-肽結(jié)合測定。采用AlphaScreen測定(Perkin-Elmer)，對肽與MBP-PTH1RECD-H6融合蛋白的結(jié)合進(jìn)行了評價。將反應(yīng)混合物在室溫下溫育，反應(yīng)混合物含有各5μg/ml鏈霉抗生物素包被的供體珠和鎳螯合物包被的接納珠，以及各23nM在50mMMOPS(pH7.4)、150mMNaCl禾口7mg/mlBSA緩沖液中的N端生物素化PTH(7_34)NH2和MBP-PTH1RECD-H6。單獨(dú)使生物素化PTH和MBP-PTH1RECD-H6分別與鏈霉抗生物素珠和鎳螯合物珠預(yù)偶聯(lián)1小時。將預(yù)偶聯(lián)反應(yīng)物混合，按所示加入未標(biāo)記的競爭劑肽，將反應(yīng)物溫育4-5小時以達(dá)到平衡。采用Envision2104讀板儀(Perkin-Elmer)，在384孔o(hù)ptiplate中記錄光子計數(shù)。應(yīng)用Prism5.O軟件(GraphPadSoftware,SanDiego)將數(shù)據(jù)擬合到用于測定IC50值的固定斜率劑量反應(yīng)抑制方程式中。如下所述，采用OctetRed系統(tǒng)O^orteBio)，對肽與分離的PTHlRE⑶的結(jié)合進(jìn)行了實(shí)時分析。結(jié)晶、數(shù)據(jù)采集、結(jié)構(gòu)解析和精修。將IOmMTris-HCl(pH7.5)、50mMNaClUmM麥芽糖和ImMEDTA中的MBP-PTH1RECD-H6與合成的PTHrP片段(殘基12-34)按11.1摩爾比率(蛋白質(zhì)肽)混合，在冰上溫育30分鐘，離心濃縮至20mg/ml以結(jié)晶。在20°C下，用7.5%PEG2000,13%PEG400的貯存溶液，通過坐滴(sittingdrop)蒸氣擴(kuò)散方法，使雙錐體晶體生長。通過透析過夜，將晶體轉(zhuǎn)移到10%PEG2000,22%PEG400、50mMNaCl、37ImMEDTA的冷凍保護(hù)劑溶液中，并插入液氮中速凍。在AdvancedPhotonSource(Argonne，IL)的LS-CATbeamline21-ID-F處，以0.9785A的波長和100°K的溫度，從單晶收集數(shù)據(jù)集。應(yīng)用HKL2000軟件包(37)處理數(shù)據(jù)，用CCP4套件(38)將kal印ack強(qiáng)度轉(zhuǎn)化成結(jié)構(gòu)因素振幅。采用來自PDB坐標(biāo)文件3C4MQ7)的MBP和PTHlRE⑶各自的檢索模型，用Wiaser(39)，通過分子置換，對結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。在不對稱單元中有一個MBP-PTH1RECD:PTHrP(12-34)復(fù)合物。在(K40)中重建的迭代循環(huán)和用Refmac5的約束精修完成了結(jié)構(gòu)。還包括使用相當(dāng)于MBP-麥芽糖復(fù)合物和E⑶-PTHrP復(fù)合物的兩個TLS組的TLS精修0幻。ftOcheck^B)驗(yàn)證的結(jié)構(gòu)表明，93.6%的殘基在拉氏圖的最有利區(qū)域中，無殘基位于不允許的區(qū)域。數(shù)據(jù)采集和精修統(tǒng)計數(shù)據(jù)列于表Sl中。在CCP4套件內(nèi)，對溶劑可接近表面面積和形狀互補(bǔ)性進(jìn)行了分析。用PyMoK44)繪制了結(jié)構(gòu)圖。受體結(jié)合測定。如前所述()，對肽與細(xì)胞膜中G蛋白解偶聯(lián)受體(RO)和G蛋白偶聯(lián)受體(RG)構(gòu)象結(jié)合進(jìn)行了評價。cAMP測定。在37°C/5%C02培養(yǎng)箱中，將自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,VA)獲得的C0S-1細(xì)胞培養(yǎng)在補(bǔ)充了10%胎牛血清的Dulbecco改良fegle培養(yǎng)基中。將500，000個細(xì)胞接種在IOcm培養(yǎng)皿中，次日上午通過DEAE-葡聚糖方法，用3μg編碼hPTMR的pcDNA3.1載體轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后M小時，將約40，000個轉(zhuǎn)染細(xì)胞接種在96孔板的各孔中。轉(zhuǎn)染后48小時，將細(xì)胞用PBS(pH7.4)洗滌兩次，并用肽刺激。對于劑量反應(yīng)測定，在補(bǔ)充了0.2%BSA、0.01%大豆胰蛋白酶抑制劑、0.桿菌肽和2mM3-異丁基-ι-甲基黃嘌呤(IBMX)的Krebs-Ringers-H印es(KRH)緩沖液(25mMHepes(pH7.4)、104mMNaCl、5mMKCl、2mMCaC12、lmMKH2P04、1.2mMMgS04)中，用肽于37°C刺激細(xì)胞30分鐘。用冷的6%高氯酸終止反應(yīng)，細(xì)胞裂解物用KHC03中和。按照生產(chǎn)商的說明書，用LANCEcAMP試劑盒(Perkin-Elmer)測定了cAMP。對于配體洗出測定，在如上補(bǔ)充、但缺乏IBMX的KRH緩沖液中，將細(xì)胞用肽(IOOnM)于室溫刺激10分鐘。將細(xì)胞用缺乏IBMX的緩沖液洗滌3次，并在配體洗出后的所示時間，將緩沖液替換為含有IBMX的緩沖液，5分鐘后終止反應(yīng)，并如上對cAMP含量進(jìn)行了評價。利用劑量反應(yīng)測定的固定斜率劑量反應(yīng)刺激方程式和配體洗出測定的單相指數(shù)式衰減方程式，用I^rism5.0軟件進(jìn)行了曲線擬合。表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建。由pcDNA3.1/PTH1R對編碼具有C端6個組氨酸殘基標(biāo)簽的PTHlR殘基23-191的DNA片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增。片段用BamHI和NotI限制性內(nèi)切核酸酶消化，并連接到PETDuetl載體(Novagen)中，該載體編碼麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)接著多克隆位點(diǎn)1中的凝血酶切割位點(diǎn)(Th)和生物素化標(biāo)簽序列(GGLNDIFEAQKIEWHEDT；生物素化位點(diǎn)為粗體)以及多克隆位點(diǎn)2中的BirA生物素連接酶。所得載體共表達(dá)MBP-Th-生物素標(biāo)簽-PTMRE⑶-H6融合蛋白和BirA。通過編碼區(qū)的自動化DNA測序證實(shí)了該構(gòu)建體。MBP-Th-生物素標(biāo)簽-PTMRECD融合蛋白的表達(dá)和純化。將大腸桿菌OrigamiB(DE3)細(xì)胞(Novagen)用表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，并在12LLB培養(yǎng)基中于37°C培養(yǎng)至對數(shù)中期。降低溫度至16°C，加入生物素至5μM終濃度，并用0.4mMIPTG誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)，總誘導(dǎo)時間約為19小時。收獲細(xì)胞，重新懸浮于50mMTris-HCKpH7.5)、150mMNaCl、10%甘油和25mM咪唑中。通過在10，OOOpsi下勻漿使細(xì)胞裂解，所得裂解物通過離心澄清。將上清液直接加到50mlNi2+ChelatingS印harose柱(GEHealthcare)上。柱用600ml50mMTris-HCl(pH7.5)、150mMNaCl、10%甘油和72.5mM咪唑洗滌，緩沖液中的融合蛋白用洸2.5mM咪唑洗脫出來。合并峰流分，加到50mMTris-HCl(pH7.5)、150mMNaCl和5%甘油中平衡的50ml直鏈淀粉高流動性柱(NewEnglandBiolabs)上。蛋白質(zhì)用O-IOmM麥芽糖的線性梯度洗脫。合并峰流分，稀釋至lmg/ml，樣品用ImM還原谷胱甘肽、ImM氧化谷胱甘肽和11摩爾比率的純化DsbCMBP-Th-生物素標(biāo)簽-PTHIRECD-H6于20°C處理23小時，以使二硫鍵得以改組。DsbC按之前描述0純化。使二硫鍵改組反應(yīng)混合物在上述50mlNi2+chelatings印harose柱中運(yùn)行以除去DsbC。將洗脫的融合蛋白濃縮，加到300mlSuperdex200柱(GEHealthcare)上，并收集與正確折疊的蛋白質(zhì)對應(yīng)的峰流分。純化樣品的天然凝膠電泳表明，蛋白質(zhì)約有50%生物素化，由遷移率略不同的兩個明顯條帶所證實(shí)(數(shù)據(jù)未顯示)。通過Bradford方法06)測定了蛋白質(zhì)濃度。肽與生物素化PTHlRECD結(jié)合的OctetRed實(shí)時分析。利用OctetRed系統(tǒng)O^orteBio)，通過生物層干涉量度技術(shù)，對生物素化PTH1RECD與PTH(1_34)NH2和PTHrP(l-34)NH2之間的相互作用進(jìn)行了分析。通過以蛋白酶融合蛋白1750的比率(重量/重量)用人α-凝血酶(HaematologicTechnologieshe.)在4°C下消化過夜，從MBP-Th-生物素標(biāo)簽-PTMRECD融合蛋白中除去MBP。通過SDS-PAGE證實(shí)了完全切割(數(shù)據(jù)未顯示)。將高結(jié)合鏈霉抗生物素傳感器與在補(bǔ)充了2mg/mlBSA的KRH緩沖液中稀釋至2yg/ml蛋白質(zhì)的消化反應(yīng)物一起溫育，接著10yg/ml生物胞素封閉，并在補(bǔ)充了2mg/mlBSA的KRH緩沖液中洗滌3次以洗去消化混合物的非生物素化組分，并建立基線。將肽在具有2mg/mlBSA的KRH緩沖液中稀釋，并在25°C下監(jiān)測各肽締合和解離達(dá)20分鐘。為了說明非特異性結(jié)合，將用肽和缺乏PTHlRECD的傳感器觸頭獲得的跡線從用肽和固定化PTHlRE⑶獲得的跡線中減去。另外，使用來自具有固定化PTHlRE⑶但沒有肽的傳感器觸頭的跡線減去基線漂移。應(yīng)用OctetRed分析軟件分析數(shù)據(jù)。實(shí)施例2PTH和PTHrP與PTHlRECD結(jié)合采用AlphaScreen發(fā)光鄰近測定(Perkin-Elmer)，對PTH和PTHrP與MBP-PTH1RECD-H6融合蛋白的體外結(jié)合進(jìn)行了評價。在該測定中，N端生物素化PTH(7-34)NH2與鏈霉抗生物素包被的供體珠結(jié)合，融合蛋白通過(His)6標(biāo)簽與鎳螯合物包被的接納珠結(jié)合。生物素化PTH和融合蛋白的締合使珠接近，產(chǎn)生發(fā)光信號。本發(fā)明人之前表明，PTH(15-34)NH2以與用等溫滴定量熱法測定的約IyM的Kd值類似的IC50值競爭相互作用(27)。PTH(1-34)ΝΗ2和PTH(12-34)ΝΗ2兩者均以約為1μΜ的IC50值競爭Alphakreen相互作用(圖1Α)，與本發(fā)明人之前的觀察結(jié)果一致。然而，PTH(1-34)OH結(jié)合融合蛋白的親和力相比C端酰胺化肽的低至約1/10(圖1A)。該結(jié)果和與PTH(15-34)NH2復(fù)合的PTHlRECD的晶體結(jié)構(gòu)一致，其表明C端酰胺基與ECD形成兩個氫鍵07)。相比之下，PTHrP(12-34)NH2和PTHrP(12-34)OH競以約為2μM的類似的IC50值爭相互作用(圖1Β)，這就表明PTHrP的C端酰胺基對于ECD結(jié)合不重要。本發(fā)明人還通過采用利用生物層干涉量度技術(shù)以實(shí)時監(jiān)測結(jié)合事件的OctetRed系統(tǒng)O^orteBio)，研究了肽與分離的PTHlRE⑶的相互作用。按照實(shí)施例1中所描述的方法，制備了不含MBP且在該蛋白質(zhì)N端的生物素化標(biāo)簽序列的單個殘基上經(jīng)生物素化的分離的PTHlRE⑶(殘基23-191)。將生物素化E⑶固定在鏈霉抗生物素傳感器觸頭的表面，并評價了溶液中游離的PTH(1-34)NH2和PTHrP(1_34)NH2的結(jié)合。實(shí)時結(jié)合曲線(圖Si)的穩(wěn)態(tài)分析表明，PTH和PTHrP結(jié)合ECD的Kd值分別為2.8μM和0.99μM(圖IC和圖1D)。PTH的Kd值與由他人采用Biacore技術(shù)獲得的類似(31)。匯總結(jié)合數(shù)據(jù)表明，PTH和PTHrP結(jié)合PTHlRECD的親和力相似，但卻表明基礎(chǔ)生化機(jī)制的差異，因?yàn)镃端酰胺化影響PTH而非PTHrP結(jié)合E⑶的能力。實(shí)施例3PTHrP與PTHlRECD結(jié)合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)為了理解在PTH和PTHrP結(jié)合機(jī)制的差異下的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，本發(fā)明人確定了與PTHrP(12-34)ΝΗ2復(fù)合的MBP-PTH1RECD-H6融合蛋白的晶體結(jié)構(gòu)。通過分子置換對結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析，并在1.94Α分辨率下，精修至R因子為19.3%(自由R因子23.3%)(表2)。表權(quán)利要求1.一種甲狀旁腺素(PTH)肽或其包含二硫鍵的類似物，所述甲狀旁腺素肽包含在氨基酸位置12、14、16、17和27的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO:9的氨基酸序列。2.權(quán)利要求1的PTH肽或類似物，其包含SEQIDNO53的序列，其中12位氨基酸為Gly、Val,Ala或其保守取代，14位氨基酸為His、Phe,Leu或其保守取代，16位氨基酸為AsruThr或其保守取代，17位氨基酸為Ser、Asp、Asn或其保守取代，且27位氨基酸為Lys、Leu或其保守取代。3.權(quán)利要求1或2的PTH肽或類似物，其中所述PTH肽包含SEQIDNO1-10和13-20中任一個的氨基酸序列。4.權(quán)利要求1的PTH肽或類似物，其中所述類似物包含SEQIDNO:54-56中任一個的氨基酸序列，其中在19、22和25位上的氨基酸中的兩個由二硫鍵連接。5.權(quán)利要求4的PTH肽或類似物，其中所述二硫鍵將19位氨基酸與22位氨基酸連接。6.權(quán)利要求5的PTH肽或類似物，其中19位氨基酸是D-Cys，且22位氨基酸是Cys。7.權(quán)利要求4的PTH肽或類似物，其中所述二硫鍵將22位氨基酸與25位氨基酸連接。8.權(quán)利要求7的PTH肽或類似物，其中在22和25位上的氨基酸各自為Cys。9.權(quán)利要求4的PTH肽或類似物，其中所述類似物包含SEQIDNO:11、12和21-52中任一個的氨基酸序列。10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物，其中所述PTH肽或其類似物包含替換C端羧酸的C端酰胺基。11.一種PTH肽，其包含在SEQIDNO:9的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO9的氨基酸15-34。12.權(quán)利要求11的PTH肽，其中與野生型PTH(SEQIDNO9)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，所述PTH肽表現(xiàn)出對甲狀旁腺素受體(PTHlR)的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中所述PTH肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，且其中所述PTH肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累。13.權(quán)利要求11的PTH肽，其中在SEQIDNO:9的23、27、觀和31位的一個或多個上的氨基酸被SEQIDNO:79相應(yīng)位置上的氨基酸取代。14.權(quán)利要求11-13的PTH肽，其包含在SEQIDNO:9的23、27、沘和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO9的氨基酸1-34。15.權(quán)利要求14的PTH肽，其包含SEQIDNO:57-66中任一個的氨基酸序列。16.權(quán)利要求11-15中任一項(xiàng)的PTH肽，其中與野生型PTH(SEQIDNO9)的cAMP反應(yīng)相比，所述PTH肽表現(xiàn)較短期的cAMP反應(yīng)。17.權(quán)利要求16的PTH肽，其中所述PTH肽包含SEQIDNO:64。18.一種？^肽，其包含在20、21、23、24、27、觀和34位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO9的氨基酸15-34。19.權(quán)利要求18的PTH肽，其中與野生型PTH與PTHlR的E⑶的結(jié)合相比，所述PTH肽表現(xiàn)出與PTHlR的胞外結(jié)構(gòu)域(EOT)的結(jié)合減弱。20.權(quán)利要求18的PTH肽，其中與野生型PTH(SEQIDNO9)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，所述PTH肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中所述PTH肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，且其中所述PTH肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累O21.權(quán)利要求18-20的PTH肽，其中所述PTH肽在23或觀位上或者在兩個位置上包含氨基酸取代。22.權(quán)利要求21的PTH肽，其中所述PTH肽在21、27和34位的一個或多個上包含氨基酸取代。23.權(quán)利要求18-22中任一項(xiàng)的PTH肽，其包含SEQIDNO9的氨基酸1-34，其中在20、21、23、24、27、觀和34位的一個或多個上具有氨基酸取代。24.權(quán)利要求18的PTH肽，其在20、21、23、24、27、觀和；34位的一個或多個上包含Ala。25.權(quán)利要求M的PTH肽，其包含SEQIDNO:68_71、73、74和78中任一個的氨基酸序列。26.一種PTHrP肽，其包含在SEQIDNO:79的23、27、觀和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO79的氨基酸12-34。27.權(quán)利要求洸的PTHrP肽，其中與野生型PTHrP(SEQIDNO79)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，所述PTHrP肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中所述PTHrP肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，且其中所述PTHrP肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累。28.權(quán)利要求27的PTHrP肽，其中在SEQIDNO:79的23、27、觀和31位的一個或多個上的氨基酸被SEQIDNO:9相應(yīng)位置上的氨基酸取代。29.權(quán)利要求26-28的PTHrP肽，其包含在SEQIDNO79的23、27、28和31位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO79的氨基酸1_34。30.權(quán)利要求四的PTHrP肽，其包含SEQIDNO:80-90中任一個的氨基酸序列。31.權(quán)利要求洸-30中任一項(xiàng)的PTHrP肽，其中與野生型PTHrP(SEQIDNO:79)WcAMP反應(yīng)相比，所述PTHrP肽表現(xiàn)出較短期的cAMP反應(yīng)。32.權(quán)利要求31的PTHrP肽，其中所述PTHrP肽包含SEQIDNO:81。33.一種PTHrP肽，其包含在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代的SEQIDNO79的氨基酸12-34。34.權(quán)利要求33的PTHrP肽，其中與野生型PTHrP與E⑶或PTHlR的結(jié)合相比，所述PTHrP肽表現(xiàn)出與PTHlR的E⑶的結(jié)合減弱。35.權(quán)利要求33的PTHrP肽，其中與野生型PTHrP(SEQIDNO79)對PTHlR的RO構(gòu)象的親和力相比，所述PTH肽表現(xiàn)出對PTHlR的G蛋白解偶聯(lián)構(gòu)象(RO)的親和力降低，其中所述PTHrP肽保持與PTHlR的G蛋白偶聯(lián)構(gòu)象(RG)結(jié)合，且其中所述PTHrP肽刺激細(xì)胞中cAMP的積累。36.權(quán)利要求33-35的PTHrP肽，其中所述PTHrP肽在22或27位上或者在兩個位置上包含氨基酸取代。37.權(quán)利要求33-36中任一項(xiàng)的PTHrP肽，其包含SEQIDNO79的氨基酸1_34，其中在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上具有氨基酸取代。38.權(quán)利要求37的PTHrP肽，其在20、21、23、24、27、28、32和33位的一個或多個上包含Ala。39.權(quán)利要求38的PTHrP肽，其包含SEQIDNO=93-98,100和101中任一個的氨基酸序列。40.一種化學(xué)衍生物，其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物或者PTHrP肽以及不是野生型PTH(SEQIDNO9)或野生型PTHrP(SEQIDNO79)的部分的化學(xué)部分。41.一種融合多肽，其包含(a)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物或PTHrP肽，(b)任選接頭區(qū)，和(c)與PTH肽或類似物或PTHrP肽連接，或者與所述接頭區(qū)連接的第二多肽，其中所述第二多肽不與PTH肽或類似物或PTHrP肽天然連接。42.一種多聚體肽，其包含重復(fù)約2-約100次的基礎(chǔ)肽序列和任選包含間隔物，其中所述基礎(chǔ)肽序列是前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物或PTHrP肽的氨基酸序列。43.一種藥物組合物，其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物或PTHrP肽、權(quán)利要求40的化學(xué)衍生物、權(quán)利要求41的融合多肽或權(quán)利要求42的多聚體肽，和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。44.一種用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥盒，其包括選自權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物和權(quán)利要求26-39中任一項(xiàng)的PTHrP肽的肽，以及將所述肽給予患有骨質(zhì)疏松癥的受治療者的說明書。45.一種選自權(quán)利要求1-25中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物和權(quán)利要求沈-39中任一項(xiàng)的PTHrP肽的肽在制備用于治療骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。46.一種用于激活細(xì)胞中的PTH受體的方法，所述方法包括將前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的PTH肽或類似物或PTHrP肽給予細(xì)胞，使得所述PTH肽或類似物或PTHrP肽引起PTH受體被激活。47.權(quán)利要求46的方法，其中所述細(xì)胞是成骨細(xì)胞。48.權(quán)利要求46或47的方法，其中所述細(xì)胞處于活動物內(nèi)，并且將所述PTH肽或類似物或PTHrP肽給予活動物。49.權(quán)利要求48的方法，其中所述活動物是人。50.權(quán)利要求48或49的方法，其中所述PTH肽或類似物或PTHrP肽通過口服遞送或注射給予。51.一種治療患有非所需骨損失相關(guān)疾病或病癥的受治療者的方法，所述方法包括以有效治療受治療者的量將權(quán)利要求43的藥物組合物給予受治療者。52.權(quán)利要求51的方法，其中所述受治療者是人。53.權(quán)利要求51或52的方法，其中所述疾病或病癥是骨質(zhì)疏松癥。54.一種改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的方法，所述方法包括以有效改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的量將權(quán)利要求43的藥物組合物給予受治療者。55.一種延緩受治療者的骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的方法，所述方法包括以有效延緩受治療者的骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的量將權(quán)利要求43的藥物組合物給予受治療者。56.一種使受治療者的骨再生的方法，所述方法包括以有效使受治療者的骨再生的量將權(quán)利要求43的藥物組合物給予受治療者。全文摘要本文提供甲狀旁腺素(PTH)肽和甲狀旁腺素相關(guān)蛋白(PTHrP)肽(例如PTH類似物、PTHrP類似物)及相關(guān)變體、化學(xué)衍生物、融合多肽、多聚體多肽和肽模擬物、擬肽等。本文還提供它們在細(xì)胞(例如成骨細(xì)胞)中激活PTH受體的方法、治療患有骨損失的受治療者的方法(例如通過給予PTH肽或PTHrP肽(例如PTH類似物或PTHrP類似物))、改善受治療者的骨質(zhì)疏松癥相關(guān)癥狀的方法、延緩受治療者的骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展的方法和使受治療者的骨再生的方法中的用途。文檔編號A61K38/00GK102448482SQ201080023802公開日2012年5月9日申請日期2010年3月26日優(yōu)先權(quán)日2009年3月27日發(fā)明者A·A·皮奧薩克,H·E·徐,T·J·加德拉申請人:綜合醫(yī)院公司附屬之麻薩諸塞綜合醫(yī)院,范安德爾研究所