專利名稱：用于預(yù)防和治療高血壓的組合物和組合物制備方法
用于預(yù)防和治療高血壓的組合物和組合物制備方法相關(guān)申請的交叉引用本申請要求于2009年6月12日提交的美國臨時申請第61/186，709號和于2009年6月17日提交的美國臨時申請第61/187，905號的優(yōu)先權(quán)，通過引用將上述申請的全部內(nèi)容并入本文。
背景技術(shù)：
提供以下描述是為了有助于閱讀者的理解 ，并不是承認(rèn)提供的信息或引用的文獻是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。美國心臟協(xié)會估計高血壓影響美國約1/3的成年人，即七千三百萬人。按照美國醫(yī)學(xué)協(xié)會雜志的報道，估計高血壓還影響約兩百萬的美國青少年和兒童。高血壓已明顯成為主要公眾健康問題。無并發(fā)癥的高血壓通常沒有任何癥狀，因此高血壓被稱為“超級無聲殺手”。高血壓可以悄悄地進展并最終發(fā)生數(shù)種潛在致死并發(fā)癥中的任意一種或多種，例如心臟病發(fā)作或中風(fēng)。心臟病發(fā)作或中風(fēng)是西方國家中的首要死因并且現(xiàn)在已成為很多亞洲國家中的首要死因。由于壽命的延長和諸如肥胖的影響因素的流行，高血壓已成為世界范圍內(nèi)高度普遍的心血管風(fēng)險因素。盡管當(dāng)今治療技術(shù)高速發(fā)展，目前可用的例如血管擴張劑、β -阻斷劑、利尿劑等的高血壓藥物和治療方式僅能在持續(xù)服藥下提供血壓的適當(dāng)控制和癥狀改善，目前還沒有藥物或治療策略被認(rèn)為可以對高血壓提供治愈性治療的效果。目前的治療藥物和方法僅能減輕高血壓的癥狀或延緩其惡化速度。因此，高血壓目前仍然是不可治愈的并且無法得到有效的控制。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防哺乳動物個體中的高血壓的方法，所述方法包括給予有需要的個體有效量的日本路邊青(Geum japonicum)的有機提取物(OEGJ)。在一個實施方案中，與未給予OEGJ的個體相比，給予OEGJ的個體中小動脈的外周阻力系統(tǒng)性降低。在一個實施方案中，小動脈的外周阻力是通過器官或組織中的側(cè)支血管形成而降低。在一個實施方案中，OEGJ誘導(dǎo)在小動脈阻力已經(jīng)增加了的器官或組織中形成側(cè)支血管，從而使這些器官和組織的外周阻力降低。在一個實施方案中，與未給予OEGJ的個體相比，所述個體的血壓降低。在一個實施方案中，所述哺乳動物個體是人。在一個實施方案中，給予的OEGJ的量為約O. Olmg至約IOg提取物/千克體重/天。在一個實施方案中，給予的OEGJ是劑量單位形式。在一個實施方案中，給予的OEGJ是包含藥學(xué)可接受的載體的劑量單位形式。在一個實施方案中，OEGJ通過口服給藥。在一個實施方案中，OEGJ通過皮下注射、肌內(nèi)注射或靜脈輸注進行給藥。在一個實施方案中，OEGJ是日本路邊青的低級烷基醇溶劑提取物。在一個實施方案中，所述低級烷基醇具有1-6個碳原子。在一個實施方案中，所述低級烷基醇是乙醇。在一個實施方案中，所述低級烷基醇是甲醇。另一方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防哺乳動物個體中的高血壓的藥物組合物，包含有效量的日本路邊青有機提取物(OEGJ)和藥學(xué)可接受的賦形劑。
另一方面，本發(fā)明提供試劑盒，其包含有效量的日本路邊青有機提取物(OEGJ)和藥學(xué)可接受的載體、容器和表明該藥物組合物對患高血壓(hypertension)或高血壓(highblood pressure)的人有益的說明書。附圖
簡要描述圖I是顯示OEGJ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分化的顯微圖片。圖(a):介質(zhì)處理的細(xì)胞顯示出增殖，但沒有分化的跡象。圖(b) 0EGJ(30y g/ml)處理增強內(nèi)皮細(xì)胞增殖(根據(jù)MTT測定，多30-50%的細(xì)胞)。圖(c) 0EGJ(60yg/ml)處理的細(xì)胞顯示出細(xì)長和折光性好的細(xì)胞形態(tài)，這是血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的特征。圖(d ) 0EGJ(180yg/ml)處理的細(xì)胞表現(xiàn)出薄且細(xì)長的表型，并形成管腔樣結(jié)構(gòu)。圖2提供的數(shù)據(jù)顯示出OEGJ治療降低2V0大鼠模型的血壓。圖(a):在2V0結(jié)扎后6周測量介質(zhì)處理的大鼠時，2V0結(jié)扎后的血壓升高(154. 25±3.95mmHg)。圖
(b):相比之下，在結(jié)扎后6周測量OEGJ治療的大鼠時，由于2V0而升高的血壓被降低(135 ±2. 14mmHg)。圖3顯示出停止OEGJ治療后2周，2V0腦部中降低的血管外周阻力的多普勒超聲評價。通過測量實驗動物的基底動脈來評價腦血流量。橫軸表示時間，縱軸表示血液流速。每個信號對應(yīng)于I個心動周期。A :實時二維圖像顯示出介質(zhì)處理的動物中縱向截面的基底動脈(上圖)和從基底動脈記錄的多普勒頻移信號(下圖)。B :實時二維圖像顯示出OEGJ治療的動物縱向截面的基底動脈(上圖)和從基底動脈記錄的多普勒頻移信號(下圖)。雖然OEGJ治療動物的血壓(128mmHg)低于介質(zhì)處理動物中顯著升高的血壓(148mmHg)，但是OEGJ治療組的腦血流量(21. Iml/分鐘)顯著高于介質(zhì)處理對照組(14. 6ml/分鐘)。根據(jù)公式血壓(BP)/血流量(BF)=血管外周阻力，在正常組和對照組之間幾乎未觀察到外周阻力的差異，然而，與介質(zhì)處理的2V0動物相比，OEGJ治療組的阻力低43%，提示有新的側(cè)支動脈的生成，血管計數(shù)定量分析表明，OEGJ治療的腦的血管截面積增加了 37.4%，并提供多于介質(zhì)處理的2V0動物約30. 8%的腦部供血。圖4T，代表性的OEGJ治療的2V0大鼠s額葉皮質(zhì)的血管(約61. 7±20. 3/HPF)顯著多于介質(zhì)處理的對照2V0大鼠(C)的血管(38. 5±12.6/HPF)圖5顯示2V0動物模型的血壓和腦血流。BP代表血壓?；證BFV代表通過基底動脈的腦血流量。Nor代表正常對照大鼠。Mod代表介質(zhì)處理的2V0大鼠。OEGJ代表OEGJ治療的2V0大鼠。圖6顯示右側(cè)頸動脈部分結(jié)扎(60% )的SD大鼠的血壓和腦血流。(BP)代表血壓；(CBFV)代表總腦血流量；(對照)代表介質(zhì)處理的模型大鼠；(治療)代表OEGJ治療的模型大鼠。OEGJ治療顯著增加了通過基底動脈的腦血流，同時保持正常血壓。相比之下，介質(zhì)處理的大鼠中通過基底動脈的腦血流顯著低于OEGJ治療的大鼠，同時血壓升高。圖7顯示APP小鼠的血壓。(OEGJ)代表OEGJ治療的APP小鼠；(對照)代表介質(zhì)處理的APP小鼠。與介質(zhì)處理的APP小鼠相比，OEGJ治療使APP小鼠的血壓降低約10%，達(dá)到正常水平。發(fā)明詳細(xì)描述在各個方面，本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療高血壓的化合物、提取物和方法。本文提供的化合物可以配制為可用于公開的方法的藥物組合物和藥物。還提供了所述化合物和提取物在制備藥物制劑和藥物中的用途。應(yīng)當(dāng)理解，為了提供對本發(fā)明的實質(zhì)性理解，下文以不同詳細(xì)程度描述了本發(fā)明的某些方面、模式、實施方案、變化和特征。以下術(shù)語在全文中按下文所述使用，除非上下文明確指明另外情況。本文中，試劑或藥物對個體的“給藥”包括將化合物引入或遞送至個體以行使化合物預(yù)期功能的任何途徑?？梢酝ㄟ^任何合適的途徑進行給藥，包括口服、鼻內(nèi)、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)、直腸或局部給藥。給藥包括自給藥和由他人給藥。本文所用的術(shù)語組合物的“有效量”或“藥學(xué)有效量”或“治療有效量”是足以實現(xiàn)所需治療和/或預(yù)防效果的量，例如，實現(xiàn)了所治療疾病相關(guān)的癥狀的預(yù)防或減少的量。給予個體的組合物的量將取決于疾病的類型和嚴(yán)重程度以及個體的特征，例如一般健康狀況、年齡、性別、體重和對藥物的耐受性。其還取決于疾病的程度、嚴(yán)重性和類型。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)這些因素以及其它因素能確定合適的劑量。本發(fā)明的組合物也可以與一種或多種其它治療化合物聯(lián)合給藥。
在沒有特別指明的情況下，本發(fā)明所用的縮寫“0EGJ”表示下文所述的植物日本路邊青的有機溶劑提取物。本文所用的術(shù)語“疾病”或“醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)”可交換使用，并且包括但不限于表現(xiàn)為一種或多種需要治療和/或預(yù)防的身體和/或心理癥狀的任何疾病狀態(tài)或疾病，并且包括之前鑒定出的和新近鑒定出的疾病和其它病癥。例如，醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)可以是高血壓。本文所用的術(shù)語“個體”包括任何哺乳動物個體，例如人，但也可以是動物，例如，家畜(例如，狗、貓等)，農(nóng)畜(例如，牛、羊、豬、馬等)和實驗室動物(例如，猴、大鼠、小鼠、兔、豚鼠等)。本文所用的術(shù)語“治療(treating) ”或“治療(treatment) ”或“緩解”是指治療性處理以及預(yù)防性(prophylactic)或預(yù)防性(preventative)措施,其目的是預(yù)防或延緩(減輕)所針對的病理疾病狀態(tài)或病癥。如果個體按照本發(fā)明的方法接受了治療劑后，該個體表現(xiàn)出具體疾病或疾病狀態(tài)的一種或多種指征和癥狀的可觀察到的和/或可測定的減少或缺失，則認(rèn)為該個體被成功“治療” 了病癥。本文所用的病癥或疾病狀態(tài)的“預(yù)防(prevention) ”或“預(yù)防(preventing) ”是指在統(tǒng)計學(xué)樣品中，相對于未處理的對照樣品，化合物能減少處理的樣品中病癥或疾病狀態(tài)的發(fā)生，或者相對于未處理的對照樣品，化合物能延緩病癥或疾病狀態(tài)的一種或多種癥狀的發(fā)作或降低其嚴(yán)重程度。本發(fā)明的組合物本發(fā)明提供利用來自多種植物的試劑和/或提取物和化合物以及該化合物的衍生物治療或預(yù)防高血壓的方法，所述植物包括日本路邊青。在一些實施方案中，所述試劑是日本路邊青的提取物，例如日本路邊青的有機提取物。在具體實施方案中，所述試劑是日本路邊青的甲醇或乙醇提取物或其活性部位。本發(fā)明的試劑可以是含有一種或多種賦形劑、載體或填充劑的藥物組合物的一部分。在一個實施方案中，所述藥物組合物以單位劑量形式包裝。所述單位劑量形式當(dāng)給予有需要的個體時能有效改善各種疾病或醫(yī)學(xué)疾病狀態(tài)。提供了制備日本路邊青有機提取物的方法。該方法包括以下步驟(a)用醇提取日本路邊青植物，所述醇選自C1-C4醇。該步驟可以室溫下重復(fù)3-6次，通常5次。在進行步驟(a)之前，可以將植物材料制成粉末或切成小塊。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇。通常，添加的醇的重量是待提取的日本路邊青重量的ι- ο倍。所述方法還可以包括以下步驟(b)將獲自步驟(a)的提取物干燥為干燥粉末；和
(c)用C6烷、EtOAc和選自C1-C4醇的醇相繼提取獲自步驟(b)的粉末。C6烷包括具有6個碳原子的環(huán)狀和非環(huán)狀烷，包括，例如，環(huán)己烷、正己烷和新己烷等。C1-C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇。所用的有機溶劑的重量通常是待進一步提取的粉末重量的1-10倍。上文所述的方法還可以包括過濾提取物以去除其中的任何不溶性粉末?？梢栽诟哂谑覝氐臏囟认?例如50°C )的減壓條件下完成干燥步驟。
為了純化0EGJ，所述方法可以還包括以下步驟將粉末施加到色譜柱；并用含有漸增濃度的選自C1-C4醇的醇的水性溶液洗脫柱。例如，可以使用Sephadex或反相柱。所用的醇可以是選自甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇和叔丁醇的任何一種。通過NMR分析，我們發(fā)現(xiàn)OEGJ通常主要含有單寧類和三萜類，所述單寧類包括gemin A、B、C、D、E和F，所述三萜類包括2-羥基齊墩果酸、2-羥基熊果酸、2，19- 二羥基-熊果酸、2- α，19- α - 二輕基_3_氧代_12_烏索烯_28_酸、熊果酸、epimolic acid、山楂酸、野鴨椿酸、委陵菜酸，委陵菜酸的28- β -D-葡糖苷。在一個實施方案中，本發(fā)明的提取物、部分和化合物是利用水和/或有機溶劑從植物原材料提取得到的，包括以下過程I.將水和/或有機溶劑添加到植物材料，將全部進行諸如浸泡/浸濾、超聲或微波的處理而進行提??；2.在提取過程之前或之后，利用石油醚、己烷或氯仿類型的溶劑進行脫脂；3.任選地，利用乙酸乙酯或乙醚類型的有機溶劑對回收的提取物進行進一步提?。?.任選地，將獲得的粗提取物濃縮，并如果需要將其凍干。一方面，考慮到允許獲得的富集，粗提取物可以接受色譜純化過程。在一個實施方案中，使用離心分配色譜(CPC)。該技術(shù)具體描述于Α. P. FOUCAULT，Ed.，CentrifugalPartition Chromatography (離心分配色譜)，Chromatographic Science Series, MarcelDekker Inc.,1995,68 或 W. D. CONWAY, Ed. , Countercurrent Chromatography apparatustheory and applications (逆流色譜裝置理論和應(yīng)用)，VCH Publishers Inc. ,1990。CPC是基于通過混合兩種或更多種溶劑或溶液而制備的兩種不混溶液相的溶質(zhì)分配。所述兩相中的一種通過離心力保持靜止。溶劑、它們的比例和流速的選擇與CPC柱中靜止相的穩(wěn)定性和實際壓力密切相關(guān)。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員能根據(jù)所需純化的提取物的性質(zhì)選擇最合適的溶劑。這些不同的提取物，即粗提取物或富集的提取物，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實施其它分離過程允許分離這些富集了一種或多種化合物的提取物。使用合適溶劑的按照適合于所選擇的分離的比例的混合物，可以對從粗提取物富集的部分或?qū)Υ痔崛∥镒陨磉M行這些分離。預(yù)防和治療高血壓的方法收縮壓是當(dāng)心臟收縮時動脈中的最大壓力并且將血液推入體內(nèi)。舒張壓是搏動之間當(dāng)心臟舒張充滿血液時動脈中的最小壓力。高血壓被定義為平均收縮壓高于140-150mmHg、舒張壓高于90-95mm Hg或同時滿足兩者。收縮壓和/或舒張壓的升高增加了發(fā)生心臟病、腎病、動脈硬化(hardening of the arteries)(動脈硬化(atherosclerosis)或動脈硬化(arteriosclerosis))、眼損傷和中風(fēng)(腦損傷)的風(fēng)險。這些高血壓并發(fā)癥通常稱為最終器官損傷，因為這些器官的損傷是慢性高血壓的最終結(jié)果。因此，高血壓的診斷和早期治療對于正?；獕汉皖A(yù)防并發(fā)癥是很重要的。盡管目前先進的治療策略能延緩該疾病進展，但同時也能發(fā)生嚴(yán)重的并發(fā)癥，例如ACE抑制劑抑制血管緊張素II的產(chǎn)生，所述血管緊張素II使血管收縮變窄；血管緊張素-II受體拮抗劑與ACE抑制劑的作用方式相似；β -阻斷劑阻斷激素腎上腺素和交感神經(jīng)系統(tǒng)對身體的作用，舒張心臟；α-阻斷劑導(dǎo)致血管舒張和變寬；以及鈣通道阻斷劑降低動脈肌肉張力。血壓是心臟將血液泵入動脈時所產(chǎn)生，是血液流動的動力。心臟泵出的血越多并且動脈越窄，血壓就會越高。為了保持向所有器官和組織提供足夠量的血液來滿足身體正?；顒拥谋厝恍枨?，需要心臟能泵出一定量的血液通過動脈遍布全身。因此，降低血壓而且 不會對身體正?；顒釉斐刹焕绊懙淖詈梅椒ㄊ怯谰眯栽黾尤砜倓用}的橫截面積。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，用日本路邊青有機提取物治療高血壓個體約2周后，該提取物能顯著降低個體中升高的血壓。在一些實施方案中，用提取物治療4-8周能永久增加高血壓個體外周小動脈的橫截面積，明顯降低外周動脈的阻力，從而使血壓降低，而且不會影響全身的功能表現(xiàn)。本發(fā)明涉及日本路邊青有機提取物(OEGJ)的用途和治療人或動物的高血壓和高血壓相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明特別涉及用于降低系統(tǒng)血壓的藥物組合物和方法。不希望被理論所束縛，OEGJ可以通過系統(tǒng)性地刺激在外周阻力已經(jīng)增加的個體中生長新的側(cè)支循環(huán)毛細(xì)血管、小動脈和微血管，從而在不同水平上增加小血管的橫截面積從而明顯改善對重要器官和組織的血液灌注。因此，高血壓中增加的小動脈外周阻力由于新生側(cè)支血管對變窄動脈的補償而得到調(diào)整，從而導(dǎo)致血壓降低。因此，本方法提供了能解決高血壓的根本病理學(xué)變化的實質(zhì)性治療方式。一方面，本發(fā)明提供治療或預(yù)防有需要的個體中的高血壓的方法，包括給予所述個體有效量的本文所述的化合物、組合物、部分或提取物。一方面，預(yù)防或治療高血壓的方法包括給予有需要的哺乳動物來自多種植物的部分和/或提取物，所述植物包括日本路邊青。在一些實施方案中，所述提取物是獲自植物日本路邊青的有機提取物。另一方面，用于治療或預(yù)防高血壓的試劑是含有一種或多種賦形劑、載體或填充劑的藥物組合物的一部分。在一個實施方案中，所述藥物組合物以單位劑量形式包裝。所述單位劑量形式能有效改善(即，降低)個體的血壓。在本發(fā)明的各個實施方案中，進行合適的體外或體內(nèi)分析來確定本發(fā)明的試劑(提取物、部分和化合物)的治療效果，以及所述試劑的給藥是否適用于治療或預(yù)防個體的高血壓。在一些實施方案中，使用高血壓的體內(nèi)模型來評價試劑對個體的治療效果。研究了試劑在治療動物個體高血壓的效果，并與合適的對照進行比較。在一個實施方案中，本發(fā)明的植物、提取物、活性部位和/或化合物可以作為與另一心血管藥的聯(lián)合治療的一部分進行給藥。心血管藥的實例包括血管舒張劑，例如肼屈嗪；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，例如卡托普利；抗心絞痛藥，例如硝酸異山梨酯、三硝酸甘油酯和季戍四醇四硝酸酯；抗心律失常藥，例如奎尼丁、procainaltide和利諾卡因；強心式,例如地高辛和洋地黃毒苷；鈣拮抗劑，例如維拉帕米和硝苯地平；利尿劑，例如噻嗪類和相關(guān)化合物，例如芐氟噻嗪、氯噻嗪、氯噻酮、氫氯噻嗪和其它利尿劑，例如呋塞米和氨苯蝶啶；以及鎮(zhèn)靜劑，例如，硝基安定、氟西泮和地西泮。其它示例性的心血管藥包括，例如，環(huán)氧酶抑制劑，例如阿司匹林或吲哚美辛；血小板聚集抑制劑，例如氯卩比格雷、ticlopidene或阿司匹林；纖維蛋白原拮抗劑或利尿劑，例如氯噻嗪、氫氯噻嗪、氟甲噻嗪、氫氟甲噻嗪、芐氟甲噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪或芐噻嗪，以及依他尼酸、替尼酸、氯噻酮、呋塞米、莫唑胺、布美他尼、氨苯蝶啶、阿米洛利和螺內(nèi)酯以及這些化合物的鹽；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，例如卡托普利、佐芬普利、福辛普利、依那普利、ceranopriI、西拉普利、地拉普利、噴托普利、喹那普利、雷米普利、賴諾普利以及這些化合物的鹽；血管緊張素II拮抗劑，例如氯沙坦、伊貝沙坦或纈沙坦；溶栓齊[J，例如組織纖溶酶原活化劑(tPA)、重組tPA、鏈激酶、尿激酶、尿激酶原和茴?；w溶酶原鏈激酶活化劑復(fù)合物(APSAC,阿尼普酶,Beecham Laboratories)或動物唾液腺纖溶酶原活化劑；鈣通道阻斷劑，例如維拉帕米、硝苯地平或地爾硫卓；血栓素受體拮抗劑，例如伊非曲班、環(huán)前列腺素模擬物；或磷酸二酯酶抑制劑。這些組合產(chǎn)品(如果配制為固定的劑 量)在上文所述的劑量范圍內(nèi)使用本發(fā)明化合物，其它藥學(xué)活性劑處于其被認(rèn)可的劑量范圍。其它示例性的心血管藥包括，例如，血管擴張劑，例如芐環(huán)烷、桂利嗪、胞磷膽堿、環(huán)扁桃酯、環(huán)煙酯、ebumamonine、phenoxezyl、氟桂利嗪、異丁司特、艾芬地爾、洛美利嗪、naphlole、nikamate、尼麥角林、尼莫地平、S粟堿、噴替茶堿、nofedoline、長春蔓胺、長春西汀、vichizyl、己酮可可堿、環(huán)前列腺素衍生物(例如前列腺素El和前列腺素12)、內(nèi)皮肽受體阻斷藥(例如博沙坦)、地爾硫卓、尼可地爾和硝酸甘油。腦保護藥物的實例包括自由基清除劑(例如依達(dá)拉奉、維生素E和維生素C)、谷氨酸鹽拮抗劑、AMPA拮抗劑、紅藻氨酸拮抗劑、NMDA拮抗劑、GABA激動劑、生長因子、阿片類拮抗劑、磷脂酰膽堿前體、血清素激動齊U、Na+/Ca2+通道抑制劑性藥物和K+通道開放藥物。腦部代謝刺激劑的實例包括金剛烷胺、泰必利和Y氨基丁酸?？鼓齽┑膶嵗ǜ嗡?例如肝素鈉、肝素鉀、達(dá)肝素鈉、達(dá)肝素鈣、肝素鈣、帕肝素鈉(pamaparin sodium)、瑞肝素鈉和達(dá)那肝素鈉)、華法林、依諾肝素、阿加曲班、巴曲酶和檸檬酸鈉?？寡“逅幍膶嵗}酸噻氯匹定、雙嘧達(dá)莫、西洛他唑、二十碳五烯酸乙酯、鹽酸沙格雷酯、鹽酸地拉卓、曲匹地爾、非留體抗炎藥(例如阿司匹林)、貝前列素鈉、伊洛前列素和吲哚布芬。溶栓藥物的實例包括尿激酶、組織型纖溶酶原激活劑(例如阿替普酶、替索激酶、那替普酶、帕米普酶、孟替普酶和瑞替普酶)和那沙普酶。降壓藥的實例包括血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(例如卡托普利、阿拉普利、賴諾普利、咪達(dá)普利、喹那普利、替莫普利、地拉普利、貝那普利、西拉普利、群多普利、依那普利、西羅普利、福辛普利、咪達(dá)普利、mobertpril、培哚普利、雷米普利、螺普利和群多普利)、血管緊張素II拮抗劑(例如氯沙坦、坎地沙坦、纈沙坦、依普羅沙坦和伊貝沙坦)、鈣通道阻滯劑(例如阿雷地平、依福地平、尼卡地平、巴尼地平、貝尼地平、馬尼地平、西尼地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、尼伐地平、非洛地平、氨氯地平、地爾硫卓、芐普地爾、克侖硫卓、Phendilin、戈洛帕米、米貝拉地爾、甲基丁烯胺、司莫地爾、特羅地林、異搏定、西尼地平、依高地平、伊拉地平、拉西地平、樂卡地平、尼莫地平、桂利嗪、氟桂利嗪、利多氟嗪、洛美利嗪、芐環(huán)烷、依他苯酮和哌克昔林)、β腎上腺素受體阻斷劑(普萘洛爾、吲哚洛爾、茚諾洛爾、卡替洛爾、布尼洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾、美托洛爾、噻嗎洛爾、尼普洛爾、噴布洛爾、納多洛爾、替利洛爾、卡維地洛、比索洛爾、倍他洛爾、塞利洛爾、波吲洛爾、貝凡洛爾、拉貝洛爾、阿普洛爾、氨磺洛爾、阿羅洛爾、苯呋洛爾、布庫洛爾、布非洛爾、丁呋洛爾、布拉洛爾、butylidine、丁非洛爾、卡拉洛爾、塞他洛爾、氯拉洛爾、地來洛爾、依泮洛爾、左布諾洛爾、甲吲洛爾、美替洛爾、莫普洛爾、萘肟洛爾、萘比洛爾、氧烯洛爾、普拉洛爾、丙茶洛爾、索他洛爾、sufinalol、他林洛爾、tertalol、托利洛爾、xybenolol和艾司洛爾)、α受體阻斷劑(例如氨磺洛爾、哌唑嗪、特拉唑嗪、多沙唑嗪、布那唑嗪、烏拉地爾、酚妥拉明、阿羅洛爾、達(dá)哌拉唑、芬司匹利、吲哚拉明、拉貝洛爾、萘哌地爾、尼麥角林、坦索羅辛、妥拉唑林、曲馬唑嗪和育亨賓)、交感神經(jīng)抑制劑(例如氯壓定、胍法辛、胍那芐、甲基多巴和利血平)、肼苯噠嗪、托屈嗪、布屈嗪和卡屈嗪。抗心絞痛藥物的實例包括硝酸酯藥物(例 如亞硝酸戊酯、硝酸甘油和異山梨醇)、β_腎上腺素受體阻斷藥(例如普萘洛爾、吲哚洛爾、茚諾洛爾、卡替洛爾、布尼洛爾、阿替洛爾、醋丁洛爾、美托洛爾、噻嗎洛爾、尼普洛爾、噴布洛爾、納多洛爾、替利洛爾、卡維地洛、比索洛爾、倍他洛爾、塞利洛爾、波吲洛爾、貝凡洛爾、拉貝洛爾、阿普洛爾、氨磺洛爾、阿羅洛爾、苯呋洛爾、布庫洛爾、布非洛爾、丁呋洛爾、布拉洛爾、butylidine、丁非洛爾、卡拉洛爾、塞他洛爾、氯拉洛爾、地來洛爾、依泮洛爾、左布諾洛爾、甲吲洛爾、美替洛爾、莫普洛爾、萘肟洛爾、萘比洛爾、氧烯洛爾、普拉洛爾、丙茶洛爾、索他洛爾、sufinalol、他林洛爾、tertalol、托利洛爾、xybenolol和艾司洛爾)、鈣通道阻滯劑(例如阿雷地平、依福地平、尼卡地平、巴尼地平、貝尼地平、馬尼地平、西尼地平、尼索地平、尼群地平、硝苯地平、尼伐地平、非洛地平、氨氯地平、地爾硫卓、節(jié)普地爾、克侖硫卓、phendi I in、戈洛帕米、米貝拉地爾、甲基丁烯胺、司莫地爾、特羅地林、異搏定、西尼地平、依高地平、伊拉地平、拉西地平、樂卡地平、尼莫地平、桂利嗪、氟桂利嗪、利多氟嗪、洛美利嗪、芐環(huán)烷、依他苯酮和哌克昔林)曲美他嗪、雙嘧達(dá)莫、依他苯酮、地拉、曲匹地爾、尼可地爾、依諾肝素和阿司匹林。利尿劑的實例包括噻嗪類利尿劑(例如氫氯噻嗪、甲氯噻嗪、三氯噻嗪、芐氫氯噻嗪和戊氟噻嗪)、袢利尿劑(例如呋喃苯胺酸、依他尼酸、布美他尼、吡咯他尼、阿左塞米和托拉塞米)、保鉀利尿劑(螺內(nèi)酯、三氨蝶呤和坎利酸鉀)、滲透利尿劑(例如異山梨醇、D-甘露醇和甘油)、非噻嗪類利尿劑(例如美替克侖、曲帕胺、氯噻酮和美夫西特)和乙酰唑胺。強心劑的實例包括洋地黃制劑(例如洋地黃毒苷、地高辛、甲基地高辛、去乙酰毛花苷、維司力農(nóng)、毛花洋地黃甙C和海蔥次苷)、黃嘌呤制劑(例如氨茶堿、膽茶堿、二羥丙茶堿和丙羥茶堿)、兒茶酚胺制劑(例如多巴胺、多巴酚丁胺和多卡巴胺)、I3DE III抑制劑(例如氨力農(nóng)、奧普力農(nóng)和米力農(nóng))、地諾帕明、泛癸利酮、匹莫苯、左西孟旦、氨乙基磺酸、維司力農(nóng)、卡培立肽和達(dá)普酸考福新?？剐穆墒СＫ幍膶嵗ò犰`、吡美諾、普魯卡因胺、西苯唑啉、丙吡胺、奎尼丁、安搏律定、美西律、利多卡因、苯妥英、吡西卡尼、丙胺苯丙酮、氟卡尼、阿替洛爾、醋丁洛爾、索他洛爾、普萘洛爾、美托洛爾、吲哚洛爾、胺碘酮、尼非卡蘭、地爾硫卓、芐普地爾和維拉帕米。抗高血脂藥的實例包括阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀鈉、氟伐他汀鈉、克利貝特、氯貝特、雙貝特、非諾貝特、苯扎貝特、考來替蘭和考來烯胺。藥物組合物的制劑和劑量通常，足以實現(xiàn)治療或預(yù)防效果的本發(fā)明組合物的有效量為約O. OOOOOlmg/千克體重/天至約10，OOOmg/千克體重/天。合適的情況下，劑量為約O. OOOlmg/千克體重/天至約IOOOOmg/千克體重/天。對于試劑的給藥，劑量范圍可以為每周、每2周或每3周約O. 0001至10000mg/kg宿主體重，更通常為O. I至10000mg/kg宿主體重。示例性的治療方案為每兩周一次或每月一次或每3-6個月一次給藥。通常多次給予所述試劑。單次劑量之間的間隔可以是每天、每周、每月或每年?；蛘?，可以以緩釋制劑的形式給予所述試劑，在這種情況下，需要給藥的頻率減少。劑量和頻率根據(jù)試劑在個體中的半衰期而不同。給藥的劑量和間隔可以根據(jù)是預(yù)防性處理還是治療性處理而不同。在預(yù)防性應(yīng)用中，在長期以相對低頻率的間隔給予相對低的劑量。某些個體持續(xù)接受治療。在治療性應(yīng)用中，有時需要以相對短的間隔給予相對高的劑量，直至疾病的進展減緩或停止，并優(yōu)選地直至個體表現(xiàn)出疾病癥狀的部分或完全改善。在此之后，可以給予患者預(yù)防方案。毒性
合適的情況下，本文所述的試劑的有效量(例如，劑量)能提供有益的治療效果，而不會產(chǎn)生對個體的明顯毒性?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)程序在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏写_定本文所述的試劑的毒性，例如，通過測定LD5tl (半數(shù)致死量)或LDltltl (絕對致死量)。治療指數(shù)(半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值是。由這些細(xì)胞培養(yǎng)測試和動物研究的數(shù)據(jù)可以用于參考制定人類中使用無毒性的劑量范圍。本文所述的試劑的劑量優(yōu)選地處于包括有效劑量且僅具有很小的毒性或無毒性的血循環(huán)濃度的范圍內(nèi)。根據(jù)所用劑型和給藥途徑，劑量可以在該范圍內(nèi)變化。確切的制劑、給藥途徑和劑量可以由醫(yī)師根據(jù)個體的疾病狀態(tài)來選擇。參見，例如，F(xiàn)ingl et al, In The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch. I (治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)，第一章)(1975)。根據(jù)一個實施方案，可以將所述試劑合并到適于給藥的藥物組合物中。在一些實施方案中，所述藥物組合物可以包含適于對個體進行給藥的形式的純化的或基本純化的日本路邊青提取物和藥學(xué)可接受的載體。在其它實施方案中，所述藥物組合物所包含的藥學(xué)可接受的載體在一定程度上由所給予的具體組合物以及用于給予組合物的具體方法決定。因此，適于給予組合物的藥物組合物制劑有很多種(參見，例如，Remington' sPharmaceutical Sciences (雷明頓制藥科學(xué))，Mack Publishing Co. , Easton, PA 18thed.，1990)。通常將藥物組合物配制為無菌的、基本上等滲的并且完全符合美國食品與藥品管理局的所有良好生產(chǎn)規(guī)范(GMP)規(guī)程。當(dāng)形容組合物、載體、稀釋劑和試劑時，術(shù)語“藥學(xué)可接受的”、“生理學(xué)容許的”以及其語法變體可交換使用，并且表示該材料能夠給予個體,并且不會產(chǎn)生需要禁止組合物給藥的程度的不希望的生理學(xué)影響。例如，“藥學(xué)可接受的賦形劑”表示該賦形劑可用于制備通常是安全的，無毒性的且滿足需要的藥物組合物，并且還包括獸醫(yī)用途以及人類制藥用途能接受的賦形劑。這些賦形劑可以是固體、液體、半固體，或者對于噴霧劑組合物來說，可以是氣體?！八帉W(xué)可接受的鹽和酯”是指藥學(xué)可接受的并具有所需藥學(xué)性質(zhì)的鹽和酯。這類鹽包括試劑中存在的酸性質(zhì)子能夠與無機或有機堿反應(yīng)的情況下形成的鹽。合適的無機鹽包括與堿金屬形成的鹽，所述堿金屬例如鈉和鉀、鎂、鈣和鋁。合適的有機鹽包括與有機堿形成的鹽，所述有機堿例如胺類堿，例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、N-甲基葡糖胺等。這類鹽還包括與無機酸(例如，鹽酸和氫溴酸)和有機酸(例如乙酸、檸檬酸，馬來酸和烷基磺酸和芳基磺酸，例如甲磺酸和苯磺酸)形成的酸加成鹽。藥學(xué)可接受的酯包括與試劑中存在的羧基、磺酰氧基和膦酰氧基形成的酯，例如，Ch6烷基酯。當(dāng)存在兩種酸性基團時，藥學(xué)可接受的鹽或酯可以是單酸單鹽或酯或二鹽或酯；同樣，當(dāng)存在多于兩種酸性基團時，部分的或所有的這些基團可以被鹽化或酯化。本發(fā)明中命名的試劑可以以非鹽化或非酯化的形式或鹽化和/或酯化的形式存在，并且這些試劑的命名意圖包括原始(非鹽化的和非酯化的)化合物及其藥學(xué)可接受的鹽和酯。此外，本發(fā)明所述的某些試劑可以以多種立體異構(gòu)體的形式存在，涉及該試劑時意圖包括所有單種立體異構(gòu)體和這些立體異構(gòu)體的所有混合物(無論是外消旋的還是其它)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定本發(fā)明的具體藥物和組合物的合適的給藥時機、順序和劑量。這些載體或稀釋劑的實例包括但不限于，水、鹽溶液、林格氏液、葡萄糖溶液和5%人血清白蛋白。還可以使用脂質(zhì)體和諸如不揮發(fā)性油的非水性載體。這些介質(zhì)和化合物在藥學(xué)活性物質(zhì)中的使用是本領(lǐng)域公知的。除了與所述試劑不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或化合物之外，其它介質(zhì)或化合物可用于組合物中。還可以將補充性活性化合物合并到組合物中。本發(fā)明的藥物組合物的配制符合其預(yù)期的給藥途徑。本發(fā)明的組合物可以通過以下途徑給藥胃腸外、局部、靜脈內(nèi)、口服、皮下、動脈內(nèi)、真皮內(nèi)、經(jīng)皮、直腸、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、肌內(nèi)途徑或作為吸入劑。所述試劑可以任選地與在治療各種疾病中至少有一定效果 的其它試劑聯(lián)合給藥。胃腸外、真皮內(nèi)或皮下施用的溶液或懸液可以包括以下組分無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌化合物，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合化合物，例如乙二胺四乙酸(EDTA);緩沖液，例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用于調(diào)節(jié)張力的化合物，例如氯化鈉或葡萄糖?？梢杂盟峄驂A調(diào)節(jié)PH，例如鹽酸或氫氧化鈉。胃腸外制劑可以裝入安瓶、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多劑量瓶中。適于注射使用的藥物組合物包括無菌水性溶液(在可溶于水的情況下)或用于臨時制備無菌注射液或分散液的分散劑和無菌粉末。對于靜脈內(nèi)給藥，合適的載體包括生理鹽水、抑菌水、Cremophor EL (BASF,Parsippany,N. J.)或磷酸鹽緩沖液(PBS)。無論在什么情況下，組合物必須是無菌的，并且其流動性應(yīng)當(dāng)易于注射。其在生產(chǎn)和貯存條件下必須穩(wěn)定，并且必須能抵抗諸如細(xì)菌和真菌的微生物的污染活動。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的混合物的溶劑或分散介質(zhì)?？梢岳缤ㄟ^使用諸如卵磷脂的包被、保持需要的顆粒尺寸(在分散液的情況下)和施用表面活性劑來保持合適的流動性。可以利用各種抗菌和抗真菌化合物實現(xiàn)微生物活動的預(yù)防，所述抗菌和抗真菌化合物例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸，硫柳汞等。在很多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲化合物，例如糖，諸如甘露醇、山梨醇的多元醇，氯化鈉。可以通過在組合物中包含延緩吸收的化合物實現(xiàn)注射組合物的持續(xù)吸收，所述化合物例如單硬脂酸鋁和明膠?？梢酝ㄟ^將所需量的試劑合并入含有一種上文所列成分或上文所列成分的組合的合適的溶劑中然后視情況進行過濾滅菌來制備無菌注射液。通常，通過將結(jié)合劑合并到含有基本分散介質(zhì)和上文所列的所需其它成分的無菌介質(zhì)中來制備分散劑。對于用于制備無菌注射液的無菌粉末，制備方法是真空干燥和冷凍干燥，從而從之前過濾滅菌的溶液得到活性成分和任何其它所需成分的粉末?？梢砸苑e存注射(depot injection)或植入制劑的形式給予本發(fā)明的試劑，植入制劑的制備形式能允許活性成分的持續(xù)釋放或脈沖釋放?？诜M合物通常包含惰性稀釋劑或可食用的載體?？梢詫⒖诜M合物封裝在明膠膠囊中或壓縮成片劑。為了口服治療給藥，結(jié)合劑可以與賦形劑合并，并用于片劑、錠劑或膠囊的形式。還可以使用用于漱口水的流體載體來制備口服組合物，其中流體載體中化合物是經(jīng)口施用、漱口和吐出或吞下。藥學(xué)相容的結(jié)合化合物和/或輔助材料可以作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可以含有任何下述成分或具有相似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解化合物，例如藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterotes ;助流劑,例如膠態(tài)二氧化娃；甜味劑化合物，例如蔗 糖或糖精；或調(diào)味劑化合物，例如薄荷油、水楊酸甲酯或桔子香精。在一個實施方案中，所述試劑與能保護所述試劑免于從體內(nèi)快速清除(例如控釋制劑，包括植入物和微膠囊化的遞送體系)或保護藥物免于被胃酸降解的載體一起進行制備。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。此類制劑的制備方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。還可以從Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals, Inc購買所述材料。脂質(zhì)體懸液(包括革巴向于感染細(xì)胞的具有針對病毒抗原的單克隆抗體的脂質(zhì)體)也可用作藥學(xué)可接受的載體。可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進行制備，例如，美國專利第4，522，811號中的描述。
實施例通過以下實施例進一步闡述本技術(shù)，但這些實施例不應(yīng)解釋為以任何方式進行限制。實施例I.日本路邊青有機提取物的制備使用由生物活性導(dǎo)向的分離方法來篩選植物成分，從而鑒定出通過誘導(dǎo)機體側(cè)支循環(huán)的小動脈和微血管的形成，進而降低小動脈的外周阻力的化合物的組合物。簡而言之，將IOkg采集自安徽省的干燥的日本路邊青切成小塊，用75%乙醇(10倍量)在40°C下滲濾3天。將提取物進行電噴霧，得到棕色粉末。實施例2. OEGJ增強血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和分化按照修改過的ATCC流程，使用MTT方法來測定血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC，2X103/孔)接種于96孔培養(yǎng)板的生長培養(yǎng)基中(含15% FBS、6U/ml肝素和SOyg/ml內(nèi)皮細(xì)胞生長補充劑的F12K培養(yǎng)基)。細(xì)胞貼壁后，將培養(yǎng)基更換為含2%FBS的Ham' s F12K培養(yǎng)基，培養(yǎng)12小時。然后，用濃度梯度為50、100和200 μ g/ml的OEGJ(按照實施例I中所述制備)處理細(xì)胞48小時。利用Tecan Sunrise酶標(biāo)儀(GmbH,Australia)測定光學(xué)密度(OD)。在MTT測定之前，用倒置顯微鏡觀察所有不同處理的孔用于評價培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞的表型和分化。我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ不僅在低濃度下促進HUVEC增殖，還能增強HUVEC的分化，在培養(yǎng)物中形成薄且細(xì)長的且相互連接的管樣結(jié)構(gòu)，提示其在促進血管生成中的潛力(圖I)。實施例3. OEGJ在高血壓大鼠模型中的治療效果我們的初步研究提示雙側(cè)頸動脈(2V0)的永久性結(jié)扎由于腦小動脈的阻力增加而導(dǎo)致輕度高血壓。2V0后，腦供血主要依靠雙側(cè)椎動脈，椎動脈通常提供腦總血量的約40%。為了代償通常由雙側(cè)頸動脈提供的腦供血的60%的減少，心臟需要產(chǎn)生更大的壓力(這個推論已在實驗過程中通過測量血壓得到證實)來克服腦部小動脈的阻力，從而通過椎動脈將更大量的血液供至腦部。在本實驗中，使用重250_300g的雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠。本研究的進行符合國家實驗動物管理條例，并且所有動物實驗得到張江高科技園區(qū)的實驗動物管理委員會的批準(zhǔn)。對于2V0(n = 12)，在麻醉下，通過中線頸部切口暴露兩條頸總動脈，然后用6-0尼龍縫線將其結(jié)扎，并用微型手術(shù)剪切斷。然后用縫線縫合傷口。進行中線頸部切開手術(shù)但未進行頸總動脈結(jié)扎的大鼠(η = 6)作為假手術(shù)對照。從麻醉蘇醒后，允許實驗動物自由進食和飲水。
對于OEGJ治療組的2V0大鼠(η = 6),每天灌胃給予OEGJ懸液(480mg/kg/天，配制于水中)，給藥4周。對于介質(zhì)處理組的2V0動物(η = 6)，每天給予等量的水。對假手術(shù)治療組中的3只大鼠每天灌胃給予OEGJ懸液(480mg/kg/天，配制于水中)，給藥4周，剩余的3只動物每天給予等量的水。治療后4周分析血壓和腦血流。血壓的測量治療4周后，在一段預(yù)熱期后，用配備了尾套的計算機化自動測血壓系統(tǒng)(BP-98A，Softron)，在未麻醉的大鼠中測量實驗動物的收縮壓(SBP)和平均血壓(MBP)。室溫27°C保持恒定。我們發(fā)現(xiàn)，治療后4周，介質(zhì)處理的2V0大鼠的血壓升高(154. 25±3. 95mmHg)(圖2)，其顯著高于假手術(shù)動物的血壓(約125mmHg)。相比之下，OEGJ治療的2V0大鼠的血壓為135. 25±2. 14mmHg(圖2)，其顯著低于介質(zhì)處理的對照大鼠的血壓，但稍高于假手術(shù)大鼠的水平，這就提示由于OEGJ治療促進了腦側(cè)支循環(huán)血管的形成，從而降低了腦小動脈的外周阻力。為了排除OEGJ的血管擴張效應(yīng)的可能性，在OEGJ治療停藥后2周，我們再次測量了 2V0實驗動物的腦部血流量和血壓。我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ治療停止后2周，OEGJ治療的大鼠的血流量仍然與上一次的測量值相似，血壓為約128mmHg。而介質(zhì)處理的大鼠的腦血流量和血壓與2周前的上一次的測量值大致相同。綜上所述，OEGJ治療恢復(fù)了由于2V0而引起的腦缺血的腦部供血。該效果可能是由于OEGJ的治療誘導(dǎo)腦部中側(cè)支血管的形成，從而降低了腦部小動脈的外周阻力，這個推測已經(jīng)被通過在相同腦樣品的組織學(xué)研究(血管計數(shù))的結(jié)果得到了證實。腦血流的多普勒超聲評價如果OEGJ治療能刺激腦部側(cè)支血管的生長，從而降低腦部小動脈的外周阻力，則在一定的血壓下總腦血流量應(yīng)當(dāng)增加。為了證實這個猜測，我們按照上文所述的方法測量了血壓，并通過利用配備了 PLT-1202S線性陣列換能器的東芝ApHo XG超聲儀來測量實驗動物的顱外基底動脈的血流，來評估實驗動物的腦血流量。永久性2V0之后，大鼠腦部供血主要依賴于雙側(cè)椎總動脈-基底動脈，其通常提供腦部總血量的約40%。我們的結(jié)果表明，假手術(shù)大鼠基底動脈的血流量為約12. 4±3. 5ml/分鐘，但是在介質(zhì)處理的動物的基底動脈的血流由于對2V0的代償機制而達(dá)到了 16. 04±6. 4ml/分鐘(圖3)，相當(dāng)于正常腦部總血量的52%。有趣的是，OEGJ治療的動物的基底動脈的血流量增加至25. 9±11. 80ml/分鐘(圖3)，相當(dāng)于總腦血流量的正常水平的約83. 5%。為了確定OEGJ介導(dǎo)的腦外周血管阻力降低的效果是由于其引起的血管擴張還是由于其誘導(dǎo)了腦部新的側(cè)支血管的形成，在OEGJ治療停藥后2周我們再次測量了這些實驗動物的腦血流量。我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ治療停止后2周，OEGJ治療大鼠的腦血流量仍然與上一次的測量值相似(21. I ±6. 3ml/分鐘)，血壓為約128mmHg，與正常血壓水平相似。而介質(zhì)處理的大鼠中腦血流量(14. 6ml/分鐘)和血壓(148mmHg)也都與2周前的上一次的測量值大致相似。根據(jù)公式血壓(BP)/血流量(BF)=外周血管阻力(PR)，對于正常大鼠第一次測量時，RnO = 125/12. 4 = 10. 08，2周后，Rn2 = 121/12 = 10. I ;對于介質(zhì)處理的對照大鼠RcO = 154. 25/16. 04 = 9. 62，介質(zhì)處理停止后 2 周，Rc2 = 148/14. 6 = 10. 14 ;對于OEGJ 治療的大鼠Ro0 = 135. 25/25. 9 = 5. 22，OEGJ 治療停止后 2 周，Ro2 = 128/21. I =
6.06(圖3)。通過以上計算發(fā)現(xiàn)，正常和介質(zhì)處理的對照大鼠的外周血管阻力之間幾乎沒有差異(約10)。然而，OEGJ治療組的外周血管阻力低了約43%，這就提示在腦部有新的 側(cè)支動脈生成，增加了腦部外周動脈的截面積，這點通過組織學(xué)定量分析的血管計數(shù)得到進一步證實。腦部新的側(cè)支血管形成的證實我們發(fā)現(xiàn)，OEGJ治療的大鼠的腦部平均重量比介質(zhì)處理的對照大鼠重
9.I ±2. 3% (P <0.01)。最后一次測量腦血流后，處死實驗動物，取出的腦部，福爾馬林固定，石蠟包埋，組織切片(5μπι)，Η&Ε染色。在光學(xué)顯微鏡高倍鏡視野(HPF) (40倍)下，對腦額葉皮質(zhì)內(nèi)和海馬區(qū)周圍的血管進行計數(shù)，從而確定切片樣品中血管密度。取額葉或海馬內(nèi)6個隨機且非重疊HPF進行觀察和血管計數(shù)，取HPF血管數(shù)的平均值，并將其表示為每個HPF的血管數(shù)。由2個研究人員以雙盲法的方式進行血管計數(shù)。我們發(fā)現(xiàn)，在OEGJ治療的大鼠中，額葉皮質(zhì)區(qū)內(nèi)的血管數(shù)為約61. 7±20. 3/HPF (圖4)，海馬區(qū)周圍的血管數(shù)為56. 4+12. 3/HPF。相比之下，在介質(zhì)處理的大鼠中，額葉皮質(zhì)區(qū)內(nèi)的血管數(shù)為約38. 5 ±12. 6/HPF(圖4)，海馬區(qū)周圍的血管數(shù)為30. 7 ±10. 5/HPF。綜上所述，OEGJ治療可以在缺血的腦中誘導(dǎo)新生側(cè)支血管形成(增多37.4%)，這就揭示了 OEGJ治療可以使2V0誘導(dǎo)的高血壓動物的腦缺血供血增加30. 8%以及血壓降低14. 5%的內(nèi)在機理(圖5)。實施例4.輕度高血壓動物模型中OEGJ的治療效果測試了在數(shù)種輕度高血壓動物模型中OEGJ的治療效果。所有研究的進行符合國家實驗動物管理條例，并且所有動物實驗都得到張江高科技園區(qū)的實驗動物管理委員會的批準(zhǔn)。動物模型包括如下文所述的單側(cè)頸動脈的部分結(jié)扎的大鼠、APP小鼠、中風(fēng)大鼠和衰老加速小鼠產(chǎn)生的輕度高血壓動物模型。較輕度高血壓大鼠模型的產(chǎn)生為此目的，進行了 SD大鼠(η = 12)右側(cè)頸動脈的部分結(jié)扎(60% ) (PLRCA)。在麻醉下，通過右側(cè)中線頸部切口暴露右側(cè)頸總動脈。然后，用6-0尼龍縫線將暴露的右側(cè)頸動脈部分結(jié)扎(60%)，并用微型手術(shù)剪切斷。然后用縫線縫合傷口。進行右側(cè)中線頸部切開手術(shù)但未進行頸總動脈結(jié)扎的6只大鼠作為假手術(shù)對照。從麻醉蘇醒后，允許實驗動物自由進食和飲水。將大鼠隨機分為OEGJ治療組(η = 6)和介質(zhì)處理組(η = 6)。APP小鼠發(fā)展出纖維淀粉樣斑塊隨著APP小鼠衰老，它們表現(xiàn)出空間學(xué)習(xí)和記憶障礙，并伴隨輕度升高的血壓。由Takeda和其同事(Takeda et al. , 1991)開發(fā)的SAMPlO小鼠表現(xiàn)出快速衰老的特征。當(dāng)它們衰老時，它們發(fā)生早期學(xué)習(xí)和記憶異常，并伴隨輕度高血壓。在本研究中，使用了 APP (η=30)和SAMPlO小鼠(η = 30)。分別將APP小鼠和SAMPlO小鼠隨機分為OEGJ治療組(η=15)和介質(zhì)處理組(η = 15)。缺血性中風(fēng)誘導(dǎo)的高血壓的大鼠模型按照之前使用的方法(Mayzel-Oreg et al.，2004)，通過手術(shù)在SD大鼠中引發(fā)缺血性中風(fēng)。簡而言之，通過頸部右側(cè)的正中切口暴露頸動脈分叉周圍的頸總動脈(CCA)、頸內(nèi)動脈(ICA)和頸外動脈(ECA)。在頸動脈分叉近端結(jié)扎CCA。利用注射器將含有約1000個微球(80-150 μ M)的鹽溶液(0.5ml)朝向頸動脈分叉注射入ECA。在注射位點的遠(yuǎn)端結(jié)扎ECA并去除CCA結(jié)扎之后，注射的微球進入ICA，從而導(dǎo)致腦中的多發(fā)性梗塞缺血性中風(fēng)。按照大鼠的神經(jīng)學(xué)評級，將大鼠(η = 28)分為OEGJ治療組(η = 12)和介質(zhì)處理組(η =16)，使每組中的大鼠具有大體上相似的等級。對于所有以上動物模型的OEGJ治療組中的大鼠和小鼠，分別用OEGJ懸液(480mg/kg/天，配制于水中)灌胃治療4周。對于介質(zhì)處理組的大鼠和小鼠，在相同的時間段內(nèi)每天灌胃給予等量的水。結(jié)果表明，介質(zhì)處理的大鼠(PLRCA)的平均血壓升高至約142mmHg，總腦血流量為約37ml/分鐘(圖6)。相比之下，在OEGJ治療的大鼠中，由于PLRCA而升高的血壓降低至正常水平(121mmHg)，同時總腦血流量顯著增加至58ml/分鐘，從而能保持對缺血性腦部的供血(圖6)。在APP小鼠(6-7月齡)中，介質(zhì)處理組的小鼠的平均血壓為約124mmHg(圖7)。相比之下，OEGJ治療組的小鼠的平均血壓為約114mmHg，比介質(zhì)處理的對照小鼠的平均血壓低約10% (圖7)。我們還發(fā)現(xiàn)，OEGJ治療組的腦部平均重量比介質(zhì)處理組的腦部平均重量重約15%。組織學(xué)研究還表明，在OEGJ治療的APP小鼠的腦部皮質(zhì)和海馬中發(fā)現(xiàn)了顯著較多的新生血管。綜上所述，I個月的OEGJ治療不僅誘導(dǎo)腦部和其它組織中新的側(cè)支血管的形成，還能降低APP小鼠的系統(tǒng)血壓(約114mmHg)。相比之下,介質(zhì)處理的APP小鼠的血壓(124mmHg)比OEGJ治療的APP小鼠的血壓高約10% (圖7)。此外，我們還證實，I個月的OEGJ治療(480mg/kg)后，大鼠中風(fēng)模型和SAMPlO小鼠模型中輕度升高的血壓(130-150mmHg)下降了約10%，與這些動物的正常血壓水平相似。實施例5. OEGJ對人類個體的高血壓的治療效果基于以上從細(xì)胞培養(yǎng)物體系中OEGJ增強的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化以及更重要的，在動物模型中OEGJ介導(dǎo)的對2V0、中風(fēng)、PLRCA和APP所引起的高血壓的明顯治療所獲得的十分具有前景的結(jié)果，在人道治療的基礎(chǔ)上，在高血壓患者中測試了在高血壓動物模型中觀察到的OEGJ引起的明顯治療效果能否相似地移用到臨床應(yīng)用上的可能性。在10名原發(fā)性或繼發(fā)性高血壓患者上進行了我們的初步臨床治療。參與本測試的所有原發(fā)性或繼發(fā)性高血壓患者(η = 10)都報告具有長期高血壓病史。近些年來，目前的商業(yè)藥物不能對他們的高血壓進行令人滿意的治療。他們的高血壓對常規(guī)治療或聯(lián)合治療策略的反應(yīng)不好。在檢查時，他們的血壓為約162±20/106±10mmHg。此外，除高血壓外，他們還主訴受到頻繁性頭痛、頭暈、胸悶、呼吸短 促和視力模糊等的困擾。在知情和書面同意后，他們接受了 4-8周的OEGJ治療(2_3g/天，口服給藥)。1-2周OEGJ 口服給藥后，所有這些患者經(jīng)歷了血壓平穩(wěn)下降。4-8周治療后，所有這些患者的血壓回到正常范圍內(nèi)(119土 10/79 土 6mmHg)，他們主訴上述的高血壓伴隨癥狀也得到了緩解(表 I)。表I.治療后聞血壓相關(guān)癥狀的緩解
權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防哺乳動物個體中的高血壓的方法，所述方法包括給予有需要的個體有效量的日本路邊青(Geum japonicum)有機提取物(OEGJ)。
2.如權(quán)利要求2所述的方法，其中與未給予OEGJ的個體相比，給予OEGJ的個體中小動脈的外周阻力系統(tǒng)性降低。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中小動脈的外周阻力是通過器官或組織中的側(cè)支循環(huán)血管形成而降低。
4.如權(quán)利要求I所述的方法,其中給予的OEGJ的量為約O.Olmg至約10，OOOmg提取物/千克體重/天。
5.如權(quán)利要求I所述的方法，其中給予的OEGJ是劑量單位形式。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其中給予的OEGJ是包含藥學(xué)可接受的載體的劑量單位形式。
7.如權(quán)利要求I所述的方法，其中OEGJ誘導(dǎo)在小動脈阻力已經(jīng)增加了的器官或組織中形成側(cè)支循環(huán)血管。
8.如權(quán)利要求I所述的方法，其中與未給予OEGJ的個體相比，所述個體的血壓降低。
9.如權(quán)利要求I所述的方法，其中OEGJ通過口服給藥。
10.如權(quán)利要求I所述的方法，其中OEGJ通過皮下注射、肌內(nèi)注射或靜脈輸注進行給藥。
11.如權(quán)利要求I所述的方法，其中OEGJ是日本路邊青的低級烷基醇溶劑提取物。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中低級烷基醇具有1-6個碳原子。
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述溶劑是乙醇。
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其中所述溶劑是甲醇。
15.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述哺乳動物個體是人。
16.用于治療或預(yù)防哺乳動物個體中的高血壓的藥物組合物，包含有效量的日本路邊青(Geum japonicum)有機提取物(OEGJ)和藥學(xué)可接受的賦形劑。
17.試劑盒，包含權(quán)利要求16所述的藥物組合物、容器和表明該藥物組合物對患高血壓(hypertension)或高血壓(high blood pressure)的人有益的說明書。
全文摘要
本文公開了植物日本路邊青的化合物、提取物和活性部位以及預(yù)防或治療高血壓的方法。本文提供的化合物可以配制為可用于公開的方法的藥物組合物和藥物。還提供了所述化合物和提取物在制備藥物制劑和藥物中的用途。
文檔編號A61K36/73GK102740870SQ201080026126
公開日2012年10月17日 申請日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月12日
發(fā)明者彭鵬, 李明 申請人:基因雷克斯制藥有限公司