專利名稱：乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑制劑和用其減少或消除陳化奶酪中的視覺缺陷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有金屬的乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑，用在不泌乳奶牛中預(yù)防乳腺炎。該乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑不會(huì)在用受治療動(dòng)物的奶制成的乳制品(尤其是奶酪)中引起視覺缺陷。
本發(fā)明還涉及在奶酪中預(yù)防“黑斑缺陷”(BSD)的方法。背景在乳畜群中的乳腺炎是乳品生產(chǎn)者遇到的最昂貴和困難的疾病之一。針對(duì)治療臨床的乳腺炎的常規(guī)療法包括乳房?jī)?nèi)抗微生物療法。雖然商業(yè)可購(gòu)得很多乳房?jī)?nèi)抗微生物產(chǎn)品，臨床乳腺炎的治愈率依然令人困惑地低鏈球菌屬乳腺炎為46%，葡萄球菌屬乳腺炎為21 金黃色葡萄球菌乳腺炎只有9%。見Wilson等(1996) National Mastitis CouncilProceedings 164-165,和Crandall等(2005)NMC Annual Meeting Proceedings 215-216。因此，乳品生產(chǎn)者通常僅通過從他們的畜群中剔除有乳腺炎傾向的動(dòng)物來(lái)控制疾病。由于治療乳腺炎的困難性，在乳品產(chǎn)業(yè)中預(yù)防新的乳房?jī)?nèi)感染是主要的焦點(diǎn)。干奶期間的新感染的比率顯著高于泌乳期間的新的感染。(例如，某一研究表明所有新的革蘭陰性乳房?jī)?nèi)感染的61%發(fā)生于干奶期。見Todhunter等(1995) J. Dairy Sci. 78 :2366.)緊接著干奶后的三星期和產(chǎn)犢前的兩星期是特別易于新感染的期間。因此，近年來(lái)乳品生產(chǎn)者集中大量的努力于干奶期間奶牛的“預(yù)防保持”。2003年4月，在美國(guó)市場(chǎng)引入了一種用于干奶奶牛的內(nèi)部(或“乳房?jī)?nèi)”)乳頭封閉劑(ITS)。該產(chǎn)品開發(fā)于新西蘭，在美國(guó)以“0RBESEAL”商標(biāo)(美國(guó)商標(biāo)注冊(cè)號(hào)2，772，198和3，120,693)市售。引入美國(guó)市場(chǎng)的“0RBESEAL”商標(biāo)的ITS含有分散于粘稠糊劑中的65% w/w堿式硝酸鉍。該ITS產(chǎn)品不含有任何抗生素，該產(chǎn)品也不含有任何活性抗微生物齊U。以施用抗生素于干奶奶牛的相同方式，將該ITS用管狀給藥注射器注射入乳頭末端。該ITS產(chǎn)品填充乳頭管的裂縫和褶皺，由此對(duì)病原體產(chǎn)生物理屏障。見發(fā)行于2001年7月3日的美國(guó)專利號(hào)6，254，881，其通過引用結(jié)合到本文中。在新西蘭“0RBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品的初期研究推斷，該產(chǎn)品在產(chǎn)犢時(shí)預(yù)防新的乳房?jī)?nèi)感染并在哺乳的頭五(5)個(gè)月預(yù)防乳腺炎的臨床表現(xiàn)中，與廣譜長(zhǎng)效乳房?jī)?nèi)抗生素同樣良好地作用。見 Woolford 等(1998) New Zealand Veterinary Journal 46:1。在美國(guó)更近期的研究還推斷該ITS產(chǎn)品改善已經(jīng)注入芐星鄰氯青霉素的奶牛的乳房健康。見Godden 等(2003) J. Dairy Sci. 86 :3899_3911。因此，“0RBESEAL” 商標(biāo)的 ITS 被證實(shí)是減少奶牛在它們的干奶期間乳腺炎新病例的數(shù)量的有效工具。雖然它相對(duì)近期才引入美國(guó)市場(chǎng)，“ORBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品具有普遍的市場(chǎng)接受度并廣泛用于美國(guó)乳畜群。簡(jiǎn)言之，“0RBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品在它的預(yù)防乳腺炎的預(yù)期目的上非常好?！癘RBESEAL”商標(biāo)的ITS產(chǎn)品在美國(guó)引入之后，在陳化乳制品中，最顯著地在陳化車達(dá)(cheddar)奶酪中，開始出現(xiàn)視覺缺陷。視覺缺陷以小的黑斑(約0. 5_5mm直徑)形式遍布于陳化奶酪中。該斑點(diǎn)是純粹美觀的、視覺的缺陷，其降低了受這個(gè)問題影響的奶酪的品質(zhì)等級(jí)(及由此降低市場(chǎng)價(jià)值)。該斑點(diǎn)在奶酪中不伴隨有任何感觀性能缺陷。受黑斑影響的奶酪是易賣的，雖然比不受影響的奶酪等級(jí)差。所述缺陷被稱為“黑斑缺陷”(BSD)。發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明的第一形式涉及一種在非人類動(dòng)物的乳頭管內(nèi)形成物理屏障的方法，用于在動(dòng)物的干奶期對(duì)乳房疾病進(jìn)行預(yù)防性治療，并同時(shí)防止用該動(dòng)物的奶制成的乳制品中的BSD。該方法包含將乳頭封閉制劑注入動(dòng)物的乳頭管內(nèi)。該乳頭封閉制劑可含有鉍或可以是無(wú)鉍的。該制劑以足夠形成阻止微生物進(jìn)入乳頭的物理屏障的量給予，但不會(huì)在該動(dòng)物
的奶制成的乳制品中引起黑斑缺陷。優(yōu)選封閉劑不含抗感染劑(即該乳頭封閉劑優(yōu)選不含有抗生素或其它抗感染活性劑)。優(yōu)選方法包含注入乳頭封閉制劑，該乳頭封閉制劑包含至少約30%重量的無(wú)毒金屬鹽，更優(yōu)選約50%至約75%重量的無(wú)毒金屬鹽，和更優(yōu)選約65%重量的無(wú)毒金屬鹽。鹽的目的主要是給予組合物足夠的密度以使ITS “沉降”入乳頭管。在該方法的一個(gè)形式中，無(wú)毒金屬鹽選自鉍鹽、鈦鹽、鋅鹽、鋇鹽和這些鹽的組合物。最優(yōu)選的鹽是堿式硝酸鉍，二氧化鈦，氧化鋅，硫酸鋇和這些鹽的組合物。這些金屬的其它無(wú)毒鹽明確地在本發(fā)明范圍內(nèi)，比如鹵化物、硫酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、硝酸鹽、氨基磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、丙二酸鹽、草酸鹽、水楊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、馬來(lái)酸鹽等。凝膠基底可以是任何適合的凝膠制劑，許多凝膠制劑公知于制藥領(lǐng)域。優(yōu)選的凝膠基底含有單、雙和/或三酸甘油酯，其給予極大提高了的清潔度。甘油酯可含有來(lái)源于飽和的或不飽和的脂肪酸的同側(cè)鏈或不同側(cè)鏈。因此，通過非限制性實(shí)例，單、雙和/或三酸甘油酯可包含由癸酸、十二烷酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、十五酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸、二十四烷酸、十七酸、肉豆蘧烯酸、棕櫚油酸、油酸、順二十碳-9-烯酸、芥酸、順蓖麻酸、亞油酸、亞麻酸、里卡利酸、十七碳一烯酸(margaroleic acid)、花生四烯酸、鰈魚酸(clupanadonic acid)、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等衍生的側(cè)鏈。具有更長(zhǎng)或更短的側(cè)鏈的甘油酯也可使用。所述甘油酸酯可包含或衍生于天然動(dòng)物或植物的油或脂肪，比如(但非限制于)動(dòng)物性脂肪、低芥酸菜籽油(canola oil)、椰子油、玉米油、棉籽油、亞麻籽油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、豆油、向日葵油、魚油、藻油等。特別優(yōu)選的凝膠基底是低芥酸菜籽油、玉米油和/或棉籽油。有許多甘油酯的商品供應(yīng)者，比如ABITEC Corporation,Columbus，Ohio。ABITEC 的產(chǎn)品“CAPTEX 355”，目錄號(hào)65381-09-1 和 73398-61-5，一種辛酸甘油三酯，在本發(fā)明中非常適用。因此，在最優(yōu)選形式中，乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑以組合形式包含包含甘油酯的凝膠基底；和分散于凝膠基底中的無(wú)毒金屬鹽。因此優(yōu)選的對(duì)應(yīng)方法包含將一定量的乳頭封閉制劑注入動(dòng)物的乳頭管中。該乳頭封閉制劑包含分散于包含甘油酯的凝膠相中的無(wú)毒金屬鹽，其中注入的乳頭封閉制劑的量足夠形成阻止微生物進(jìn)入乳頭的物理屏障。乳頭封閉制劑還不會(huì)在所述動(dòng)物的奶制成的乳制品中引起黑斑缺陷。
本發(fā)明的另一形式涉及一種乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑，其基本上由包括單、雙和/或三酸甘油酯的凝膠基底，組合分散于凝膠基底中的無(wú)毒金屬鹽而組成，其中金屬鹽是堿式硝酸鉍。如之前提到的，乳頭封閉制劑優(yōu)選包含至少約30%重量、更優(yōu)選約50%至約75%重量，還更優(yōu)選約65%重量的金屬鹽。本發(fā)明的另一形式是乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑的改進(jìn)。尤其是，在非人類動(dòng)物的乳頭管內(nèi)形成物理屏障、用于在動(dòng)物的干奶期間乳房疾病的預(yù)防性治療的方法中，其中該方法包含將無(wú)抗感染劑的封閉制劑注入動(dòng)物的乳頭管內(nèi)的步驟，本發(fā)明的改進(jìn)包括注入在含有甘油酯的凝膠基底中包含無(wú)毒金屬鹽的乳頭封閉制劑。該改進(jìn)防止受治療動(dòng)物的奶制成的乳制品中黑斑缺陷的形成。本文用的數(shù)值范圍旨在包括包含于該范圍內(nèi)的每個(gè)數(shù)值和子集，不論是否明確公開。此外，這些數(shù)值范圍應(yīng)解釋為對(duì)涉及該范圍內(nèi)任何數(shù)值或數(shù)值子集的權(quán)利要求提供支
持。例如，從I至10的公開應(yīng)解釋為支持從2至8，從3至7、5、6，從I至9，從3. 6至4. 6，從3. 5至9. 9等的范圍。所有對(duì)本發(fā)明的單數(shù)特征或限定的指示物應(yīng)包括相應(yīng)的復(fù)數(shù)特征或限定，并且反之亦然，除非另外詳細(xì)說(shuō)明或通過作出該指示物的上下文清楚地意指為相反。本文所用的所有方法或方法步驟的組合可在任何順序下進(jìn)行，除非另外詳細(xì)說(shuō)明或通過作出該所指組合的上下文清楚地意指為相反。本發(fā)明的方法可包含、包括本文描述的方法和產(chǎn)品的基本要素和限定，以及本文描述的或者在合成有機(jī)化學(xué)中有用的任何其他或任選的成分、組成或限定，或基本上由其組成。附圖
簡(jiǎn)述圖IA和IB是在在18kg陳化的白色車達(dá)奶酪塊中的典型的黑斑缺陷的照片。圖IA顯示酪塊的表面，帶有容易看到的黑斑缺陷。圖IB是表明缺陷尺度的放大視圖(帶疊加的直尺)。這樣的斑點(diǎn)平均地分布于整個(gè)奶酪中。圖2是呈現(xiàn)鉍(III)硫化物納米棒的特征性毛發(fā)狀或棒狀結(jié)構(gòu)的黑斑缺陷的電子照片。在任何無(wú)BSD奶酪或試驗(yàn)的無(wú)BSD奶酪區(qū)未出現(xiàn)這樣的結(jié)構(gòu)。顯示于圖2的棒具有直徑范圍為 37. 09nm-129. 33nm。圖3是黑斑缺陷區(qū)域的單個(gè)棒狀結(jié)構(gòu)的電子照片。該棒顯示直徑為130. 88nm，并呈現(xiàn)二等分棒長(zhǎng)度的線。圖4A和4B是實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)的黑斑缺陷的圖像。在圖4A中，將“ORBESEAL”商標(biāo)的乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑(ITS)的各種成分與奶酪混合并且對(duì)每個(gè)斑點(diǎn)立即照相。圖4B顯示在暴露于陳化車達(dá)奶酪揮發(fā)物或硫化氫后照相的相同斑點(diǎn)。位點(diǎn)4和5分別含有堿式硝酸鉍和完整的“ORBESEAL”商標(biāo)的ITS制劑。圖5是描述各種類型的ITS的清潔度的矩形圖。圖6是描述ITS制劑在不同溫度下的粘度曲線圖。X軸表示溫度(°C )，Y軸表示粘度。發(fā)明詳述開始于2003年后期，奶酪生產(chǎn)者向Wisconsin-Madison大學(xué)食品科學(xué)部門和乳品研究中心(CDR)提出許多咨詢，尋求在陳化的奶酪，特別是陳化的車達(dá)奶酪中出現(xiàn)新的“黑斑缺陷”的信息。在歷史上，奶酪中由灰到黑的污點(diǎn)由幾個(gè)不同和清楚的原因?qū)е?，包括特定微生?例如某些環(huán)境丙酸桿菌或霉菌)的生長(zhǎng)或食物級(jí)潤(rùn)滑碎屑對(duì)奶酪的污染。然而，奶酪生產(chǎn)者注意到的該特殊BSD不符合細(xì)菌污染或其它變質(zhì)生物體的外形，它看來(lái)也不是那些進(jìn)入奶流中的潤(rùn)滑碎屑或在奶酪生產(chǎn)過程中引入的其它碎屑。因此，第一步是測(cè)定黑斑缺陷的化學(xué)結(jié)構(gòu)。最初做出大量的努力于提取BSD奶酪的受影響區(qū)域。用不同極性、疏水性等的廣譜有機(jī)溶劑的提取努力，作為從奶酪基質(zhì)分離任何類型的有機(jī)色素物質(zhì)的手段，被證明沒有結(jié)果。盡管用有機(jī)溶劑對(duì)BSD的提取不成功，該提取努力的確產(chǎn)生有用的數(shù)據(jù)。值得注意的是，由于該色素不溶解或擴(kuò)散進(jìn)入這樣的溶劑，其可推斷(具有高度的可能性)該黑斑色素同樣不在奶酪基質(zhì)本身內(nèi)溶解或擴(kuò)散。漸增數(shù)量的呈現(xiàn)缺陷的奶酪樣品(從商業(yè)奶酪制造者累積的樣品)的目視檢測(cè)確認(rèn)了這個(gè)結(jié)論-黑斑色素被良好地容納并且看起來(lái)不擴(kuò)散進(jìn)入奶酪基質(zhì)。見圖IA和1B，其為典型的受BSD影響的18kg陳化的、白的車達(dá)奶酪塊的照片。圖IA是奶酪塊外表面的照片。圖IB是單個(gè)黑斑的放大視圖，帶有重疊于圖像上的直尺，以顯示斑點(diǎn)的尺度。如圖IA
和IB中顯示的斑點(diǎn)通常平均地分布于整個(gè)奶酪塊中，直徑尺度范圍從< Imm至約5_。任何給出的18kg奶酪塊內(nèi)的斑點(diǎn)的頻率在很大程度上變化，從每塊< 10個(gè)至遠(yuǎn)大于100個(gè)。一些從奶酪生產(chǎn)者里收到的無(wú)對(duì)照?qǐng)?bào)告指出，特別的陳化的和保存策略可能有助于溶解或擴(kuò)散斑點(diǎn)至它們不再是視覺上顯著的程度。(由于該缺陷是不伴有任何感官性能缺陷，“褪去”該斑點(diǎn)將改善這種情況。)然而，因?yàn)榻o出了在用于提取努力的有機(jī)溶劑中的色素穩(wěn)定性，這樣的效果極不可能。簡(jiǎn)言之，由本發(fā)明人進(jìn)行的提取實(shí)驗(yàn)用具有類似于乳脂的疏水性的溶劑。如果該黑斑色素溶解或擴(kuò)散進(jìn)入奶酪基質(zhì)本身(經(jīng)陳化或貯存方案)，該色素應(yīng)同樣易于溶解或擴(kuò)散進(jìn)入具有物理性質(zhì)類似于乳脂的有機(jī)溶劑。那樣的結(jié)果未出現(xiàn)于實(shí)驗(yàn)室中。此外，給定了在奶酪中典型PH/酸性環(huán)境，和多數(shù)陳化車達(dá)奶酪(0.5-2年)相關(guān)的典型的陳化/保質(zhì)期，該缺陷可經(jīng)陳化或貯存方案改善的無(wú)對(duì)照證據(jù)沒有價(jià)值。然而一實(shí)驗(yàn)顯示的最大啟發(fā)是黑斑色素在硝酸中易于溶解。這強(qiáng)烈提示該色素是無(wú)機(jī)鹽。結(jié)合該缺陷的第一次出現(xiàn)的時(shí)間，形成一種工作假設(shè)，即該ITS或者是BSD的致病因素(或至少與之相關(guān))。黑斑色素易溶于酸的發(fā)現(xiàn)支持進(jìn)一步的假設(shè)色素可能包含鉍III硫化物。因此，推斷在美國(guó)含有65%重量的含鉍鹽的“ORBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品可能不經(jīng)意地引入到奶流中。如上所述，該“ORBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品在商業(yè)上是成功的，因?yàn)樗纬勺柚共≡w進(jìn)入乳頭管的緊密的物理屏障。然而，從受治療的動(dòng)物除去該產(chǎn)品需要從動(dòng)物的乳頭剝離?？磥?lái)一些ITS在剝離后殘留于乳頭中，并進(jìn)入奶酪中。研究的下一階段依據(jù)一種假設(shè)操作，該假設(shè)是鉍III硫化物實(shí)際上是BSD的致病因素。堿式硝酸鉍本身是白色的和相對(duì)化學(xué)惰性的。因此，在液體牛奶、馬蘇里拉(mozzarella)奶酪和酸奶中存在的其痕量不易明顯看到。然而，在帶有高氣味強(qiáng)度的陳化奶酪中，黑斑缺陷看起來(lái)顯著。因此，假設(shè)鉍III硫化物(黑色的相對(duì)不溶的鹽)是堿式硝酸鉍(來(lái)自ITS)和硫化氫之間的反應(yīng)產(chǎn)物，該硫化氫通過熟化微生物群、酶類和作用于奶酪的蛋白/氨基酸成分的某些輔因子的作用而在陳化奶酪中產(chǎn)生。簡(jiǎn)言之，假設(shè)由于在擠奶前ITS清除不完全使得堿式硝酸鉍進(jìn)于奶流。然后按照方程式I，該堿式硝酸鉍與硫化氫反應(yīng)產(chǎn)生鉍III硫化物4BiN03 (OH)2BiO (OH)+H2S^Bi2S3 (不溶，黑色)(方程式 I)產(chǎn)物鉍 III 硫化物(或只是硫化鉍)是相對(duì)不溶的黑色的鹽。除了具有特別的元素目標(biāo)鉍之外，假設(shè)在奶酪基質(zhì)中存在的條件或化學(xué)環(huán)境下，Bi2S3分子將形成在文獻(xiàn)中稱為納米棒或納米晶須的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。見W. Zhang等(2001)Sol.State Comm. 119 :143-146 和 B. Zhang 等(2006) J. Phys. Chem. 110 :8978_8985。這些含鉍的納米棒將由此構(gòu)成光學(xué)衍射顆粒，其能賦予見于黑斑缺陷中的灰至黑的色調(diào)。隨之，努力集中于證實(shí)1)在黑斑缺陷中鉍元素的存在；和2)證實(shí)在黑斑缺陷中鉍III硫化物納米棒結(jié)構(gòu)的物理存在。證實(shí)在黑斑中鉍的存在，使用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICPMS)研究。用AOAC國(guó)際(分析共同體協(xié)會(huì)，Association of Analytical Communities)方法 993. 14。第一步努力為對(duì)多個(gè)黑斑篩選可促成BSD的幾種元素的存在。初始實(shí)驗(yàn)集中于牛奶和奶酪處理/運(yùn)輸設(shè)備發(fā)現(xiàn)的典型的金屬鹽/氧化物，和其他存在于食物級(jí)加工中的殘留金屬衍生物。
作為對(duì)照的測(cè)量，進(jìn)行奶酪成分分析。具體的，分別用法定分析方法，AOAC第17版(版權(quán)2000, ISBN :0935584-67-6)的方法 2001. 14、935. 42 和 926. 08 測(cè)量蛋白、灰分，和水分。根據(jù)法定分析方法，AOAC第17版描述的方法測(cè)量脂肪。進(jìn)行透射電子顯微鏡(TEM)研究如下加入約100 U I雙蒸餾水至樣品中，并用玻棒將混合物粉碎至成懸浮液。將懸浮樣品約5 Ul的等分部分沉積于涂有聚乙烯醇-甲醛縮醛的300目銅TEM網(wǎng)格(Ted Pella, Inc.，Redding, CA)。用小塊濾紙將過量的樣品吸去，并在室溫下將剩余樣品干燥至網(wǎng)格表面。在一些情況下，將NANO-W-商標(biāo)的TEM陰性著色劑(Nanoprobes, Incorporated, Yaphank, NY)應(yīng)用于干燥樣品上以增強(qiáng)對(duì)比度和可見度。用Philips CM 120電子顯微鏡觀察樣本,并用MegaView 3數(shù)碼攝影機(jī)(來(lái)自SIS, Ringoes,NJ)收集圖像。用已知長(zhǎng)度的參比樣品校準(zhǔn)的SIS-商標(biāo)的分析軟件(Ring0es，NJ)進(jìn)行測(cè)量。ICPMS結(jié)果證明元素鉻、銅、鐵、鎳和鉍存在于BSD區(qū)域中。盡管發(fā)現(xiàn)元素鉻、銅、鐵和鎳的增量增加，在BSD區(qū)域的鉍濃度通常為在非BSD區(qū)域分析的相同奶酪的三階次大。這些結(jié)果說(shuō)明鉍是以參加色素生成反應(yīng)的足夠數(shù)量存在的唯一元素。奶酪樣品的BSD區(qū)域的幾百個(gè)TEM圖像獲得了單一、一致的結(jié)論。以上引用的文獻(xiàn)報(bào)道的那些中典型的納米棒獨(dú)特地存在于BSD奶酪區(qū)域。這樣的圖像的一個(gè)實(shí)例呈現(xiàn)于圖2。圖2顯示的納米棒結(jié)構(gòu)太小而不易用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)。圖2顯示的納米棒直徑范圍為約69nm-約130nm。該納米棒對(duì)TEM可能的破壞情況非常穩(wěn)定。這些棒看來(lái)具有輕微斑駁的表面，并且它們呈現(xiàn)沿該納米棒長(zhǎng)度延伸的特征線。見圖3，其為單個(gè)納米棒的增加放大倍數(shù)的視圖。這樣的結(jié)構(gòu)的存在與在奶酪基質(zhì)中的條件下形成的硫化鉍納米棒的存在一致。為證實(shí)堿式硝酸鉍作為反應(yīng)物形成鉍Ill硫化物納米棒的反應(yīng)性，進(jìn)行其他分析以察看BSD是否能在實(shí)驗(yàn)室中有目的性地再現(xiàn)。簡(jiǎn)言之，用已知量的ITS成分制備奶酪，并且經(jīng)受由成熟奶酪產(chǎn)生的真實(shí)的揮發(fā)性物，或直接暴露于假設(shè)的堿式硝酸鉍共反應(yīng)劑-硫化氫氣體。在兩種情形中，反應(yīng)總是相同的當(dāng)含有堿式硝酸鉍或完整的ITS制劑的奶酪樣品暴露于真實(shí)的奶酪揮發(fā)物或“化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)”級(jí)H2S氣體時(shí)，每個(gè)都形成相同的黑色著色，伴隨納米棒結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)，進(jìn)一步證實(shí)堿式硝酸鉍是BSD的原因。結(jié)果顯示于圖4。當(dāng)這樣暴露時(shí)無(wú)其他ITS成分形成黑斑。此外，當(dāng)接觸真實(shí)奶酪揮發(fā)物或硫化氫氣體時(shí),敏感位點(diǎn)形成相同的黑色著色，因此證實(shí)硫化氫氣體是可疑的共反應(yīng)劑。從奶酪制備和陳化或熟化觀點(diǎn)上，認(rèn)為以消除硫化氫氣體的產(chǎn)生為目標(biāo)作為控制BSD的手段是不合理的。硫化氫是一種高度氣味活性的化合物，是針對(duì)含硫氨基酸(比如半胱氨酸)的微生物、酶和輔因子活動(dòng)的產(chǎn)物。見Arfi等(2002)Appl. Microbiol.Biotechnol. 58 :503_510。大量研究支持硫化氫是典型的陳化車達(dá)奶酪香味的必需的和/或重要的成分的主張。見Burbank和Qian(2005) J. Chrom. 1066 :149_157。即使設(shè)計(jì)方案以消除硫化氫的產(chǎn)生(通過阻斷許多復(fù)雜的代謝途徑)，生成的最終產(chǎn)品有香味特征不被奶酪定級(jí)者和消費(fèi)者接受的風(fēng)險(xiǎn)。
實(shí)施例僅為了提供本文公開和要求保護(hù)的發(fā)明的更完整的描述而包括以下實(shí)施例。實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例I :配制用氧化鋅和氧化鈦的組合作為金屬鹽的試驗(yàn)ITS。除了它不含有任何鉍或含鉍的鹽，該試驗(yàn)ITS與“ORBESEAL”商標(biāo)的制劑相同。該試驗(yàn)ITS包含氧化鋅、二氧化鈦、礦物油(30-40% )和硬脂酸鋁。為制備一批ITS，將液體石蠟(例如礦物油)供給到適當(dāng)?shù)难b有攪拌器的容器中。加入硬脂酸鋁，攪拌混合物并加熱至約160°C直到均勻(約兩個(gè)小時(shí))。然后在攪拌下將無(wú)毒的不含有鉍的鹽分次加入到混合物中，直到已加入需要的金屬鹽的量。隨后攪拌混合物直到均勻。然后將產(chǎn)品轉(zhuǎn)移至常規(guī)注射器管中用于乳頭內(nèi)給藥。實(shí)驗(yàn)例2:該實(shí)施例的目的是與“ORBESEAL”商標(biāo)的產(chǎn)品相比，比較不包括堿式硝酸鉍的ITS在非泌乳奶牛的乳頭中的保留。該研究在Wisconsin 的 Arlington 的 Wisconsin-Madison 大學(xué)(UW)的 Blaine 牛奶場(chǎng)進(jìn)行。在干奶日編入十六(16)頭奶牛(11 = 64個(gè)乳頭)。所有編入的奶牛要求具有四個(gè)功能區(qū)域并且沒有乳腺炎的可見跡象。所有奶牛是干奶的，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)UW乳畜群方案接受乳房?jī)?nèi)抗生素不泌乳奶牛治療(dry cow therapy,DCT)。記錄每頭奶牛的產(chǎn)次和產(chǎn)奶量(在干奶期)。在入編初期，對(duì)乳頭的形狀、長(zhǎng)度、直徑和乳頭末端過度角化的程度評(píng)分。在每頭奶牛中，分配兩個(gè)乳頭接受“ORBESEAL”-商標(biāo)的ITS，并分配兩個(gè)乳頭接受試驗(yàn)ITS。設(shè)計(jì)給藥方案，確保在乳頭位置中每種產(chǎn)品均勻地給予，每種產(chǎn)品給予每一位置(右后方、右前方、左后方、左前方)的各八個(gè)乳頭。給予前和后稱量封閉劑管以測(cè)定凈給藥體積。在接受DCT和內(nèi)部乳頭封閉劑前，用單一 70%異丙醇醇擦拭物清潔乳頭末端，并用部分插入技術(shù)減少引入乳頭皮膚病原體的可能性。在給予內(nèi)部封閉劑后，將乳頭用外部乳頭消毒劑浸潰。在第1、2、3、4、5、6、7、14、28、42天時(shí)和在產(chǎn)犢時(shí)檢查乳頭，以檢測(cè)發(fā)紅、腫脹和/或封閉劑的滲漏。在第14、28、42天和在產(chǎn)犢時(shí)，通過人工剝離將封閉劑從每頭奶牛的一個(gè)乳頭(每個(gè)除去日對(duì)每一封閉劑為八個(gè)乳頭)中除去。伴隨初乳收集該除去的封閉劑，置于帶刻度的50ml塑料管形瓶中。離心該管形瓶(3000rpm x 5-7分鐘)，沖洗上清液，稱重回收的封閉劑。比較每個(gè)時(shí)期試驗(yàn)ITS治療乳頭和“ORBESEAL”商標(biāo)的ITS治療乳頭回收的封閉劑的量。然后用相同方法在產(chǎn)犢后第一天收集樣品。在所有采樣時(shí)期，在除去封閉劑后，用外部乳頭消毒劑浸潰乳頭。在產(chǎn)犢后，從所有區(qū)域里無(wú)菌收集四等份奶樣品并培養(yǎng)，以鑒定乳房?jī)?nèi)的感染情況。群組特征-乳頭長(zhǎng)度和體積總共16頭奶牛編入該研究，總數(shù)為64只乳頭；32只乳頭接受試驗(yàn)ITS和32只乳頭接受“ORBESEAL”商標(biāo)ITS。受試群體的乳頭長(zhǎng)度和體積列于表I :表I.通過復(fù)合的乳頭的長(zhǎng)度和體積的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.)和標(biāo)準(zhǔn)誤差(S. E.)
權(quán)利要求
1.一種在非人類動(dòng)物的乳頭管內(nèi)形成物理屏障的方法，其用于在動(dòng)物的干奶期間預(yù)防性治療乳房疾病并同時(shí)防止用該動(dòng)物的奶制成的乳制品中的黑斑缺陷，所述方法包含 將一定量的乳頭封閉制劑注入動(dòng)物的乳頭管中，其中所述乳頭封閉制劑中包含無(wú)毒的金屬鹽，該鹽分散于包含甘油酯的凝膠相中， 其中所注入的乳頭封閉制劑的量足以形成阻止微生物進(jìn)入乳頭管的物理屏障，并且其中所述乳頭封閉制劑不會(huì)引起用該動(dòng)物的奶制成的乳制品中的黑斑缺陷。
2.權(quán)利要求I的方法，其包含注入不含抗感染劑的乳頭封閉制劑。
3.權(quán)利要求I的方法，其包含注入不含鉍的乳頭封閉制劑。
4.權(quán)利要求I的方法，其包含注入不含抗感染劑且不含鉍的乳頭封閉制劑。
5.權(quán)利要求I的方法，其包含注入在包含甘油三酯的基質(zhì)中含有無(wú)鉍、無(wú)毒金屬鹽的乳頭封閉制劑。
6.權(quán)利要求I的方法，其包含注入包含至少約30%重量的無(wú)毒金屬鹽的乳頭封閉制劑。
7.權(quán)利要求I的方法，其包含注入包含約50%至約75%重量的無(wú)毒金屬鹽的乳頭封閉制劑。
8.權(quán)利要求I的方法，其包含注入包含約65%重量的無(wú)毒金屬鹽的乳頭封閉制劑。
9.權(quán)利要求I的方法，其中所述無(wú)毒金屬鹽選自鈦鹽、鋅鹽、鋇鹽和它們的組合。
10.權(quán)利要求I的方法，其中所述無(wú)毒金屬鹽選自二氧化鈦、氧化鋅、硫酸鋇和它們的組合。
11.權(quán)利要求I的方法，其中所述凝膠基質(zhì)包含選自以下的油動(dòng)物性脂肪、低芥酸菜籽油、椰子油、玉米油、棉籽油、亞麻籽油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、豆油、向日葵油、魚油、藻油和它們的組合。
12.—種乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑,其以組合方式包含 包含甘油酯的凝膠基質(zhì)；和 分散于所述凝膠基質(zhì)中的無(wú)毒金屬鹽。
13.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述凝膠基質(zhì)包含甘油三酯。
14.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述凝膠基質(zhì)包含選自以下的油動(dòng)物性脂肪、低芥酸菜籽油、椰子油、玉米油、棉籽油、亞麻籽油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、豆油、向日葵油、魚油、藻油和它們的組合。
15.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述乳頭封閉劑不含抗感染劑。
16.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述乳頭封閉劑不含鉍。
17.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述乳頭封閉劑不含抗感染劑且不含鉍。
18.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其包含至少約30%重量的無(wú)毒金屬鹽。
19.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其包含約50%至約75%重量的無(wú)毒金屬鹽。
20.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其包含約65%重量的無(wú)毒金屬鹽。
21.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述無(wú)毒金屬鹽選自鈦鹽、鋅鹽、鋇鹽和它們的組合。
22.權(quán)利要求12的乳頭封閉劑，其中所述無(wú)毒金屬鹽選自二氧化鈦、氧化鋅、硫酸鋇和它們的組合。
23.在非人類動(dòng)物的乳頭管內(nèi)形成物理屏障、用于在動(dòng)物的干奶期間預(yù)防性治療乳房疾病的方法中的改進(jìn)，所述方法包含注入封閉制劑至動(dòng)物的乳頭管中的步驟，所述改進(jìn)包含 注入如權(quán)利要求12所述的乳頭封閉制劑。
全文摘要
本發(fā)明描述的是乳房?jī)?nèi)乳頭封閉劑和在非人類動(dòng)物的乳頭管內(nèi)形成物理屏障，用于在動(dòng)物的干奶期間預(yù)防性治療乳房疾病的相應(yīng)方法。所述方法包括將乳頭封閉制劑注入到動(dòng)物的乳頭管中的步驟，所述乳頭封閉制劑包括在含有甘油酯的凝膠基質(zhì)中的金屬鹽。所述方法還防止在由這樣受治療的動(dòng)物的奶制成的乳制品，尤其是車達(dá)奶酪中黑斑缺陷的形成。
文檔編號(hào)A61K47/06GK102802642SQ201080026136
公開日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2010年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月8日
發(fā)明者S·A·蘭金 申請(qǐng)人:威斯康星舊生研究基金會(huì)