專利名稱：用于預防或治療過敏性疾病的包含含氘的水的組合物及其制備方法
用于預防或治療過敏性疾病的包含含氘的水的組合物及其制備方法本發(fā)明的目的涉及用于預防或治療過敏性疾病的藥物組合物和食品工業(yè)組合物及其制備方法。
背景技術：
近些年，許多科學出版物(FEBSLett. 317 1-4,1993 ；Termeszetgyogydszat10 :29-32,1996 ；Kisallatorvoslas 3 :114-5,1996 ；Erfahrungsheilkunde 7 :381-88,1997 J.R. Heys和D.G. Melillo (編輯)同位素標記化合物的合成與應用(Synthesisand Applications of Isotopically Labelled Compounds). John Wiley 和 Sons Ltd.pp. 137-141,1997)以及匈牙利專利(登記號208084, 209787，214593，214824)均是基于天然存在的氘在調控細胞分化中起著重要作用的認識。除了所提及專利中描述的動物實驗夕卜，在人測試實驗中也證實了低氣水(deuterium-depleted water)(簡稱為“Dd水”且氣在下文簡稱為D)的抗癌效應。在歷時兩年的人II期雙盲臨床研究中(其中無論主治醫(yī)生還是受試者都不知道哪些患者接受了活性劑和哪些接受了安慰劑)，在前列腺癌患者的治療組和對照組間觀察到顯著性差異。所述研究明確證實了我們早期的動物和人的研究的結果。不依賴于臨床試驗，在過去的15年里總共1290個患者消耗了 400噸Dd水。這些病例突顯癌細胞對氣貧化反應靈敏，且在絕大多數病例中(70-80% ),不能適應降低的氣濃度，導致癌組織部分或完全消退。在歷時15年多的患者隨訪期間進行了一些有趣的觀察。關于過敏的患者的觀察產生了出乎預料的結果Dd水降低或消除了通常對過敏性疾病的主訴(詳述見下文)。本發(fā)明是基于消耗作為飲用水的Dd水預防、降低或消除過敏性疾病的癥狀的觀察，因此本發(fā)明適用于預防或治療所述疾病。發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明涉及包含具有0. 01-135ppm氘含量的水的藥物組合物和食品組合物的制備方法，其適用于預防或治療過敏性疾病。所應用的具有0. 01-135ppm氘含量的Dd水優(yōu)選通過已知的電解和/或地蒸懼制備或通過其它方法制備[Howard K. Rae (編輯)氫同位素的分離(Separation of Hydrogen Isotopes) ,American Chemical SocietySymposium Series 68,華盛頓.1978 ;Stelio Villani(編輯)同位素分離(IsotopeSeparation). American Nuclear Society 1983]并通過加入常用的添加劑(例如矯味齊U、香料等)和通過應用本領域常用的方法，尤其是被應用于制備藥物、非酒精飲料或啤酒的方法，將所獲得的水配制成藥物組合物或食品組合物。另一方面，本發(fā)明涉及a)用于預防或治療過敏性疾病的藥物組合物，其包含具有0. 01至135ppm氘含量的水及在制藥工業(yè)所應用的常用添加劑；和b)用于預防或治療過敏性疾病的食品組合物，其包含具有0. 01至135ppm氘含量的水及在食品工業(yè)所應用的常用添加劑。
在上述的兩種組合物中，具有0. 01至135ppm氘含量的水是通過已知的電解和/或蒸餾或任何其它已知的產生Dd水的方法而制備。在優(yōu)選的實施方案中所應用的Dd水的氘濃度為5至125ppm、更優(yōu)選50至110、并且還更優(yōu)選75至90ppm。然而，對于人消耗而言，尤其在治療最初的2-3個月，優(yōu)選的Dd含量是105至130ppm且在治療的下一個2-3個月，優(yōu)選的Dd含量是80_105ppm。應指出的是如果所施用的Dd水未成功預防，那么可在治療階段應用具有更低D-濃度的Dd水。此外,在用Dd水成功治療后，具有相同或不同D-濃度的Dd水可被用作應對將來過敏性發(fā)作的預防劑。因此，就Dd水而言，可被應用于預防和治療，彼此互補。發(fā)明詳沭基于O-D鍵在4 iim波長的最大吸收，通過紅外光譜測定水的氘濃度。將水樣裝入比色皿中，經過水的紅外光會依據氘含量的成比例地被吸收，其為儀器所檢測到。用已知D含量的水校正儀器后，可測定測試樣品中D的量(Analytical Biochemistry 98:208-213,1979)。以下描述生產Dd水的兩個優(yōu)選的方法，即電解和蒸餾，其適用于以相對低的成本大量制備Dd-水。a)通過彼此分開的陰極和陽極在直流電2-5伏的電壓下將15-20%的KOH水溶液電解。在陰極釋放的且含有降低濃度的氘的氫被燃燒，并使正在形成的水蒸氣凝結且單獨收集。所獲得的水具有30-40ppm的氣含量(氫同位素的分離(Separation of HydrogenIsotopes)編輯Howard K. Rae, American Chemical Society Symposium Series 68,華盛頓.1978 ;同位素的分離(Isotope Separation)編輯Stelio Villani,American NuclearSocietyl983)。所獲得的水的氣含量通過進一步電解可被進一步降低6至20ppm。b)在50至150塔板數的分餾柱上，在50至60mbar的壓力且在45至50°C的溫度下將水蒸餾。在蒸餾過程中的逆流值是12至13，且在蒸餾期間應用的是底部十倍稀釋。應用這些參數，初產品的氣濃度是在0. I至30ppm之間(氫同位素的分離(Separation ofHydrogen Isotopes)編輯Howard K. Rae, American Chemical Society Symposium Series68,華盛頓 1978 ;同位素的分離(Isotope Separation)編輯Stelio Villani, AmericanNuclear Society 1983)。通過改變操作柱過程中的參數，例如通過顯著提高柱的負載量，可大量生產高于30ppm的D濃度的Dd-水。還可以使Dd-水在相似的、連接的柱經過進一步的分餾蒸餾處理來進一步降低水的D-濃度。通過上述的(或通過任何其它)方法產生的Dd水被用作起始的原料。在本說明書中所應用的術語“藥物組合物”也包括獸醫(yī)學組合物。對于術語“過敏性疾病”我們可給出以下的解釋當免疫系統對環(huán)境中的無害物起反應時，過敏反應發(fā)生。免疫系統是極其復雜的，因此有很多可能讓其產生故障。當免疫系統開始對環(huán)境中的無害物起反應時，這可導致過敏反應，其是對通常無害物質的擴大的、有損害性的免疫應答。當患過敏疾病的人暴露于通常的環(huán)境物質，諸如房塵滿或草花粉，一種類型的白細胞(B淋巴細胞)對所述物質產生被稱作IgE的特定抗體。然后所述的IgE將自身附于另一類型的白細胞(肥大細胞)上，且當肥大細胞再次與這物質接觸時，它們激發(fā)導致過敏反應復雜的免疫應答。
具有過敏反應的不同的人對不同物質過敏。人們通常過敏的一些物質包括房塵螨、來自草和樹的花粉、包括貓、狗、馬的動物皮屑、霉菌、包括木本堅果、花生、貝殼類動物、魚、奶、雞蛋、小麥等的食品。具有過敏反應的不同的人當他們暴露于他們過敏的物質時的反應也是不同的。一些通常的反應包括過敏性濕疹或蕁麻疹、過敏性鼻炎(花粉熱)、過敏性哮喘、過敏癥、打噴嚏、鼻充血和眼刺激。相似的癥狀也可發(fā)生在某些動物上。在依據本發(fā)明配制藥物組合物或食品組合物的過程中，可應用任何常用的添加劑[例如甜味劑、著色劑、增稠劑、矯味劑(香料)、PH-調節(jié)劑、表面活性劑、香料、果汁濃縮齊U、穩(wěn)定劑等]，這些添加劑為制藥工業(yè)(包括生產獸醫(yī)學組合物的工業(yè))和食品工業(yè)所熟知，在食品工業(yè)中尤其是應用在制備啤酒和非酒精飲料的那些添加劑。在此，要強調的是添加劑可以是具有正常(天然)氘含量的水。
在依據本發(fā)明制備組合物的過程中，可應用制藥和食品工業(yè)(也包括生產獸醫(yī)學組合物的工業(yè))任何標準的(已知的)配制方法。由于Dd水在所發(fā)明的組合物的制備方法中的應用，液體形式是有利的制品類型。然而，尤其在食品工業(yè)化應用中，所制備的組合物可以是固體(或半固體、凝膠、膠體混合物等)形式。在這種情況下所述的制品僅包含Dd水，即通過消耗該制品，所治療的個體的平均氘含量沒有增加，即這些制品可以補充由液態(tài)形式組合物構成的基本治療。本發(fā)明方法的主要優(yōu)勢如下a)它可以在不存在合成的“藥物”時干擾過敏過程且可有益地影響病程，b/本方法中所應用的Dd水沒有毒副作用。c/生產過程沒有產生有害廢物。d/所述組合物易于被制備。如上所述，在我們的實驗中發(fā)現了 Dd水在治療過敏性疾病中的一些重要的正面作用。最有價值的結果歸納如下—組過敏反應患者(10個患者)每年主要在春季遭受花粉熱。他們向我們工作組報告在消耗具有105或125ppm的D-含量的Dd水后，癥狀完全消失或顯著減弱。另一個患者每年遭受打噴嚏、鼻充血和眼刺激的較強癥狀，但是在通常出現所述癥狀前3-4星期開始消耗Dd水(85ppm)后,它們均可被預防。一個具有嚴重過敏反應的患者服藥很長時間來緩解癥狀。在她已經開始消耗Dd水(85ppm)后,她可以停止服用藥物?？紤]到Dd水在獸醫(yī)學應用的可能性，我們可報告Dd水對遭受非常嚴重的鼻充血的馬的正面作用。在馬飲用了約150-200升具有85ppm D-含量的Dd水后，就變得沒有癥狀了。最令人吃驚的結果是在此之后，僅用Dd水治療，在后來的幾年所述的癥狀沒有出現。正如來自于上述的實踐經驗，通過本發(fā)明的方法所獲得組合物適用于預防或治療過敏性疾病。正在研究的是在所述作用中可能起至關重要的分子機制。初步結果表明在有機體中由Dd水所誘導的D水平的降低可能影響某些基因的表達。對于改善或消除癥狀的解釋可能是由Dd水所誘導的基因表達的改變對觸發(fā)過敏癥狀的病因適當地反應。Dd水在人類中所獲得的結果證實本發(fā)明所述方法在治療過敏性疾病中的適用性。下面的考察可用以揭示所發(fā)現的藥物作用的理論背景，雖然還沒有開展詳細的統計學上支持的藥理學研究。然而，就過敏反應復雜的且大部分未被發(fā)現的理論背景而言，我們未將自己束縛于以下所討論的理論。藥理學研究和實齡過敏反應是對通常無害的或不能在所有人產生免疫應答物質的超敏免疫反應。淋巴細胞是在免疫和過敏反應中都起著關鍵作用的白細胞。它們被分為兩種類型，T和B淋巴細胞。每種類型負責免疫系統特定的分支。T-淋巴細胞的的職責是準備直接實行攻擊外源性物質(細胞-介導的免疫)。某些T-淋巴細胞是“殺傷”專家(細胞毒性或殺傷T細胞)，而其它則輔助免疫應答并被命名為“輔助”細胞(TH細胞)。TH細胞根據它們釋放的蛋白質進一步被劃分成THl (感染斗士)和TH2(過敏反應促進者)。T-淋巴細胞的伴侶是B-淋巴細胞。B-淋巴細胞是生產幫助破壞外源性物質的抗體的小抗體工廠，
該行為由TH細胞激發(fā)。嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細胞是在過敏反應中起著重要作用的其它白細胞。在過敏條件下T細胞經常調用這些細胞產生作用。嗜酸性粒細胞的血濃度在有哮喘和其它過敏性疾病的人群中通常是升高的。細胞因子是由淋巴細胞釋放的小蛋白質，其能增強或降低免疫應答。一種細胞因子，白介素4(IL4)是產生IgE所必需的。白介素5(IL5)和其它的細胞因子在吸引其它細胞中是很重要的，所述其它細胞特別是嗜酸性粒細胞，該細胞隨后可促進炎癥。TH2淋巴細胞也可釋放這一系列的細胞因子，因此進一步促進過敏性炎癥。對于治療過敏性疾病提出了治療性介入的三個要點。A)第一個可能性是阻斷免疫應答的引發(fā)且從而防止疾病的發(fā)展-促進T輔助2(TH2)對過敏原的應答例如，通過在生命早期介入。B)第二個可能性是直接地或間接地通過作用于存在抗原的細胞，阻斷過敏原-特異性的TH2細胞的活化例如，通過用抗炎癥藥物治療，諸如糖皮質激素，或通過過敏原免疫治療。C)第三個可能性是阻斷產生過敏性疾病臨床癥狀的效應分子例如，通過用抗組胺劑、白三烯拮抗藥，TH2細胞因子的特異性的中和抗體或IgE的特異性抗體治療。IL,白細胞介素；TCR, T-細胞受體(Nature Reviews Immunology 5,271-283(2005年4月)在過敏和哮喘中白介素10分泌型調控T細胞的潛在作用(Potentialrole of interleukin-lO-secreting regulatory T cells in allergy and asthma)C. M. Hawrylowicz & A. 0' Garra)。其它結果顯示酪氨酸磷酸化在IL-2-介導的信號轉導中是很關鍵的且MAP激酶是在該通路中涉及的一個細胞中介物。(通過重組白細胞介素-2活化胚細胞植物凝集素中的絲裂原激活的蛋白激酶/ERK-2 與⑶3活化的特征比較(Activationof mitogen-activated protein kinase/ERK-2 in phytohaemagglutin in blastsby recombinant interleukin-2 contrasting features with CD3 activation).R M Fairhurst, M Daeipour, M C Amaral, and 和 A E NeI, Immunology. 1993 May ；79(1) :112-118. ))0另一篇論文也證實在IL-誘導的趨化因子釋放中涉及MAP激酶(在人的氣道平滑肌細胞中IL-I ￠-誘導的趨化因子釋放中涉及p38 MAPK, JNK, p42/p44 ERK 和 NF-Kb (Involvement of p38 MAPK，JNK，p42/p44 ERK and NF-k B in IL_\旦-induced chemokine release in human airway smooth muscle cells)ffim A. ffuyts,Bart M. Vanaudenaerde, Lieven J.Dupont, Maurits G. Demedts 和 Geert M. Verleden.Respiratory Medicine 2003 年 7 月，97 (7) :811-817)。為了揭示氘貧化應用于減弱或預防過敏反應的特定通路需要進一步的基礎和臨床研究，但是基于已提供的結果，已有Dd水影響在過敏反應中起關鍵作用分子機制的明確證據。如上所述直接地或間接地通過作用于存在抗原的細胞，阻斷過敏原特異性的TH2細胞的活化(例如，通過用抗炎癥藥物治療)是治療過敏性疾病的一種可能性。公知非甾體抗炎藥的主要靶標是負責前列腺素合成的C0X-2基因。用來源于人結腸的腫瘤細胞系(腺癌)開展實驗。所述細胞在二氧化碳恒 溫箱(5% CO2 :95%空氣)中含有10%胎牛血清(FCS)的RPMI基質中培養(yǎng)。當細胞幾乎充滿培養(yǎng)皿(70%融合值)的空間時，抽取血清24小時。在去除了血清后，下一步將細胞培養(yǎng)在低氘水制備的RPMI基質中，在24小時后,進行MTT (microculture tetrazolinum)分析以測定細胞增殖。我們用蛋白印跡分析測定上文所詳述處理的細胞的C0X-2含量。分析已顯示Dd-水(20-60ppm)強烈地抑制HT-29人結腸癌細胞系的C0X-2基因表達。與細胞增殖實驗的結果相似，這也證實作用呈濃度依賴性。圖I.顯示D2O濃度對C0X-2基因表達的影響。圖2.顯示D-濃度和細胞內前列腺素的量之間的相關性證實Dd水對C0X-2基因表達的抑制作用導致細胞中前列腺素的濃度較低(Gabor Somlyai :讓我們戰(zhàn)勝癌癥(Let, s defeat cancer). AkademiaiKiado 出版，郵政信箱 245. H-1519 布達佩斯，www. akkrt. hu, ISBN 963 05 78076)。這些結果可表明Dd水對過敏性患者的一種作用模式可以是C0X-2基因的抑制作用。然而，應該明白的是C0X-2基因抑制作用不產生抗過敏效應。該現象揭示可以在治療過敏反應中起作用的一種作用。上面也提到MAP激酶(ERK)磷酸化在IL_2_介導的信號轉導中很關鍵。圖3.顯示(未發(fā)表的結果)在正常水(150ppm)中磷酸化鍵出現在誘導后的2分鐘，但是在Dd水(20ppm)中磷酸化鍵沒有出現。這明確地表明Dd水的應用介入信號轉導通路且可抑制IL-介導的信號轉導。然而，應該明白的是磷酸化的抑制作用不產生抗過敏效應。該現象揭示可以在治療過敏反應中起作用的一種作用。如上面所討論的，該信號轉導系統對過敏反應起作用，但是作用方式是非常復雜的且大部分未被發(fā)現。正如在研究D-濃度改變不同IL的水平的作用的研究中所獲得的結果(表I :這些實驗在有資格的獨立的實驗室中完成)所知，可以說Dd水對IL水平具有復雜的作用。然而，基于所獲得的實驗結果(對于不同的IL，發(fā)現主要是降低但是有時水平提高)不能預測所發(fā)現的對治療過敏性疾病的正面作用。從所述的結果中僅能得出一個事實Dd水對在過敏反應中起著重要作用IL水平具有影響。下表I至3概述了 Dd水對細胞因子濃度(水平)的作用。顯著高于滅菌水對照值(P < 0. 05)以加粗顯示。顯著低于滅菌水對照值(p ( 0. 05)以加粗和斜體顯示。應指出的是在本稀釋設計中IL-8、IL-6、單核細胞趨化蛋白-I(MCP-I)和粒細胞集落刺激因子(G-CSF)的水平在所有組中均太高以至于無法定量。表I (DDW: Dd 水)
權利要求
1.用于制備預防或治療過敏性疾病的藥物組合物的方法，其包括將具有0.01至135ppm氘含量的水與應用于制藥工業(yè)的常用添加劑混合，并將所獲得的混合物配制成藥物組合物。
2.用于制備預防或治療過敏性疾病的食品組合物的方法，其包括將具有0.01至135ppm氘含量的水與應用于食品工業(yè)的常用添加劑混合，并將所獲得的混合物配制成食品組合物。
3.依據權利要求I或2的方法，其中具有0.01至135ppm氘含量的水是通過電解或蒸餾制備的。
4.依據權利要求I至3中任意一項的方法,其中優(yōu)選的氣含量是105至130ppm或80至 105ppmo
5.用于預防或治療過敏性疾病的藥物組合物，其包含具有0.01至135ppm氘含量的水及應用于制藥工業(yè)的常用添加劑。
6.用于預防或治療過敏性疾病的食品組合物，其包含具有0.01至135ppm氘含量的水及應用于食品工業(yè)的常用添加劑。
7.依據權利要求5或6的組合物，其中具有0.01至135ppm氘含量的水是通過電解或蒸餾制備的。
8.依據權利要求5至7中任意一項的組合物,其中氣含量是105至130ppm或80至·105ppmo
全文摘要
本發(fā)明涉及用于預防或處理過敏性疾病的藥物組合物和食品組合物及其制備方法。本發(fā)明所述的方法包括將具有0.01-135ppm氘含量的水(優(yōu)選通過已知的電解或蒸餾制備)與常用的添加劑混合，并通過制藥或食品工業(yè)常用的方法將該混合物配制成藥品或食品，優(yōu)選通過應用在制備藥物、非酒精飲料或啤酒中所應用的標準的矯味劑、香料和其它添加劑。
文檔編號A61K33/00GK102802641SQ201080026592
公開日2012年11月28日 申請日期2010年4月16日 優(yōu)先權日2009年4月16日
發(fā)明者G·紹姆堯伊 申請人:Hyd癌癥研究和藥物開發(fā)有限責任公司