專利名稱：通過(guò)神經(jīng)元煙堿受體配體逆轉(zhuǎn)左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙的制作方法
通過(guò)神經(jīng)元煙堿受體配體逆轉(zhuǎn)左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙
背景技術(shù)：
運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)(AMs)會(huì)在長(zhǎng)期使用左旋多巴的大多數(shù)帕金森病(PD)患者中發(fā)展，并可能像帕金森病本身一樣造成身體虛弱。Qiiik及其同事最近證實(shí)煙堿會(huì)使患帕金森非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物類和嚙齒動(dòng)物的左旋多巴誘導(dǎo)的似運(yùn)動(dòng)障礙性運(yùn)動(dòng)減少 50%。目前對(duì)左旋多巴誘導(dǎo)的AM的可用治療方法非常有限。因此，特別是由于煙堿不會(huì)中和左旋多巴的抗帕金森作用，關(guān)于煙堿治療會(huì)減少這些運(yùn)動(dòng)的觀察可能會(huì)提供一種新的治療選擇。煙堿通常通過(guò)剌激神經(jīng)元煙堿受體(NNRs)來(lái)發(fā)揮其作用。然而，煙堿以中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼肌中的多重NNRs作為靶點(diǎn)。除了任何需要的反應(yīng)外，這還會(huì)導(dǎo)致副作用。因此，鑒別可減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙的NNR亞型選擇性(subtype-selective)
藥物是有益的。參考文獻(xiàn)Carta，M.，Carlsson,T.，Munoz, A.，Kirik, D. &Bjorklund,A.，‘‘Serotonin-Dopamine Interaction In The Induction And Maintenance OfL-Dopa-Induced Dyskinesias”，Prog Brain Res，172 :465-78 (2008) ;Cenci，M.A.&Lundblad， M. ，“Ratings Of L-Dopa-Induced Dyskinesia In The Unilateral 6-OHDALesion Model Of Parkinson' s Disease In Rats And Mice，，，Curr Protoc Neurosci,Chapter 9， Unit 9:25(2007) ;Cox， H.等，“The Selective Kappa-Opioid ReceptorAgonist U50，488 Reduces L-Dopa-Induced Dyskinesias But Worsens Parkinsonism InMPTP-Treated Primates”，Exp Neurol, (2007) ；. Dani, J. A. & Bertrand, D.，“NicotinicAcetylcholine Receptors And Nicotinic Cholinergic Mechanisms Of The CentralNervous System”，Annu Rev Pharmacol Toxicol, 47 :699-729 (2007) ;Dekundy，A.，Lundblad，M.，Danysz, W.&Cenci，M. A，“Modulation Of L-Dopa-Induced AbnormalInvoluntary Movements By Clinically Tested Compounds Further Validation Of TheRat Dyskinesia Model ”，Behav Brain Res，179 :76-89 (2007) ;Exley，R. &Cragg，S. J.，“ADynamic And Diverse Cholinergic Filter Of Striatal Dopamine Neurotransmission，，，Br J Pharmacol, 153Suppl I :S283_97 (2008) ;Fox，S. H.，Lang, A. E. & Brotchie, J. M.，“Translation Of Nondopaminergic Treatments For Levodopa-Induced Dyskinesia FromMPTP-Lesioned Nonhuman Primates To Phase IIA Clinical Studies Keys To SuccessAnd Roads To Failure) ”，Mov Disord，21，1578-94 (2006) ;Gotti，C.等，“HeterogeneityAnd Complexity Of Native Brain Nicotinic Receptors，，，Biochem Pharmacol，，，74 :1102-11 (2007) ；Grady, S. R.等，“The Subtypes Of Nicotinic AcetylcholineReceptors On Dopaminergic Terminals Of Mouse Striatum”， Biochem Pharmacol，74 :1235-46 (2007) ;Guigoni，C.，等，“Pathogenesis Of Levodopa-Induced Dyskinesia Focus On Dl And D3 Dopamine Receptors，，，Parkinsonism Relat Disord，11 Suppl I S25-9 (2005) ;Guigoni，C.等，“Involvement Of Sensorimotor，Limbic，and AssociativeBasal Ganglia Domains In L~3,4-DihydroxyphenyIalanine-Induced Dyskinesia，，，JNeurosci，25 :2102-7 (2005) ;Hsu，A.等，“Effect Of The D3 Dopamine Receptor PartialAgonist BP-897[N_[4-(4-(2-Methoxyphenyl)PiperazinyI)Butyl]-2-Naphthamide]OnL—3，4-DihydroxyphenyIalanine-Induced Dyskinesias And Parkinsonism InSquirrel Monkeys”，J Pharmacol Exp Ther，311 :770-7(2004) ;Linazasoro，G.，‘‘NewIdeas On The Origin Of L-Dopa-Induced Dyskinesias :Age， Genes And NeuralPlasticity”，Trends Pharmacol Sci，26 :391-7(2005) ；Linazasoro,G. ,Van Blercom，N.，Ugedo，L& Ruiz Ortega，J. A./‘Pharmacological Treatment Of Parkinson' s Disease Life Beyond Dopamine D2/D3 Receptors ”，J Neural Transm，115 :431-41 (2008)；Mercuri,N. B. & Bernardi，G.，“The' Magic' Of L-Dopa Why Is It The Gold StandardParkinson ' s Disease Therapy ，，，Trends Pharmacol Sci，26 :341-4 (2005) ;Quik，M.，Pol ice，S.，He，L.，Di Monte, D. A. & Langston, J. W.，“Expression Of D (3)Receptor Messenger RNA And Binding Sites In Monkey Striatum And SubstantiaNigra After Nigrostriatal Degeneration Effeet Of Levodopa Treatment，，，
Neuroscience,98 :263-73 (2000) ;Quik，M.，Police，S.，Langston，J. W. & Di Monte,D. A.，‘‘Increases In Striatal Preproenkephalin Gene Expression Are AssociatedWith Nigrostriatal Damage But Not L-Dopa-Induced Dyskinesias In The SquirrelMonkey, ” Neuroscience,113 :213-20 (2002) ;Quik，M.，Polonskaya, Y.，Mcintosh，J. M. & Kulak, J. M.，“Differential Nicotinic Receptor Expression In Monkey BasalGanglia Effects Of Nigrostriatal Damage，，，Neuroscience，112 :619-30 (2002) ;Quik，M.等，‘‘L-Dopa Treatment Modulates Nicotinic Receptors In Monkey Striatum，，，Mol Pharmacol，64 :619-28 (2003) ;Quik，M.等，“Chronic Oral Nicotine TreatmentProtects Against Striatal Degeneration In MPTP-Treated Primates”， J Neurochem，98 :1866-75 (2006) ;Quik，M.，0, leary，K. &Tanner，C. M.，“Nicotine and Parkinsonr sDisease !Implications For Therapy”，Mov Disord，23 1641-52(2008), Samadi, P.，Bedard，P.J. &Rouillard，C.，“Opioids And Motor Complications In Parkinson f sDisease”，Trends Pharmacol Sci,27 :512-7 (2006) ;Togasaki，D. M.等，“LevodopaInduces Dyskinesias In Normal Squirrel Monkeys”，Ann Neurol,50 :254-7. (2001)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面包括一種通過(guò)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽給藥治療左旋多巴引起運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的方法。另一方面包括通過(guò)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽給藥減少左旋多巴引起運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)。另一方面包括一種通過(guò)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽給藥而延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作和發(fā)展的方法。另一方面包括一種通過(guò)(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽給藥改善帕金森綜合征的方法。另一方面包括一種用左旋多巴和(R) -5- ((E) -2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病為帕金森氏病。另一方面包括一種通過(guò)給予以a4P2*和a6P2*NNRs為靶點(diǎn)的化合物來(lái)治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)或延緩其發(fā)展的方法。同樣，本發(fā)明一方面包括(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備治療左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的藥物中的用途。另一方面包括(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的藥物中的用途。另一方面包括(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作或發(fā)展的藥物中的用途。另一方面包括(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備改善帕金森綜合征藥物中的用途。另一方面包括左旋多巴和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽各自在制備治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病的藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病是帕金森氏病。另一方面包括以a 40 2*和a 63 2 *NNRs為靶點(diǎn)的化合物在制備治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩其發(fā)展的藥物中的用途。同樣，本發(fā)明一方面包括一種化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其用于治療左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)。另一方面包括一種化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其用于減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)。另一方面包括一種化合物，(R) -5- ((E) -2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其用于延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作或發(fā)展。另一方面包括一種化合物，(R) -5- ((E) -2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其用于改善帕金森綜合征。另一方面包括一種化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其聯(lián)合左旋多巴治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病是帕金森氏病。另一方面包括一種化合物，其以a4P2*和a 6 @ 2 * NNRs為祀點(diǎn),用于治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩其發(fā)展。本發(fā)明另一方面包括一種試劑盒，其包含左旋多巴；(R) -5- ((E) -2-卩比咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，和一個(gè)或多個(gè)關(guān)于治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩其發(fā)作或發(fā)展的治療方法的說(shuō)明書(shū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，這樣的試劑盒還可以包括包裝，如泡罩包裝。選擇性地，這樣的試劑盒可以向個(gè)體提供左旋多巴和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽各自的處方和劑量，但當(dāng)聯(lián)合治療、減少左旋多巴引起運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩其發(fā)作或發(fā)展的治療方法的說(shuō)明書(shū)時(shí)，這也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。另一方面包括一種包含左旋多巴；(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，以及一種或多種藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥物組合物可以為單一劑型(unitary dosage form)。另一方面包括一種包含左旋多巴；和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽的聯(lián)合(combination)。在一個(gè)實(shí)施方案中，該聯(lián)合可以依次地或同時(shí)地以每個(gè)活性成分各自的劑型單獨(dú)或一起給藥的形式出現(xiàn)，和以彼此間隔時(shí)間較短或較長(zhǎng)給藥的形式出現(xiàn)。另一方面包括一種包含治療方案，其包含左旋多巴；和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，其中(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽與左旋多巴同時(shí)給藥。本發(fā)明包括各個(gè)方面和實(shí)施方案以及和本文整個(gè)說(shuō)明書(shū)中所述的優(yōu)選實(shí)施方案的組合。


了根據(jù)本發(fā)明特定的實(shí)施方案和各方面示例得到的結(jié)果，但其不應(yīng)被解釋為對(duì)其作出的限制。 圖I為繪制的用于左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙大鼠研究的治療時(shí)間表。圖I表示了時(shí)間、化合物A(也被稱為激動(dòng)劑#PD1)治療方法、左旋多巴劑量和行為測(cè)試。圖2所示為在若干評(píng)估期內(nèi)在帕金森病大鼠中化合物A的兩個(gè)單獨(dú)劑量(再一次說(shuō)明，其也被稱作roi)減少了左旋多巴誘導(dǎo)的AMs。每一個(gè)值都是平均值+10只大鼠的SEM。與對(duì)照組有顯著差異；P < 0. 05。圖3所示為化合物A的兩個(gè)單獨(dú)劑量(再一次說(shuō)明，其也被稱作roi)不會(huì)加重(worsen)下述情況中的帕金森綜合征狀無(wú)受評(píng)估的左旋多巴(在沒(méi)有的情況下)帕金森綜合征狀，或者有受評(píng)估的左旋多巴(在存在的情況下)帕金森綜合征狀，其中在研究過(guò)程中使用在某些場(chǎng)合下不對(duì)稱前肢或圓柱體試驗(yàn)。每一個(gè)值均是平均值+9-10只大鼠的SEM。發(fā)明詳述伴隨長(zhǎng)期應(yīng)用左旋多巴治療包括但不限于帕金森氏病的運(yùn)動(dòng)障礙，存在一個(gè)與運(yùn)動(dòng)障礙發(fā)展有關(guān)的公認(rèn)問(wèn)題。運(yùn)動(dòng)障礙是已得到確認(rèn)和證明的左旋多巴治療的臨床苜1J 作用。例如，參見(jiàn) Brotchie, J. M.，Lee, J. & Venderova, K.，uLevodopa-InducedDyskinesia in Parkinson’ s Disease)，，，J Neural Transm, 112 :359-91 (2005)；Fabbrini, G. ,Brotchie,J. M. ,Grandas,F. ,Nomoto,M. & Goetz,C. G,. “Levodopa-InducedDyskinesias”, Mov Disord (2007) ；01anow, C. ff. , Obeso, J. A.& Stocchi, F.,“Continuous Dopamine-Receptor Treatment of Parkinson’ s Disease !ScientificRationale and Clinical Implications，，，Lancet Neurol, 5 :677-87 (2006) ；Stacy, M. &Galbreath, A. , “Optimizing Long-Term Therapy For Parkinson Disease 0ptions ForTreatment-Associated Dyskinesia,，， Clin NeuropharmacoI,31 :120-5(2008) ；Stacy,M. & Galbreath,A.,“Optimizing Long-Term Therapy For Parkinson Disease Levodopa,Dopamine Agonists, And Treatment-Associated Dyskinesia,，，Clin NeuropharmacoI,31 :51-6 (2008) jPThanvi’B. , Lo, N. & Robinson, T. ,“Levodopa-Induced Dyskinesia InParkinson’s Disease Clinical Features,Pathogenesis,Prevention And Treatment,，，，Postgrad Med J, 83 :384-8 (2007)。2007年，發(fā)表的研究表明典型的煙堿乙酰膽堿激動(dòng)劑煙堿用于改善帕金森氏病動(dòng)物模型中左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙特殊的相關(guān)性。參見(jiàn)，Bordia, T. , Campos, C. , Huang,L. Z. & Quik,M. ,“Continuous And Intermittent Nicotine Treatment Reduces L-3,4-Dihydroxyphenylalanine (L-DOPA)-Induced Dyskinesias In A Rat Model Of Parkinson’sDisease”，J Pharmacol Exp Ther, 327 :239-47 (2008) ；Quik, M.等，“Nicotine ReducesLevodopa-Induced Dyskinesias In Lesioned Monkeys”， Annals of Neurology,62 588-96(2007) ；and Quik, M. , Bordia, T. &0，leary, K. ,“Nicotinic Reeeptors As CNSTargets For Parkinson’ s Disease，， Biochem Pharmacol, 74 :1224-1234(2007)。雖然這些數(shù)據(jù)很引人注目，但大量不良的副作用仍與煙堿在人類中的使用和給藥有關(guān)，特別是與其在外周，即肌肉和神經(jīng)節(jié)中的作用有關(guān)。因此，更具有選擇性神經(jīng)元煙堿受體相互作用的另一類化合物被認(rèn)為在患者的依從性和治療指數(shù)方面而言更具優(yōu)勢(shì)。紋狀體中存在的但不存在于周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的主要的NNRs是a4P2*，a6@2*和a 7NNRs，星號(hào)表示在受體復(fù)合體中可能存其他NNR亞單位。因此，針對(duì)這些NNR亞型的藥物將會(huì)提供一種超過(guò)煙堿針對(duì)改善左旋多巴引起運(yùn)動(dòng)障礙的改良的選擇性。下述定義是對(duì)所定義的術(shù)語(yǔ)的完善而不是對(duì)其進(jìn)行的限制。如果本文所用的特定術(shù)語(yǔ)沒(méi)有被進(jìn)行特別的定義，此類術(shù)語(yǔ)也不應(yīng)被視為是不清楚的。相反，此類術(shù)語(yǔ)在其公認(rèn)
的含義內(nèi)被使用。本文所用的“激動(dòng)劑”為一種可刺激其結(jié)合配偶體，代表性的受體的物質(zhì)。在具體試驗(yàn)的正文中對(duì)刺激進(jìn)行了定義，或在本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的基本相似的環(huán)境下從本文的討論的文獻(xiàn)中，與作為特定結(jié)合配偶體的“激動(dòng)劑”或“拮抗劑”被接受的因子或物質(zhì)相比是顯而易見(jiàn)的。就特定作用或功能的增加方面而言，刺激可被定義為通過(guò)具有結(jié)合配偶體的激動(dòng)劑或部分激動(dòng)劑相互作用誘導(dǎo)的特定的作用或功能的增長(zhǎng)，并可以包括別構(gòu)效應(yīng)。本文所用“拮抗劑”為一種抑制其結(jié)合配偶體，代表性的受體的物質(zhì)。在特定試驗(yàn)的上下文中對(duì)抑制進(jìn)行定義，或其在本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的基本相似的環(huán)境下，從本文的討論的文獻(xiàn)中，與作為特定結(jié)合配偶體的“激動(dòng)劑”或“拮抗劑”被接受的因子或物質(zhì)相比是顯而易見(jiàn)的。抑制可被定義為通過(guò)具有結(jié)合配偶體的拮抗劑的相互作用誘導(dǎo)的特定的作用或功能的減少，并可以包括別構(gòu)效應(yīng)。本文所用的“部分激動(dòng)劑”或“部分拮抗劑”為一種分別向其結(jié)合配偶體提供刺激或抑制水平的物質(zhì)，該配偶體并非完全地或全部地激動(dòng)或拮抗。將承認(rèn)，刺激并且因此抑制被定義為本質(zhì)上用于任何物質(zhì)或種類物質(zhì)，所述物質(zhì)被定義為激動(dòng)劑、拮抗劑，或部分激動(dòng)劑。本文所用的“固有活性”或“效能”是指一定程度的結(jié)合配偶體復(fù)合體的生物有效性。就受體藥理學(xué)方面而言，文中的固有活性或效能應(yīng)根據(jù)結(jié)合配偶體(例如受體/配體)復(fù)合體的上下文來(lái)解釋，并考慮有關(guān)特定生物結(jié)果的活性。例如，在某些情況下，固有活性可根據(jù)特定的所涉及的第二信使系統(tǒng)變化。參見(jiàn)Hoyer, D.和Boddeke, H. , TrendsPharmacol. Sci. 14(7) :270-5 (1993)，關(guān)于此類教導(dǎo)被本文引用作為參考。其中上下文中對(duì)應(yīng)具體的評(píng)估內(nèi)容，及其可能與本發(fā)明內(nèi)容相關(guān)的程度對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。本文所用受體調(diào)節(jié)包括受體的激動(dòng)、部分激動(dòng)、拮抗作用、部分拮抗作用，或反相激動(dòng)。說(shuō)明書(shū)中所用的化合物A(在生物測(cè)試中也被稱作roi)為(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽，如下圖所示。化合物A或其藥學(xué)可接受的鹽具有如下結(jié)構(gòu)式hO化合物A，或其藥學(xué)可接受的鹽。(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶，其外消旋合成體，和其粘酸鹽(galactarate)以及半粘酸鹽(hemi-galactarate)的形式在WO 04/078752和美國(guó)專利US7，098，331中所公開(kāi)，因?yàn)樗鼈児_(kāi)了化合物A的制備其均以引用的方式并入本文中。在很有效的帕金森病運(yùn)動(dòng)障礙動(dòng)物模型(左旋多巴處理的單側(cè)6-羥基多巴胺-損傷大鼠)中開(kāi)展了一項(xiàng)評(píng)估以CNS亞型為靶點(diǎn)的NNR藥物效果的研究。化合物A(0. I或0.3mg/kg/天，通過(guò)皮下微型真空泵給藥)，其以a 40 2*和a 6 P 2 * NNRs為靶點(diǎn)，將總
的左旋多巴誘導(dǎo)的AMs減少 25%，在口服組中比軸向AMs組中有更顯著的減少。此外，化合物A顯示出改善受損大鼠帕金森綜合征的趨勢(shì)。因此，選擇性NNR藥物可被用于帕金森氏病運(yùn)動(dòng)障礙，左旋多巴治療方法有問(wèn)題的并發(fā)癥的管理，用于這些病癥的目前治療方法非常有限。本文所用術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的”是指載體、稀釋劑、賦形劑或本發(fā)明化合物的鹽的形式與制劑中的其他成分相適應(yīng)并且對(duì)其藥物組合物接受體來(lái)說(shuō)是無(wú)毒的。本文所用術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”是指任選地與一種或多種藥學(xué)可接受的載體、稀釋齊U，或賦形劑混合的本發(fā)明化合物。優(yōu)選地，藥物組合物顯示出對(duì)環(huán)境條件的一定程度的穩(wěn)定性從而使得其適于生產(chǎn)和商業(yè)目的。本文所用術(shù)語(yǔ)“有效量”，“治療量”，以及“有效劑量”是指本發(fā)明化合物足以產(chǎn)生預(yù)期的藥理作用或治療作用從而產(chǎn)生有效的疾病治療作用的量。疾病的治療作用可表現(xiàn)為延緩或防止疾病的發(fā)作或發(fā)展，和延緩或防止與所述疾病有關(guān)的癥狀的發(fā)作或發(fā)展。疾病的治療作用還可以表現(xiàn)為減少或消除癥狀，逆轉(zhuǎn)疾病的發(fā)展，以及其他任何對(duì)患者有利的
-Tj. 士 [>貝獻(xiàn)。所述的有效劑量可以根據(jù)如患者的病癥，疾病癥狀的嚴(yán)重程度，以及藥物組合物的給藥方式多種因素而變化。就以有效劑量進(jìn)行的給藥而言，化合物可以以低至0. lmg/kg患者體重的量來(lái)給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物可以以從小于約lmg/kg患者體重至小于約100 V- g/kg患者體重,和進(jìn)一步地約I y g/kg至小于100 V- g/kg患者體重的量進(jìn)行給藥。前文所述的有效劑量通常表示以單一劑量可以給藥的量，或在24小時(shí)內(nèi)以一種或多種劑量可以給藥的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物A的日劑量可以以約Img至約IOOmg,優(yōu)選地Img至約50mg,優(yōu)選地約5mg至約30mg,優(yōu)選地約5mg至約20mg來(lái)進(jìn)行給藥。所述劑量可以為每日一次，或分成以每日兩次(BID)，每日三次(QD)，每日4次(QID)，或每日更多次來(lái)提供?；衔顰或其藥學(xué)可接受的鹽可以結(jié)晶成不止一種形式的晶體，其特征被稱為多晶型現(xiàn)象，并且這樣的多晶型(“多晶型物”)也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。通常多晶型現(xiàn)象可作為對(duì)在溫度、壓力變化，或兩者均變化的應(yīng)答而出現(xiàn)。結(jié)晶過(guò)程中的各種變化也會(huì)導(dǎo)致多晶型現(xiàn)象?？梢酝ㄟ^(guò)各種本領(lǐng)域已知的物理特性如X-射線衍射圖、溶解度以及熔點(diǎn)來(lái)區(qū)分多晶型物?；衔顰含有一個(gè)手性中心，因此可存在多個(gè)立體異構(gòu)體。本發(fā)明的范圍包括立體異構(gòu)體以及純化的對(duì)映體或?qū)τ丑w/非對(duì)映體富集混合物的混合物。本發(fā)明化學(xué)式所示化合物的各個(gè)異構(gòu)體，及其完全或部分平衡的混合物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明還包括與其其中一個(gè)或多個(gè)手性中心是反向的異構(gòu)體一起以混合物形式存在的上式表示的化合物的單個(gè)異構(gòu)體。當(dāng)需要化合物為單一的對(duì)映體時(shí)，這時(shí)可以通過(guò)立體定向合成，最終產(chǎn)物或任何適宜的中間產(chǎn)物的拆分，或本領(lǐng)域已知的手型色譜法來(lái)獲得。最終產(chǎn)物、中間產(chǎn)物、或起始物料的拆分可使用任何本領(lǐng)域已知的適當(dāng)方法來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)，例如Stereochemistry of Organic Compounds(Wiley-Interscience,1994)。本發(fā)明包括本文所述化合物的鹽或溶劑化物，包括其如鹽的溶劑化物的組合。本發(fā)明的化合物可以以溶劑化物的形式例如成水合物，以及以非溶劑化物的形式存在，并且本發(fā)明包括所有這些形式。通常，但不是絕對(duì)地，本發(fā)明的鹽為藥學(xué)可接受的鹽。包括在
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的鹽”中的鹽是指本發(fā)明化合物的無(wú)毒的鹽。適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)可接受的鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸加成鹽如氯化物、溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽，和硝酸鹽；有機(jī)酸加成鹽如乙酸鹽、粘酸鹽(galactarate)、丙酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、羥乙酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、延胡索酸鹽、甲磺酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽和抗壞血酸鹽；具酸性氨基酸的鹽如天冬氨酸鹽和谷氨酸鹽；堿金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽；堿土金屬鹽如鎂鹽和鈣鹽；銨鹽；有機(jī)堿性鹽如三甲胺鹽、三乙胺鹽、吡啶鹽、甲基吡啶鹽、二環(huán)己基胺鹽，和N，N/ -二苯基乙二胺鹽；和具堿性氨基酸的鹽如賴氨酸鹽和精氨酸鹽。在某些情況下所述的鹽可以為水合物或乙醇溶劑化物。雖然本發(fā)明化合物以活性化學(xué)原料(bulk active chemical)的形式給藥是有可能的，但優(yōu)選地以所述化合物藥物組合物或制劑的形式給藥。因此，本發(fā)明一方面包括包含一個(gè)或多個(gè)式I化合物和/或其藥學(xué)可接受的鹽和一種或多種藥學(xué)可接受的載體，稀釋劑，或賦形劑的藥物組合物。本發(fā)明另一方面提供一種用于制備藥物組合物的方法，其包括混合一個(gè)或多個(gè)式I化合物和/或其藥學(xué)可接受的鹽和一種或多種藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。 本發(fā)明化合物的給藥方式可以變化。本發(fā)明化合物優(yōu)選地是口服給藥。優(yōu)選地用于口服給藥的藥物組合物包括片劑、膠囊、小膠囊(caplet)、糖漿、溶液和懸浮液?？梢砸愿牧坚尫艅┬腿缪訒r(shí)釋放(time-release)片劑和膠囊制劑的形式提供本發(fā)明的藥物組合物。所述藥物組合物還可以通過(guò)注射，即靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、以
及腦室內(nèi)的方式給藥。靜脈注射給藥是優(yōu)選的注射方法。適合的注射用載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，和其包括5 %葡萄糖溶液、鹽水和磷酸鹽緩沖鹽水。所述制劑還可通過(guò)其他方式來(lái)給藥，例如直腸給藥。用于直腸給藥的制劑如栓劑已被本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。所述化合物還可以通過(guò)吸入如以氣霧劑的形式；局部給藥如以洗劑形式；經(jīng)皮如使用透皮貼劑(例如通過(guò)使用從Novartis公司和Alza公司可商業(yè)獲得的技術(shù))，通過(guò)無(wú)針?lè)勰┳⑸淦鳎蛲ㄟ^(guò)頰，舌下或鼻內(nèi)吸收來(lái)給藥。藥物組合物可被制成單位劑量形式，或多劑量或亞單位劑量形式。本文所述的藥物組合物的給藥可以是間歇性的，或以逐步的、連續(xù)的、不變的或可控的速率進(jìn)行。所述藥物組合物可向溫血?jiǎng)游铮绮溉閯?dòng)物如小鼠、大鼠、貓、兔子、狗、豬、母牛，或猴給藥；但有利地是向人類給藥。此外，每日該藥物組合物給藥的時(shí)間和次數(shù)可以變化?；衔顰或其藥學(xué)可接受的鹽可以與各種用于所述疾病或病癥的治療或預(yù)防的其他適合的治療劑聯(lián)合。因此，本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案包括與其他治療化合物聯(lián)合的本發(fā)明化合物的給藥。例如，本發(fā)明所述化合物可被用于與其他NNR配體(如伐尼克蘭)、NNRs別構(gòu)調(diào)節(jié)劑、抗氧化劑(如自由基清除劑)、抗菌劑(如青霉素類抗生素)、抗病毒劑(如核苷類似物，諸如齊多夫定和阿昔洛韋)、抗凝血?jiǎng)?如華法林)、抗炎劑(如NSAIDs)、退熱劑、鎮(zhèn)痛劑、麻醉劑(如外科使用的)、乙酰 膽堿酯酶抑制劑(如多奈哌齊和加蘭他敏)、抗精神病藥(如氟哌啶醇、氯氮平、奧氮平、和喹硫平)、免疫抑制劑(如環(huán)孢素和甲氨蝶呤)、神經(jīng)保護(hù)藥、留類(如類固醇激素)、皮質(zhì)類留醇類(如地塞米松、潑尼松、和氫化可的松)、維生素類、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)品、抗抑郁劑(如丙咪嗪、氟西汀、帕羅西汀、依他普侖、舍曲林、文拉法辛和度洛西汀)、抗焦慮劑(如阿普唑侖和丁螺環(huán)酮)、抗驚厥藥(如苯妥英和加巴噴丁)、血管擴(kuò)張劑(如阿普唑侖和西地那非)、情緒穩(wěn)定劑(如丙戊酸鹽和阿立哌唑)、抗癌藥(如抗增殖劑)、抗高血壓藥(如阿替洛爾、可樂(lè)定、氨氯地平、維拉帕米、和奧美沙坦)、輕瀉劑、軟便劑、利尿劑(如呋塞米)、抗疫藥(anti-spasmotics)(如雙環(huán)維林)、抗運(yùn)動(dòng)障礙劑和抗?jié)兯?如艾美拉唑)聯(lián)合。這樣的藥物活性劑的聯(lián)合可以一起或分開(kāi)給藥，當(dāng)分開(kāi)給藥時(shí)，給藥可以同時(shí)地或以任何順序地進(jìn)行。為了達(dá)到預(yù)期的治療效果將會(huì)對(duì)化合物或藥劑的量以及相對(duì)的給藥時(shí)間安排進(jìn)行選擇。本發(fā)明化合物與其他治療成分聯(lián)合給藥可以為相伴給藥組合(I) 一種包括兩種化合物的單一藥物組合物；或(2)獨(dú)立的藥物組合物，其各自包含一種化合物。選擇性地，所述聯(lián)合可以以順序方式分開(kāi)進(jìn)行給藥，其中一個(gè)治療劑先進(jìn)行給藥然后進(jìn)行另一個(gè)的給藥。這種順序給藥可以在接近的時(shí)間內(nèi)或間隔較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行。本發(fā)明另一方面包括聯(lián)合治療方法，其包含給予受試者治療或預(yù)防有效量的本發(fā)明化合物和一種或多種包括化學(xué)療法、放射療法、基因療法、或免疫療法的其他療法。當(dāng)以有效量使用時(shí)，本發(fā)明化合物被認(rèn)為可調(diào)節(jié)CI402和CI602*的活性，對(duì)a 7幾乎沒(méi)有到?jīng)]有影響，對(duì)特征在于人類神經(jīng)節(jié)的煙堿亞型無(wú)可感知的相互作用，這表現(xiàn)為缺乏產(chǎn)生腎上腺嗜鉻細(xì)胞組織或骨骼肌中的煙堿功能的能力，進(jìn)一步表現(xiàn)為缺乏在表達(dá)肌型煙堿受體的細(xì)胞制備物中產(chǎn)生煙堿功能的能力。因此，這些化合物被認(rèn)為可以治療或預(yù)防疾病、病癥以及癥狀而不產(chǎn)生神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)肌肉位點(diǎn)上的與活性有關(guān)的明顯的副作用。因此，認(rèn)為所述化合物的給藥會(huì)提供一個(gè)治療窗，其中提供某些疾病、病癥以及癥狀的治療，而避免了某些副作用。也就是說(shuō)，化合物的有效劑量被認(rèn)為是足以對(duì)疾病，病癥或癥狀產(chǎn)生所需的作用，但不足以，即沒(méi)有到達(dá)足夠的濃度從而產(chǎn)生不希望的副作用。特別是當(dāng)它們被修飾以包括適當(dāng)?shù)臉?biāo)記時(shí)，所述化合物可被用于診斷組合物中，如探針。為此，最優(yōu)選地用放射性同位素部分，如nC、18F、76Br、123I或125I標(biāo)記本發(fā)明的化合物。使用適于所用標(biāo)記的已知的檢測(cè)方法可檢測(cè)給藥化合物。檢測(cè)方法的實(shí)例包括正電子成像術(shù)(position emission topography) (PET)和單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)化斷層顯像(SPECT)。上述的放射性示蹤標(biāo)記被用于PET (例如nC、18F或76Br)和SPECT (例如123I)成像，對(duì)11C來(lái)說(shuō)半衰期約20. 4分鐘，18F約109分鐘，123I約13小時(shí)和76Br約16小時(shí)。希望得到高比活性以顯像非飽和濃度下的選擇性受體亞型。通常給藥劑量低于毒性范圍，并可提供高強(qiáng)反差圖像。該化合物預(yù)期可以以無(wú)毒的水平給藥。劑量的確定可以本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的放射性示蹤成像方法進(jìn)行。參見(jiàn)，例如，U.S.專利No. 5，969，144, London等。所述化合物可以用已知的技術(shù)來(lái)給藥。參見(jiàn)，例如U. S.專利No. 5,969，144，London等，如前文所述。所述化合物可以以并入其他成分，如適用于診斷組合物制備的那些類型的成分的制劑組合物的形式來(lái)給藥。用于實(shí)施本發(fā)明化合物優(yōu)選地是使用高純度形式。參見(jiàn) U.S.專利 No. 5，853，696，Elmalch 等。當(dāng)向受試者(例如，受試人)進(jìn)行所述化合物的給藥后，用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)可以對(duì)受試者體內(nèi)的化合物進(jìn)行顯像和定量從而指示存在、數(shù)量以及功能。除人類之外，還可以向動(dòng)物如小鼠、大鼠、狗和猴子進(jìn)行所述化合物的給藥。可以用任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù)和設(shè)備來(lái)進(jìn)
行 SPECT 和 PET 成像。參見(jiàn) Villemagne 等，In Arneric et al. (Eds.)神經(jīng)兀煙喊受體藥理和治療時(shí)機(jī)(Neuronal Nicotinic Receptors Pharmacology and TherapeuticOpportunities), 235-250 (1998)和 U. S.專利 No. 5，853，696,Elmalch 等，本文將其引用作為參考用于公開(kāi)代表性的成像技術(shù)。另一方面，所述診斷組合物可被用于診斷受試者如人類患者疾病的方法中。所述方法包括給予患者可探測(cè)已標(biāo)記的本文所述的化合物，并探測(cè)該化合物對(duì)選定的NNR亞型(例如a4P2和a 63 2*受體亞型)的空間機(jī)理。使用診斷工具如PET和SPECT，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以用本文所述的放射性標(biāo)記化合物來(lái)診斷多種癥狀和病癥，包括與中樞和自主神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙有關(guān)的癥狀和病癥。所述病癥包括多種包括阿爾茨海默爾病、帕金森氏病，和精神分裂癥的CNS疾病和病癥?？蛇M(jìn)行評(píng)估的這些和其他有代表性的疾病和病癥包括那些在U. S.專利No. 5，952，339中說(shuō)明的那些，Bencherif等。另一方面，所述診斷組合物可被用于監(jiān)控受試者如人類患者選擇性煙堿受體亞型的方法中。所述方法包括給予患者可探測(cè)已標(biāo)記的本文所述的化合物，并探測(cè)該化合物對(duì)選定的煙堿受體亞型即a 40 2和a 60 2*受體亞型的離子流的影響?？梢杂酶鞣N方法包括已得到確認(rèn)的合成方法來(lái)制備化合物A。說(shuō)明性的一般合成方法在下文中進(jìn)行了描述，并且在工作實(shí)施例中對(duì)本發(fā)明的具體化合物進(jìn)行了制備。下文所述的實(shí)施例中，必要時(shí)，根據(jù)合成化學(xué)的一般原則使用了用于敏感或反應(yīng)基團(tuán)的保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)的操作按照有機(jī)合成的標(biāo)準(zhǔn)方法(T.W.Green和P. G. M. Wuts(1999)Protecting Groups in Organic Synthesis,3rd Edition,John Wiley &Sons，關(guān)于保護(hù)基團(tuán)方面而言本文將其引用作為參考)進(jìn)行。在化合物合成適宜的階段除去這些基團(tuán)，所使用的方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。方法的選擇以及反應(yīng)條件和使用的順序應(yīng)與本發(fā)明化合物的制備相一致?；衔顰可以按照下文所述方法，使用容易獲得的起始物料和試劑來(lái)制備。在這些反應(yīng)中，可以進(jìn)行一些變化，這些變化本文沒(méi)有詳細(xì)描述但對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是已知的。除非另作說(shuō)明，本文所述的結(jié)構(gòu)也意味著包括僅存在的一種或多種同位素富集原子(isotopically enriched atom)不同的化合物。除了氣或氣代替氫原子,或13C-或14C-富集的碳代替碳原子外具有本發(fā)明所述結(jié)構(gòu)的化合物也在本發(fā)明范圍內(nèi)。例如，氘已被廣泛地用于檢測(cè)生物活性化合物的藥代動(dòng)力學(xué)和代謝。雖然從化學(xué)角度看，氘表現(xiàn)與氫類似，但在氘-碳鍵與氫-碳鍵之間的鍵能和鍵長(zhǎng)明顯不同。因此，在生物活性化合物中用氘代替氫可使化合物通常保留其生物化學(xué)效力和選擇性，而與其無(wú)同位素的對(duì)應(yīng)物相比卻顯示出明顯不同的吸收、分布、代謝，和/或排泄(ADME)特性。因此，就某些生物活性化合物來(lái)說(shuō)，氘取代可使藥物效力、安全性，和/或耐受性得到改善。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解存在許多生產(chǎn)本發(fā)明化合物，以及生產(chǎn)適于各種用途的用放射性同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物的方法。例如，與11C-或18F-標(biāo)記的芳基-或雜芳基硼酸結(jié)合，然后去除保護(hù)基團(tuán)，如前文所述會(huì)產(chǎn)生適用于正電子成像術(shù)的化合物。同樣，與3H-或14C-標(biāo)記的芳基-或雜芳基硼酸結(jié)合，然后除去保護(hù)基團(tuán)，如前文所述會(huì)產(chǎn)生適用于功能和代謝研究或作為另一種治療化合物使用的被同位素修飾的化合物。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :方案I
EtO2CHO2C
OHOMs、^ CO2Et、^ CO2H
— rt — O — 一
NNNN
丨丨I
BocBocBocBoc
34
1 2
OHOMs
y~~~ CO2H、、—7/
O— — O — O —
NNNI
IIILoc
BocBocBocboc
5678
_ /N-\ cT—...少—>N
L Q 0
9II
Boc|_|
10 11叔丁基(R)-3_(甲基磺酰基氧基)吡咯烷-I-甲酸酯⑵的合成步驟A :向-20至-30°C的叔丁基(R) _3_羥基吡咯烷_(kāi)1_甲酸酯(200g，I. 07mol)和三乙胺(167g，1.63mol)的甲苯(700mL)溶液中滴加甲磺酰氯(156g，I. 36mol)，同時(shí)保持溫度在-10至_20°C。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭⒃试S攪拌。將該反應(yīng)溶液每小時(shí)取樣一次并用HPLC對(duì)其進(jìn)行分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后，過(guò)濾該懸浮液以除去三乙胺鹽酸鹽。用 600mL稀碳酸氫鈉水溶液洗滌該濾液。干燥有機(jī)層并在減壓條件下對(duì)其進(jìn)行濃縮從而得到一種粘稠的油狀物2 (260g，92%)，其不經(jīng)進(jìn)一步純化而被使用。1H NMR(CDCl3,400MHz)8 5. 27 (m, 1H)，3. 44-3. 76 (m, 4H)，3. 05 (s, 3H)，2. 26 (m, 1H)，2. 15 (m, 1H)，I. 47 (s,9H)。
步驟B :將反應(yīng)器填裝叔丁基(R) -3-羥基吡咯烷-I-甲酸酯(2. OOkg, 10. 7mol)，甲苯(8. 70kg)和三乙胺(I. 75kg，17. 3mol)的。用氮?dú)獯祾咴摲磻?yīng)器15分鐘。將混合物進(jìn)行攪拌，冷卻至3°C。用冰浴連續(xù)冷卻，緩慢地(在2小時(shí)的時(shí)間內(nèi))加入甲磺酰氯(I. 72kg，mol)(放熱反應(yīng))(完全加入后，溫度為14°C )。當(dāng)溫?zé)嶂?0°C時(shí)，攪拌該粘稠的含沉淀出三乙胺鹽酸鹽的混合物12h。GC和TLC分析(茚三酮染色)均表明沒(méi)有起始物料殘留。過(guò)濾該混合物以除去三乙胺鹽酸鹽，并將濾液重新加入到反應(yīng)器中。然后用5%碳酸氫鈉水溶液(2x 3kg)洗滌濾液，每次洗滌時(shí)攪拌15分鐘和沉降15分鐘。用無(wú)水硫酸鈉干燥所得的有機(jī)層，過(guò)濾。在真空條件下除去濾 液中的揮發(fā)性成分，首先在50°C下進(jìn)行4小時(shí)，然后在室溫下進(jìn)行10小時(shí)。殘留物重3. OOkg (收率106% )，用色譜法和NMR分析對(duì)其進(jìn)行鑒定從而預(yù)先制備，除了含有甲苯的樣品。二乙基(R)-2-(I-(叔-丁氧基擬基)卩比咯燒-3-基)丙二酸酯(3)的合成制備A 向叔丁醇鉀(187g，I. 62mol)的I-甲基_2_吡咯烷酮(I. 19L)溶液中加入丙二酸二乙基酯(268g. I. 67mol)同時(shí)保持溫度在35°C以下。將溶液加熱至40°C，攪拌20-30分鐘。加入叔丁基(R)-3-(甲基磺?；趸?吡咯烷-I-甲酸酯(112g，420mmOl)，將溶液加熱到65°C，攪拌6h。將反應(yīng)溶液每2h取樣一次，并對(duì)其進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后(10-12h)，將混合物冷卻至約25°C。向溶液中加入去離子水(250mL)，并通過(guò)添加2N鹽酸(650mL)將pH調(diào)節(jié)到3_4。過(guò)濾所得的懸浮液，加入水(I. 2L)和氯仿(I. 4L)。將溶液進(jìn)行徹底混合，收集氯仿層，在減壓條件下對(duì)氯仿層進(jìn)行蒸發(fā)從而得到一種黃色油狀物。將該油狀物溶解于己烷(2. 00L)中并用去離子水(2x I. 00L)洗滌。在50-55°C減壓條件下濃縮有機(jī)層從而得到一種淡黃色油狀物(252g)/H NMR分析表明其為49. 1%的3(123. 8g)與48. 5%的丙二酸二乙基酯(122g)和2% I-甲基_2_吡咯烷酮(5g)。將該原料用于接下來(lái)的步驟中而不對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的純化。1H匪R(⑶Cl3，400MHz) 8 4. 20(q，4H)，3. 63 (m, 1H)，3. 48 (m, 1H)，3. 30 (m, 1H) ,3. 27 (d, J = IOHz，1H)，3. 03 (m, 1H)，2. 80 (m, 1H)，
2.08 (m, 1H)，I. 61 (m, 1H)，I. 45 (s,9H)，I. 27 (t,6H)。制備B :保持氮?dú)鈿夥眨蚍磻?yīng)器中裝填200規(guī)定乙醇(proof ethanol) (5. 50kg)和21% (按重量計(jì))乙醇中的乙醇鈉(7. 00kg，21. 6mol)。攪拌該混合物并將其溫?zé)嶂?0°C。在20分鐘的時(shí)間內(nèi)加入丙二酸二乙基酯(3. 50kg，21.9mol)。然后將反應(yīng)混合物在40°C加熱，保持1.5h。加入叔丁基(R)-3-(甲基磺?；趸?吡咯烷-I-甲酸酯(來(lái)自例2，步驟B的3. OOkg產(chǎn)物，10. 7mol)的200規(guī)定乙醇(5. 50kg)溶液，加熱回流(78°C )所得的混合物2h。GC和TLC分析(茚三酮染色)均表明沒(méi)有起始物料殘留。然后將攪拌的混合物冷卻至25°C，用水(2.25kg)稀釋，用濃鹽酸(I. 27kg, 12. 9mol)的水(5.44kg)溶液對(duì)其進(jìn)行緩慢地處理。用甲基叔丁醚(MTBE) (14. Ikg以及11. 4kg)洗滌該混合物兩次，每次洗滌時(shí)攪拌15分鐘和沉降15分鐘。用無(wú)水硫酸鈉(Ikg)干燥合并的MTBE洗滌液，過(guò)濾，在50°C真空條件下濃縮6h。殘留物(紅色油狀物)重4. 45kg，經(jīng)GC分析為49%的所需產(chǎn)物(62%完全得自叔丁基(R)-3-羥基吡咯烷-I-甲酸酯)。(R)-2-(I-(叔-丁氧基擬基)卩比咯燒-3-基)丙二酸⑷的合成步驟A :向例 3，步驟 A(232g)，包含 123. 8g (380mmol) 3 的產(chǎn)物和 121. 8g(760mmol)丙二酸二乙基酯的四氫呋喃(I. 2L)溶液中加入21%的氫氧化鉀溶液(0. 50L去離子水中含450g)同時(shí)保持溫度在25°C以下。將該反應(yīng)混合物加熱至45°C并攪拌lh。每小時(shí)對(duì)該反應(yīng)溶液進(jìn)行取樣并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后(2-3h)，將混合物冷卻至約250C。收集水層，將其冷卻至5°C。通過(guò)添加4N鹽酸(750mL)將pH調(diào)節(jié)到2，所得的懸浮液在5-10°C下保持30分鐘。過(guò)濾混合物，用己烷(IL)洗滌濾餅。用氯仿(IL)萃取水濾液，并將氯仿層儲(chǔ)存?zhèn)溆?。通過(guò)加熱至40°C將過(guò)濾步驟中收集到的固體重新溶解到氯仿(IL)中。過(guò)濾該溶液以除去不溶的無(wú)機(jī)固體物。合并氯仿層，在50-55°C減壓條件下對(duì)其進(jìn)行濃縮從而得到灰白色固體物(15g)。合并該固體并將其溶解在乙酸乙酯(350mL)中從而得到懸浮液，將該懸浮液加熱至55-60°C保持2h。趁熱過(guò)濾該懸浮液，用乙酸乙酯(2xl50mL)和己烷(2x 250mL)洗滌所得的濾餅從而得到83. Og(80. 1% )的白色固體4，將其用于接下來(lái)的步驟中而不對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的純化。1HNMR(Cl4-CH3OHdOOMHz) 8 3. 60 (m, 1H)，3. 46 (m,1H)，3. 29-3. 32 (m, 2H)，2. 72 (m, 1H)，2. 09 (m, 1H)，I. 70 (m, 1H)，I. 45 (s,9H)。步驟B :在氮?dú)夥障?，將?，步驟B (4. 35kg)的包含2. 13kg (6. 47mol) 3的產(chǎn)物的四氫呋喃(13.9kg)溶液加入到攪拌的冷卻的氫氧化鉀(I. 60kg，40. Omol)去離子水(2. OOkg)溶液中同時(shí)保持溫度低于35°C。加熱該反應(yīng)混合物并在40-45°C下保持24h，
此時(shí)GC和TLC分析表明反應(yīng)已完全。將混合物冷卻至25°C并用MTBE(34kg)對(duì)其進(jìn)行洗滌，用15分鐘攪拌和用15分鐘沉降。收集水層，將其冷卻至1°C。然后緩慢地加入濃鹽酸(2. 61kg，26. 5mol)的去離子水(2. 18kg)混合物，在加入期間和加入后15分鐘將該混合物的溫度保持在< 15°C下。通過(guò)再加入鹽酸將溶液的pH調(diào)節(jié)到3. 7。過(guò)濾以收集白色固體，用水(16kg)洗滌該白色固體，并室溫在真空條件下干燥6天。該干燥的固體重I. 04kg。將濾液冷卻至< 10°C并保持在室溫同時(shí)通過(guò)添加更多的鹽酸(使用了 6N的I. 6L ；9. 6mol ;最終pH = 2)降低pH。通過(guò)過(guò)濾來(lái)收集白色固體，用水(8L)對(duì)其進(jìn)行洗滌，并在40°C真空條件下干燥3天。該干燥的固體重0.25kg。將合并的固體物(I. 29kg，73%收率)在色譜上等同于(chromatographically identical)先前制備的樣品。(R)-2-(I-(叔-丁氧基擬基)卩比咯燒-3-基)乙酸(5)的合成步驟A :在110-112 °C氮?dú)鈼l件下攪拌(R)-2-(l_(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(83g)的I-甲基-2-吡咯烷酮(0. 42L)溶液2h。每小時(shí)對(duì)該反應(yīng)溶液進(jìn)行取樣并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后,將反應(yīng)溶液冷卻至20-25°C。將溶液與去離子水(I. 00L)混合，加入MTBE(1.00L)。進(jìn)行相分離，收集有機(jī)層。用MTBE(l.OOL)，然后用氯仿(I. 00L)對(duì)水相進(jìn)行萃取。合并有機(jī)層，在50-55°C減壓條件下進(jìn)行濃縮從而得到油狀物。將該油狀物溶解在MTBE(2. 00L)中，用0. 6N鹽酸(2x1. 00L)洗滌兩次。收集有機(jī)層，在50-55°C減壓條件下進(jìn)行濃縮從而得到半固體物。將該半固體物混懸在I :4乙酸乙酯/己烷(IOOmL)中，加熱至50°C，保持30分鐘，冷卻至-10°C，過(guò)濾。在減壓下將濾液進(jìn)行濃縮從而得到油狀物，將其溶解于MTBE(250mL)中并用0. 6N鹽酸(2xl00mL)洗滌兩次。在50-55°C減壓條件下濃縮該有機(jī)層從而得到半固體物，將其混懸在I : 4乙酸乙酯/己烷(50mL)中，加熱至50°C，保持30分鐘，冷卻至-10°C，過(guò)濾。收集該固體，將其混懸于己烷(200mL)中，并通過(guò)過(guò)濾對(duì)其進(jìn)行收集從而得到54. Og(77.6% )的5。1H NMR(CDCl3,400MHz) 8 11. 00 (br s, 1H) ,3. 63 (m, 1H)，3. 45 (M, 1H)，3. 30 (M, 1H) ,2. 97 (m, 1H)，2. 58 (m,1H)，2. 44 (m, 2H)，2. 09 (m, 1H)，I. 59 (M, 1H)，I. 46 (s,9H)。步驟B :在110°C氮?dú)鈼l件下攬拌(R)-2-(I-(叔-丁氧基擬基)卩比咯燒-3-基)丙二酸(I. 04kg, 3. 81mol)的I-甲基-2-吡咯烷酮(6. 49kg)溶液5h，此時(shí)TLC和HPLC分析表明反應(yīng)已完全。將該反應(yīng)混合物冷卻至25°C (4h)，與水(12.8kg)和MTBE (9. 44kg)合并。劇烈攪拌該混合物20分鐘，進(jìn)行相分離(IOh)。收集有機(jī)相，并將水相與MTBE (9. 44kg)合并，攪拌15分鐘，進(jìn)行沉降(45分鐘)。收集有機(jī)相，并將水相與MTBE (9. 44kg)合并，攪拌15分鐘，進(jìn)行沉降(45分鐘)。合并三個(gè)有機(jī)相，用IN鹽酸(8. 44kg份)洗滌三次，用水(6. 39kg)洗滌一次，每次洗滌時(shí)攪拌15分鐘和沉降15分鐘。將所得的溶液用無(wú)水硫酸鈉(2. Okg)進(jìn)行干燥，過(guò)濾。在31°C減壓下濃縮濾液(2h)從而得到固體物。在真空下加熱該固體物4小時(shí)，在39°C下4h和在25°C下16h，留下704g(81% )的5(6(純度99.7% )。步驟C(5的改進(jìn)的合成，用化合 物2作起始物料)將乙醇(21重量百分?jǐn)?shù)，343g，
I.05mol)中的乙醇鈉、乙醇(無(wú)水，300mL)和丙二酸二乙基酯(168g, I. 05mol)的攪拌混合物加熱至40°C保持1.5h。向該混合物中加入(R)-叔-丁基3-(甲基磺?；趸?吡咯烷-I-甲酸酯(138g，0. 592mol)的乙醇(IOOmL)溶液，將該反應(yīng)混合物加熱至78°C保持8h。用水(2. 0L)稀釋冷卻的反應(yīng)混合物，用6M HCl (IOOmL)將其酸化至pH = 3。用甲苯(1.0L)萃取該含水的乙醇混合物，在真空下濃縮該有機(jī)相從而得到230g紅色油狀物。在85°C下將該紅色油狀物加入到22. 5% (重量百分?jǐn)?shù))的氫氧化鉀(748g，3.01mol)水溶液中。完全加入后，當(dāng)進(jìn)行乙醇的蒸餾時(shí)將反應(yīng)溫度緩慢地升至102°C。當(dāng)反應(yīng)溫度達(dá)到102°C，并且蒸餾已減退時(shí)，繼續(xù)進(jìn)行加熱另外的90分鐘。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用甲苯(2X400mL)對(duì)其進(jìn)行洗滌。向水層加入600mL 6M鹽酸同時(shí)保持內(nèi)部溫度低于20°C。這將導(dǎo)致形成沉淀，起始于約4-5的pH。過(guò)濾該懸浮液,用300mL水洗漆濾餅。在真空下干燥該固體從而得到77g灰白色固體狀的(R)-2-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(54%的(R)-叔-丁基3-(甲基磺?；趸?吡咯烷-I-甲酸酯收率)。1H NMR (DMS0-d6,400MHz) 8 3. 47 (m, 1H) ；3. 32 (m, 1H) ；3. 24 (m, 1H) ；3. 16 (m, 1H) ；3. 92 (m, 1H) ；2. 86 (m,1H) ；1. 95 (m, 1H) ；1. 59 (m, 1H) ;1.39(s,9H)。將甲苯(150mL)和二甲基亞砜(2mL)中的(R)_2_(1_(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)丙二酸(15g，55mm0l)懸浮液加熱回流2h。將混合物恢復(fù)至室溫，用MTBE(150mL)稀釋。用10%檸檬酸水溶液(2X200mL)洗滌該有機(jī)溶液，在真空下去除溶劑從而得到11. 6g灰白色固體狀的(R)-2-(l-(叔-丁氧基羰基)-吡咯烷-3-基)乙酸(收率92 % )。1HNMR (DMS0-d6，400MHz) 8 12. I (s, 1H) ；3. 36-3. 48 (m, 1H) ；3. 20-3. 34 (m, 1H)；
3.05-3. 19 (m, IH ；2. 72-2. 84 (m, 1H) ；2. 30-2. 42 (m, 1H)，2. 22-2. 30 (m, 2H) ； I. 85-2. 00 (m,1H) ；1. 38-1. 54 (m,，1H)，I. 35(2，9H)。叔丁基(R)-3_(2-羥乙基)吡咯烷-I-甲酸酯(6)的合成步驟A:將(R) _2-(I-(叔-丁氧基擬基)卩比略燒_3-基)乙酸(49. 0g, 214mmol)的四氫呋喃(THF) (200mL)溶液冷卻至_10°C。向燒瓶中緩慢地加入250mL(250mmol)的IM硼烷T(mén)HF溶液同時(shí)將溫度保持低于(TC。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢鑜h。每小時(shí)對(duì)該溶液進(jìn)行取樣，并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后，將溶液冷卻至(TC，在30分鐘的時(shí)間內(nèi)逐滴的加入10%氫氧化鈉溶液(SOmL)以控制氣體選出。用500mL I I己烷/乙酸乙酯溶液對(duì)該溶液進(jìn)行萃取。用飽和氯化鈉溶液洗滌該有機(jī)層，用IOg硅膠對(duì)其進(jìn)行干燥。過(guò)濾除去硅膠，并用IOOmL的I : I己烷/乙酸乙酯洗滌硅膠。合并有機(jī)層，在真空下對(duì)其進(jìn)行濃縮從而得到放置會(huì)固化的淡橘黃色油狀物6 (42g，91.3% )。1H NMR(⑶Cl3，400MHz)8 3. 67 (m, 2H), 3. 38-3. 62 (m, 2H)，3. 25 (m, 1H)，2. 90 (m, 1H), 2. 25 (m, 1H), I. 98-2. 05 (m,1H)，I. 61-1. 69 (m, 2H)，I. 48-1. 59 (m, 2H)，I. 46 (s,9H)。步驟B :將硼烷-THF復(fù)合物(在THF中，3. 90kg或IM的L，mol)緩慢地加入到攪拌的(R)-2-(1-(叔-丁氧基羰基)吡咯烷-3-基)乙酸(683g,3. 03mol)的THF(2. 5kg)溶液中，保持在氮?dú)鈿夥障?，并使用水浴以將溫度保持?3至28°C之間。加入該試劑花費(fèi)時(shí)間1.75h。在25°C下連續(xù)攪拌Ih后，GC分析顯示反應(yīng)完全。將該反應(yīng)混合物冷卻至< 10°C，當(dāng)緩慢地加入10%氫氧化鈉水溶液(1.22kg)時(shí)將溫度保持在低于25°C。加入該試劑花費(fèi)時(shí)間40分鐘。在25°C下攪拌該混合物lh，然后將其與I : l(v/v)庚烷/乙酸乙酯(7L)合并。攪拌該混合物15分鐘，對(duì)其進(jìn)行 相分離(Ih)。取出有機(jī)相，水相與另一部分的7L的
I I庚烷/乙酸乙酯合并。將其攪拌15分鐘，進(jìn)行相分離(20分鐘)。再次取出有機(jī)相，用飽和的氯化鈉(4. 16kg)水溶液洗滌合并的有機(jī)相，混合用15分鐘，沉降用lh。將該有機(jī)相與娃膠(140g)混合并攪拌lh。加入無(wú)水硫酸鈉(700g),攪拌該混合物I. 5h。過(guò)濾混合物，用I : I庚烷/乙酸乙酯(2L)洗滌濾餅。在< 40°C的真空條件下濃縮濾液6h。得到的油狀物重670g(103%收率)并含有庚烷痕跡，但經(jīng)NMR分析與先前制備樣品6相同。叔丁基(R)-3-(2-(甲基磺酰基氧基)乙基)吡咯烷-I-甲酸酯(7)的合成步驟A :向叔丁基(R)-3-(2-羥甲基)吡咯烷-I-甲酸酯(41.0g，190mmol))溶液中加入在甲苯(380mL)中的三乙胺(40mL)，冷卻至-10°C。緩慢地加入甲磺酰氯(20. OmL，256mmol)以將溫度維持在約_5至(TC。將溶液溫?zé)嶂潦覝?，攪拌lh。每小時(shí)對(duì)該溶液進(jìn)行取樣并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后,過(guò)濾溶液,用5%碳酸氫鈉溶液(250mL)洗滌濾液。收集有機(jī)層，用飽和氯化鈉水溶液(250mL)對(duì)其進(jìn)行洗滌。收集有機(jī)層，用硅膠(IOg)干燥，在真空下進(jìn)行濃縮從而得到呈淡黃色粘稠油狀物的7(53. Og,92. 8% )。1HNMR(CDCl3,400MHz) 8 4. 26 (t, J = 6. 8Hz，2H)，3. 41-3. 63 (m，2H)，3. 27 (m, 1H)，3. 02(s，3H)，
2.92 (m, 1H)，2. 28 (m, 1H)，2. 05 (m, 1H)，I. 83 (m, 2H)，I. 50-1. 63 (m, 1H)，I. 46 (s,9H)。步驟B :在氮?dú)夥障?，將甲?5.20kg)中的三乙胺(460g，4. 55mol)和叔丁基(R)-3-(2-羥甲基)吡咯烷-I-甲酸酯(全部樣品來(lái)自例7，步驟B，3.03mol)溶液進(jìn)行攪拌，并冷卻至5°C。在I. 25h的時(shí)間內(nèi)緩慢地加入甲磺酰氯(470g，4. IOmol)，同時(shí)用冰浴冷卻保持溫度低于15°C。逐漸地(在I. 5h時(shí)間內(nèi))將混合物溫?zé)嶂?5°C，并將該溫度保持I. 25h，此時(shí)間點(diǎn)上GC分析表明反應(yīng)已進(jìn)行完全。將混合物冷卻至25°C，濾出固體物，用甲苯(I. 28kg)洗滌濾餅。將濾液與10%碳酸氫鈉水溶液(4. Okg) 一起攪拌15分鐘，進(jìn)行相分離30分鐘。然后將其與飽和的氯化鈉(3. 9kg)水溶液一起攪拌30分鐘，進(jìn)行相分離20分鐘。將有機(jī)相與娃膠(160g)混合并攪拌lh。加入無(wú)水硫酸鈉(540g),攪拌混合物另外的40分鐘。然后過(guò)濾該混合物并用甲苯(460g)洗滌濾餅。在50°C真空條件下濃縮濾液5h，在23°C真空條件下存放得到的油狀物另外的8h。留下798g的7，GC分析純度93%。叔丁基(R)-3_乙烯基吡咯烷-I-甲酸酯(9)的合成步驟A :在50_60°C下攪拌叔丁基(R) _3_ ((甲基磺?；趸?乙基)吡咯烷_(kāi)1_甲酸酯(49. 0g，167mmol)、碘化鈉(30. 0g,200mmol)和 1，2-二甲氧基乙烷(450mL)溶液 4h。每小時(shí)對(duì)該溶液進(jìn)行取樣并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后，將溶液冷卻至-10°C，保持溫度低于0°C時(shí)加入固體叔丁醇鉀(32. 0g,288mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢鑜h。每小時(shí)對(duì)該混合物進(jìn)行取樣并進(jìn)行HPLC分析以確認(rèn)反應(yīng)完全。反應(yīng)完全后，通過(guò)硅藻土(25g基于干燥的量)襯墊過(guò)濾該混合物。用1，2_二甲氧基乙烷(IOOmL)洗滌濾餅。在真空下濃縮合并的濾液從而得到含懸浮固體的橙色油狀物。將該油狀物溶解在己烷(400mL)中，攪拌30分鐘，過(guò)濾以除去固體物。用硅膠(IOg)干燥有機(jī)層，在真空下進(jìn)行濃縮從而得到呈無(wú)色油狀物的 9(26. 4g，82. 9%) o 1H NMR(CDCl3,400MHz) 8 5. 77 (m，1H)，5. 10 (dd, J = I. 2Hz，J = 16Hz, 1H)，5. 03 (dd, J=L 2Hz, J = 8. 8Hz, 1H)，3. 41-3. 59 (m,2H)，3. 29 (m, 1H)，3. 05 (m, 1H)，2. 78 (m, 1H) ,2. 01 (m, 1H)，I. 62-1. 73 (m, 1H)，I. 46 (m, 9H)。步驟B :在氮?dú)鈿夥眨?5°C下對(duì)叔丁基(R)-3-(2_(甲基磺酰基氧基)乙基)吡咯烷-I-甲酸酯(792g例7，步驟B的產(chǎn)物， 2. 5mol)、碘化鈉(484g，3. 27mol)和1，2_ 二甲氧基乙烷(7. 2L)的溶液進(jìn)行攪拌4. 5h，該時(shí)間GC分析表明反應(yīng)已進(jìn)行完全。將溶液冷卻至< 10°C，分批加入固體叔丁醇鉀(484g，4. 32mol) (I. 25h的加入時(shí)間)同時(shí)將溫度保持在15 °C以下。在5 °C下攪拌反應(yīng)混合物Ih，緩 慢地^h)將其溫?zé)嶂?0 0C，并在20 V下攪拌Ih。通過(guò)硅藻土(400g基于干燥的量)襯墊過(guò)濾該溶液。用1，2_ 二甲氧基乙烷(1.6kg)洗滌濾餅。在真空下濃縮合并的濾液，將半固體殘留物與庚烷(6. 0L) 一起攪拌2h。通過(guò)過(guò)濾來(lái)除去固體物(用440mL庚烷洗滌濾餅)，在20°C真空條件下濃縮濾液從而得到455g9 (90. 7%純度)。對(duì)該原料的樣品(350g)在20-23torr下進(jìn)行分次蒸餾以得到296g純化的9 (bp130-133°C )(經(jīng) GC 分析純度> 99% )。(R)-5-((E)-2-吡咯烷_(kāi)3_基乙烯基)嘧啶(11)的合成向(R)-叔-丁基3-乙烯基吡咯烷-I-甲酸酯(25g，127mmol)、5-溴嘧啶(30. 3g，190mmol)、1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵(2. llg, 3. 8mmol)和醋酸鈉(18. 8gr, 229mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(250mL)溶液中通入氮?dú)鈒h，加入醋酸鈀(850mg，3. 8mmol)。以40°C /h的速度將該反應(yīng)混合物加熱至150°C，攪拌16h。將混合物冷卻至10°C，同時(shí)保持內(nèi)部溫度低于20°C時(shí)用水(750mL)淬滅。加入MTBE (300mL)，接著將其通過(guò)硅藻土(40g基于干燥的量)。室溫下攪拌該懸浮液lh，將其通過(guò)硅藻土床過(guò)濾。將殘留物用MTBE (2 X IOOmL)進(jìn)行洗滌，將濾液移至在頂部裝有攪拌器和裝有活性炭(40g)的2-L的容器中。室溫下攪拌該懸浮液2h，通過(guò)硅藻土將其過(guò)濾。用MTBE (2 X IOOmL)洗滌殘留物，在真空下濃縮濾液從而得到28. 6g橙色油狀物。將該油狀物溶解在MTBE(IOOmL)中，加入Si-Thiol (2. 0g，
I.46mmol硫醇/g, Silicycle Inc.)。在氮?dú)庵?，室溫下攪拌該懸浮?h,通過(guò)細(xì)濾器對(duì)其進(jìn)行過(guò)濾，并盛放在玻璃容器中。在30分鐘的時(shí)間內(nèi)向6M HCl (70mL)溶液中加入該濾液同時(shí)將內(nèi)部溫度保持在20°C至23°C之間。劇烈攪拌該混合物lh，除去有機(jī)層。用45wt% K0H(50mL)堿化剩余的水層，用氯仿(300mL)萃取所得的懸浮液一次。在真空(45°C的浴溫)下蒸發(fā)溶劑，得到呈紅色油狀的16. Og (R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶游離堿(71.8% )，將其立即溶入異丙醇(50mL)中，并用于鹽的制備。鹽將(R)-5-((E)-2-吡咯烷_(kāi)3_基乙烯基)嘧啶游離堿(10mg，0. 057mmol)溶解于醋酸異丙酯或乙腈中。溫?zé)嶂?0°C，用0.5(半)至I. 1(一)等量的相應(yīng)酸處理該溶液，緩慢地冷卻至室溫過(guò)夜。然后在不加熱真空的條件下蒸發(fā)溶劑。實(shí)施例2 :體內(nèi)方法左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙亞型選擇性NNR激動(dòng)劑化合物A，會(huì)刺激a 4 P 2 *和會(huì)在較小程度上刺激a 6 *NNRs0毒理學(xué)研究表明其在嚙齒類、狗和靈長(zhǎng)類動(dòng)物中有較低的外周副作用的發(fā)生率和合理的治療指數(shù)，這與其主要相互作用于a 40 2*和a 6*煙堿受體相一致。在大鼠的安全性研究中，在這些實(shí)例中編碼為HH的化合物A使用強(qiáng)游離堿(acute free base) 口服劑量高達(dá)30mg/kg，并未與任何明顯的有害作用相關(guān)。不存在行為的敏感性，并且化合物A(PDl)不會(huì)增加大鼠的運(yùn)動(dòng)行為活性，顯示出低濫用傾向。試驗(yàn)使用如前文所述的6-OHDA(SigmaChemical Co. , St. Louis,MO)單側(cè)損傷的雄性 Sprague-Dawley 大鼠進(jìn)行(Cenci 等，1998 ；Cenci.，2002)。以3 y g/ 的濃度將6-0HDA溶解于0. 02%抗壞血酸/鹽水中。化合物A通過(guò)滲透微型真空泵(Alzet model 2006 ;Durect公司，Cupertino, CA,USA)進(jìn)行全身性地輸注，以3. 6 iU/天的速度遞送藥物6周。選擇此途徑是因?yàn)楫?dāng)通過(guò)該途徑連續(xù)給藥時(shí)，煙堿會(huì)最有效地減少左旋多巴誘導(dǎo)的大鼠AIM s (Bordia, T. , Campos, C. , Huang, L. Z. & Quik,M.,“Continuous And Intermittent Nicotine Treatment Reduces L-3,4-Dihydroxyphenylalanine (L-Dopa)-Induced Dyskinesias In A Rat Model Of Parkinson' s Disease，，，J Pharmacol Exp Ther 327:239-47(2008))。泵預(yù)先裝滿了滅菌水或水中的化合物A堿(pH 7. 0)從而用來(lái)提供所需劑量(0.03、0. 1、0. 3mg/kg/天)。在異熒烷麻醉的情況下，按照廠商說(shuō)明，沿著肩胛骨間的頸部的背面皮下植入所述的微型真空泵。植入之后，給予大鼠用于術(shù)后疼痛的丁丙諾啡(0.02mg/kg sc)。在開(kāi)始藥物治療后兩周，大鼠被給予每日單次皮下注射6至8mg/kg左旋多巴甲酯加15mg/kg節(jié)絲肼。在兩個(gè)位點(diǎn)的每一個(gè)位點(diǎn)上,注射
2U I等分部分，共8至12 y g進(jìn)入右側(cè)上行多巴胺纖維叢。在2分鐘的時(shí)間內(nèi)向靶區(qū)輸注6-0HDA，用保留在注射部位上的套管保持另外2分鐘。損傷后兩到三周，在自動(dòng)行為測(cè)定儀(R0T0MAX, AccuScan Instruments Inc. Columbus, Ohio, USA)上對(duì)大鼠進(jìn)行藥物誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為測(cè)試。將每只大鼠放在一個(gè)圓柱形玻璃室中30分鐘以適應(yīng)環(huán)境，之后進(jìn)行4. Omg/kg苯丙胺(Sigma Chemical Co. , St. Louis, MO)腹膜內(nèi)(ip)給藥。監(jiān)測(cè)苯丙胺誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為90分鐘，用形成了至少200次同側(cè)轉(zhuǎn)動(dòng)/90分鐘的大鼠進(jìn)行下一步研究。 如本文所述進(jìn)行了左旋多巴誘導(dǎo)的AMs測(cè)定。試驗(yàn)劑量和試驗(yàn)方案參見(jiàn)圖I。行為測(cè)試在早晨9至10AM之間進(jìn)行。測(cè)定了三種不同的AMs亞型包括(I)軸向張力障礙，頸和上身的對(duì)側(cè)扭曲體態(tài)；(2)異?？谏噙\(yùn)動(dòng)，刻板下頜運(yùn)動(dòng)和對(duì)側(cè)舌突出；和(3)異常前肢運(yùn)動(dòng)，重復(fù)性有節(jié)律抽搐或?qū)?cè)前肢的張力障礙體態(tài)和/或?qū)?cè)爪的抓動(dòng)。參見(jiàn)，例如，Carta M, Lindgren HS, Lundblad M, Stancampiano R, Fadda F, Cenci MA(2006),Role of Striatal L-DOPA in the Production of Dyskinesia in 6-hydroxydopamineLesioned Rats, J Neurochem 96 :1718-172 ;Cenci MA, Lee CS, Bjorklund A(1998)L-DOPA—induced dyskinesia in the rat is associated with striatal overexpressionof prodynorphin-and glutamic acid decarboxylase mRNA ；Eur J Neurosci 10 2694-2706 ；Cenci MA, Whishaw IQ, Schallert T(2002)Animal models of neurologicaldeficits how relevant is the rat , Nat Rev Neurosci 3 :574-579 ；Bordia, T.,Campos, C. , Huang, L. Z. &Quik, M. ,“Continuous And Intermittent Nicotine TreatmentReduces L~3,4-Dihydroxyphenylalanine(L-Dopa) -Induced Dyskinesias In A RatModel Of Parkinson' s Disease”，J Pharmacol Exp Ther327 :239-47 (2008))。如下所述，對(duì)這三種AM亞型的每一種以0至4分來(lái)對(duì)大鼠進(jìn)行評(píng)分1 =偶爾；2 =經(jīng)常；3 =連續(xù)的但通過(guò)感覺(jué)分散可中斷的；和4 =連續(xù)的，嚴(yán)重的，通過(guò)感覺(jué)分散不能中斷的。通過(guò)不知情評(píng)定者用最初20分鐘基線時(shí)間，和用不知情評(píng)定者隨后左旋多巴注射3h時(shí)間對(duì)動(dòng)物進(jìn)行AMs評(píng)估。在20分鐘期間的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行不同亞型的AMs評(píng)估，從而每只動(dòng)物總共得到9期測(cè)試。因此每只動(dòng)物可能得到的最高分為108分(每期(session)的最高分=12 ；在3h時(shí)間內(nèi)的期數(shù)=9)。所有的統(tǒng)計(jì)分析使用GraphPad Prism (GraphPad Software, Inc, San Diego,CA.)進(jìn)行。值為平均值土SEM大鼠指示數(shù)，并代表了來(lái)自一至兩個(gè)單獨(dú)測(cè)定期的數(shù)據(jù)。用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-Whitney檢驗(yàn))分析組間評(píng)定分?jǐn)?shù)偏差。就時(shí)間過(guò)程研究而言，使用的是重復(fù)測(cè)量的方差分析(ANOVA),然后是Bonferroni多重比較檢驗(yàn)。0. 05水平被認(rèn)為顯著。有趣地是，通過(guò)多重評(píng)估0. I和 0. 311^/1^/天劑量的化合物4(^)1)會(huì)明顯減少總的或某些(軸向、口和/或前肢)亞型中的左旋多巴誘導(dǎo)的AIMs (參見(jiàn)圖2)。這包括在第二次和第三次評(píng)估期間(用0. lmg/kg/天)和在第四次評(píng)估期間(用0. 3mg/kg/天)的總AIMs的明顯減少和在第一次和第五次AMs評(píng)估期間的總AMs的減少趨勢(shì)。重要地是,化合物A(PDl)沒(méi)有產(chǎn)生可檢測(cè)到的副作用(即，作用于體重、體溫、理毛行為(grooming)、排尿、排便、分泌)。實(shí)施例3 :運(yùn)動(dòng)功能由于減少AMs的藥物會(huì)加重帕金森綜合征，因此還使用肢體不對(duì)稱使用試驗(yàn)或圓柱體試驗(yàn)，測(cè)試了化合物A(roi)對(duì)帕金森氏病大鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響(參見(jiàn)圖3)。在單側(cè)黑質(zhì)紋狀體損傷后，用如前所述的探索性活動(dòng)分析，將圓柱體試驗(yàn)用作行為功能指標(biāo)。將動(dòng)物放在一個(gè)透明的圓柱體(20cm直徑X 30cm高)或透明的籠中，在5分鐘的時(shí)間內(nèi)對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。在圓柱體/籠子后面放一面鏡子以便當(dāng)大鼠遠(yuǎn)離評(píng)定者時(shí)可以使評(píng)定者觀察前肢的運(yùn)動(dòng)。根據(jù)受損前肢(對(duì)側(cè)損傷)使用數(shù)與使用肢體運(yùn)動(dòng)的總數(shù)相比的百分?jǐn)?shù)來(lái)表現(xiàn)墻壁探索(Wall exploration)。兩名評(píng)定者，一名對(duì)大鼠的治療狀況不知情，進(jìn)行評(píng)級(jí)。相關(guān)性分析得出高度的受試者之間可靠性(R = 0.99)。該測(cè)試還提供了一個(gè)優(yōu)勢(shì)就是其不需要使用多巴胺能藥物(即苯丙胺)來(lái)測(cè)定異常情況。大鼠被置于透明的圓柱體內(nèi)，這會(huì)引起垂直探索和產(chǎn)生未受損和受損前肢接觸碰撞受評(píng)估圓柱體的百分?jǐn)?shù)(Cenci，M.A.和M. Lundblad, “Post-Versus Presynaptic Plasticity In L-Dopa-Induced Dyskinesia，，，J Neurochem, 99 :381-392(2006) ；Tillerson, J. L.等，“Forced Limb-Use Effects OnThe Behavioral And Neurochemical Effects Of 6-Hydroxydopamine,y, J Neurosci 21,4427-35(2001);和 Meredith, G. E. &U. J. Kang, “Behavioral Models Of Parkinson ' sDisease In Rodents A New Look At An Old Problem”，Mov Disord,21 :1595-606(2006)。結(jié)果表明以試驗(yàn)期間兩個(gè)試驗(yàn)劑量的任何一個(gè)劑量的化合物A (roi)不會(huì)加重基線運(yùn)動(dòng)功能(無(wú)左旋多巴)，也不會(huì)在使用左旋多巴治療時(shí)加重增加的肢體使用。實(shí)際上還顯示出較小的改善趨勢(shì)?？傊?，化合物A(TOl)看起來(lái)是一種可減少左旋多巴誘導(dǎo)的AMs、而不加重帕金森綜合征的有前途的候選產(chǎn)品(見(jiàn)圖3)。除非另有說(shuō)明，化合物A、PDU (R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧唆，以其半-粘酸鹽的形式給藥，而劑量是以游離堿當(dāng)量計(jì)算。根據(jù)和取決于所選擇的特定的活性化合物或是否存在藥物載體以及制劑類型和所用的給藥方式，觀察到的具體藥理反應(yīng)可能會(huì)變化，根據(jù)本發(fā)明的實(shí)踐操作對(duì)由此產(chǎn)生的此類預(yù)期的變化或不同進(jìn)行預(yù)期。雖然本文對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方案進(jìn)行了舉例說(shuō)明和詳細(xì)描述，但本發(fā)明并不限于此。以本發(fā)明典型示例的形式提供了上文的詳細(xì)說(shuō)明，其不應(yīng)被解釋為對(duì)本發(fā)明作出的任何限制。修改對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的，并且未背離本發(fā)明精神的所有的修改也被認(rèn)為是包含在所附權(quán)利要 求范圍內(nèi)的。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)給予(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽治療左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的方法。
2.一種通過(guò)給予(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的方法。
3.—種通過(guò)給予(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作或發(fā)展的方法。
4.一種通過(guò)給予(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽改善帕金森綜合征的方法。
5.一種用左旋多巴和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病的方法。
6.如權(quán)利要求5所述的方法,其中所述的對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病為帕金森氏病。
7.一種通過(guò)給予以a 4 P 2 *和a 6 P 2 * NNRs為靶點(diǎn)的化合物治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)展的方法。
8.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于治療左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的藥物中的用途。
9.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的藥物中的用途。
10.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作和發(fā)展的藥物中的用途。
11.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽在制備用于改善帕金森綜合征的藥物中的用途。
12.左旋多巴和(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽各自在制備治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病的藥物中的用途。
13.如權(quán)利要求12所述的用途，其中所述的對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病為帕金森氏病。
14.以a4P2*和a632 *NNRs為靶點(diǎn)的化合物在制備治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)展的藥物中的用途。
15.一種用于治療左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
16.一種用于減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
17.一種用于延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作或發(fā)展的化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
18.一種用于改善帕金森綜合征的化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
19.一種聯(lián)合左旋多巴治療對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病的化合物，(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
20.如權(quán)利要求19所述的化合物，其中所述的對(duì)左旋多巴有響應(yīng)的疾病為帕金森氏病。
21.一種化合物，其以a4P2*和a 63 2 *NNRs為靶點(diǎn)，用于治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或者延緩左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)展。
22.—種試劑盒，包含 a.左旋多巴； b.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽；和 c.關(guān)于用于治療、減少左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)，或延遲左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙或異常不自主運(yùn)動(dòng)的發(fā)作或發(fā)展的治療方案的說(shuō)明書(shū)。
23.一種藥物組合物，包含 a.左旋多巴； b.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽；和 c.一種或多種藥學(xué)可接受的載體。
24.一種聯(lián)合，包含 a.左旋多巴；和 b.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽。
25.一種治療方案，包含 a.左旋多巴；和 b.(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽， 其中(R)-5-((E)-2-吡咯烷-3-基乙烯基)嘧啶或其藥學(xué)可接受的鹽與左旋多巴同時(shí)給藥。
全文摘要
本發(fā)明包括用于治療或預(yù)防左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙的方法、用途和化合物。
文檔編號(hào)A61K31/506GK102802630SQ201080026720
公開(kāi)日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2010年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月17日
發(fā)明者K·G·喬丹, S·R·萊徹沃斯, M·本徹瑞弗 申請(qǐng)人:塔加西普特公司