專利名稱：用于治療精神分裂癥和雙相型障礙的組織激肽釋放酶的制作方法
技術領域：
本發(fā)明提供治療包括精神分裂癥，精神分裂癥譜系(schizophrenic spectrum)的相關病癥和雙相型障礙的精神病障礙的方法，包括給予組織激肽釋放酶(KLKl)、其變體或活性片段。
背景技術：
精神分裂癥是使人衰弱的精神疾病，其總共影響世界人口的大約(Lang et al，Cell Physiol Biochem. ,2007,20 :687_702)。這種復雜的慢性腦疾病表現(xiàn)出很多癥狀， 所述癥狀被歸類為陽性、陰性或認知損傷類型，并且在青春期或者成年早期出現(xiàn)。研發(fā)來治療精神分裂癥的第一種藥物——被稱作典型抗精神病藥——是高親和性多巴胺D2受體拮抗劑，其防止過高水平的多巴胺，多巴胺通常被認為是形成所述疾病的精神病陽性癥狀的主要原因。該類藥物最終不再受人歡迎，原因是它們普遍的不良副作用 (嗜睡、倦睡和錐體束外癥狀，如遲發(fā)性運動障礙)，其導致不依從和精神病復發(fā)的可能性增大(Lieberman et al, Am JPsychiatiy, 2003,160 1396-1404) ； (Asher-Svanum et al, BMC Psychiatry,2006,6 8) ； (Lieberman et al, NEngl J Med.，2005，353 1209-23)。非典型抗精神病藥被設計為通過減少對多巴胺D2受體的親和性或者增加對5-羥色胺受體靶向的親和性而減少副作用。這類藥物表現(xiàn)出錐體束外癥狀副作用減少，但其缺點是有其他副作用，包括體重增加和糖尿病發(fā)作(Leiberman et al.，2005)。此外，非典型抗精神病藥不能充分地減輕陰性和認知損傷癥狀(Leiberman et al.，2005)。精神分裂癥的另一種治療方法是使用情緒穩(wěn)定劑，例如鋰。情緒穩(wěn)定劑治療所述疾病的躁狂(陽性癥狀)和抑郁(陰性癥狀)。然而，鋰必須是以幾乎對身體有毒的劑量使用。因此，需要持續(xù)監(jiān)測以防止能夠致命的腎毒性、脫水、抽搐和震顫。此外，鋰還有常見的不良副作用，例如麻木、眩暈感和倦睡。一篇廣泛的綜述表明單獨的鋰治療對精神分裂沒有作用(Leucht et al. , Cochrane Database Syst Rev.，20073 :CD001258)。雙相型障礙(BP)被認為影響美國2. 6 %的人口(Muzina et al.，Ann Clin Psychiatry 2007,19(4) :305_12)。然而，因為缺乏一致性的診斷，受該疾病影響的實際人數(shù)可能更高。雙相型障礙的特征是一段時期的抑郁和一段時期的躁狂，兩者都極大地干擾日常生活。雙相型障礙能被分為兩類(I型雙相型障礙和II型雙相型障礙)，這兩類都有抑郁和躁狂的癥狀。躁狂被定義為思緒飛快、語言急速、活力水平升高和激動不安以及高漲的自負感，而抑郁階段包括自我認同缺乏、孤獨、悲傷、挫敗感，并且可能包括自殺想法。這種使人衰弱的病癥需要醫(yī)療介入，通常包括使用控制所述癥狀的藥物。
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常見的治療包括情緒穩(wěn)定劑、抗躁狂劑、抗驚厥劑和抗癲癇劑，它們可包括，例如鋰、氯丙嗪、氨基苯基吡啶酮、阿立哌唑(aripiprazole)、奧蘭扎平(olanzapine)和氟西汀(fluoxetine)。如前所述，這些藥物有一些不良副作用。特別是已知鋰能夠引起惡心、 嘔吐、震顫和腹瀉。在躁狂期治療時經(jīng)常需要住院治療(Muzina Prim Care 2007，34 (3) 521-50)。目前可用于精神分裂癥和雙相型障礙的治療遠不足以令人滿意。不良副作用和不能充分減輕癥狀的問題仍然存在，因此，需要更好的治療方法(Javitt et al. , Biol Psychiatry. 1999,45 :668_679)。對精神分裂癥的進一步研究已經(jīng)揭示在其起因下的其他機制。不適當?shù)墓劝滨０沸盘杺鬟f是一個關鍵因子，而非多巴胺，現(xiàn)在多巴胺被認為是不適當谷氨酰胺信號傳遞的結(jié)果(Buchanan et al.，Schizophr Bull,2007,33 1120-1130)； (Depoortere et al, NearopsvchopharmacoloRY, 2005, 30 1963-1985)。在動物模型中使用苯環(huán)己哌啶(phencyclidine，PCP)，一種N-甲基D-天冬氨酸 (NMDA)受體(NMDAR)拮抗劑，可通過防止谷氨酰胺與腦細胞中NMDA受體的NR2部分的結(jié)合再現(xiàn)精神分裂癥的所有癥狀(陽性、陰性和認知損傷MJavitt et al.，1999)。犬尿喹啉酸(kynurenic acid)(天然存在的NMDA受體拮抗劑)被發(fā)現(xiàn)在患有精神分裂癥的人中水平異常高，并且與記憶問題有關(Chess et al.，Schizophr Bull，2007，33 :797_804)。此夕卜，高達80%的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者患有與抗-DNA抗體(與腦中NMDA受體的NR2部分交叉反應)引起的精神分裂癥類似的精神病和認知損傷。這種表現(xiàn)型可通過在動物模型中將人 SLE 抗 DNA 抗體轉(zhuǎn)入腦而重現(xiàn)(DeGiorgio et al.，Nat Med.，2001，7 1189-93)。NMDA受體拮抗作用的分子分析顯示在PI3K/Akt/GSK_3 β途徑中Akt和 GSK-3 β 的磷酸化減少(Lei et al.，Neuropsychopharmacology, 2007, doi 10. 1038/ sj. npp. 1301511)。與正常個體相比，精神分裂癥患者表現(xiàn)出Akt活性下降(Emamian et al. ,Nat Med.，2004，36 131-137)，這樣它對GSK-3 β的抑制性調(diào)節(jié)可能受損。GSK-3 β是導致神經(jīng)元變性和凋亡的一種絲氨酸_蘇氨酸激酶，其可導致神經(jīng)元突觸連接性和體積的喪失。在精神分裂癥中，這造成相關的陰性和認知損傷癥狀(Benitez-King et al. ,Curr. Drug Targets CNS Neurol Disord.，2004，3 :515_33)。值得注意的是，誘發(fā)暫時性幻覺陽性樣癥狀的精神活性藥物破壞神經(jīng)元細胞骨架(變性)(Benitez-King et al.，2004)，而 β-聯(lián)蛋白(P-cateninM—種受GSK_3i3活性抑制的轉(zhuǎn)錄因子)的過表達引起類似于鋰治療的情緒穩(wěn)定(Gould etal.，NeuropsvchopharmacoloRY, 2007，32 :2173_83)。Rowe等證明當給予鋰以治療雙相型障礙時鋰調(diào)節(jié)GSK-3 (Rowe etal.，Neurosci Biobehav Rev. 2007,31(6) :920_31)。這表明鋰可有效治療雙相型障礙以及由GSK(P13K/ Akt/GSK-3i3)調(diào)節(jié)途徑機能障礙引起的其他病癥。其他分子分析表明神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(neurotrophin)例如神經(jīng)生長因子(NGF)的水平在精神分裂癥患者中下降。成熟的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白通常通過與它們合適的Trk受體結(jié)合 (這還引起它們表達增加)而活化所述PI3K/Akt/GSK-3i3途徑。神經(jīng)營養(yǎng)蛋白因它們提供神經(jīng)保護、誘導軸突生長和關聯(lián)的突觸連接性以及神經(jīng)發(fā)生的能力而聞名。本文公開的治療方法將解決在目前治療精神分裂癥和雙相型障礙的方法中沒有發(fā)現(xiàn)的所述疾病的多種癥狀。


圖1-3顯示被認為引起精神分裂癥和雙相型障礙的生物化學途徑和KLKl的可能作用路徑的簡圖形式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括治療受P13K/Akt/GSK_3i3途徑影響的精神疾病的方法，包括給予組織激肽釋放酶(KLKl)，其變體或活性片段。精神疾病可以是精神分裂癥、精神分裂癥譜系的相關病癥或雙相型障礙。本發(fā)明的一個方面提供治療精神分裂癥和相關病癥的癥狀的方法，包括給予組織激肽酶、其變體或活性片段。另一方面，精神分裂癥的癥狀可以是陽性癥狀、陰性癥狀或認知癥狀。陽性癥狀可以包括但不限于妄想、幻覺和緊張癥行為。陰性癥狀可以包括但不限于缺乏情感、不喜愛活動、低能量、對生活缺乏興趣、失語癥、不適當?shù)纳缃患寄?、不能交朋友和與世隔絕。認知癥狀包括但不限于注意力/信息處理、感覺門控、問題解決、處理速度、 語言和視覺的學習和記憶以及工作記憶的損傷。在另一個方面，本發(fā)明包括治療雙相型障礙或者精神分裂癥第一次發(fā)作的前驅(qū)期或復發(fā)時的方法，包括給予KLKl或其變體或活性片段。本發(fā)明的一個實施方案包括治療雙相型障礙的癥狀，包括給予KLKl或其變體或活性片段。雙相型障礙的一個癥狀可以是連續(xù)情緒混亂，其包括抑郁和躁狂兩個時期。在另一個方面，本發(fā)明包括通過給予KLKl或其變體或活性片段來增加對腦細胞的神經(jīng)保護的方法。神經(jīng)保護可以包括但不限于神經(jīng)營養(yǎng)蛋白(例如NGF)的增加和/或 GSK-3 β活性的下降。在另一個方面，本發(fā)明包括通過給予KLKl或其變體或活性片段來防止腦中細胞凋亡的方法。防止凋亡的方法包括但不限于增加例如NGF的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白和/或降低 GSK-3 β 活性。在另一個方面，本發(fā)明提供通過給予KLKl或其變體或活性片段來防止腦中的神經(jīng)變性。防止神經(jīng)變性的方法包括但不限于增加例如NGF的神經(jīng)營養(yǎng)蛋白和/或降低 GSK-3 β 活性。在本發(fā)明的另一個方面，可口服給予KLKl或其變體或活性片段?？诜o藥可以是經(jīng)腸給藥?？诜苿┛梢允且后w、丸劑、溶液劑、片劑、緩釋膠囊、腸溶衣膠囊或糖漿?？诜委焺┝靠梢允欠秶鸀槊刻旒s1至約1000國際單位(IU)的最大劑量。在本發(fā)明的另一個方面，KLKl或其變體或活性片段能夠鼻內(nèi)給藥。用于鼻內(nèi)給藥的制劑可以是軟膏劑、膏劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑和油劑等。鼻治療劑量是每天約1至約5000IU的最大劑量。本發(fā)明的另一個方面包括如本文所述的治療和預防方法，還包括同時給予可用于治療精神分裂癥或雙相型障礙的治療性化合物?？捎糜谥委熅穹至寻Y和/或雙相型障礙的治療性化合物包括但不限于典型和非典型抗精神病藥以及例如鋰和丙戊酸的情緒穩(wěn)定劑。本發(fā)明的另一方面包括為口服給藥配制的藥物組合物，包含約1至1000IU的KLKl 或其變體或活性片段，還可選地包含可藥用賦形劑，并且還可選地包含如上所述的其他治療性化合物。本發(fā)明的另一個方面包括為鼻內(nèi)給藥配制的藥物組合物，包含約1至約5000IU的 KLKl或其變體或活性片段，可選地包含可藥用賦形劑。
具體實施例方式“組織激肽釋放酶”或“KLK1”是一種主要因其通過將激肽原切割為賴氨酰緩激肽 (胰激肽)而控制高血壓的作用而為人所知的絲氨酸蛋白酶(Yousef et al. . , Endocrine Rev. 2001,22 184-204)。在所述KLK家族中有很多酶，但是KLKl看起來是遍在酶或多靶標作用酶。本文使用的術語“組織激肽釋放酶”與以下術語同義血管舒緩素(callicrein)、 舒血管素(glumorin)、padreatin、怕杜丁(padutin)、姨舒血管素(kallidinogenase)、 bradykininogenase>(pancreatic kallikrein) > onokrein P> dilminal D、 cbpot-Padutin、尿激肽釋放酶(urokallikrein)或尿激肽釋放酶(urinary kallikrein)。
組織激肽釋放酶多肽具有以下序列NP 001001911 GI :50054435 野豬(Sus scrofa)1-17 信號肽18-24 前肽25-263 成熟肽>gi I 50054435 | ref | NP_001001911. 11 組織激肽釋放酶 1 [野豬]MWSLVMRLALSLAGTGAAPPIQSRIIGGRECEKDSHPWQVAIYHYSSFQCGGVLVDPKWVLTAAHCKNDNYQVWLGRHNLFENEVTAQFFGVTADFPHPGFNLSLLKNHTKADGKDYSHDLMLLRLQSPAKITDAVKVLELPTQEPELGSTCQASGWGSIEPGPDDFEFPDEIQCVELTLLQNTFCADAHPDKVTESMLCAGYLPGGKDICMGDSGGPLICNGMWQGITSWGHTPCGSANKPSIYTKLIFYLDWINDTITENP(SEQ ID NO 1)另一個實施方案包括NP_002248 GI 4504875 人(Homo sapiens)1-18 信號肽19-24 前肽25-262 成熟肽>gi I 4504875 | ref | NP_002248. 11 組織激肽釋放酶 1 前蛋白原[人]MWFLVLCLALSLGGTGAAPPIQSRIVGGWECEQHSQPWQAALYHFSTFQCGGILVHRQWVLTAAHCISDNYQLWLGRHNLFDDENTAQFVHVSESFPHPGF匪SLLENHTRQADEDYSHDLMLLRLTEPADTITDAVKVVELPTEEPEVGSTCLASGWGSIEPENFSFPDDLQCVDLKILPNDECKKAHVQKVTDFMLCVGHLEGGKDTCV⑶SGGPLMCDGVLQGVTSWGYVPCGTPNKPSVAVRVLSYVKWIEDTIAENS(SEQ ID NO 2)術語“活性片段”是指保留有全長KLKl多肽活性的KLKl多肽的較小部分。
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初始或參考多肽的“變體”或“突變體”是具有以下性質(zhì)的多肽1)其氨基酸序列不同于所述初始或參考多肽的氨基酸序列，并且2)其是通過天然或人工(人為的)突變從所述初始或參考多肽衍生而來的。這樣的變體包括它的氨基酸缺失、插入、取代或它們的結(jié)合。本文中變體氨基酸是指與初始或參考多肽序列(例如源抗體或抗原結(jié)合片段的序列)的相應位置上的氨基酸不同的氨基酸?？梢灾圃烊笔?、插入和取代的任何結(jié)合來實現(xiàn)最終的變體或突變體構(gòu)建體，條件是所述最終的構(gòu)建體具有所需要的功能特點。所述氨基酸變化還可以改變所述多肽的翻譯后加工，例如改變糖基化位點的數(shù)量和位置。美國專利 No. 5，534，615描述了產(chǎn)生多肽的氨基酸序列變體的方法，其以引用的方式明確地納入本文。“野生型”或“參考”序列或者“野生型”或“參考”蛋白質(zhì)/多肽的序列可以是通過引入突變而從中衍生出變體多肽的參考序列。總之，給定蛋白質(zhì)的“野生型”序列是自然界中最常見的序列。類似地，“野生型”基因序列是自然界中最常見的基因的序列?？赏ㄟ^天然方法或通過人工誘導方法將突變引入“野生型”基因(從而引入其編碼的蛋白質(zhì))。這樣的方法的產(chǎn)物是初始“野生型”蛋白質(zhì)或基因的“變體”或“突變體”。對于本文中指出的多肽，“氨基酸序列同一性百分比(%)”被定義為在比對候選序列和參考序列并——如果必要的話——引入空位以實現(xiàn)最大序列同一性百分比后，并且不將任何保守取代考慮為序列同一性的一部分的情況下，所述候選序列中與參考序列的氨基酸殘基相同的氨基酸殘基的百分比。可通過本領域技術中的各種方法來實現(xiàn)以確定氨基酸序列同一性百分比為目的的比對，所述方法例如，使用公眾可獲得的計算機軟件，如 BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領域技術人員能夠確定度量比對的合適參數(shù)，包括在被比對序列的全長中實現(xiàn)最大比對所需的任何算法。ALIGN-2程序可通過加利福尼亞南圣弗朗西斯科的Genentech公司公開獲得。 對于本文目的，給定氨基酸序列A對于、與或相對給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(其還能夠被表述為對于、與或相對給定氨基酸序列B具有或包括一定％氨基酸同一性的給定氨基酸序列A)計算如下100X 分數(shù) X/Y，其中X是在A和B的程序比對中由序列比對程序計為相同匹配的氨基酸殘基的數(shù)目，Y是B中氨基酸殘基的總數(shù)。應理解當氨基酸序列A的氨基酸長度不等于氨基酸序列B 的長度時，A對B的％氨基酸序列同一性會不等于B對A的％氨基酸序列同一性?！昂怂嵝蛄型恍园俜直?％ ) ”被定義為在比對候選序列和參考多肽編碼核酸序列并——如果必要的話——引入空位以實現(xiàn)最大序列同一性百分比后，所述候選序列中與參考多肽編碼核酸序列中的核苷酸相同的核苷酸的百分比?？赏ㄟ^本領域技術中的各種方法來實現(xiàn)以確定核酸序列同一性百分比為目的的比對，所述方法例如，使用公眾可獲得的計算機軟件，如 BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2 或 Megalign (DNASTAR)軟件?？赏ㄟ^已知方法確定度量比對的合適參數(shù)，包括在被比對序列的全長中實現(xiàn)最大比對所需的任何算法。對于本文目的，給定核酸序列C對于、與或相對給定核酸序列D的％核酸序列同一性(其還能夠被表述為對于、與或相對給定核酸序列D具有或包括一定％核酸同一性的給定核酸序列C)計算如下
IOOX 分數(shù) W/Z，其中W是在C和D的程序比對中由序列比對程序計為相同匹配的核苷酸的數(shù)目， 并且其中Z是D中核苷酸的總數(shù)。應理解當核酸序列C的長度不等于核酸序列D的長度時，C對D的核酸序列同一性％會不等于與D對C的核酸序列同一性％。在本領域中，“同源序列”，例如與已知序列具有80%同一性的序列，具有與所述已知序列相似的功能是很常見的。術語“氨基酸”以其最廣義含義使用，意欲包括天然存在的La _氨基酸或殘基。本文使用常用的天然存在氨基酸的單字母和三字母縮寫(Lehninger，A.L. , Biochemistry, 2d ed.，pp. 71-92，(1975)，WorthPublishers, New York)。所述術語還包括所有 D-氨基酸以及化學修飾的氨基酸，例如氨基酸類似物，天然存在的但通常不被納入蛋白質(zhì)的氨基酸，例如正亮氨酸，以及具有本領域已知為氨基酸所特有性質(zhì)的化學合成化合物。例如，氨基酸的定義中包括可使肽化合物具有與天然苯丙氨酸或脯氨酸相同構(gòu)象限制的Phe或Pro類似物或模擬物。這樣的類似物或模擬物在本文中被稱為氨基酸的“功能等同物”。氨基酸的其他實例由 Roberts 禾口 Vellaccio 在The Peptides Analysis, Synthesis, Biology, Gross and Meiehofer, Eds.，Vol. 5 ρ 341，Academic Press, Inc, N. Y. 1983 中列出，其以引用方式納入本文。術語“蛋白質(zhì)”具有比肽長的氨基酸序列?！半摹卑?至約50個氨基酸殘基。術語“多肽”包括蛋白質(zhì)和肽。蛋白質(zhì)的實例包括但不限于抗體、酶、凝集素和受體；脂蛋白和脂多肽；以及糖蛋白和糖多肽。“融合蛋白”和“融合多肽”是指具有共價連接在一起的兩個部分的多肽，其中每個部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物學特性，例如在體外或在體內(nèi)的活性。特性還可以是簡單的化學或物理特性，例如與目的抗原的結(jié)合，對反應的催化等。所述兩個部分可通過單個肽鍵直接連接或者通過包含一個或多個氨基酸殘基的肽連接物連接。所述兩個部分和所述連接物一般會互相處于閱讀框中。所述融合多肽的兩個部分優(yōu)選來自異源或不同的多肽。 術語“治療有效量”是指能夠有效“減輕”或“治療”受試者或哺乳動物的疾病或障礙的組合物的量。總的來說，減輕或治療疾病或障礙涉及減少與所述疾病或障礙相關的一個或多個癥狀或醫(yī)學問題。在一個實施方案中，“治療有效量”是治療精神分裂癥和精神分裂癥相關的癥狀、精神分裂癥第一次發(fā)作的前驅(qū)期、復發(fā)、精神分裂癥譜系的相關病癥和雙相型障礙的量。術語“治療”是指抑制、減輕和治愈疾病和病癥或其癥狀?！爸委煛笔侵钢委熜灾委熀皖A后性或預防性措施，其中目的是預防或者減緩(減少)目的病理病癥或障礙。治療包括對患有精神分裂癥或雙相型障礙的患者給予KLKl或其變體或活性片段，包括“治療有效量”，所述“治療有效量”包括預后性的量(例如，足以減輕或治愈上述疾病或其癥狀的量)。 可通過精神病學評估來評價所述疾病的成功治療和改善。術語“預防(防止)”是指預后(prophylaxis)，即使得疾病、疾病病癥、疾病病理和/或疾病癥狀不發(fā)生。可通過給予治療有效量KLKl或其變體或活性片段來預防精神分裂癥和雙相型障礙。本文使用的“治療有效量”包括預后量(例如，有效預防上述疾病或其癥狀的量)?？赏ㄟ^精神病學評估來評價對所述疾病的成功治療和改善。
術語“精神分裂癥”是指一種慢性心理/精神障礙，其特征是精神病(與現(xiàn)實失去聯(lián)系)、幻覺(錯誤感知)、妄想(錯誤信念)、紊亂的語言和行為、感受平淡(情緒范圍受限)、認知缺陷(理解和解決問題受損)以及職業(yè)和社交功能障礙。精神分裂癥的癥狀可由專業(yè)醫(yī)生基于病史、面談、身體檢查和實驗測試來歸類。本文使用的術語“精神分裂癥” 包括所有的精神分裂癥亞型，包括但不限于混亂型、緊張型、妄想型、殘余型和未定型(The Merck Manual of Diagnosis and Therapy，2006)。與精神分裂癥相關的障礙包括a)短暫精神障礙，b)妄想障礙和C)情感分裂性精神障石尋(schizoaffective disorder)。術語“雙相型障礙”或“BP”或“躁狂抑郁病”是指一種慢性心理/情緒疾病，其特征是有顯著的情緒變化，包括抑郁期和興奮躁狂期。BP由專業(yè)醫(yī)生基于個人或病史、面談和身體檢查來診斷。術語“躁狂”或“躁狂期”是指個體表現(xiàn)出以下部分或全部特征的時期思緒飛快、 語言急速、活力水平升高和激動不安以及高漲的自負感、興奮、判斷力差、失眠、注意力受損和侵略性。術語“抑郁”是指個體情緒低落的時期，所述情緒低落是指產(chǎn)生包括但不限于悲傷和沮喪感的精神狀態(tài)，其能夠引起破壞性行為。術語“第一次發(fā)作的前驅(qū)期”是指在完全發(fā)展的疾病中特征性表現(xiàn)可見之前的疾病的早期癥狀和跡象。在精神分裂和雙相型障礙中，這代表潛隱精神失常期(period of prepsychotic disturbance)或者慣常行為失常的發(fā)作和顯著精神病癥狀首次出現(xiàn)之間的間隔期。前驅(qū)期可以在精神分裂癥患者或患有雙相型障礙的個體的首次行為發(fā)作之前，或者是所述發(fā)作復發(fā)之前的時期。術語“精神分裂癥復發(fā)”是指以前患過精神分裂癥的健康個體的癥狀退化至他們患有精神分裂癥時的狀態(tài)，這由精神科醫(yī)生診斷。術語“雙相型障礙復發(fā)”是指以前患過雙相型障礙的健康個體的癥狀退化至他們患有雙相型障礙時的狀態(tài)，這由精神科醫(yī)生診斷。術語“增加神經(jīng)保護”或“增加的神經(jīng)保護”是指抑制神經(jīng)元損傷和死亡。術語“同時給藥”和“同時給予”是指混合地給予KLKl和治療性化合物。例如，藥物組合物可以是相繼、同時或在不同的時間給予的各自的化合物或各自的藥物組合物。優(yōu)選同時給予KLKl和治療性化合物。術語“其他治療性化合物”是指KLKl或其變體或片段以外的用于治療精神分裂癥或雙相型障礙的治療劑。用于治療精神分裂癥或雙相型障礙的其他治療性化合物包括但不限于典型和非典型抗精神病藥和情緒穩(wěn)定劑，例如鋰和丙戊酸。術語“精神分裂癥譜系”是指密切相關的精神病病癥，其通常共有多種癥狀，但嚴重程度不一，從輕微到嚴重。精神分裂樣人格障礙在所述譜系中屬于輕度，精神分裂型人格屬于中度，而精神分裂癥在所述譜系中屬于重度。在整個譜系中存在的常見癥狀和認知損傷可歸因于共有的遺傳和環(huán)境事件，其導致與正常個體相比暫時性的異常腦構(gòu)造。所述譜系的較嚴重情況，慢性精神分裂癥，表現(xiàn)出腦構(gòu)造的額外異常，例如額葉缺陷，其可造成更嚴重的癥狀，而所述譜系的較輕微情況，精神分裂樣人格障礙，沒有這樣的額外異常并且有可能更好地補償所述暫時性缺陷，因此癥狀較輕微。
術語“陽性癥狀”是指但不限于妄想、幻覺、思維紊亂和緊張癥運動行為 (catatonic motor behavior)0術語“陰性癥狀”是指但不限于缺乏情感、不喜愛活動、精力少、對生活缺乏興趣、 失語癥、avolition、不適當?shù)纳缃患寄?、不能交朋友和與世隔絕。術語“認知癥狀”是指但不限于注意力/信息處理、感覺門控、問題解決、處理速度、語言和視覺學習以及記憶和工作記憶的能力。治療精神分裂癥和雙相型障礙的方法本發(fā)明提供用于治療精神分裂癥、精神分裂癥譜系的相關病癥和雙相型障礙的方法。一個實施方案包括通過將組織激肽釋放酶或其變體或活性片段給予哺乳動物以治療所述哺乳動物的精神分裂癥、精神分裂癥譜系的相關病癥或雙相型障礙的方法?？煽诜虮莾?nèi)給藥。精神分裂癥、精神分裂癥譜系的相關病癥或雙相型障礙的病理學包括腦細胞和其他神經(jīng)組織的凋亡。給予KLKl會提供神經(jīng)保護，S卩，KLKl會抑制腦細胞的凋亡。KLKl活化緩激肽B2受體，致使PI!3K/Akt/GSK-3i3途徑的活化。Akt的這種活化防止凋亡，并且藉此產(chǎn)生神經(jīng)保護效應。KLKl引起的緩激肽B2受體的活化還活化對GSK-3i3的調(diào)節(jié)性抑制。 該過程在圖2中以圖示方式顯示。此外，對GSK-3i3的抑制會防止/抑制β-聯(lián)蛋白磷酸化，其之后防止/抑制遍在蛋白依賴的聯(lián)蛋白降解。聯(lián)蛋白的活性能夠改善由給予鋰實現(xiàn)的情緒穩(wěn)定能力。該過程在圖1中以圖示方式顯示。與鋰同時給予KLKl或其變體或活性片段進一步改善情緒穩(wěn)定。KLKl或其變體或活性片段還能夠與神經(jīng)營養(yǎng)蛋白相互作用以產(chǎn)生免于凋亡和神經(jīng)變性的神經(jīng)保護，促進軸突生長并且提高神經(jīng)元突觸連接性。給予KLKl或其變體或活性片段能夠修飾神經(jīng)營養(yǎng)蛋白，例如NGF，以提供神經(jīng)保護效應，從而治療精神分裂癥、精神分裂癥的病癥和雙相型障礙。NGF的前體形式由KLKl切割進行翻譯后修飾，成為成熟形式， 這樣NGF之后就能夠通過Trk A活化PI!3K/Akt/GSK-3 β途徑。該過程在圖3中以圖示方式顯示。NGF與Trk A結(jié)合致使Akt活化，該結(jié)合僅能在NGF被切割為其成熟形式時發(fā)生。 給予KLKl或其變體或活性片段還通過KLKl修飾神經(jīng)營養(yǎng)蛋白而治療精神分裂癥、精神分裂癥譜系病癥和雙相型障礙。藥物組合物本發(fā)明的藥物組合物包括可口服或鼻內(nèi)給予的制劑。適于鼻內(nèi)給藥的制劑包括粉末劑、顆粒劑、溶液劑、滴劑、軟膏劑、膏劑、洗劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑、油劑等。 可通過常規(guī)方法將本發(fā)明的溶液劑或懸浮劑直接施用于鼻腔，所述常規(guī)方法例如使用點滴器、移液管或噴霧器?？梢砸詥蝿┝炕蚨鄤┝啃问教峁┲苿Ｈ芤簞┛梢允菬o菌、等滲或低滲的，或者適于通過注射或其他方式給藥，并且可包含合適的佐劑、緩沖劑、防腐劑和鹽。例如鼻滴劑的溶液劑可包含抗氧化劑、緩沖劑等。粉末或顆粒形式的藥物組合物可與溶液結(jié)合，以及與稀釋劑、分散劑和/或表面活性劑結(jié)合。用于氣霧給藥的制劑包括為鼻內(nèi)給藥設計的制劑?；钚猿煞挚商峁┯诤泻线m噴射劑的加壓容器，所述噴射劑例如含氯氟烴(CFC)(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其他合適氣體。氣霧劑還可包含表面活性劑，例如卵磷脂。藥物劑量可由計量閥控制?；蛘撸钚猿煞挚梢砸愿煞鄣男问教峁?，例如，在合適的粉末基質(zhì)中的所述化合物的粉末混合物，所述粉末基質(zhì)例如乳糖、淀粉或淀粉衍生物(例如羥丙甲基纖維素)和聚乙烯吡咯烷(PVP)。所述粉末載體可在鼻腔內(nèi)形成凝膠。粉末組合物可以以單位劑量形式存在于例如膠囊或由諸如明膠制成的藥包或者可借助吸入器從中給予所述粉末的吸塑包裝。配制用于鼻內(nèi)給藥的藥物組合物包含約1至約5000IU的KLKl或其變體或活性片段，可選地還包含可藥用賦形劑。KLKl或其變體或活性片段的鼻內(nèi)劑量可以是以下劑量 每天約1至約5000IU、每天約1至約4000IU、每天約1至約3000IU、每天約1至約2500IU、 每天約1至約2000IU、每天約1至約1000IU、每天約1至約750IU、每天約1至約500IU、每天約1至約400IU、每天約1至約300IU、每天約1至約250IU、每天約1至約200IU、每天約 1至約150IU、每天約1至約100IU、每天約1至約75IU、每天約1至約50IU、每天約1至約 50IU、每天約1至約25IU、每天約1至約20IU、每天約1至約15IU、每天約1至約10IU、每天約1至約5IU、每天約5至約1000IU、每天約10至約1000IU、每天約15至約1000IU、每天約20至約1000IU、每天約25至約1000IU、每天約50至約1000IU、每天約75至約1000IU、 每天約100至約1000IU、每天約150至約1000IU、每天約200至約1000IU、每天約250至約 1000IU、每天約300至約1000IU、每天約400至約1000IU、每天約500至約1000IU、每天約 750至約1000IU、每天約10至約100IU、每天約10至約250IU、每天約10至約500IU、每天約50至約250IU、每天約50至約500IU、每天約100至約250IU、每天約100至約500IU或每天約250至約750IU。適于口服給藥的制劑包括液體劑、丸劑、溶液劑、片劑、緩釋膠囊、腸溶衣膠囊或糖漿。配制用于口服給藥的藥物組合物包含約1至1000IU的KLKl或其變體或活性片段，可選地還包含可藥用賦形劑。KLKl或其變體或活性片段的口服劑量可以是以下劑量每天約1 至約1000IU、每天1至約750IU、每天1至約500IU、每天1至約400IU、每天1至約300IU、 每天1至約250IU、每天1至約200IU、每天1至約150IU、每天1至約100IU、每天1至約 75IU、每天1至約50IU、每天1至約50IU、每天1至約25IU、每天1至約20IU、每天1至約 15IU、每天1至約10IU、每天1至約5IU、每天5至約1000IU、每天10至約1000IU、每天15 至約1000IU、每天20至約1000IU、每天25至約1000IU、每天50至約1000IU、每天75至約 1000IU、每天100至約1000IU、每天150至約1000IU、每天200至約1000IU、每天250至約 1000IU、每天300至約1000IU、每天400至約1000IU、每天500至約1000IU、每天750至約 1000IU、每天10至約100IU、每天10至約250IU、每天10至約500IU、每天50至約250IU、 每天50至約500IU、每天100至約250IU、每天100至約500IU或每天約250至約750IU。藥物組合物的給藥治療腦疾患的常規(guī)給藥方式包括口服以及靜脈內(nèi)給藥途徑。這些方式并不總是理想的?；衔锏目诜o藥導致生物利用率有限(溶解性、第一輪肝臟降解、血腦屏障限制) 以及可能引起不利腸胃副作用的延時釋放問題。但是，組織激肽釋放酶(KLKl)似乎能夠穿過并且可能繞過血腦屏障從而對腦起作用。靜脈內(nèi)(i.v.)給藥需要受訓醫(yī)療工作人員，這對于衛(wèi)生保健系統(tǒng)是耗費時間并且昂貴的，它還可能引起患者順應性問題。還存在與靜內(nèi)脈給藥相關的風險(例如注射部位的感染)。鼻內(nèi)給藥可使藥物“迅速作用”，因為藥物能夠以更直接的途徑到達腦。鼻內(nèi)給藥
11方便并且實際上消除了患者順應性問題。粘膜和粘膜下層上皮細胞是選擇透過性的。因此， 通過鼻內(nèi)途徑，例如KLKl的蛋白質(zhì)可以穿過和繞過血腦屏障。鼻內(nèi)給予KLKl可直接對腦起作用，從而使外周作用最小化，這歸因于鼻通路上部嗅區(qū)的參與。鼻內(nèi)給藥的物質(zhì)可行進兩種可能的途徑——神經(jīng)元內(nèi)途徑和神經(jīng)元外途徑。神經(jīng)元內(nèi)途徑是肽被攝入嗅神經(jīng)元內(nèi)，在此肽沿著軸突移動以繞過血腦屏障。通過嗅區(qū)上皮細胞的獨特細胞間隙是可使肽擴散進入蛛網(wǎng)膜下隙的神經(jīng)元外途徑。神經(jīng)元外途徑是更優(yōu)選的，因為通向腦更迅速，避免了神經(jīng)元內(nèi)途徑中涉及的蛋白水解降解(Born et al. . , Nat. Neurosci. 2002,5(6) :514-6)，并且可在腦的多個位點迅速引起生物學效應(Throne et al. ·，Neuroscience,2004，127(2) :481-96)。盡管能夠經(jīng)口遞送，然而優(yōu)選的給藥途徑是鼻內(nèi)給藥，因為鼻內(nèi)給藥能將KLKl更直接地遞送至腦中所需的作用位置。藥物組合物可通過口服或鼻內(nèi)給藥。適于鼻內(nèi)給藥的制劑包括軟膏劑、膏劑、洗齊U、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑、油劑等?？赏ㄟ^常規(guī)方法，例如用點滴器、移液管或噴霧器將溶液劑或懸浮劑直接施用于鼻腔。制劑可以以單劑量或多劑量的形式提供。對于點滴器或移液管，可以給予患者合適的、預定體積的溶液劑或懸浮劑。噴霧劑可通過計量霧化噴射泵給予。用于氣霧給藥——特別是給至呼吸道的氣霧給藥——的制劑包括鼻內(nèi)給藥?；钚猿煞挚梢蕴峁┯趲в泻线m噴射劑的加壓容器中，所述噴射劑例如含氯氟烴(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或者二氧化碳或其他合適氣體。氣霧劑還可包含合適的表面活性劑，例如卵磷脂。藥物劑量可由計量閥控制。或者，活性成分可以以干粉的形式提供，例如所述化合物在合適的粉末基質(zhì)中的粉末混合物，所述粉末基質(zhì)例如乳糖、淀粉或淀粉衍生物(例如羥基丙基甲基纖維素)和聚乙烯吡咯烷(PVP)。所述粉末載體可在鼻腔內(nèi)形成凝膠。所述粉末組合物可以以單位劑型存在，例如膠囊、明膠藥包或吸塑包裝?？赏ㄟ^吸入器來給予粉末劑。本發(fā)明的一個方法包括將化合物通過跨神經(jīng)元逆向和順向轉(zhuǎn)運機制運送至腦的患病區(qū)域。通過所述轉(zhuǎn)運系統(tǒng)將神經(jīng)學試劑運送至腦能夠以數(shù)種方式實現(xiàn)。一種技術包括將KLKl單獨遞送至鼻腔。在這種情況下，KLKl的化學特性可便于其轉(zhuǎn)運至腦的患病神經(jīng)元。輔助物質(zhì)能夠?qū)LKl遞送至周圍感覺神經(jīng)元并且/或者沿著神經(jīng)途徑至腦的功能障礙區(qū)域?？墒褂眯嵘窠?jīng)途徑的周圍神經(jīng)細胞將KLKl運送至與嗅球連接的大腦區(qū)域的受損神經(jīng)元。本發(fā)明的一種方法將KLKl運送至哺乳動物的鼻腔。優(yōu)選將KLKl遞送至鼻腔內(nèi)上三分之一的嗅區(qū)，特別是嗅上皮，以促進所述試劑被運送至周圍嗅神經(jīng)元，而不是呼吸上皮內(nèi)的毛細血管。通過神經(jīng)系統(tǒng)而不是循環(huán)系統(tǒng)將KLKl轉(zhuǎn)運至腦，這樣KLKl可被遞送至腦中的受損神經(jīng)元。為向嗅神經(jīng)元遞送KLKl，可將KLKl單獨地或以藥物組合物的形式與其他物質(zhì)結(jié)合給至位于鼻腔內(nèi)上三分之一的嗅區(qū)。組合物可以以粉末或液體噴霧劑、鼻滴劑、凝膠劑或軟膏劑的形式通過軟管或?qū)Ч堋⑼ㄟ^注射器、通過packtail、通過拭子或者通過粘膜下層灌注來鼻內(nèi)給藥?？诜o藥包括溶液劑、片劑、緩釋膠囊、腸溶衣膠囊和糖漿的經(jīng)腸給藥。
KLKl能夠與載體和/或其他佐劑結(jié)合以形成藥物組合物?？赡艿淖魟┌ǖ幌抻贕M-1、磷脂酰絲氨酸(PQ和例如聚山梨醇酯80的乳化劑。其他的添加性物質(zhì)包括但不限于親脂性物質(zhì)，例如神經(jīng)節(jié)苷脂和磷脂酰絲氨酸(PS)?？蓪LKl單獨地或者與可用于治療精神分裂癥或雙相型障礙的第二種治療性化合物結(jié)合給至鼻腔?？捎糜谥委熅穹至寻Y或雙相型障礙的第二種治療性化合物包括但不限于三氟拉嗪(trifluoperazine)、二鹽酸三氟噻噸(f luanxol)、洛沙平 (Ioxapac)、琥珀酸洛沙平(Ioxitane)、茶堿(etrafon)、羥哌氯丙嗪(trilafon)、鹽酸氯丙嗪(thorazine)、氟哌唆酉享(halopoidol)、輕哌氟丙嗪(f luphenazine decanoate)、 阿立哌唑(aripiprazole)、氯氮平(clozapine)、齊拉西酮(ziprasidone)、利斯哌酮 (resperidone)、questiapire、奧蘭扎平(olanzapine)、伊潘立酮(iloperidone) (Titan/ Novartis), DTA 20 IA(Knoll)、DV 127090 (Solvayl Lundbeck)、ORG 5222 (Organon)、 奧沙奈坦(Osanetant)(Sanofi-Synthelabo)禾口 MEM 3454(Memoray Pharmaceuticals Corp.)。可用于治療雙相型障礙的第二種治療性化合物包括但不限于阿立哌唑、阿塞納平(asenapine)(研究的)、酰胺咪嗪(carbamaz印ine)、氟西汀(fluoxetine)和 alanzapine、拉莫三嗪(Iamotrigine)、鋰、奧蘭扎平、奧卡西平(oxcartaz印ine)、喹迪平 (quetiapine)、維思通(risperidone)、托吡酯(topirimate)、丙戊酸、丙戊酸、雙丙戊酸鈉 (divalproex sodium)禾口齊拉西酮(ziprasidone)。在本發(fā)明的一個實施方案中，KLKl能夠與由親脂物質(zhì)制成的微團結(jié)合。微團能夠改變鼻膜的透過性并且增強所述試劑的吸收。親脂微團可包含神經(jīng)節(jié)苷脂，尤其是GM-I神經(jīng)節(jié)苷酯和磷脂酰絲氨酸(PS)。一旦KLKl穿過鼻上皮，KLKl即沿著嗅神經(jīng)途徑運送。KLKl能夠在嗅系統(tǒng)中移動。 具體地，神經(jīng)營養(yǎng)物質(zhì)和神經(jīng)發(fā)生(neuritogenic)物質(zhì)已經(jīng)被證明容易進入神經(jīng)細胞膜并且對神經(jīng)細胞受體部位有親和性。實施例實施例1 大鼠中用KLKl治療后對驚跳(startle)的前脈沖抑制缺陷的防止在正常大鼠中，在前的前脈沖減弱驚跳脈沖反射，但是，在用PCP處理的大鼠中， 缺乏感覺運動門控導致前脈沖抑制缺陷，因此驚跳脈沖反射更強烈。這種驚跳的前脈沖抑制缺陷見于精神分裂癥。將在室溫下自由飲食和飲水的適應的雄性Sprague-Dawley或Wistar大鼠分為5 個處理組a) 10皮下給予溶媒(vehicle)和鼻內(nèi)給予溶媒b) 10皮下給予PCP和鼻內(nèi)給予溶媒c) 10皮下給予PCP和腹膜內(nèi)給予氯氮平(Clozapine)
d) 10以劑量I的KLKl處理14天后皮下給予PCPe) 10以劑量II的KLKl處理14天后皮下給予PCP使用的劑量為PCP 0. 5至3. Omg/kg，氯氮平1至15mg/kg以及KLK10. 01至 1000IU. KLKl在前脈沖抑制測試前1小時給予。氯氮平在前脈沖抑制測試前 30分鐘給予。PCP在前脈沖抑制測試前 15分鐘給予。將動物逐個置于標準驚跳室中，令其在所述驚跳測試開始前在所述室中適應2-5
13分鐘的時間。以偽隨機的方式對每只動物進行10-15次非驚跳脈沖(僅背景噪音)試驗， 10-15次驚跳脈沖試驗(100-120dB)，10-15次低前脈沖(50_90dB) +驚跳試驗，10-15次中前脈沖(50-90dB) +驚跳試驗和高前脈沖(50-90dB) +驚跳試驗，試驗間間隔為10-30秒。通過室傳感器以驚跳脈沖反射來測量運動并記錄為驚跳振幅。前脈沖抑制被定義為在存在前脈沖的條件下的驚跳振幅與無前脈沖條件下的振幅相比的百分比減少(100-(100X平均前脈沖(低、中或髙)+驚跳/平均驚跳)。用PCP處理之后，僅PCP處理載體組與非PCP處理小組相比顯示出前脈沖抑制百分比的統(tǒng)計學顯著的下降。作為陽性對照的氯氮平處理組與PCP處理載體組相比顯示出前脈沖抑制百分比統(tǒng)計學顯著的升高。用KLKl處理使PCP處理后的前脈沖抑制恢復，因此與僅PCP處理載體組相比，前脈沖抑制百分比有統(tǒng)計學顯著的提高。^MM 2 :KLK1處理減Φ強i白游泳測Ii式中PCP 曾加的靜I卜時間將適應的Sprague-Dawley大鼠分為對照組和處理組(3組)。兩個處理組各自接受腹膜內(nèi)注射10mg/kg/天的PCP，為期14天，而對照組接受鹽水。在第15天，其中一個處理組接受0. 01-1000IU的KLKl 30-60分鐘。強迫游泳試騎當被放置在充滿水的玻璃杯中沒有可能逃跑時，嚙齒動物就靜止不動了，這是非條件性應激反射(還被稱作“行為絕望”)。Noda等證實重復PCP注射誘導該反射(Br. J. Pharmacol, 1995，116 :2531-2537)。用于治療精神分裂癥、特別是陰性癥狀的治療劑減少了該反射。通過將大鼠放置在加了 30cm的25°C水的Plexiglas 圓筒(高60.5cm，直徑 29cm)中使其進行為期六分鐘的強迫游泳試驗。記錄靜止時間以確定該組的平均值。KLKl能夠減少以PCP處理的小鼠的靜止時間。因此，PCP+KLK1組與僅PCP處理組相比顯示出平均靜止時間的意料之外的和顯著的減少。實施例3 =KLKl減少新物體識別(NOR)任務中亞慢性PCP誘導的認知缺陷新物體識別(NOR)任務依賴于動物探索新物體而不是熟悉物體的自然傾向。探索新物體標識學習和記憶(認知)。與未受影響的對照相比對新物體的探索時間減少標識認知損傷。將適應的雌性Hooded-Lister大鼠分為對照組和處理組。兩個處理組接受腹膜內(nèi)注射10mg/kg/天的PCP，為期7天，而對照組接受鹽水，之后的7天所有組都不處理。在第 15天所述PCP處理組之一接受0. 01-1000IU的KLK130-60分鐘。將大鼠各自放置在帶有黑壁的開放Plexiglas 盒(52cm L ；52cm W ；31cm H)中， 其中放置有兩個高度接近的物體。然后將大鼠從所述盒中移出一小會兒時間(1分鐘)并放回去，其中一個物體已經(jīng)被新物體代替。確定所述動物對每個物體的探索時間。探索時間包括聞、舔、觸摸、站或坐在所述物體上花費的時間。在該測試之前將大鼠引入所述盒中，這樣它們會對該環(huán)境熟悉，因此這樣的刺激不會影響實驗結(jié)果。每當從所述盒中將大鼠移出就將所述物體和盒本身用10%的酒精清洗以除去殘留的嗅覺信息。所有試驗均由不清楚所述處理組的實驗者拍攝并分析。僅PCP處理組因PCP誘導的認知損傷而不能夠區(qū)分所述熟悉物體和所述新物體之間的差異。同樣地，對所述熟悉物體和新物體的平均探索時間之間也沒有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計上顯著的差異。PCP+KLK1處理組顯示出KLKl能夠抑制PCP誘導的認知損傷，因為觀察到對所述新物體的平均探索時間與對所述熟悉物體的平均探索時間相比出乎意料地并且顯著地增加。該結(jié)果表明KLKl能夠減少認知缺陷樣癥狀，其被認為是對神經(jīng)疾病認知缺陷的再現(xiàn)。實施例4 =KLKl處理防丨h(huán) PCP-誘導的通過GSK-3B活化的神經(jīng)變件使用不含Mg2+或Ca2+的冷Hanks平衡鹽溶液(HBSS)解離Sprague-Dawley大鼠胚胎前腦細胞(E18-E19)，以IOX IO5細胞/ml重鋪在聚賴氨酸(5mg/ml)包被的多孔板上，并在添加了 0. 05mM L-谷氨酰胺和 10% B27 (Invitrogen)的 Neurobasal (Invitrogen， Carlsbad, CA)培養(yǎng)基中在37°C和5% CO2下培養(yǎng)。每四天更換培養(yǎng)基。14天之后，將細胞用ΙμΜ PCP處理如下不同的時間0、1、3、6、12、對和48小時。 在所述具體時間點的最后用PBS沖洗所述細胞，并用RIPA緩沖液(Pierce Biotechnology, Rockford, IL)裂解。在20000Xg下離心所述細胞提取物，收集上清液，使用BCA蛋白分析試劑盒(Pierce)確定蛋白質(zhì)濃度。使用30 μ g的蛋白質(zhì)細胞提取物，對每個時間點進行蛋白質(zhì)印跡以確定磷酸化GSK-3i3S9(失活的)和活化的胱天蛋白酶_3(17kDa)的存在并定量。將每個時間點的相對帶密度與對照(非PCP處理細胞裂解物)相比并以相對于對照的百分比標繪在密度圖中。所述圖顯示，在僅PCP處理的細胞中，磷酸化GSK-3i3S9的水平隨時間下降而活化的胱天蛋白酶_3(17kDa)的水平隨時間增加，一直到M小時時間點。這表明PCP處理致使GSK-3i3活化，其導致活性GSK-3i3引起的下游胱天蛋白酶_3的活化。這種趨勢標識經(jīng)由胱天蛋白酶-3活化的神經(jīng)細胞死亡，其是精神病疾病中觀察到的神經(jīng)變性的標志。對用PCP (ΙμΜ)和KLKl (在0.001至1000IU的劑量范圍內(nèi))處理的細胞重復此相同過程如下不同時間0、1、3、6、12、對和48小時。得到的圖顯示加入KLKl防止PCP誘導的神經(jīng)變性。GSK-3 β S9磷酸化隨時間下降和活性胱天蛋白酶-3隨時間增加的趨勢被KLKl 減弱。實施例5 在小鼠中用KLKl處理后防止驚跳缺陷的前脈沖抑制將室溫下自由飲食的適應的雄性小鼠分為5感染處理組a) 10皮下給予溶媒和鼻內(nèi)給予溶媒b) 10皮下給予PCP和鼻內(nèi)給予溶媒c) 10皮下給予PCP和腹膜內(nèi)給予氯氮平d) 10以劑量I的KLKl處理14天后皮下給予PCPe) 10以劑量II的KLKl處理14天后皮下給予PCP使用的劑量為PCP 1. 0至10. 0mg/kg,氯氮平1至15mg/kg和KLK10. 01至 1000IU. KLKl在前脈沖抑制測試前1小時給予。氯氮平在前脈沖抑制測試前 30分鐘給予。PCP在前沖抑制測試前 15分鐘給予。將動物逐個放在標準驚跳室中，令其在所述測試開始前在所述室中適應2-5分鐘的時間。以偽隨機的方式對每只動物進行10-15次非驚跳脈沖(僅背景噪音)試驗，10-15 次驚跳脈沖試驗(100-120dB)，10-15次低前脈沖(50_90dB) +驚跳試驗，10-15次中前脈沖 (50-90dB) +驚跳試驗和高前脈沖(50-90dB) +驚跳試驗，試驗間間隔為10-30秒。通過室傳感器以驚跳脈沖反射來測量運動并記錄為驚跳振幅。前脈沖抑制被定義為在存在前脈沖的條件下驚跳振幅與無前脈沖條件下的振幅相比的百分比減少(100-(100X平均前脈沖^ Mm+驚跳/平均驚跳)。 用PCP處理之后，僅PCP處理載體組與非PCP處理小組相比顯示出前脈沖抑制百分比統(tǒng)計學顯著的下降。作為陽性對照的氯氮平處理組與PCP處理載體組相比顯示出前脈沖抑制百分比統(tǒng)計學顯著的升高。用KLKl處理使PCP處理后前脈沖抑制恢復，因此與僅 PCP處理載體組相比，前脈沖抑制百分比有統(tǒng)計學顯著的提高。
權(quán)利要求
1.一種治療精神疾病的方法，包括給予組織激肽釋放酶、其片段或變體；其中所述精神疾病具有機能障礙的PI3K/Akt/GSK-3 β途徑。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述精神疾病是精神分裂癥。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述精神疾病是雙相型障礙。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述精神疾病是精神分裂癥譜系。
5.權(quán)利要求1-4任一項的方法，其中所述組織激肽釋放酶、其片段或變體包含選自SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2的氨基酸序列。
6.權(quán)利要求1-4任一項的方法，其中所述組織激肽釋放酶、其片段或變體包含與選自 SEQ ID NO. :1和SEQ ID NO. :2的序列具有80%同一性的氨基酸序列。
7.權(quán)利要求1-6任一項的方法，其中所述給予包括以口服給藥的方式每天給予1至 1000國際單位。
8.權(quán)利要求1-6任一項的方法，其中所述給予包括以口服給藥的方式每天給予1至 5000國際單位。
9.權(quán)利要求1-8任一項的方法，其中所述給予與常規(guī)精神疾病藥物結(jié)合給予。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述常規(guī)精神疾病藥物選自三氟拉嗪、二鹽酸三氟噻噸、 洛沙平、琥珀酸洛沙平、茶堿、羥哌氯丙嗪、鹽酸氯丙嗪、氟哌啶醇、羥哌氟丙嗪、阿立哌唑、 氯氮平、齊拉西酮、利斯哌酮、questiapire、奧蘭扎平、伊潘立酮、DTA 20IA、DV 127090、ORG 5222、奧沙奈坦、MEM 3454、阿立哌唑、阿塞納平、酰胺咪嗪、氟西汀、alanzapine、拉莫三嗪、 鋰、loanzapine、奧卡西平、喹迪平、維思通、托吡酯、丙戊酸、雙丙戊酸鈉和齊拉西酮。
11.組織激肽釋放酶、其片段或變體用于制備用于治療精神疾病的藥物的用途，所述精神疾病具有機能障礙的PI3K/Akt/GSK-3 β途徑。
12.組織激肽釋放酶、其片段或變體用于治療精神疾病的用途，所述精神疾病具有機能障礙的 PI3K/Akt/GSK-3 β 途徑。
13.權(quán)利要求11-12任一項的用途，其中所述精神疾病選自精神分裂癥、雙相型障礙和精神分裂癥譜系。
14.權(quán)利要求11-13的用途，其中所述組織激肽釋放酶、其片段或變體包含選自SEQID Ν0. 1和SEQ ID N0. 2的氨基酸序列。
15.權(quán)利要求11-14任一項的用途，其中所述組織激肽釋放酶、其片段或變體包含與選自SEQ ID NO. :1和SEQ ID NO. :2的序列具有80%同一性的氨基酸序列。
全文摘要
本發(fā)明包括治療精神疾病的方法，所述精神疾病包括精神分裂癥、精神分裂癥譜系相關的病癥和雙相型障礙，所述方法包括給予組織激肽釋放酶(KLK1)、其變體或活性片段。本發(fā)明包括包含KLK1、其變體或活性片段的組合物。
文檔編號A61P25/00GK102458453SQ201080027271
公開日2012年5月16日 申請日期2010年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日
發(fā)明者M·威廉姆斯, M·查爾斯 申請人:森諾姆尼有限公司