專利名稱：具有不同釋放速率的納米載體加工組分的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及合成納米載體的組合物、以及相關(guān)方法，這些合成納米載體包括從合成納米載體差異地釋放的免疫調(diào)節(jié)劑和抗原。
背景技術(shù)：
普通接種疫苗策略包括與佐劑一起給予抗原。然而，缺少關(guān)于在這兩種試劑之間的生物的相互作用和如何控制它們的遞送可以提供最佳體內(nèi)效果的信息。對于允許最佳體內(nèi)效果的、與佐劑一起遞送抗原的新方法連同相關(guān)組合物存在需要。發(fā)明概述本發(fā)明的多個方面涉及包括合成納米載體的組合物，這些合成納米載體包括偶合到合成納米載體的免疫調(diào)節(jié)劑、以及偶合到合成納米載體的抗原，其中根據(jù)以下關(guān)系，該免疫調(diào)節(jié)劑和抗原從合成納米載體解離IA(rel) % /A(rel)%^ 1. 2，其中IA(rel) %被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量除以在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量加上在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，保留在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取做跨合成納米載體樣品的平均數(shù)，并且其中 A(rel) %被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的抗原的重量除以在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的抗原的重量加上在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，保留在合成納米載體中的抗原的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)由免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分偶合到合成納米載體上。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑共價偶合到合成納米載體上。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑被膠囊化在合成納米載體內(nèi)。在某些實施方案中，抗原經(jīng)由抗原偶合部分偶合到合成納米載體上。在一些實施方案中，抗原共價偶合到合成納米載體上。在某些實施方案中， 抗原被膠囊化在合成納米載體內(nèi)。在一些實施方案中，抗原是一種B細(xì)胞抗原。在某些實施方案中，B細(xì)胞抗原是衍生自傳染媒介物的抗原。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是免疫原性差的抗原。在某些實施方案中，B細(xì)胞抗原是一種濫用的物質(zhì)或其一部分或者是一種上癮的物質(zhì)或其一部分。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是一種毒素或危險的環(huán)境因素。在某些實施方案中，B細(xì)胞抗原是一種變應(yīng)原、一種退行性疾病抗原、一種癌抗原、一種特應(yīng)性疾病抗原、或一種代謝病抗原。在一些實施方案中，抗原是一種T細(xì)胞抗原。在某些實施方案中，T細(xì)胞抗原是一種MHC I類抗原。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑是一種佐劑。在一些實施方案中，佐劑包括iToll樣受體(TLR)激動劑(例如TLR 3激動劑、TLR 7激動劑、TLR 8激動劑、TLR 7/8 激動劑、或TLR 9激動劑)。在一些實施方案中，TLR激動劑是一種咪唑并喹啉。在某些實施方案中，咪唑并喹啉是瑞喹莫德或咪喹莫特。在一些實施方案中，TLR激動劑是一種免疫刺激核酸(例如免疫刺激DNA或免疫刺激RNA)。在某些實施方案中，免疫刺激核酸是一種含有CpG的免疫刺激核酸。在一些實施方案中，佐劑包括一種通用T細(xì)胞抗原。在某些實施方案中，合成納米載體包括一種或多種可生物降解的聚合物。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)由免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分偶合到一個或多個可生物降解的聚合物上。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑共價偶合到一種或多種可生物降解的聚合物上。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分包括一個酰胺鍵。在某些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分包括一個酯鍵。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑包括一個靜電鍵。在一些些實施方案中，可生物降解的聚合物包括聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、或聚 (丙交酯乙交酯)共聚物。在某些實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該可生物降解的聚合物具有范圍從800道爾頓至10，000道爾頓的重均分子量。在一些實施方案中，該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(APC)靶向特征。在一些實施方案中，合成納米載體包括脂基納米顆粒，聚合物納米顆粒，金屬納米顆粒，表面活性劑基乳液，樹枝狀化合物，巴奇球，納米線，病毒狀顆粒，肽或蛋白基顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一種組合的納米顆粒。在某些實施方案中，本發(fā)明相關(guān)的組合物進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可以接受的賦形劑。本發(fā)明的其他方面涉及包括疫苗的組合物，這些疫苗包括任何本發(fā)明相關(guān)的組合物。本發(fā)明的其他方面涉及包括將本發(fā)明相關(guān)的任何組合物給予受試者的方法。在一些實施方案中，組合物以有效誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的量存在。在一些實施方案中，受試者患有癌、傳染病、非自身免疫性代謝病、退行性疾病、或依賴癥。附圖簡要說明

圖1示出由攜帶煙堿抗原和佐劑的合成納米載體誘導(dǎo)的煙堿特異性抗體，并且在 24小時可檢測地從這些載體釋放佐劑，而不是抗原。詳細(xì)說明在詳細(xì)說明本發(fā)明以前，已理解本發(fā)明并不局限于具體舉例說明的材料或工藝參數(shù)，因為這些當(dāng)然可以變化。還已理解在此使用的術(shù)語只是為了說明本發(fā)明的具體實施方案的目的，并不旨在限制使用可替代的術(shù)語來說明本發(fā)明。在此引用的所有出版物、專利和專利申請，無論在前或在后，都出于所有目的通過引用以其全文結(jié)合在此。如在本說明書和附加權(quán)利要求中使用的那樣，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)指示物，除非該內(nèi)容清楚地另外指明。例如，引用“一種聚合物”包括兩種或更多種這樣的分子的混合物，引用“一種溶劑”包括兩種或更多種這樣的溶劑的混合物，引用“一種粘合劑”包括兩種或更多種這樣的材料的混合物，并且以此類推。
序論在提供了與免疫調(diào)節(jié)劑一起遞送抗原以更佳地誘導(dǎo)對抗原的免疫應(yīng)答的方式的方面，本發(fā)明是有用的。提供的組合物和方法允許免疫調(diào)節(jié)劑在抗原以前釋放或伴隨抗原釋放。這樣的釋放可以提供強(qiáng)并且長期的免疫應(yīng)答，并且因此在使用疫苗用于預(yù)防和治療目的方面具有特別的興趣。抗原可以被偶合到合成納米載體上，這樣在一些實施方案中，它們存在于合成納米載體表面上、膠囊化在合成納米載體內(nèi)或這二者并存。在實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑增大了對抗原的免疫應(yīng)答。本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地并且令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過實踐在此披露的本發(fā)明，可以克服以上提到的問題和限制。特別是，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)可能提供組合物、以及相關(guān)方法，包括合成納米載體，包括(a)偶合到合成納米載體的免疫調(diào)節(jié)劑；以及(b)偶合到合成納米載體的抗原；其中根據(jù)以下關(guān)系，該免疫調(diào)節(jié)劑和抗原從合成納米載體解離IA(rel) % /A(rel) 1. 2其中IA (rel) %被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時， 釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量除以在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量加上在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，保留在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)；其中A (rel) %被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t 小時，釋放的抗原的重量除以在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的抗原的重量加上在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，保留在合成納米載體中的抗原的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)； 并且其中t為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、18、24、30、36、42或48小時。在優(yōu)選實施方案中， t是12、24、或48小時。在實施方案中，根據(jù)以下關(guān)系，免疫調(diào)節(jié)劑和抗原從合成納米載體解離 IA (rel) % /A (rel) % 彡 1. 3，IA (rel) % /A (rel) % ^ 1.4, IA (rel) % /A (rel) % 彡 1. 5，IA(rel) % /A(rel) % ^ 1. 6, IA(rel) % /A(rel) % ^ 1. 7, IA(rel) % /A(rel) % 彡 1. 8，IA(rel) % /A(rel) % ^ 1. 9, IA(rel) % /A(rel) % ^ 2, IA(rel) % /A(rel) % 彡 2. 5, IA(rel) % /A(rel) % ^ 3, IA(rel) % /A(rel) % ^ 3. 5, IA(rel) % /A(rel) % 彡 4，IA(rel) % /A(rel) % ^ 4. 5, IA(rel) % /A(rel) % ^ 5, IA(rel) % /A(rel) % 彡 6，IA(rel) % /A(rel) % ^ 7, IA(rel) % /A(rel) % ^ 8, IA(rel) % /A(rel) % ^ 9, IA(rel) % /A(rel) % 彡 10，IA(rel) % /A(rel) % 彡 15，IA(rel) % /A(rel) % 彡 20， IA (rel) % /A (rel) % 彡 25，IA (rel) % /A (rel) % 彡 30，IA (rel) % /A (rel) % 彡 40， IA (rel) % /A (rel) % ^ 50, IA (rel) % /A (rel) % 彡 75，或 IA (rel) % /A (rel) % ^ 100，其中IA(rel) %、A(rel) %、并且t如以上定義的那樣。在一些實施方案中，組合物、以及相關(guān)方法，包括合成納米載體，包括(a) —種偶合到合成納米載體上的免疫調(diào)節(jié)劑；和(b) —種偶合到合成納米載體上的抗原；其中釋放至少 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、 35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%或90%的免疫調(diào)節(jié)劑，同時抗原未被可檢測地釋放。在這些實施方案中，釋放的百分?jǐn)?shù)為IOOx (在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量除以在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量加上在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境 t小時，保留在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑的重量之和，被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù))。在這些實施方案中，t如以上定義的那樣。在優(yōu)選實施方案中，t是12、24、或48小時。特別是，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)注意到，在已經(jīng)被細(xì)胞內(nèi)吞以后M至48小時的時段內(nèi)，如果它們含有的微粒物質(zhì)未被“消化”，那么免疫細(xì)胞溶酶體改變它們的特征。典型地，多數(shù)內(nèi)吞的生物材料被消化為小分子(例如氨基酸、小肽、或核酸)，供細(xì)胞代謝或細(xì)胞外的處理使用。然而，在M至48小時的時段內(nèi)不能分解它們含有的顆粒的溶酶體被細(xì)胞改性。失去信號受體和其他系統(tǒng)，并且溶酶體被轉(zhuǎn)化為“死亡端”囊泡，它被最終加工用于從細(xì)胞排除。因此，在顆粒被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)吞以后，存在一個時間窗口。如果合成納米載體在M至48小時，優(yōu)選地為12小時的這一窗口內(nèi)不釋放它有效載荷的免疫調(diào)節(jié)劑，那么它打算靶向的信號受體可能被從囊泡中排除。這轉(zhuǎn)而使在囊泡內(nèi)免疫調(diào)節(jié)劑的任何隨后釋放在很大程度上與影響免疫原性應(yīng)答無關(guān)。本發(fā)明的諸位發(fā)明人還注意到在抗原攝入期間，信號受體(例如Toll樣受體) 的存在和結(jié)合可以控制免疫細(xì)胞活化和/或成熟(例如吞噬體成熟)的動力學(xué)和結(jié)果。 信號受體的存在和結(jié)合不但導(dǎo)致更快的免疫細(xì)胞成熟，而且賦予免疫細(xì)胞的超強(qiáng)能力來促成由主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子識別的肽(Blander，Ann Rheum Dis 2008 67(SupplIII) :iii44-iii49)。希望在免疫細(xì)胞中，受體信號發(fā)送發(fā)生在抗原攝入以前或伴隨抗原攝入。在此提供的組合物和方法提供了這樣的受體信號發(fā)送，它通過遞送作為部分的合成納米載體的免疫調(diào)節(jié)劑和抗原，該合成納米載體允許免疫調(diào)節(jié)劑在抗原以前釋放或伴隨抗原而釋放。在實施方案中，在免疫調(diào)節(jié)劑或抗原到合成納米載體的偶合顯著減少或消除時，發(fā)生免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的釋放。通過減少或消除免疫調(diào)節(jié)劑或抗原與偶合部分(分別是一種免疫調(diào)節(jié)劑或抗原偶合部分)之間的鍵合，可以減少或消除這樣的偶合。還可以通過降解合成納米載體來減少或消除這樣的偶合，這樣免疫調(diào)節(jié)劑或抗原從將它們“封裝”在內(nèi)的合成納米載體釋放。在這樣的一個實施方案中，由于在所述降解之前鍵合，免疫調(diào)節(jié)劑或抗原并未偶合到合成納米載體。此外，通過降解合成納米載體可以減少或消除這樣的偶合，這樣免疫調(diào)節(jié)劑或抗原仍偶合到一部分合成納米載體的上(例如分別經(jīng)由一個免疫調(diào)節(jié)或抗原偶合部分)，但是那所述部分被充分降解至能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。在實施方案中，該免疫應(yīng)答與在未偶合到該部分合成納米載體上時，在相同環(huán)境中，用免疫調(diào)節(jié)劑或抗原會引起的免疫應(yīng)答類似或相同。優(yōu)選地，免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的釋放發(fā)生在溶酶體或內(nèi)含體中。因此免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的釋放發(fā)生在4. 5的pH值。通過比較在約4. 5的環(huán)境pH下，抗原從合成納米載體的體外釋放速率與免疫調(diào)節(jié)劑的體外釋放速率，可以估計在時間窗口內(nèi)，免疫調(diào)節(jié)劑釋放的效率?？乖瓘暮铣杉{米載體的釋放被用作合成納米載體以多快的速度被免疫系統(tǒng)細(xì)胞的溶酶體消化的指示物。事實上，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗原可以按這樣一種方式被偶合到合成納米載體上， 那就是在4. 5的pH值，在體外未檢測到釋放，但是在非常堿性的條件下與此相反。在這樣的實例中，這證明在生理條件(例如在7. 4或4. 5的pH值)，抗原與合成納米載體的鍵合非常穩(wěn)定，并且一般地，隨著在體內(nèi)合成納米載體被消化，將發(fā)生抗原的釋放。因此，這樣的一種合成納米載體將允許免疫調(diào)節(jié)劑的更快釋放。如果在溶酶體的刺激的低pH值條件下和在相關(guān)時間窗口期間，免疫調(diào)節(jié)劑比抗原更快地從合成納米載體釋放，那么是活性溶酶體-以及因此免疫系統(tǒng)細(xì)胞-可以被免疫調(diào)節(jié)劑影響的指示。如果相反的是真實的，那么那是一些或所有免疫調(diào)節(jié)劑有效載荷在細(xì)胞上可以不具有最佳效果的指示。因此，根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體可以提供一個或多個更大的免疫應(yīng)答，其結(jié)果是，提供對受試者的增強(qiáng)的治療益處。定義“濫用的物質(zhì)”是為了某些目的(除了它適用的目的)，或者以除了醫(yī)師指導(dǎo)的一種方式或數(shù)量，由受試者(例如人類)服用的任何物質(zhì)。在一些實施方案中，濫用的物質(zhì)是藥物(例如違規(guī)藥物)。在某些實施方案中，濫用的物質(zhì)是非處方藥。在一些實施方案中， 濫用的物質(zhì)是處方藥。在一些實施方案中，濫用的物質(zhì)是一種上癮的物質(zhì)。在一些實施方案中，濫用的物質(zhì)具有改變情緒的效果，并且因此包括吸入劑和溶劑。在其他實施方案中，濫用的物質(zhì)是不具有改變情緒的效果或中毒特性的物質(zhì)，并且因此包括促蛋白合成留類。濫用的物質(zhì)包括，但并不局限于大麻素(例如大麻、大麻煙)、抑浮劑(例如巴比妥鹽、苯并二氮雜卓、氟硝基安定(洛喜普諾)、GHB、甲喹酮(安眠酮))、分離劑醉劑(例如開他敏、PCP)、 致幻劑(例如LSD、三甲氧苯乙胺、賽洛西賓)、阿片樣物質(zhì)和嗎啡衍生物(例如可待因、芬太尼、海洛英、嗎啡、阿片)、興奮劑(苯丙胺、可卡因、搖頭丸(MDMA)、冰毒、哌甲酯(利他林)、煙堿)、促蛋白合成留類、以及吸入劑。在一些實施方案中，在納米載體中包含的濫用的物質(zhì)是完整分子或其一部分?！吧习a的物質(zhì)”是引起強(qiáng)迫癥、強(qiáng)迫、或身體依賴或心理依賴的物質(zhì)。在一些實施方案中，上癮的物質(zhì)是違規(guī)藥物。在其他實施方案中，上癮的物質(zhì)是非處方藥。仍在其他實施方案中，上癮的物質(zhì)是處方藥。上癮的物質(zhì)包括但并不局限于可卡因、海洛英、大麻煙、冰毒、以及煙堿。在一些實施方案中，在納米載體中包含的上癮的物質(zhì)是完整分子或其一部分。“佐劑”是指并不構(gòu)成特異性抗原，但是增強(qiáng)對抗原的免疫應(yīng)答的強(qiáng)度和持續(xù)時間的試劑。這樣的佐劑可以包括，但并不局限于模式識別受體(例如Toll樣受體、RIG-I 和NOD樣受體(NLR))的刺激劑、礦物鹽(例如明礬，與腸道細(xì)菌(例如大腸桿菌、明尼蘇達(dá)沙氏桿菌、鼠傷寒沙門菌、或弗氏志賀菌)的單磷酰脂質(zhì)(MPL)A結(jié)合的明礬或分別與 MPL (AS04)、以上提到的細(xì)菌的MPL A特異結(jié)合的明礬)、皂苷(例如QS-21、Quil-A)、 ISC0Ms、ISC0MATRIX 、乳液(例如 MF59 、Montanide ISA 51 和 ISA 720)、AS02 (QS21+ 角鯊烯+ MPL )、脂質(zhì)體和脂質(zhì)體配制品(例如AS01)、合成的或特別制備的微顆粒和微載體(例如淋病奈瑟菌(N. gonorrheae)、沙眼衣原體和其他細(xì)菌的細(xì)菌衍生的外膜泡 (OMV))、或殼聚糖顆粒、貯存形成劑(例如Pluronic 嵌段共聚物)、特異性修飾或制備的肽(例如胞壁酰二肽)、氨基烷基氨基葡糖苷4-磷酸鹽(例如RC529)、或蛋白質(zhì)(例如細(xì)菌類毒素或毒素片段)。在實施方案中，佐劑包括用于模式識別受體(PR (包括但并不局限于Toll樣受體(TLR)，特別是TLR 2、3、4、5、7、8、9和/或其組合)的激動劑。在其他實施方案中，佐劑包括用于Toll樣受體3的激動劑、用于Toll樣受體7和8的激動齊U、或用于Toll樣受體9的激動劑；優(yōu)選這些列舉的佐劑包括咪唑喹啉；例如瑞喹莫德(也稱為R848)；腺嘌呤衍生物(例如在美國專利6，3 , 381 (Sumitomo Pharmaceutical Company)中披露的那些)；免疫刺激DNA ；或免疫刺激RNA。在特定的實施方案中，合成納米載體合并了作為佐劑化合物的對于toll樣受體(TLR)7&8的激動劑(“TLR 7/8激動齊U”)。它的效用是Tomai等人的美國專利6，696，076中披露的TLR 7/8激動劑化合物， 包括但是不局限于咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7_稠合環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、以及1， 2-橋接咪唑并喹啉胺。優(yōu)選佐劑包括咪喹莫特和瑞喹莫德。在特定的實施方案中，佐劑可以是DC表面分子CD40的激動劑。在某些實施方案中，合成納米載體合并了促進(jìn)DC成熟(需要有效啟動幼稚T細(xì)胞)并且產(chǎn)生細(xì)胞因子的佐劑，例如類型I干擾素，它依次刺激針對希望的抗原的抗體和細(xì)胞毒性的免疫應(yīng)答。在實施方案中，佐劑還可以包括免疫刺激RNA分子(例如但并不局限于dsRNA或聚I:C(TLR3刺激劑)、和/或在F. Heil等人， “Species-Specific Recognition of Single-Stranded RNA via Toll-like Receptor 7and 8” Science 303 (5663), 1526-1529 (2004) ;J. Vollmer 等人，‘‘ Immune modulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides，，WO 2008033432A2 ； A. Forsbach 等人，‘‘ Immunostimulatory oligoribonucleotides containing specific sequence motif(s)and targeting the Toll-like receptor 8pathway"WO 2007062107A2 ；E.Uhlmann φ 入，“Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity，，U. S. Pat. Appl. Publ. US2006241076 ；G. Lipford 等人，"Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides and use for treating cancer and infections"W02005097993A2 ；G. Lipford等人,“Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides, compositions, and screening methods"W02003086280A2 中披露的那些。在一些實施方案中，佐劑可以是TLR-4激動劑(例如細(xì)菌脂多糖(LPQ、VSV-G、 和/或HMGB-1)。在一些實施方案中，佐劑可以包括TLR-5激動劑(例如鞭毛蛋白、或它的一部分或衍生物)，包括但并不局限于在美國專利6，130，082,6, 585，980、和7，192，725 中披露的那些。在特定的實施方案中，合成納米載體合并了對于Toll樣受體(TLR)-9的配體，例如包括Cp^的免疫刺激DNA分子，它誘導(dǎo)類型I干擾素分泌，并且刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞活化，導(dǎo)致增加的抗體產(chǎn)生和細(xì)胞毒性的T細(xì)胞應(yīng)答(Krieg等人，CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B cell activation. Nature. 1995. 374 :546-549 ； Chu 等人，CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on T helper 1 (Thl) immunity. J. Exp. Med. 1997. 186 :1623-1631 ；Lipford 等人，CpG—containing synthetic oligonucleotides promote B and cytotoxic T cell responses to protein antigen -.a new class of vaccine adjuvants. Eur. J. Immunol. 1997. 27 :2340-2344 ； Roman 等人’ Immunostimulatory DNA sequences function as T helper-l-promoting adjuvants. Nat. Med. 1997. 3 :849-854 ；Davis 等 X, CpG DNA is a potent enhancer of specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis B surface antigen. J. Immunol. 1998. 160 :870-876 ;Lipford 等人，Bacterial DNA as immune cell activator. Trends Microbiol. 1998. 6 :496-500)。在一些實施方案中，佐劑可以是從壞死細(xì)胞釋放的促炎刺激物(例如尿酸鹽晶體)。在一些實施方案中，佐劑可以是補(bǔ)體級聯(lián)的活化組分(例如⑶21、⑶35、等)。在一些實施方案中，佐劑可以是免疫復(fù)合物的活化組分。 這些佐劑還包括補(bǔ)體受體激動劑(例如結(jié)合到⑶21或⑶35上的分子)。在一些實施方案中，該補(bǔ)體受體激動劑誘導(dǎo)了合成納米載體的內(nèi)源補(bǔ)體調(diào)理素作用。在一些實施方案中，佐劑是細(xì)胞因子，它是由細(xì)胞釋放的小的蛋白或生物因子(在5kD-20kD的范圍內(nèi))，并且具有關(guān)于細(xì)胞-細(xì)胞相互作用、通訊以及其他細(xì)胞的行為的特定效應(yīng)。在一些實施方案中，該細(xì)胞因子受體激動劑是小分子、抗體、融合蛋白、或適體。“給予”或“給藥”是指以一種藥理學(xué)上有用的方式，將藥物提供給患者?！白儜?yīng)原”是指可以引起受試者中的變應(yīng)性應(yīng)答的任何試劑。變應(yīng)原包括但并不局限于普通灰塵、花粉、植物、動物皮屑、藥物(例如青霉素)、食物變應(yīng)原、昆蟲毒液、真菌孢子、病毒、和細(xì)菌?！翱乖己喜糠帧笨梢允侨魏尾糠?，抗原通過它被鍵合到合成納米載體上。這樣的部分包括共價鍵(例如酰胺鍵或酯鍵)，連同鍵合(共價地或非共價地)抗原至合成納米載體的分離分子。這樣的分子包括連接物或聚合物或它們的單元。例如，抗原偶合部分可以包括與抗原靜電結(jié)合的帶電聚合物。如另一個實例，抗原偶合部分可以包括抗原共價結(jié)合的一種聚合物或其單元。在一些實施方案中，該部分包括一種聚酯。在其他實施方案中，該部分包括聚(乙二醇)(PEG)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。該部分還可以包括任何以上聚合物的一個單元，例如丙交酯或乙交酯?！癆PC靶向特征”是指本發(fā)明的合成納米載體所包括的一個或多個部分，這一個或多個部分靶向合成納米載體至專職抗原遞呈細(xì)胞(“APC”)(例如但并不局限于樹突細(xì)胞、 SCS巨噬細(xì)胞、濾泡樹突細(xì)胞、以及B細(xì)胞)。在實施方案中，APC靶向特征可以包括一個或多個免疫特征表面和/或多個靶向部分，這些靶向部分將已知靶結(jié)合在APC上。在實施方案中，APC靶向特征可以包括存在于合成納米載體表面上的一個或多個B細(xì)胞抗原。在實施方案中，APC靶向特征還可以包括選擇的一個或多個尺寸的這些合成納米顆粒用來通過 APCs促進(jìn)攝入。在實施方案中，用于在巨噬細(xì)胞(“Mphs”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于巨噬細(xì)胞上(即被膜下竇-Mph標(biāo)記)。示例性的SCS-Mph標(biāo)記包括， 但并不局限于，CD4 (L3T4, W3/25, T4) ；CD9 (p24, DRAP-I, MRP-1) ；CDlla(LFA_l α，α L 整聯(lián)蛋白鏈)；CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3，Mol，C3niR，Mac-l) ；CDllc ( α X 整聯(lián)蛋白，pl50， 95，AXb2) ；CDwl2(p90-120) ；CD13(APN, gpl50, EC 3. 4. 11. 2) ；CD 14 (LPS-R) ；CD15(X-半抗原，Lewis, X，SSEA-1,3-FAL) ；CD15s(唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3 ‘磺基 Lewis X)； CD15su(6磺基唾液酰Lewis X) ；CD16a (FCRIIIA) ；CD16b (FcgRIIIb) ；CDwl7 (乳糖酶基神經(jīng)鞘氨醇，LacCer) ；CD18(整聯(lián)蛋白 β 2，CDlla，b, c β -亞基)；CD26(DPP IVectoeneyme, ADA 結(jié)合蛋白)；CD29 (血小板 GPIIa，β _1 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1，Endocam)； CD32(FCy RII) ；CD33(gp67) ；CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD36 (GpIIIb, GPIV, PASIV)； CD37 (gp52-40) ；CD38 (ADP-核糖基環(huán)化酶，T10) ；CD39 (ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶 _1)； CD40 (Bp50) ；CD43(涎蛋白，增白細(xì)胞蛋白)；CD44(EMCRII，Η-CAM, Pgp-1) ； CD45(LCA, T200, B220, Ly5) ；CD45RA ；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0(UCHL-I) ；CD46(MCP) ；CD47(gp42, IAP，0A3,神經(jīng)纖毛蛋白)；CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, 0X-45)； CD49a(VLA-l α，α 1 整聯(lián)蛋白)；CD49b (VLA-2 α，gpla, α 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 α， α 3 整聯(lián)蛋白)；CD49e(VLA_5a，a 5 整聯(lián)蛋白)；CD49f (VLA-6 a，a 6 整聯(lián)蛋白，gplc)；CD50 (ICAM-3) ； CD51 (整聯(lián)蛋白 α，VNR- α，V玻連蛋白-Ra) ； CD52 (CAMPATH-1，ΗΕ5)； CD53 (0Χ-44) ；CD54 (ICAM-I) ；CD55 (DAF) ；CD58(LFA_3) ；CD59(lF5Ag, H19，保護(hù)素，MACIF, MIRL, P-18) ；CD60a(GD3) ；CD60b(9_0-乙?；?GD3) ；CD61(GP Ilia, β3 整聯(lián)蛋白)； CD62L(L-選擇素，LAM-I，LECAM-I, MEL-14，Leu8, TQl) ；CD63(LIMP, MLAl，gp55, NGA, LAMP-3, ME491) ；CD64 (Fe y RI) ；CD65 (神經(jīng)酰胺，VIM-2) ；CD65s (唾液酸化的-CD65， VIM2) ；CD72(Ly-19. 2, Ly-32. 2, Lyb-2) ；CD74(Ii，恒定鏈)；CD75 (唾液掩蔽的乳糖胺)； CD75S(a 2，6 唾液酸化的乳糖胺)；CD80(B7，B7-1，BBl) ；CD81 (ΤΑΡΑ-Ι) ；CD82(4F9, C33, IA4, KAI1, R2) ；CD84(p75, GR6) ；CD85a(ILT5, LIR2, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10)； CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ；CD87(uPAR)； CD88 (C5aR) ；CD89(IgA Fc 受體，F(xiàn)caR) ；CD91(a 2M-R, LRP) ；CDw92(p70) ；CDw93 (GRll)； CD95(AP0-1, FAS, TNFRSF6) ；CD97(BL-KDD/F12) ；CD98(4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2) ；CD99R(CD99Mab 限制的)；CD100(SEMA4D) ；CDlOl (IGSF2, P126, V7) ；CD102 (ICAM-2)； CDlll (PVRL1, HveC, PRRl，Nectin 1，HIgR) ；CDl12(HveB, PRR2, PVRL2,粘合素 2)； CD114(CSF3R, G-CSRF, HG-CSFR) ；CD115(c-fns, CSF-1R， M-CSFR) ；CDl16(GMCSFRα)； CDwll9 (IFNyR, IFN y RA) ；CD120a (TNFRI，p55) ；CD120b (TNFRII，p75, TNFR p80)； CD121b(類型 2IL-1R) ；CD122(IL2Rβ) ；CD123(IL-3Rα ) ；CD124(IL-4Rα ) ；CD127(p90, IL-7R, IL-7Ra) ；CD128a(IL-8Ra, CXCRl，(暫時重命名為 CD181)) ;CD128b(IL-8Rb, CSCR2，(暫時重命名為 CD182)) ；CD130 (gpl30) ；CD131(公共 β 亞基)；CD132(公共 γ 鏈，IL-2Ry ) ；CDwl36(MSP-R，RON, pl58-ron) ；CDwl37 G-1BB，I LA) ；CD139 ；CD141 (血栓調(diào)節(jié)素，胎兒調(diào)節(jié)素)；CD147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ;CD148(HPTP-n，p260, DEP-1)； CD155(PVR) ；CD156a(CD156, ADAM8, MS2) ;CD156b(TACE，ADAM17，cSVP) ；CDwl56C(ADAMlO)； CD157(Mo5, BST-1) ；CD162(PSGL-1) ；CD164 (MGC-24，MUC-24) ；CD165(AD2, gp37)； CD168(RHAMM，IHABP, HMMR) ；CD169 (唾液酸粘附素，涎免凝集素-1) ；CD170(涎免凝集素 5) ；CD171(L1CAM, NILE) ；CD172(SIRP-1α，MyD-I) ；CD172b (SIRP^) ；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD181 (CXCR1,(以前稱為 CDl^a)) ；CD182 (CXCR2,(以前稱為 CDl28b))； CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD191(CCRl) ；CD192(CCR2) ；CD195(CCR5) ；CDwl97(CCR7(是 CDwl97)) ；CDwl98(CCR8) ；CD204(MSR) ；CD205 (DEC-25) ；CD206(MMR) ；CD207 (胰島蛋白)；CDw210(CK) ；CD213a(CK) ；CDw217(CK) ；CD220(胰島素 R) ；CD221 (IGFlR)； CD222 (M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT) ；CD226 (DNAM-1，PTA1) ；CD230(朊病毒蛋白(PrP))； CD232 (VESP-R) ；CD244(2B4, P38, NAIL) ；CD245(p220/240) ；CD256(APRIL, TALL2, TNF (配體)超家族，成員 13) ；0)257(81^5，141^1，1咿(配體)超家族，成員 13b) ；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa) ； CD262 (TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ； CD263 (TRAIL-R3, TNBF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD280 (TEM22, END0180)； CD281(TLR1, TOLL-樣受體 1) ；CD282(TLR2, TOLL-樣受體幻；CD284(TLR4, TOLL-樣受體 4) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3, Na K ATP 酶，β 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H)； CD300c(CMRF-35A) ；CD300e(CMRF-35L1) ；CD302 (DCLl) ；CD305 (LAIRl) ；CD312(EMR2)； CD315(CD9P1) ；CD317(BST2) ；CD321(JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw328(涎免凝集素 7)； CDw329 (涎免凝集素9) ；CD68(gpllO，巨涎蛋白(Macrosialin))；和/或甘露糖受體；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。在實施方案中，用于在樹突細(xì)胞(“DC”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于DC上(即一種DC標(biāo)記)。示例性的DC標(biāo)記包括，但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ； CDlb (Rl) ； CDlc(M241, R7) ； CDld(R3) ； CDle(R2) ； CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol, C3niR, Mac-1) ；CDllc ( α X 整聯(lián)蛋白，pl50，95，AXb2) ；CDwll7(乳糖酶基神經(jīng)鞘氨醇，LacCer) ；CD19 (B4) ；CD33 (gp67) ；CD 35 (CRl，C3b/C4b 受體)；CD 36(GpIIIb, GPIV, PASIV) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ；CD40 (Bp50) ；CD45(LCA， T200, B220, Ly5) ；CD45RA ；CD45RB ；CD45RC ；CD45R0 (UCHL-1) ；CD49d (VLA-4 α，α 4 整聯(lián)蛋白)；CD49e (VLA-5 α，α5 整聯(lián)蛋白)；CD58(LFA_3) ； CD64(Fc y RI) ；CD72 (Ly_19. 2， Ly-32. 2, Lyb-2) ；CD73 (Ecto-5，nucloticlase) ；CD74(Ii,恒定鏈)；CD80(B7, B7-1， BBl) ；CD81(TAPA-I) ；CD83(HB15) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10)； CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ；CD88(C5aB)； CD97(BL-KDD/F12) ；CDlOl (IGSF2, P126, V7) ;CD116(GM_CSFRa) ；CD120a(TMFRI，p55)； CD120b(TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD123(IL-3Rα) ；CD139 ;CD148(ΗΡΤΡ-η，DEP-1)； CD150 (SLAM, IP0-3) ；CD156b(TACE, ADAMl7, cSVP) ；CD157(Mo5, BST-1) ；CD167a(DDR1， trkE, cak) ；CD168(RHAMM，IHABP, HMMR) ；CD169(唾液酸黏附素，涎免凝集素 _1)； CD170(涎免凝集素-5) ；CD171(L1CAM, MLE) ；CD172 (SIRP-1 α，MyD-I) ；CD172b (SIRP β )； CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD193 (CCR3) ；CD196 (CCR6)； CD197(CCR7(ws CDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1，BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205)； CD206(MMR) ；CD207(胰島蛋白)；CD208 (DC-LAMP) ； CD209(DCSIGN) ； CDw218a(IL18Rα )； CDw218b(IL8R3 ) ；CD227 (MUC1，PUM，PEM，EMA) ；CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ；CD252 (0X40L, TNF (配體)超家族，成員4) ；CD258(LIGHT，TNF (配體)超家族，成員14)；(擬65 (TRANCE-R， TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD271(NGFR, p75, TNFR 超家族，成員 16) ；CD273(B7DC, PDL2)； CD274(B7H1, PDL1) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD276 (B7H3) ；CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳月旨蛋白 3) ；CD283(TLR3, TOLL-樣受體 3) ；CD289(TLR9, TOLL-樣受體 9) ；CD295 (LEPR)； CD298(ATP1B3, Na K ATP 酶 β 3 亞基)；CD300a (CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A)； CD301 (MGL1, CLECSF14) ；CD302(DCLl) ；CD303(BDCA2) ；CD304(BDCA4) ；CD312(EMR2)； CD317(BST2) ；CD319 (CRACC, SLAMF7) ；CD320 (8D6)；以及 CD68(gpllO，巨涎蛋白)；II 類 MHC ；BDCA-I ；涎免凝集素-H ；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。在實施方案中，可以通過特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、 小分子、等)的任何靶向部分完成靶向，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于B細(xì)胞上(即B細(xì)胞標(biāo)記)。示例性的B細(xì)胞標(biāo)記包括，但并不局限于，⑶Ic (MM1，R7)；⑶ld(R3)；⑶2(E_花環(huán) R, Til, LFA-2) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1，Ly-1) ；CD6 (Τ12) ；CD9 (p24, DRAP-I, MRP-1)； CDlla(LFA-l α，α L 整聯(lián)蛋白鏈)；CDllb(aM 整聯(lián)蛋白鏈，CR3, Mol，C3niR, Mac-1)； CDllc(aX 整聯(lián)蛋白，P150，95，AXb2) ；CDwl7(乳糖胺，LacCer) ；CD18(整聯(lián)蛋白 β 2， CDl la, b, c β-亞基；CD19(B4) ； CD20(B1, Bp35) ； CD21(CR2, EBV-R, C3dR) ；CD22 (BL-CAM， Lyb8，涎免凝集素-2) ；CD23(FceRII, B6, BLAST-2，Leu-20) ；CD24(BBA_1，HSA) ；CD25(Tac 抗原，IL-2Ra，P55) ；CD26(DPP IV ectoeneyme, ADA 結(jié)合蛋白)；CD27(T14，S152)；CD29(血小板 GPIIa，β _1 整聯(lián)蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1，Endocam) ；CD32(FCyRII)； CD35(CR1, C3b/C4b 受體)；CD37 (gp52_40) ；CD38 (ADP 核糖基環(huán)化酶，T10) ；CD39(ATP 脫氫酶，NTP 脫氫酶-1) ；CD40 (Bp50) ；CD44 (ECMRII, H-CAM，Pgp-I) ；CD45 (LCA, T200, B220, Ly5) ； CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-I) ；CD46 (MCP) ； CD47(gp42, IAP，0A3,抗人神經(jīng)菌毛素)；CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, 0X-45) ；CD49b (VLA-2 α， gpla，α 2 整聯(lián)蛋白)；CD49c (VLA-3 α，α 3 整聯(lián)蛋白)；CD49d(VLA_4 α，α 4 整聯(lián)蛋白)；CD50(ICAM-3) ；CD52(CAMPATH-1，HES) ；CD53(0X_44) ；CD54(ICAM-I) ；CD55(DAF)； CD58 (LFA-3) ；CD60a(GD3) ；CD62L(L_ 選擇素，LAM-1，LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQl)； CD72(Ly-19. 2,Ly-32. 2,Lyb-2) ；CD73 (Ecto-5 ‘-核苷酸酶)；CD74 (Ii，恒定鏈)；CD75(唾液掩蔽的乳糖胺)；⑶75S(a2，6唾液酸化的乳糖胺)；⑶77 (1 抗原，BLA, CTH/Gb3)； CD79a(Iga，MB1) ；CD79b (Ig β，B29) ；CD80 ；CD81 (TAPA-I) ；CD82 (4F9, C33, IA4,KAI1,R2)； CD83(HB15) ；CD84(P75, GR6) ；CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CDw92(p70) ；CD95(AP0_1，F(xiàn)AS, TNFRSF6) ；CD98 (4F2, FRP-I, RL-388) ；CD99(MIC2, E2) ；CDlOO(SEMA4D) ；CD102(ICAM-2)； CD108(SEMA7A, JMH 血型抗原)；CDwl 19 (IFN γ R，IFN y Ra) ;CD120a(TNFRI，p55)； CD 120b (TNFRII,p75,TNFR p80) ；CD121b (類型 2IL-1R) ；CD122 (IL2Rβ ) ；CD124 (IL-4R α )； CD130(gpl30) ；CD132(公共 γ 鏈，IL_2Ry) ；CDw137 (4-1BB, ILA) ；CD139 ；CD147 (Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD150(SLAM, IP0-3) ；CD162(PSGL-1) ；CD164(MGC-24， MUC-24)； CD166(ALCAM, KG-CAM, SC-I, BEN, DM-GRASP) ；CD167a(DDR1，trkE, cak) ；CD171(L1CMA, NILE) ；CD175s(唾液酰-Tn (S-Tn)) ；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184 (CXCR4，NPY3R)； CD185(CXCR5) ；CD192(CCR2) ；CD196(CCR6) ；CD197(CCR7(was CDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205) ；CDw210(CK) ；CD213a(CK) ；CDw217(CK)； CDw218a(IL18Ra ) ；CDw218b (IL18R β ) ；CD220(胰島素 R) ；CD221(IGF1 R) ；CD222 (M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT) ；CD225 (Leul3) ；CD226(DNAM-1，PTA1) ；CD227 (MUC1, PUM, PEM, EMA) ；CD229(Ly9) ；CD230(朊病毒蛋白(Prp)) ；CD232(VESP-R) ；CD245(p220/240)； CD247 (CD3Zeta 鏈)；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成員 IOa) ；CD262 (TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成員 IOb) ；CD263(TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成員 IOc) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成員 IOd) ；CD265(TRANCE-R, TNF-R 超家族，成員 Ila) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成員 13B) ；Q^68(BAFFR，TNF-R 超家族，成員 13C) ；Q^69(BCMA，TNF-R 超家族， 成員 16) ；CD275(B7H2, IC0SL) ；CD277(BT3. 1. B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD295 (LEPR)； CD298(ATPlB3Na K ATP 酶 β 3 亞基)；CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A)； CD305 (LAIRl) ；CD307(IRTA2) ；CD315(CD9P1) ；CD316(EW12) ；CD317(BST2) ；CD319(CRACC, SLAMF7) ；CD321 (JAMl) ；CD322(JAM2) ；CDw327 (涎免凝集素 6，CD33L) ；CD68(gp 100，巨涎蛋白)；CXCR5 ；VLA-4 ；II類MHC ；表面IgM ；表面IgD ；APRL ；禾口 /或BAFF-R ；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。標(biāo)記的實例包括在其他地方提供的那些。
在一些實施方案中，可以通過特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成B細(xì)胞靶向，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于經(jīng)活化的B細(xì)胞上(即活化的B細(xì)胞標(biāo)記)。示例性的活化的B細(xì)胞標(biāo)記包括，但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ；CDlb (Rl) ；CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3'磺基 Lewis X)； CD15su(6 磺基-唾液酰 Lewis X) ；CD30 (Ber-H2, Ki-I) ；CD69(AIM, EA 1，MLR3, gp34/28,VEA) ；CD70(Ki-24，CD27 配體)；CD80 (B7，B7-1，BBl) ；CD86 (B7-2/B70) ；CD97 (BLKDD/F12)； CD125(IL-5Ra) ；CD126 (IL-6R a )；⑶138 (多配體聚糖-1，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)； CD152(CTLA-4) ；CD252 (0X40L，TNF (配體)超家族，成員 4) ；CD253 (TRAIL，TNF (配體)超家族，成員 10) ；CD279(PD1)；(擬89 (TLR9，TOLL-樣受體9)；以及 CD312 (EMR2)；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。標(biāo)記的實例包括在其他地方提供的那些?！癆(rel) 被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的抗原的重量除以在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的抗原的重量加上在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，保留在合成納米載體中的抗原的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)。t在此被定義為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、18、24、30、36、42或48小時。在優(yōu)選實施方案中，t是 12、24、或48小時。“B細(xì)胞抗原”是指天然地或者可以被構(gòu)建為被B細(xì)胞識別的任何抗原，并且觸發(fā) (天然地或如本領(lǐng)域中已知那樣被構(gòu)建)在B細(xì)胞中的免疫應(yīng)答(例如被B細(xì)胞上的B細(xì)胞受體特異性識別的抗原)。在一些實施方案中，是T細(xì)胞抗原的抗原也是B細(xì)胞抗原。在其他實施方案中，T細(xì)胞抗原并不也是B細(xì)胞抗原。B細(xì)胞抗原包括，但并不局限于蛋白、 肽、小分子、以及碳水化合物。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽抗原)。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是與傳染物相關(guān)的碳水化合物。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是與傳染物有關(guān)的糖蛋白或糖肽。這些傳染物可以是細(xì)菌、病毒、真菌、原生動物、寄生蟲或朊病毒。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是免疫原性差的抗原。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是濫用的物質(zhì)或其一部分。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是上癮的物質(zhì)或其一部分。上癮的物質(zhì)包括，但并不局限于煙堿、麻醉劑、止咳劑、鎮(zhèn)靜劑、以及安神齊U。在一些實施方案中，B細(xì)胞抗原是毒素(例如來自化學(xué)武器或天然來源的毒素)或污染物。B細(xì)胞抗原還可以是危險的環(huán)境因素。在其他實施方案中，B細(xì)胞抗原是異體抗原、 變應(yīng)原、接觸性致敏原、退行性疾病抗原、半抗原、傳染病抗原、癌抗原、特應(yīng)性疾病抗原、上癮的物質(zhì)、異種抗原、或代謝病酶或其酶產(chǎn)物?！翱缮锝到獾木酆衔铩笔侵冈谝胧茉囌唧w內(nèi)時，隨時間降解的聚合物。生物可降解的聚合物包括但并不局限于聚酯、聚碳酸酯、聚縮酮、或聚酰胺。這樣的聚合物可以包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。在一些實施方案中，該生物可降解的聚合物包括聚醚的嵌段共聚物(例如聚(乙二醇))、以及聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或其他生物可降解的聚合物。在實施方案中，該生物可降解的聚合物包括聚 (乙二醇)和聚(乳酸)的嵌段共聚物、聚(乙醇酸)、聚(乳酸乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。然而在一些實施方案中，該生物可降解的聚合物并不包括聚醚(例如聚(乙二醇))， 或單獨由聚醚組成。一般地，在PH = 7. 4并且在25°C下，對于用作合成納米載體的一部分， 該生物可降解的聚合物在水中是不可溶的。在實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該生物可降解的聚合物具有范圍從約800道爾頓至約50，000道爾頓的重均分子量。 在一些實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該重均分子量是從約800道爾頓至約10，000道爾頓，優(yōu)選從800道爾頓至10，000道爾頓。在其他實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該重均分子量是從1000道爾頓至10，000道爾頓。在一個實施方案中，該生物可降解的聚合物并不包括聚縮酮或其單元。
“偶合”或“偶接”或“偶聯(lián)”(以及類似表述)是附著到或包含在合成納米載體內(nèi)。 在一些實施方案中，該偶合是共價的。在一些實施方案中，通過一個或多個連接物介導(dǎo)共價偶合。在一些實施方案中，該偶合是非共價的。在一些實施方案中，通過電荷相互作用、親和相互作用、金屬配位、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、TT堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用、和/或它們的組合來介導(dǎo)該非共價偶合。在實施方案中，使用常規(guī)技術(shù)，在合成納米載體內(nèi)的膠囊化的背景中，可能出現(xiàn)該偶合。任何以上提到的偶合可以安排在一個表面上或安排在本發(fā)明的合成納米載體內(nèi)?！把苌摹笔侵笍淖畛醯脑锤淖兓蚋男?。例如，作為一個非限制性實例，衍生自傳染性菌株的肽抗原可以具有取代在原始抗原中發(fā)現(xiàn)的天然氨基酸殘基的若干非天然氨基酸殘基，以上原始抗原是在傳染性菌株中發(fā)現(xiàn)的。這些改變或改性可以是為了多種原因，包括但并不局限于增加的特異性、更容易的抗原加工、或改進(jìn)的安全性。“劑型”是指藥物在適合給予受試者的一種介質(zhì)、載體、媒介物、或裝置中。一種本發(fā)明的組合物的“有效量”是對于某些目的有效的量。例如，在該有效量是對于一個治療目的時，那么該量對于治療、減輕、改善、救治、延遲其發(fā)病、抑制其進(jìn)展、減少其嚴(yán)重性、和/或減少在此提供的一種疾病、失調(diào)、和/或病情的一種或多種癥狀或特征的發(fā)病率是有效的?！澳z囊化”是指封裝在合成納米載體內(nèi)，優(yōu)選完全封裝在合成納米載體內(nèi)。多數(shù)或所有膠囊化的物質(zhì)并不暴露于合成納米載體外的局部環(huán)境。膠囊化不同于吸收，后者將多數(shù)或所有物質(zhì)放置在合成納米載體表面上，并且使該物質(zhì)暴露于合成納米載體外的局部環(huán)
^Mi ο“表現(xiàn)出一種pH敏感的解離”是指環(huán)境pH中的改變顯著減少或消除在兩個實體 (例如分別地，免疫調(diào)節(jié)劑或抗原與合成納米載體或者免疫調(diào)節(jié)劑或抗原偶合部分)之間的偶合。在實施方案中，相關(guān)的PH敏感的解離可以滿足在此提供的任何關(guān)系。通常，與抗原和合成納米載體之間的偶合相比，在4. 5的pH值，免疫調(diào)節(jié)劑和合成納米載體之間的偶合被更顯著地減少或消除。在其他地方提供了定義免疫調(diào)節(jié)劑和抗原的解離的關(guān)系。“IA(rel) 被定義為在pH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量除以在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量加上在PH = 4. 5，將合成納米載體暴露于體外水環(huán)境t小時，保留在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)。t在此被定義為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、18、24、30、36、42或48小時。在優(yōu)選實施方案中，t是12、24、或48小時?！懊庖哒{(diào)節(jié)劑“是指調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的媒介物。如在此使用的那樣，“調(diào)節(jié)”是指誘導(dǎo)、增強(qiáng)、刺激、或指導(dǎo)免疫應(yīng)答。這樣的媒介物包括刺激(或促進(jìn))對抗原的免疫應(yīng)答的佐劑，但不是抗原或衍生自抗原。在一些實施方案中，該免疫調(diào)節(jié)劑在合成納米載體的表面上，和/或合并在合成納米載體內(nèi)。在實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)由一種聚合物或其單元被偶合到合成納米載體上。在一些實施方案中，所有合成納米載體的免疫調(diào)節(jié)劑都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載體包括大量不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多種獨自的免疫調(diào)節(jié)劑，所有這些都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載體正好包括一個類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體正好包括兩個不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多于兩個的不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。“免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分”可以是任何部分，免疫調(diào)節(jié)劑通過它被鍵合到合成納米載體上。這樣的部分包括共價鍵(例如酰胺鍵或酯鍵)，連同鍵合(共價地或非共價地)免疫調(diào)節(jié)劑至合成納米載體的分離分子。這樣的分子包括連接物或聚合物或它們的單元。例如，免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分可以包括免疫調(diào)節(jié)劑(例如一種免疫刺激核酸)靜電結(jié)合的一種帶電聚合物。如另一個實例，免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分可以包括免疫調(diào)節(jié)劑共價結(jié)合的一種聚合物或其單元。在一些實施方案中，該部分包括一種聚酯。在其他實施方案中，該部分包括聚(乙二醇)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。該部分還可以包括任何以上聚合物的一個單元，例如丙交酯或乙交酯?！皞魅緞笔侵秆苌约?xì)菌、真菌、病毒、原生動物、或寄生蟲的任何試劑。在一些實施方案中，病毒是痘病毒、天花病毒、埃博拉病毒、馬爾堡病毒、登革熱病毒、流行性感冒病毒、副流感病毒、呼吸道合胞體病毒、麻疹病毒、人類免疫缺陷病毒、人乳頭瘤病毒、水痘帶狀皰疹病毒、單純性皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、愛潑斯坦巴爾病毒、JC多瘤病毒、彈狀病毒、輪狀病毒、鼻病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、細(xì)小病毒、細(xì)小核糖核酸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼腸孤病毒、風(fēng)疹病毒、披膜病毒、正黏病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、嗜肝DNA病毒、柯薩奇病毒、馬腦炎病毒、乙型腦炎病毒、黃熱病病毒、立夫特谷熱病毒、 甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、或戊型肝炎病毒?！昂铣杉{米載體的最大尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的納米載體的最大尺寸?！昂铣杉{米載體的最小尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的合成納米載體的最小尺寸。例如，對于球形(spheriodal)合成納米載體，合成納米載體的最大和最小尺寸會是基本相同的，并且會是它的直徑的大小。類似地，對于立方體合成納米載體，合成納米載體的最小尺寸會是它的高、寬、或長中最小的，同時合成納米載體的最大尺寸會是它的高、寬、或長中最大的。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少 75 %、優(yōu)選至少80 %、更優(yōu)選至少90 %的合成納米載體的最小尺寸是大于lOOnm。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少 90%的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于5 μ m。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最小尺寸是等于或大于llOnm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、并且仍更優(yōu)選等于或大于150nm。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75%、優(yōu)選至少80%、 更優(yōu)選至少90%的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于3 μ m、更優(yōu)選等于或小于2 μ m、 更優(yōu)選等于或小于1 μ m、更優(yōu)選等于或小于SOOnm、更優(yōu)選等于或小于600nm、并且仍更優(yōu)選等于或小于500nm。在優(yōu)選的實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少 75 %，優(yōu)選至少80 %，更優(yōu)選至少90 %的合成納米載體的最大尺寸是等于或大于lOOnm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、更優(yōu)選等于或大于140nm、并且仍更優(yōu)選等于或大于150nm。通過將這些合成納米載體懸浮在一種液體(通常是水性)介質(zhì)中，并且使用動態(tài)光散射(例如使用一臺Broolihaven ZetaPALS儀器)獲得合成納米載體大小的測量值?！矮@得的”是指取自原始源，沒有改變或改性。例如，在實施方案中，從一個源獲得的抗原可以包括在該源發(fā)現(xiàn)的原始氨基酸殘基序列。在其他實施方案中，從一個源獲得的抗原可以包括在該源發(fā)現(xiàn)的原始分子結(jié)構(gòu)?！八帉W(xué)上可接受的賦形劑”是指一種藥理學(xué)上無活性的物質(zhì)，該物質(zhì)被添加到一種本發(fā)明的組合物中來進(jìn)一步協(xié)助該組合物的給藥。沒有限制，藥學(xué)上可接受的賦形劑的實例包括碳酸鈣、磷酸鈣、不同的稀釋劑、不同的糖和各種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、 植物油以及聚乙二醇?！懊庖咴圆畹目乖?，是指不觸發(fā)任何所希望的免疫應(yīng)答、或不觸發(fā)足夠水平的所希望的免疫應(yīng)答的抗原。如在此使用的那樣，“足夠的”是指在給予其中不使用在此說明的納米載體的組合物(例如在不存在納米載體的情況下，與佐劑混合的游離抗原)時，引起可檢測的或保護(hù)性的免疫應(yīng)答的能力。在一些實施方案中，希望的免疫應(yīng)答是治療或預(yù)防一種疾病或病情。在一些實施方案中，希望的免疫應(yīng)答是減輕疾病或病情的一種或多種癥狀。 免疫原性差的抗原包括但并不局限于小分子、和碳水化合物?！搬尫潘俾省笔侵冈谝粋€體外釋放測試中，偶合的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原從顆粒流入周圍介質(zhì)的速率。首先，通過將它置入適當(dāng)?shù)捏w外釋放介質(zhì)中，制備合成納米載體用于釋放測試。這一般通過在離心使合成納米載體成小粒以后交換緩沖液，并且在溫和條件下重建合成納米載體來實現(xiàn)。通過將樣品置于一臺適當(dāng)?shù)臏囟瓤刂蒲b置中，在37°C開始測定。在不同的時間點移出樣品。通常，在生理PH(例如pH 4. 5)下，經(jīng)由抗原偶合部分將抗原鍵合到合成納米載體上要比經(jīng)由免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分將免疫調(diào)節(jié)劑鍵合到合成納米載體上更穩(wěn)定。在實施方案中，抗原到合成納米載體上的鍵合的PH敏感性不如免疫調(diào)節(jié)劑到合成納米載體上的鍵合。在實施方案中，通過測量從合成納米載體釋放的抗原的量，確定抗原到合成納米載體的鍵合的穩(wěn)定性。在實施方案中，在4. 5的pH值與在7. 4的pH值相比，從合成納米載體釋放的抗原的量顯著不同。在實施方案中，在4. 5的pH值，與從合成納米載體釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的量相比，從合成納米載體釋放的抗原的量更少。在實施方案中，在7. 4或4. 5 的PH值，釋放的抗原的量不是可檢測到的。通過離心使合成納米載體成小粒從釋放介質(zhì)分離合成納米載體。對于從合成納米載體分散的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原，測定釋放介質(zhì)。使用HPLC測量免疫調(diào)節(jié)劑或抗原以確定免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的含量和質(zhì)量。將包含剩余封存的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的小粒溶解在溶劑中，或用堿水解來從合成納米載體解脫封存的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原。然后還通過HPLC測量包含免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的小粒以確定在給定時間點，仍未釋放的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的含量和質(zhì)量。已經(jīng)釋放至釋放介質(zhì)中的和剩余在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑或抗原間的質(zhì)量平衡是接近的。數(shù)據(jù)表示為釋放部分或凈釋放，都表示為隨時間釋放的微克數(shù)。在本領(lǐng)域，“小分子”被理解為尺寸小于約2000g/mol的有機(jī)分子。在一些實施方案中，小分子小于約1500g/mol或小于約1000g/mol。在一些實施方案中，小分子小于約800g/ mol或小于約500g/mol。在一些實施方案中，小分子是非聚合物的和/或非低聚物的。在一些實施方案中，小分子不是蛋白質(zhì)、肽、或氨基酸。在一些實施方案中，小分子不是核酸或核苷酸。在一些實施方案中，小分子不是糖或多糖。
“受試者”是指一種動物，包括哺乳動物例如人和靈長目動物；鳥；家養(yǎng)動物或家畜 (例如貓、狗、綿羊、山羊、牛、馬和豬)；實驗動物(例如小鼠、大鼠和豚鼠)；魚；以及類似動物?！耙环N或多種合成納米載體”是指在自然界不能找到的并且至少擁有在大小上小于或等于5微米的尺寸的離散物。白蛋白納米顆粒清楚地包括在合成納米載體內(nèi)。合成納米載體包括聚合物納米顆粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種或多種聚合物基質(zhì)。然而，合成納米載體還可以包括其他納米材料，并且可以是例如脂類聚合物納米顆粒。在一些實施方案中，可以由包被層(例如脂質(zhì)體、脂質(zhì)單分子層、微膠粒、等)環(huán)繞聚合物基質(zhì)。在一些實施方案中，合成納米載體不是微膠粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個核，該核包括被一個脂質(zhì)層(例如脂質(zhì)雙分子層、脂質(zhì)單分子層、等)環(huán)繞的聚合物基質(zhì)。在一些實施方案中，合成納米載體的不同元件可以與該聚合物基質(zhì)偶合。 合成納米載體可以包括一種或多種脂類。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種脂質(zhì)體。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質(zhì)雙分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質(zhì)單分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種微膠粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括被一個脂質(zhì)層(例如脂質(zhì)雙分子層、脂質(zhì)單分子層、等)環(huán)繞的非聚合物核(例如金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒性顆粒、蛋白、核酸、碳水化合物、等)。合成納米載體可以包括脂基納米顆粒、金屬納米顆粒、表面活性劑基乳液、樹枝狀化合物、巴奇球，納米線、病毒狀顆粒、肽或蛋白基顆粒(例如白蛋白納米顆粒)。合成納米載體可以具有多種不同的形狀，包括但并不局限于球形、立方形、錐形、長方形、圓柱形、 環(huán)形、以及類似形狀。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體包括一個或多個表面?？梢赃m合用于實踐本發(fā)明的示例性的合成納米載體包括(I)Gref等人的美國專利5，543, 158中披露的生物可降解納米顆粒，(2) Saltzman等人的美國專利申請20060002852公開的聚合物納米顆粒，(3)DeSimone等人的美國專利申請20090(^8910公開的石版印刷構(gòu)建的納米顆粒， (4)Andrian等人的W02009/051837的披露，或(5)Penades等人的公開的美國專利申請 2008/0145441中披露的納米顆粒。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm 的最小尺寸，并不包括具有使補(bǔ)體活化的羥基的表面，或者可替代地包括基本由不是使補(bǔ)體活化的羥基的部分組成的表面。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括實質(zhì)上使補(bǔ)體活化的表面，或者可替代地包括基本由不實質(zhì)上活化補(bǔ)體的部分組成的表面。在更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約lOOnm、優(yōu)選地等于或小于IOOnm 的最小尺寸，并不包括使補(bǔ)體活化的表面，或者可替代地包括基本由不使補(bǔ)體活化的部分組成的表面。在實施方案中，合成納米載體可以擁有大于1 1、1 1.2,1 1.5,1 2、 1 3、1 5、1 7、或大于1 10的長徑比。在一些實施方案中，合成納米載體是球體或扁球體。在一些實施方案中，合成納米載體是扁平的或盤狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是立方體或立方形的。在一些實施方案中，合成納米載體是卵形或橢圓形的。在一些實施方案中，合成納米載體是圓柱體、椎體、或錐形。通常希望使用一群在大小、形狀、和/或構(gòu)成方面較一致的合成納米載體，這樣每一合成納米載體具有類似特性。例如，至少80 %、至少90 %、或至少95 %的合成納米載體可以具有落在5 %、10 %或20 %的平均直徑或平均尺寸內(nèi)的最小尺寸或最大尺寸。在一些實施方案中，一群合成納米載體可以關(guān)于大小、形狀、和/或構(gòu)成是不均勻的。合成納米載體可以是實心的或空心的，并且可以包括一個或多個層。在一些實施方案中，相對于其他一層或多層，每一層具有獨特的構(gòu)成和獨特的特性。為了給出但是一個實例，合成納米載體可以具有一個核/殼結(jié)構(gòu)，其中核是一層(例如一個聚合物核)并且殼是一個第二層(例如一個脂質(zhì)雙分子層或單分子層)。合成納米載體可以包括多個不同的層。"T細(xì)胞抗原”是指通過T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答來識別的并且觸發(fā)T細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的任何抗原(例如，經(jīng)由遞呈結(jié)合到I類或II類主要組織相容性復(fù)合物分子(MHC)上的、 或者結(jié)合到CDl復(fù)合物上的抗原或其一部分，通過在T細(xì)胞或NKT細(xì)胞上的T細(xì)胞受體來特異性識別的抗原)。在一些實施方案中，是T細(xì)胞抗原的抗原也是B細(xì)胞抗原。在其他實施方案中，T細(xì)胞抗原并不也是B細(xì)胞抗原。T細(xì)胞抗原一般是蛋白或多肽。T細(xì)胞抗原可以是刺激CD8+T細(xì)胞應(yīng)答、CD4+T細(xì)胞應(yīng)答、或二者的抗原。因此，在一些實施方案中，這些 T細(xì)胞抗原可以有效刺激這兩種類型的應(yīng)答。在一些實施方案中，T細(xì)胞抗原是T輔助細(xì)胞抗原，它是通過刺激T細(xì)胞輔助細(xì)胞， 可以產(chǎn)生對無關(guān)的B細(xì)胞抗原的增強(qiáng)的應(yīng)答的T細(xì)胞抗原。在實施方案中，T輔助細(xì)胞抗原可以包括一種或多種衍生自破傷風(fēng)類毒素、EB病毒、流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒、 麻疹病毒、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、腺病毒、白喉類毒素、或PADRE肽的肽。在其他實施方案中，T輔助細(xì)胞抗原包括一種或多種脂類、或糖脂類，包括但并不局限于α -半乳糖基神經(jīng)酰胺(α-GalCer)、a _連接的糖鞘脂(來自鞘氨醇單胞菌屬)、半乳糖基二?；视?來自伯氏疏螺旋體)lypophosphoglycan(來自杜氏利什曼原蟲)、和磷脂酰肌醇四甘露糖苷(PIM4)(來自麻風(fēng)分枝桿菌)。對于作為T輔助細(xì)胞抗原有用的添加的脂類和 / 或糖月旨類，參見 V. Cerundolo 等人,"Harnessing invariant NKT cells in vaccination strategies. "Nature Rev Immun，9 :28-38 Q009)。在實施方案中，CD4+T 細(xì)胞抗原可以是從一個來源(例如天然來源)獲得的CD4+T細(xì)胞抗原的衍生物。在這樣的實施方案中， CD4+T細(xì)胞抗原序列(例如結(jié)合到MHC II的那些肽)可以具有與從該來源獲得的抗原的至少70 %、80 %、90 %、或95 %的同一性。在實施方案中，T細(xì)胞抗原，優(yōu)選是T輔助細(xì)胞抗原，可以偶合到合成納米載體，或者從合成納米載體解偶合?！捌鋯卧笔侵妇酆衔锏膯误w單元，該聚合物一般由一系列的連接的單體構(gòu)成?！耙呙纭笔侵父倪M(jìn)對具體的病原體或疾病的免疫應(yīng)答的物質(zhì)的組合物。疫苗典型地包含刺激受試者的免疫系統(tǒng)以識別特異性抗原為外來并且將它從受試者身體消除的因子。 疫苗還建立免疫“記憶”，這樣如果人被再攻擊，那么抗原將被迅速識別并響應(yīng)。疫苗可以是預(yù)防性的(例如阻止由任何病原體引起的未來感染)，或治療的(例如為了治療癌癥，針對腫瘤特異抗原的疫苗)。根據(jù)本發(fā)明的疫苗可以包括一種或多種在此提供的合成納米載體或組合物。 制造本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、或合成納米載體的方法
免疫調(diào)節(jié)劑和抗原可以按任何方式被偶合到合成納米載體上，這樣免疫調(diào)節(jié)劑和抗原從合成納米載體的解離滿足在此提供的解離關(guān)系。用于確定解離關(guān)系是否滿足以上其他地方和在實例中提供的解離關(guān)系的方法。在一些實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑和/或抗原可以分別經(jīng)由免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分或抗原偶合部分被偶合(例如共價地)到合成納米載體上。在一些實施方案中，合成納米載體由聚合物(例如生物可降解的的聚合物(例如低分子量生物可降解的聚合物))、和免疫調(diào)節(jié)劑和/或抗原組成，免疫調(diào)節(jié)劑和抗原分別經(jīng)由免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分或抗原偶合部分被偶合到聚合物上。以下連同包括在實例中的其他地方提供了用于偶合免疫調(diào)節(jié)劑和抗原到聚合物以形成本發(fā)明的合成納米載體的方法。可以使用減少它們的PH敏感解離的傾向的技術(shù)合成抗原偶合部分。這樣的技術(shù)可以包括除去或減少存在于對由于環(huán)境PH效應(yīng)的切割敏感的抗原偶合部分中的化學(xué)鍵的數(shù)量?？梢杂酶幻舾械逆I取代，代替原來的鍵。其他技術(shù)可以涉及使用對酸或堿降解敏感的空間位阻的化學(xué)鍵。合成酸/堿穩(wěn)定抗原偶合部分的方法包括經(jīng)由炔與疊氮化物的1，3偶極環(huán)化反應(yīng)形成三唑的點擊化學(xué)，形成六元雜環(huán)的Diels-Alder環(huán)加成作用，邁克爾加成或通過硫醇基的環(huán)氧開環(huán)形成硫-碳鍵，通過用胺環(huán)氧開環(huán)或者胺與醛或酮的還原氨化的氮-碳鍵，通過胺與異氰酸酯或氰酸酯的反應(yīng)形成脲和氨基甲酸酯，通過氧化的硫-硫鍵，或者用胺環(huán)氧開環(huán)。在實施方案中，活性基團(tuán)(例如硫醇、胺、炔或疊氮化物或雙鍵)可以是部分抗原。 在實施方案中，這樣的一個活性基團(tuán)可以例如是一個氨基酸(例如半胱氨酸(硫醇)或賴氨酸(氨基))一部分，或者經(jīng)由肽或類似的化學(xué)被添加到抗原上。額外地，抗原可以被包含在合成納米載體內(nèi)，這樣在免疫調(diào)節(jié)劑如此暴露以后，它暴露于環(huán)境。例如，合成納米載體可以由兩個或更多個層組成，并且抗原可以被偶合到一個內(nèi)層，同時免疫調(diào)節(jié)劑可以被偶合到一個外層。如另一實例，免疫調(diào)節(jié)劑可以被偶合到合成納米載體的表面上，同時抗原被膠囊化在合成納米載體內(nèi)。相反，可以使用增加它們的pH敏感解離的傾向的技術(shù)合成免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分。 這樣的技術(shù)包括，包含或增加存在于對由于環(huán)境PH效應(yīng)的切割敏感的抗原偶合部分中的化學(xué)鍵的數(shù)量。將在以下更詳細(xì)地說明這樣的鍵。提供的以下方法或這些方法的任何步驟都是示例性的，并且可以在任何合適的條件下進(jìn)行。在一些情況下，提供的這些方法的反應(yīng)或任何步驟可以在溶劑或溶劑的混合物存在的條件下進(jìn)行。適合用于本發(fā)明的溶劑的非限制性實例包括，但并不局限于對苯甲酚、甲苯、二甲苯、均三甲苯、二乙醚、二醇、石油醚、己烷、環(huán)己烷、戊烷、二氯甲烷(或亞甲基氯)、氯仿、二噁烷、四氫呋喃(THF)、二甲亞砜(DMS0)、二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯 tOAc)、三乙胺、乙腈、甲基叔丁基醚(MTBE)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、二甲基乙酰胺 (DMAC)、異丙醇(IPA)、它們的混合物、或類似物質(zhì)。在一些情況下，該溶劑選自下組，該組由以下各項組成乙酸乙酯、亞甲基氯、THF、DMF、NMP、DMAC、DMSO、和甲苯、或它們的混合物。可以在任何合適的溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。在一些情況下， 在約室溫下(例如約25°C、約20°C、在約20°C和約25°C之間、或類似溫度)進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。然而，在一些情況下，可以在低于或高于室溫的溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟，例如在約_20°C、在約-10°C、在約0°C、在約10°C、在約30°C、約
2040°C、約 50°C、約 60°C、約 70°C、約 80°C、約 90°C、約 100°C、約 120°C、約 140°C、約 150°C或更高溫度。在具體的實施方案中，在0°C和120°C之間的溫度進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。在一些實施方案中，可以在多于一個溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟 (例如在一個第一溫度下添加反應(yīng)物，并且在一個第二溫度下攪拌該反應(yīng)混合物，其中從第一溫度至第二溫度的轉(zhuǎn)變可以是逐漸的或迅速的)?？梢栽试S所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟進(jìn)行任何合適的一段時間。在一些情況下，允許所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟進(jìn)行約10分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約40分鐘、 約50分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時、約12小時、約16小時、約M小時、約 2天、約3天、約4天、或更長時間。在一些情況下，可以在一個中間時間移出并分析反應(yīng)混合物的等分部分以確定所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟的進(jìn)展。在一些實施方案中，可以在惰性氣氛在無水條件下(例如在氮氣或氬氣氣氛、無水溶劑、等條件下)進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。可以使用普遍已知的技術(shù)分離(例如經(jīng)由蒸餾、柱色譜法、萃取、沉淀、等)和/或分析(例如氣液色譜法、高效液相色譜法、核磁共振波譜法、等)反應(yīng)產(chǎn)物和/或中間產(chǎn)物。 在一些情況下，可以例如使用反相高效液相色譜法分析合成納米載體，以確定免疫調(diào)節(jié)劑或抗原的加載。這些聚合物可以具有任何合適的分子量。例如這些聚合物可以具有低或高分子量。非限制性的分子量值包括 100Da、200Da、300Da、500Da、750Da、1000Da、2000Da、3000Da、 4000Da、5000Da、6000Da、7000Da、8000Da、9000Da、10, OOODa、或更大。在一些實施方案中，這些聚合物具有約SOODa至約10，OOODa的重均分子量。在其他實施方案中，任何在此提供的聚合物可以具有約800Da至10，OOODa(例如2，OOODa)的重均分子量?？梢允褂媚z滲透色譜法確定聚合物的分子量。在一些實施方案中，在pH = 7.4并且在25 °C下該聚合物在水中是不可溶的，該聚合物是生物可降解的，或者同時滿足這二者。在其他實施方案中，在PH = 7. 4并且在25 °C 下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在pH = 4. 5并且在25°C下是可溶的。仍在其他實施方案中，在PH = 7. 4并且在25 °C下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在pH = 4. 5并且在 25°C下是可溶的并且生物可降解的。在一些實施方案中，該聚合物包括聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、或聚醚。在其他實施方案中，該聚合物包括聚(乙二醇)(PEG)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。在一些實施方案中，優(yōu)選該聚合物是生物可降解的。因此，在這些實施方案中，優(yōu)選如果該聚合物包括聚醚(例如聚(乙二醇)或其單元)，那么該聚合物包括聚醚和生物可降解聚合物的嵌段共聚物，這樣該聚合物是生物可降解的。在其他實施方案中，該聚合物并不單獨包括聚醚(例如聚(乙二醇))。因此如在此提供的偶合部分可以包括一個以上提到的聚合物或其單元(例如一種丙交酯或乙交酯)。以下提供的是并不旨在限制的示例性反應(yīng)。根據(jù)這些示例性反應(yīng)中的一個反應(yīng)， 該免疫調(diào)節(jié)劑到一個免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分上。方法1使用在酰胺合成中普遍使用的活化試劑，將一種聚合物(例如PLA、PLGA)或其單元與至少一種酸端基轉(zhuǎn)化為一種反應(yīng)性酰化劑，例如鹵化?；?、酰基咪唑、活性酯、等。
在這一兩步法中，分離生成的活化聚合物或其單元(例如PLA、PLGA)，并且然后在一種堿存在下，與一種免疫調(diào)節(jié)劑(例如R848)反應(yīng)以給出希望的結(jié)合物(例如 PLA-R848)，例如像以下圖解示出的那樣
權(quán)利要求
1.一種組合物，包括合成納米載體，包括(a)一種偶合到該合成納米載體上的免疫調(diào)節(jié)劑；以及(b)一種偶合到該合成納米載體上的抗原；其中該免疫調(diào)節(jié)劑和抗原根據(jù)以下關(guān)系從該合成納米載體解離IA(rel) % /A(rel) 1. 2其中IA(rel) %被定義為在pH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時， 釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量除以在PH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時， 釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的重量加上在PH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時， 保留在該合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)；并且其中A(rel) %被定義為在pH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的抗原的重量除以在PH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，釋放的抗原的重量加上在PH = 4. 5，將該合成納米載體暴露于體外水環(huán)境M小時，保留在該合成納米載體中的抗原的重量之和，表示為重量百分?jǐn)?shù)，并且被取作跨合成納米載體樣品的平均數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)由一個免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分偶合到該合成納米載體上。
3.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑被共價偶合到該合成納米載體上。
4.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑被膠囊化在該合成納米載體內(nèi)。
5.如權(quán)利要求1-4中任意一項所述的組合物，其中該抗原經(jīng)由一個抗原偶合部分偶合到該合成納米載體上。
6.如權(quán)利要求5所述的組合物，其中該抗原被共價偶合到該合成納米載體上。
7.如權(quán)利要求1或5所述的組合物，其中該抗原被膠囊化在該合成納米載體內(nèi)。
8.如權(quán)利要求1-7中任意一項所述的組合物，其中該抗原是一種B細(xì)胞抗原。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該B細(xì)胞抗原是一種衍生自傳染劑的抗原。
10.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該B細(xì)胞抗原是一種免疫原性差的抗原。
11.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該B細(xì)胞抗原是一種濫用的物質(zhì)或其一部分或者是一種上癮的物質(zhì)或其一部分。
12.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該B細(xì)胞抗原是一種毒素或危險的環(huán)境因素。
13.如權(quán)利要求8所述的組合物，其中該B細(xì)胞抗原是一種變應(yīng)原、一種退行性疾病抗原、一種癌抗原、一種特應(yīng)性疾病抗原、或一種代謝病抗原。
14.如權(quán)利要求1-7中任意一項所述的組合物，其中該抗原是一種T細(xì)胞抗原。
15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中該T細(xì)胞抗原是一種MHCI類抗原。
16.如權(quán)利要求1-15中任意一項所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑是一種佐劑。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中該佐劑包括一種Toll樣受體(TLR)激動劑。
18.如權(quán)利要求17所述的組合物，其中該TLR激動劑是一種TLR3激動劑、TLR7激動齊U、TLR8激動劑、TLR7/8激動劑或一種TLR9激動劑。
19.如權(quán)利要求17或18所述的組合物，其中該TLR激動劑是一種咪唑并喹啉。
20.如權(quán)利要求19所述的組合物，其中該咪唑并喹啉是瑞喹莫德或咪喹莫特。
21.如權(quán)利要求17或18所述的組合物，其中該TLR激動劑是一種免疫刺激核酸。
22.如權(quán)利要求21所述的組合物，其中該免疫刺激核酸是一種免疫刺激DNA或免疫刺激 RNA。
23.如權(quán)利要求21或22所述的組合物，其中該免疫刺激核酸是一種含有CpG的免疫刺激核酸。
24.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中該佐劑包括一種通用T-細(xì)胞抗原。
25.如權(quán)利要求I-M中任意一項所述的組合物，其中這些合成納米載體包括一種或多種可生物降解的聚合物。
26.如權(quán)利要求25所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑經(jīng)由該免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分偶合到這一種或多種可生物降解的聚合物上。
27.如權(quán)利要求沈所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑被共價偶合到這一種或多種可生物降解的聚合物上。
28.如權(quán)利要求27所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分包括一個酰胺鍵。
29.如權(quán)利要求27所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分包括一個酯鍵。
30.如權(quán)利要求沈所述的組合物，其中該免疫調(diào)節(jié)劑偶合部分包括一個靜電鍵。
31.如權(quán)利要求25-29中任意一項所述的組合物，其中該可生物降解的聚合物包括聚 (丙交酯)、聚(乙交酯)、或聚(丙交酯乙交酯)共聚物。
32.如權(quán)利要求25- 和31中任意一項所述的組合物，其中如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，這些可生物降解的聚合物具有范圍從800道爾頓至10，000道爾頓的重均分子量。
33.如權(quán)利要求1-32中的任意一項所述的組合物，其中該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(APC)靶向特征。
34.如權(quán)利要求1-33中任意一項所述的組合物，其中這些合成納米載體包括脂基納米顆粒，聚合物納米顆粒，金屬納米顆粒，表面活性劑基乳液，樹枝狀化合物，巴奇球，納米線， 病毒狀顆粒，肽或蛋白基顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一種組合的納米顆粒。
35.如權(quán)利要求1-34中任意一項所述的組合物，進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
36.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如權(quán)利要求1-35中任意一項所述的組合物。
37.一種方法，包括將如權(quán)利要求1-36中任意一項所述的組合物給予一個受試者。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其中該組合物以一個有效誘導(dǎo)或增強(qiáng)免疫應(yīng)答的量存在。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中該受試者患有癌、一種傳染病、一種非自身免疫性代謝病、一種退行性疾病、或一種依賴癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及合成納米載體的組合物、以及相關(guān)方法，這些合成納米載體包括從合成納米載體差異地釋放的免疫調(diào)節(jié)劑和抗原。
文檔編號A61P37/04GK102481375SQ201080028146
公開日2012年5月30日 申請日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日
發(fā)明者付芬妮, 查爾斯·澤普, 格雷森·B·利甫福德, 洛伊德·約翰斯頓, 薩姆·鮑德溫, 馬克·J·基根, 高云 申請人:西萊克塔生物科技公司