專利名稱：用于預(yù)防和治療心血管疾病的、包括來(lái)自棕櫚油研磨廢棄物的化合物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療心血管疾病的組合物的使用，尤其地，本發(fā)明涉及基于從棕桐油廢棄物(effluent)獲取的提取物獲取的組合物，所述組合物包括維生素Ε、 酚類類黃酮及其結(jié)合，所述組合物用于預(yù)防和治療心血管疾病、尤其動(dòng)脈粥樣硬化的方法 (means)的準(zhǔn)備。
背景技術(shù)：
動(dòng)脈粥樣硬化是心血管疾病(CVD)的示例，其需要預(yù)防和治療方面的終身處理 (management)。近來(lái)認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化是東南亞地區(qū)死亡的主要原因，每年該死亡占大約4 百萬(wàn)的致死性病例。這ー特殊疾病以使具有沉積物的動(dòng)脈內(nèi)膜硬化和增厚為特征，所述沉積物由脂肪性物質(zhì)、膽固醇、細(xì)胞廢物、鈣和纖維蛋白組成。因此，如果沒(méi)有治療，嵌入動(dòng)脈壁的、稱為斑塊或粥瘤的積累物將最終堵塞動(dòng)脈，并且是心臟病發(fā)作、胸痛或中風(fēng)的主要促進(jìn)因素 ^contributory factor)。與膽固醇的出現(xiàn)相關(guān)的主要載體以及它在動(dòng)脈中如上所述的損壞性積聚和堵塞的主要來(lái)源是低密度脂蛋白(LDL)。一般地，LDL將膽固醇運(yùn)載至外周組織并相應(yīng)地穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞，其導(dǎo)致斑塊的進(jìn)一步發(fā)展并因此形成動(dòng)脈壁膽固醇。決定性地，具有大量LDL的病人明顯具有高的動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)以上所述，以及意識(shí)到通過(guò)減少或降低病人LDL的量可顯著協(xié)助減少動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的事實(shí)，多年來(lái)基于這ー關(guān)鍵性因素已使科學(xué)驗(yàn)證的藥物和治療的發(fā)展完成準(zhǔn)備工作。正在進(jìn)行的科學(xué)發(fā)展包含抑制或降低膽固醇產(chǎn)生的幾種化學(xué)開發(fā)藥物和藥物組合物；例如，這些藥物包含他汀類(statins)。目前，替代性方法還包含消費(fèi)含有高級(jí)抗氧化物的果汁或物質(zhì)，例如石榴汁?？寡趸锏拇嬖诳蓞f(xié)助中和自由基損傷。自由基是可損傷細(xì)胞物質(zhì)的高反應(yīng)性化學(xué)物質(zhì)，并因此造成包含心血管疾病和癌癥的主要退行性疾病。此外，以組合物為基礎(chǔ)的植物性藥材或植物在提供與心血管疾病相關(guān)的有效治療方面也起主要作用。植物提取物中具有有益性能的主要成分包含因治療和預(yù)防一系列膽固醇相關(guān)疾病而廣泛聞名的抗氧化物，其中植物中抗氧化物的實(shí)例包含酚酸和類黃酮。可從植物提取的、具有極大醫(yī)療效果的其他植物基礎(chǔ)組分或礦物質(zhì)包含鉀、鈣和鎂，其中所述礦物質(zhì)公認(rèn)為預(yù)防和管理例如高血壓、心血管疾病和糖尿病的機(jī)能紊亂。緊接著以上所述，為治療心血管疾病使用具有抗氧化性能的天然植物提取物而不是合成抗氧化物正發(fā)展開來(lái)。油棕果是兩種主要的植物化學(xué)物質(zhì)、即維生素E (生育酚和生育三烯酚)和類胡蘿卜素的示例性優(yōu)秀來(lái)源，所述兩種主要的植物化學(xué)物質(zhì)均為脂溶性。已報(bào)導(dǎo)的是，棕櫚維生素E充當(dāng)防御氧化應(yīng)激和動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程的有效生物抗氧化物。
本發(fā)明的主要目的在于基于植物提取物為制備用于治療心血管疾病的藥劑提供組合物。本發(fā)明的其他目的在于為制備用于治療心血管疾病的安全藥物提供組合物，所述組合物包含棕桐油酚類物質(zhì)和棕櫚維生素E。潛在益處在于抑制斑塊的形成并因此抑制動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
一種組合物，所述組合物用于制備預(yù)防和治療心血管疾病的藥物，所述組合物包括從棕桐油研磨廢棄物提取的組分。在本發(fā)明的另一方面，提供用于預(yù)防心血管疾病的組合物，所述組合物還包括維生素E。進(jìn)ー步地，本發(fā)明涉及治療有效量的組合物連同或不連同維生素E在制備供給有需要(in need)的個(gè)體的、用于預(yù)防和抑制個(gè)體的心血管疾病的藥物中的使用。


當(dāng)結(jié)合附圖閱讀時(shí)，參照以下詳細(xì)描述可最佳地理解操作方法連同其特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)，所述附圖中圖1顯示了可觀察的各處理對(duì)兔子的血脂譜(plasma lipid profile)的作用(A 總膽固醇，B =LDL-膽固醇，C =HDL-膽固醇，D 甘油三酯)；圖2顯示了在100天處理后動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展(A 纖維斑塊，B 脂肪斑塊， (:脂紋，0:無(wú)病變)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明涉及基于棕櫚酚類物質(zhì)和維生素E的、對(duì)預(yù)防和治療心血管疾病(尤其動(dòng)脈粥樣硬化)的良好治療效果的鑒定，以及其組合物的生產(chǎn)。從植物液中成功重獲富含類黃酮(flavanoid)和酚酸的水溶性粗提物，所述植物液產(chǎn)生自油棕果的研磨。巴拉蘇德拉姆(Balasimdram，2006)已報(bào)導(dǎo)了棕櫚酚類物質(zhì)提取物在體外和體內(nèi)系統(tǒng)內(nèi)的抗氧化活性。在動(dòng)物和細(xì)胞培養(yǎng)模式系統(tǒng)中，這ー提取物經(jīng)測(cè)驗(yàn)并確認(rèn)具有對(duì)抗癌癥和動(dòng)脈粥樣硬化的抗氧化性能和有效的防護(hù)作用。維生素E防御自由基介導(dǎo)的疾病的潛在作用是許多研究的主題。目前，對(duì)棕櫚油內(nèi)維生素E、尤其生育三烯酚的營(yíng)養(yǎng)和生理特性的興趣不斷増加。流行病學(xué)研究已將維生素E和其他抗氧化物的飲食攝入與降低風(fēng)險(xiǎn)的冠心病(林曼(Rimm)等，199 和缺血性中風(fēng)(邦納(bormer)等，1995)聯(lián)系起來(lái)、以及與頸動(dòng)脈厚度的減少(克里切夫斯基 (Kritchevsky)等，1995)聯(lián)系起來(lái)?；舻纤?Hodis)等(1995)報(bào)導(dǎo)了抗氧化維生素減慢冠狀動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程，塞瑞奧爾特(Theriault)等^00 發(fā)現(xiàn)Δ -生育三烯酚是降低單核細(xì)胞上粘附分子和粘著物的內(nèi)皮表達(dá)、因此降低發(fā)展動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)的最有效的維生素Ε。與對(duì)照飲食相比，以下試驗(yàn)顯示了棕櫚維生素E的內(nèi)含物顯著降低了這些動(dòng)物內(nèi)纖維斑塊的程度。這ー發(fā)現(xiàn)與克里切夫斯基(Kritchevsky)等Q000)的觀察一致，他們報(bào)導(dǎo)了與精煉、脫色、除臭(RBD)的棕桐油或隨機(jī)棕桐油相比，包含維生素E和胡蘿卜素的紅棕桐油導(dǎo)致最不嚴(yán)重的動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展，并提出胡蘿卜素和維生素E可防御動(dòng)脈粥樣硬化。從威爾遜(Wilson)等(1978)的其他研究中也可觀察到類似效果，他們發(fā)現(xiàn)飲食中添加(w/w)的維生素E造成兔子主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化的顯著減少。更早的研究(海曼(Haiman)，1960)中還報(bào)導(dǎo)了維生素E對(duì)膽固醇誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化的防護(hù)作用。另ー方面，ー些研究者(達(dá)姆(Dam)，1994)發(fā)現(xiàn)維生素E對(duì)兔子的血脂參數(shù)或動(dòng)脈粥樣化形成沒(méi)有影響，而其他人報(bào)導(dǎo)維生素E改進(jìn)了一些脂質(zhì)參數(shù)但沒(méi)有抑制動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊形成(伊斯梅爾(Ismail)等，2000)。相應(yīng)地，依照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例且基于將簡(jiǎn)短描述的操作實(shí)例，棕櫚酚類物質(zhì)単獨(dú)地(AO)或與維生素E結(jié)合地(ACffi)顯示出，與CTR和VIT E相比，在AO和AOE組中觀察到對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病變顯著地優(yōu)良抑制作用。為了這ー發(fā)明，通過(guò)兩種不同方法，即FRAP和ABTS‘ +測(cè)量血漿抗氧化能力。從 ABTS' +清除試驗(yàn)獲得的結(jié)果顯示了所有四個(gè)組無(wú)顯著性差異。FRAP試驗(yàn)的結(jié)果也無(wú)統(tǒng)計(jì)顯著性，盡管AO組和AOE組的血漿抗氧化能力傾向于比CTR組的血漿抗氧化能力更高。本文將描述基于各個(gè)試驗(yàn)獲取的方法和結(jié)果，所述各個(gè)試驗(yàn)用于確定棕桐油植物中所述化合物的有效性。實(shí)施本發(fā)明的最佳模式操作實(shí)例材料和方法1.動(dòng)物、飲食和試驗(yàn)設(shè)計(jì)4-5個(gè)月大的32只雄性新西蘭白兔隨機(jī)分為4個(gè)不同處理組、每組8只動(dòng)物。將各動(dòng)物單個(gè)收容在不銹鋼籠子中，并將其維持在具有12小時(shí)光照周期(daylight cycle) 的溫度受控房間中(25°C -28°C )。所有動(dòng)物隨機(jī)地以致動(dòng)脈粥樣硬化飲食(diet)為食100 天。另外，還為動(dòng)物提供維生素E、棕櫚酚類物質(zhì)或其結(jié)合。四個(gè)試驗(yàn)組分類如下1.高脂肪致動(dòng)脈粥樣硬化飲食-対照(CTR)2.高脂肪致動(dòng)脈粥樣硬化飲食+維生素E (VIT E)3.高脂肪致動(dòng)脈粥樣硬化飲食+棕櫚酚類物質(zhì)(AO)。4.高脂肪致動(dòng)脈粥樣硬化飲食+維生素E+棕櫚酚類物質(zhì)(AOE)。致動(dòng)脈粥樣硬化飲食如表1中所示按配方制造。飲食包含來(lái)自脂肪的35%的能里。表1配制的兔子致動(dòng)脈粥樣硬化飲食的組合物成分g/kg飲食酪蛋白250.0玉米淀粉200.0右旋葡萄糖193.0纖維素150.0礦物混合物40.0維生素混合物10.0重酒石酸膽堿2.5DL-蛋氨酸3.0膽固醇1.5膳食脂肪150.0使用的膳食脂肪設(shè)計(jì)為致動(dòng)脈粥樣硬化，并包括飽和脂肪酸67. 1 % (C12:0+C14:0 = 54.9% )、單不飽和脂肪酸15. 7% (C18:l)以及多不飽和脂肪酸12. 0% (表幻。根據(jù)它們的甲酷使用氣相色譜確定膳食油的脂肪酸組合物(桑德蘭姆等，1997)。在VIT E和AOE組的飲食中，富含生育三烯酚的棕櫚維生素E用作維生素E來(lái)源， 1250mg的這ー維生素E添加至每千克的膳食脂肪中。VIT E顆粒飲食中最終的維生素E含量為237. Omg/kg,而基本的顆粒飲食(喂給CTR和AO組)含50mg/kg的維生素E，其主要來(lái)源于飲食配方中使用的油。向AO和AOE組提供棕櫚酚類物質(zhì)，作為它們含1500mg GAE/ L總酚類物質(zhì)的飲用流體。在飼養(yǎng)試驗(yàn)期間，連續(xù)監(jiān)控動(dòng)物的食物攝取量、水消耗量和體重増加。在14天的連續(xù)持續(xù)時(shí)間內(nèi)測(cè)試AO和AOE組棕櫚酚類物質(zhì)的消耗量，發(fā)現(xiàn)其大約為 150mg GAE/ 日 / 動(dòng)物。表2 試驗(yàn)飲食中主要脂肪酸的含量(％ )碳的數(shù)目膳食脂肪飽和脂肪酸(SFA)67.1412:040.3814:014.5016:09.7218:02.4020:00.14多不飽和脂肪酸^ (PUFA)12.0218:2(n-6)11.8818:3(n-3)0.14單不飽和脂肪酸^ (MUFA)15.6818:l(n-9)15.68在飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，處死所有動(dòng)物。在處死之前使動(dòng)物整夜禁食，用卡特敏和舒泰的混合物(O. lmL/kg體重)麻醉動(dòng)物，并通過(guò)心穿刺術(shù)取30mL血。在3000g離心20分鐘制備血漿，并在分析前將其在-80°C保存。然后，在解剖前使動(dòng)物服用過(guò)量的戊巴比妥鈉，從而移除感興趣的各個(gè)器官，例如肝臟、心臟、肺和腎。密切跟蹤、解剖動(dòng)脈系統(tǒng)，并清理動(dòng)脈系統(tǒng)的粘附外膜組織。接著切開動(dòng)脈，并在為了量化動(dòng)脈粥樣硬化病變用油紅-ο染色前將其保存在10%的福爾馬林溶液中。2.致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)的生化分析和測(cè)量以下列舉的所有試驗(yàn)分析在多數(shù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室中是現(xiàn)行的和標(biāo)準(zhǔn)的。血脂分析根據(jù)制造商的規(guī)程(protocol)，在羅氏/日立902 (Roche/Hitachi 902)的臨床化學(xué)自動(dòng)分析儀上使用酶試劑盒(羅氏診斷有限公司(Roche DiagnosticsGmbH)，曼海姆 (marmheim)，德國(guó))分析血脂(TC、甘油三酯(TG)、HDL-C)。血漿抗氧化狀態(tài)通過(guò)兩種方法，即2，2’ -連氮基-雙-(3-乙基苯并ニ氫噻唑啉)-6-磺酸陽(yáng)離子 (ABTS·+)脫色試驗(yàn)和血漿的鐵還原能力(FRAP)，測(cè)試血漿抗氧化狀態(tài)。使用雷(Re)等(1999)的、經(jīng)巴拉蘇德拉姆O006)適應(yīng)性調(diào)整的方法測(cè)量兔血漿清除ABTS·+的能力。本質(zhì)上這一試驗(yàn)測(cè)量血漿中的抗氧化物清除過(guò)硫酸鉀氧化ABTS產(chǎn)生的預(yù)制(preformed)ABTS‘ +的能力。色彩強(qiáng)烈的ABTS‘ +較穩(wěn)定，但在抗氧化物存在時(shí)，它容易還原為ABTS‘2_。將6分鐘后734nm處的吸收損失當(dāng)做ABTS·+清除活性的量度。使用 6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并ニ氫吡喃-2-羧酸(衍生物)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)ABTS·+清除曲線，按照毫克(mg)衍生物當(dāng)量/mL(mg TE/mL)記錄血漿的ABTS· +清除能力。使用費(fèi)魯茲(Firuzi)等Q005)的、經(jīng)巴拉蘇德拉姆O006)適應(yīng)性調(diào)整的方法測(cè)量血漿的鐵還原抗氧化能力。初始的FRAP試驗(yàn)由本西(Benzie)和斯特雷恩(Strain) (1996)開發(fā)，作為測(cè)量血漿鐵還原能力的測(cè)試，即通過(guò)電子轉(zhuǎn)移機(jī)制將三價(jià)鐵_2，4，6三吡啶-S-三嗪(Fe3+-TPTZ)還原為ニ價(jià)鐵-2，4，6三吡啶_s_三嗪(Fe2+-TPTZ)的能力。這ー 還原導(dǎo)致具有最大吸收為593nm的強(qiáng)藍(lán)色還原絡(luò)合物的產(chǎn)生(本西和斯特雷恩，1996)。組織病理學(xué)檢驗(yàn)采用油紅-0染色動(dòng)脈，通過(guò)使用圖像分析軟件(IDT-解決方案)著手動(dòng)脈粥樣硬化病變的量化。病變的分類如下表3中所示表3 病變表征
權(quán)利要求
1.用于制備預(yù)防和治療心血管疾病的藥物的組合物，其特征在干，所述組合物包括從棕桐油研磨廢棄物中提取的成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在干，所述組合物還包括維生素E。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在干，所述組合物包括從棕桐油研磨廢棄物提取的酚類物質(zhì)和類黃酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在干，它們可作為具有藥物可接受載體的化合物提供。
5.治療有效量的權(quán)利要求1所述的組合物連同或不連同維生素E、在制備供給有需要的個(gè)體的、用于預(yù)防和抑制個(gè)體的心血管疾病的藥物中的使用。
全文摘要
本發(fā)明提供了預(yù)防和治療心血管疾病的組合物，其中從棕櫚油研磨廢棄物、尤其從棕櫚油果實(shí)的研磨植物液獲得所述組合物化合物。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102573869SQ201080031377
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者卡里亞納·桑德拉姆·P.·馬尼卡姆, 哈查慈安妮莎哈茲·Hj·慈艾德斯, 拉維加德維·沙姆巴沙穆提, 莫哈末·巴斯利·瓦西德, 譚友愛(ài), 那貞德蘭·巴拉蘇德拉姆 申請(qǐng)人:馬來(lái)西亞棕櫚油協(xié)會(huì)