專利名稱：用于脈絡(luò)膜新生血管形成的疫苗療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)要求2009年6月11日提交的日本專利申請(qǐng)?zhí)?009-140363的權(quán)益，在此通過(guò)述及將其內(nèi)容完整收入本文用于所有目的。本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物和疫苗。本發(fā)明還涉及用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物和疫苗。
背景技術(shù)：
由脈絡(luò)膜新生血管形成(CNV)引起的滲出性年齡相關(guān)黃斑變性(AMD)是發(fā)達(dá)國(guó)家中嚴(yán)重視力缺損的主要原因之一。至今的證據(jù)提示血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在CNV發(fā)生中發(fā)揮中樞作用。例如，已經(jīng)報(bào)告了 CNV受到抑制VEGF生成的化合物或抑制VEGF信號(hào)轉(zhuǎn) 導(dǎo)途徑的化合物的阻抑。而且，還已經(jīng)報(bào)告了抗VEGF抗體顯示出與常規(guī)治療方法(包括光動(dòng)力學(xué)療法)相比更高的治療功效。因此，最近幾年，抗VEGF劑已經(jīng)成為針對(duì)CNV的藥物療法的一個(gè)主要選項(xiàng)。VEGF信號(hào)傳導(dǎo)由兩種類型的受體酪氨酸激酶介導(dǎo)，即VEGF受體I (VEGFR-I)和VEGF受體2 (VEGFR-2)。這兩種受體在人CNV膜和實(shí)驗(yàn)室小鼠CNV膜上得到了表達(dá)。然而，VEGFR-I信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在CNV中的作用仍有爭(zhēng)論。例如，一項(xiàng)研究報(bào)告了通過(guò)口服施用抗體、基因敲低、或siRNA對(duì)VEGFR-I信號(hào)傳導(dǎo)的抑制能抑制CNV。另一項(xiàng)研究報(bào)告了在眼中，VEGF或胎盤(pán)生長(zhǎng)因子I (PIGF1，一種VEGFR-2配體)對(duì)VEGFR-I的活化能經(jīng)由SPARC對(duì)VEGFR-2的活化而導(dǎo)致CNV活化。另一方面，對(duì)于VEGFR-2，VEGFR-2信號(hào)傳導(dǎo)的活化能促進(jìn)CNV生長(zhǎng)的發(fā)現(xiàn)已經(jīng)得到了廣泛承認(rèn)。因此，預(yù)期靶向VEGFR-2的血管發(fā)生性手段(諸如系統(tǒng)或局部施用抗VEGFR-2劑或VEGFR-2抗體，及玻璃體內(nèi)施用siRNA)能抑制VEGFR-2信號(hào)傳導(dǎo)和CNV生長(zhǎng)。然而，當(dāng)前可得的抗VEGF劑的問(wèn)題在于它們需要以4-6周間隔反復(fù)注射施用。而且，有嚴(yán)重并發(fā)癥諸如眼內(nèi)炎和視網(wǎng)膜剝離的高風(fēng)險(xiǎn)。因此，希望建立新型治療方法來(lái)替換當(dāng)前使用的抗VEGF劑。已知利用自人VEGF受體2衍生的肽的疫苗能在腫瘤組織中誘導(dǎo)具有有力的針對(duì)表達(dá)VEGFR-2的內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)(專利文件I)。還知道利用自人VEGF受體I衍生的肽的疫苗能誘導(dǎo)具有有力的針對(duì)表達(dá)VEGFR-I的內(nèi)皮的細(xì)胞毒性的CTL(專利文件2)。而且，已經(jīng)確認(rèn)了利用自VEGF受體2衍生的肽的疫苗在小鼠中具有CNV抑制效果(專利文件3)。然而，正如在其它組織中，脈絡(luò)膜中新生血管形成的機(jī)制中有許多不清楚之處，而且不知道有效抑制人脈絡(luò)膜中CNV的疫苗的存在。[引用表][專利文獻(xiàn)][PTL 1]W0 2004/024766[PTL 2]WO 2006/093030[PTL 3]WO 2008/099908
發(fā)明概述技術(shù)問(wèn)題鑒于上述情況，實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明。本發(fā)明要實(shí)現(xiàn)的一個(gè)目標(biāo)是提供用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的新型藥物作用劑和方法。解決方案本發(fā)明人對(duì)新生血管性黃斑病變患者施用了含有VEGFR-I衍生肽的藥物組合物/疫苗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了這能有效抑制人CNV而不引起提示安全性問(wèn)題的問(wèn)題，由此完成了本發(fā)明。更具體地，本發(fā)明提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨 基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。本發(fā)明還提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。本發(fā)明還提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。而且，本發(fā)明提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。本發(fā)明提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的方法，其包括至少對(duì)受試者施用包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸的步驟。本發(fā)明還提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的方法，其包括至少對(duì)受試者施用包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成弓I起的疾病的藥物組合物中的用途。而且，本發(fā)明提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗中的用途。本發(fā)明還提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物中的用途。另外，本發(fā)明提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗中的用途。
本發(fā)明進(jìn)一步提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽，其用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病?；蛘?，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種制造用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物的方法或工藝，其中該方法或工藝包括配制藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體與活性組分即包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供一種制造用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物的方法或工藝，其中該方法或工藝包括混合活性組分與藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體的步驟，其中該活性組分是包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸?；蛘?，在一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明中，VEGFR-I衍生肽也可以與VEGFR-2衍生肽組合施用來(lái)治療或抑制人CNV。因而，本發(fā)明提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新 生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物，其包含選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型作為活性組分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明還提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其包含選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型作為活性組分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明還提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其包含選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型作為活性組分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。而且，本發(fā)明提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其包含選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型作為活性組分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明提供一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的方法，其包括對(duì)受試者施用選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明還提供一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的方法，其包括對(duì)受試者施用選自下組的肽每一項(xiàng)的至少一種類型(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的 肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明進(jìn)一步提供選自下組的肽在制造用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。而且，本發(fā)明提供選自下組的肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成弓I起的疾病的疫苗中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。本發(fā)明還提供選自下組的肽在制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。另外，本發(fā)明提供選自下組的肽在制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。另外，本發(fā)明提供選自下組的肽，其用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。
另外，本發(fā)明提供選自下組的肽，其用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。
或者，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種制造用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物的方法或工藝，其中該方法或工藝包括配制藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體與選自下組的活性組分作為活性組分的步驟(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。或者，本發(fā)明進(jìn)一步提供一種制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗的方法或工藝，其中該方法或工藝包括將選自下組的活性組分作為活性組分與藥學(xué)或生理學(xué)可接受的載體配制的步驟(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供一種制造用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物的方法或工藝，其中該方法或工藝包括混合活性組分與藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體的步驟，其中該活性組分選自下組(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供一種制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗的方法或工藝，其中該方法或工藝包括混合活性組分與藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體的步驟，其中該活性組分選自下組(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽和/或編碼它的多核苷酸。更具體地，本發(fā)明提供下述[I]至[30]；[I] 一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物，其包含(a)肽即包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，或編碼它的多核苷酸作為活性組分，[2] [I]的藥物組合物，其中該上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)的肽
(i)至少一種包含選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[3] [2]的藥物組合物，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4) SEQ ID NO 4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[4] [I]至[3]任一項(xiàng)的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含(b)肽即包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，[5] [4]的藥物組合物，其中該上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)(i)至少一種包含選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[6] [5]的藥物組合物，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[7] [I]至[6]任一項(xiàng)的藥物組合物，其中該由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出性年齡相關(guān)黃斑變性，近視性黃斑變性，血管樣條紋癥，中央滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變，各種視網(wǎng)膜色素上皮病，脈絡(luò)膜萎縮，無(wú)脈絡(luò)膜，和脈絡(luò)膜骨瘤，[8] [I]至[7]任一項(xiàng)的藥物組合物，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者，[9] 一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其包含(a)肽即包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，或編碼它的多核苷酸作為活性組分，[10] [9]的疫苗，其中該上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)肽
(i)至少一種包含選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[11] [10]的疫苗，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[12] [9]至[11]任一項(xiàng)的疫苗，其中該疫苗進(jìn)一步包含(b)肽即包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，[13] [12]的疫苗，其中該上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)(i)至少一種包含選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[14] [13]的疫苗，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基 酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[15] [9]至[14]任一項(xiàng)的疫苗，其中該由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出性年齡相關(guān)黃斑變性，近視性黃斑變性，血管樣條紋癥，中央滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變，各種視網(wǎng)膜色素上皮病，脈絡(luò)膜萎縮，無(wú)脈絡(luò)膜，和脈絡(luò)膜骨瘤，[16] [9]至[15]任一項(xiàng)的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者，[17] 一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其包含(a)肽即包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，或編碼它的多核苷酸作為活性組分，[18] [17]的藥物組合物，其中該上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)的肽(i)至少一種包含選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[19] [18]的藥物組合物，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[20] [17]至[19]任一項(xiàng)的的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含(b)肽即包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，[21] [20]的藥物組合物，其中該上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)⑴至少一種包含選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[22] [21]的藥物組合物，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸 的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[23] [15]至[19]任一項(xiàng)的藥物組合物，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者，[24] 一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其包含(a)肽即包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，或編碼它的多核苷酸作為活性組分，[25] [24]的疫苗，其中該上文所述(a)的肽包括下文⑴和(ii)的肽(i)至少一種包含選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[26] [25]的疫苗，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[27] [24]至[26]任一項(xiàng)的疫苗，其中該疫苗進(jìn)一步包含(b)肽即包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽的至少一種類型，[28] [27]的疫苗，其中該上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)的肽⑴至少一種包含選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和
(ii)至少一種包含在選自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[29] [28]的疫苗，其中該上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，和[30] [24]至[29]任一項(xiàng)的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明可提供有效治療和預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物和疫苗。而且，本發(fā)明可提供有效抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物和疫苗。附圖簡(jiǎn)述

圖1-1圖I顯示已經(jīng)給予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年齡相關(guān)黃斑變性患者HLA-A0201-病例I的癥狀緩解。(A)顯示開(kāi)始施用之前的斷層攝影術(shù)圖像，(B)顯示開(kāi)始施用之前的眼底照片，(C)顯示開(kāi)始施用之前的熒光素眼底照相術(shù)。(A)和(D)的箭指示色素上皮的線，而(B)和(E)的箭頭指示色素上皮的剝離。
圖1-2圖I顯示已經(jīng)給予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年齡相關(guān)黃斑變性患者HLA-A0201-病例I的癥狀緩解。(D)顯示開(kāi)始施用之后五個(gè)月時(shí)的斷層攝影術(shù)圖像，(E)顯示開(kāi)始施用之后五個(gè)月時(shí)的眼底照片，(F)顯示開(kāi)始施用之后五個(gè)月時(shí)的熒光素眼底照相術(shù)。(A)和(D)的箭頭指示色素上皮的線，而(B)和(E)的箭頭指示色素上皮的剝離。圖2圖2顯示通過(guò)對(duì)已經(jīng)給予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年齡相關(guān)黃斑變性患者HLA-A0201-病例3 —個(gè)病例實(shí)施的光學(xué)相干斷層攝影術(shù)獲得的視網(wǎng)膜斷層攝影術(shù)圖像。(A)顯示開(kāi)始施用之前的斷層攝影術(shù)圖像，而(B)顯示開(kāi)始施用之后一個(gè)月時(shí)的斷層攝影術(shù)圖像。箭頭指示水腫，而虛箭頭指示顯然已纖維化且活動(dòng)減退的新生血管性膜。圖3
圖3顯示已經(jīng)給予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年齡相關(guān)黃斑變性患者HLA-A2402-病例I的癥狀緩解和視覺(jué)恢復(fù)。上部照片顯示眼底照片，而下部照片顯示視網(wǎng)膜斷層攝影術(shù)圖像，開(kāi)始治療之后視網(wǎng)膜下出血(箭頭)消失且視力改善(括弧中的數(shù)值)。另外，黃斑的解剖學(xué)仍然相同。圖4-1圖4顯示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了處理前(a)和I個(gè)療程后(b)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。圓符指示點(diǎn)計(jì)數(shù)是飽和的。圖4-2圖4顯示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了 2個(gè)療程后(C)和3個(gè)療程后(d)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。圓符指示點(diǎn)計(jì)數(shù)是飽和的。圖4-3圖4顯示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了 4個(gè)療程后(e)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。圓符指示點(diǎn)計(jì)數(shù)是飽和的。圖5-1圖5顯示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了處理前(a)和I個(gè)療程后(b)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ；響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFR2肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。圖5-2
圖5顯示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了 2個(gè)療程后(C)和3個(gè)療程后(d)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFR2肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。圖5-3圖5顯示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。測(cè)試 了 4個(gè)療程后(e)的PBMC。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左下小圖)和VEGFR2肽特異性點(diǎn)(右下小圖)的數(shù)目。圖6-1圖6顯示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。顯示了 I個(gè)療程后(a)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左中小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右中小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。通過(guò)HLA-A*0201/VEGFRldextramer來(lái)檢測(cè)VEGFRl肽特異性T細(xì)胞受體(下部小圖)。圖6-2圖6顯示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。顯示了 3個(gè)療程后(b)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左中小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右中小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。通過(guò)HLA-A*0201/VEGFRldextramer來(lái)檢測(cè)VEGFRl肽特異性T細(xì)胞受體(下部小圖)。圖6-3圖6顯示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。顯示了 4個(gè)療程后(C)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左中小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右中小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。通過(guò)HLA-A*0201/VEGFR1 dextramer來(lái)檢測(cè)VEGFRl肽特異性T細(xì)胞受體(下部小圖)。圖6-4圖6顯示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。顯示了 5個(gè)療程后(d)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小圖)或HIV-Env肽(右上小圖)刺激PBMC。R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了點(diǎn)計(jì)數(shù)(左中小圖)和VEGFRl肽特異性點(diǎn)(右中小圖)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。通過(guò)HLA-A*0201/VEGFRldextramer來(lái)檢測(cè)VEGFRl肽特異性T細(xì)胞受體(下部小圖)。圖7-1圖7顯示HLA-A0201-病例3的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了處理前(a)、I個(gè)療程后(b)、和3個(gè)療程后(c)的PBMC。在每幅圖中，圖中指示了針對(duì)VEGFR2-A2-773肽沖激的TISI或經(jīng)HIV-Env肽沖激的TISI的點(diǎn)計(jì)數(shù)(左邊小圖)和VEGFR2肽特異性點(diǎn)(右邊小圖)的數(shù)目。圖7-2圖7顯示HLA-A0201-病例3的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。測(cè)試了 4個(gè)療程后(d)和5個(gè)療程后(e)的PBMC。在每幅圖中，圖中指示了針對(duì)經(jīng)VEGFR2-A2-773肽沖激的TISI或經(jīng)HIV-Env肽沖激的TISI的點(diǎn)計(jì)數(shù)(左邊小圖)和VEGFR2肽特異性點(diǎn)(右邊小圖)的數(shù)目。圖8圖8顯示HLA-A2402-病例I的VEGFRl肽特異性應(yīng)答。顯示了 2個(gè)療程后(a)和 6個(gè)療程后(b)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A24-1084肽(左邊小圖)或HIV-Env肽(右邊小圖)刺激PBMC0 R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了 VEGFRl肽特異性點(diǎn)的數(shù)目。使用不配對(duì)Student氏t檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施統(tǒng)計(jì)分析(星號(hào)；P < O. 05)。圓符指示點(diǎn)計(jì)數(shù)是飽和的。圖9圖9顯示HLA-A2402-病例I的VEGFR2肽特異性應(yīng)答。顯示了 2個(gè)療程后(a)和6個(gè)療程后(b)的PBMC響應(yīng)作為代表性結(jié)果。在每幅圖中，顯示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A24-169肽(左邊小圖)或HIV-Env肽(右邊小圖)刺激PBMC0 R/S ;響應(yīng)者/刺激物比。圖中指示了 VEGFR2肽特異性點(diǎn)的數(shù)目。圖10圖10顯示處理后受試者的視力變化。處理組的視力與無(wú)處理組相比得到改善，有顯著差異(P值=0.015)。發(fā)明詳述定義如本文中使用的，詞語(yǔ)“一個(gè)/種”、“該”、和“所述”意味著“至少一個(gè)/種”，除非
另有明確說(shuō)明。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可互換使用，指氨基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以是經(jīng)過(guò)修飾的殘基或非天然存在的殘基(諸如相應(yīng)的天然存在氨基酸的人工化學(xué)模擬物)的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸，以及與天然存在的氨基酸發(fā)揮相似功能的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。氨基酸可以是L-氨基酸或D-氨基酸。天然存在的氨基酸指由遺傳密碼編碼的氨基酸，以及在細(xì)胞中在翻譯后被修飾的氨基酸(例如羥脯氨酸、Y-羧基谷氨酸、和O-磷酸絲氨酸)。短語(yǔ)“氨基酸類似物”指與天然存在氨基酸具有相同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)(α碳與氫、羧基、氨基、和R基團(tuán)結(jié)合)但具有一個(gè)或多個(gè)經(jīng)過(guò)修飾的R基團(tuán)或經(jīng)過(guò)修飾的主鏈的化合物(例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基锍)。短語(yǔ)“氨基酸模擬物”指與具有與一般氨基酸不同的結(jié)構(gòu)但發(fā)揮與一般氨基酸相似的功能的化學(xué)化合物。氨基酸在本文中可以通過(guò)它們公知的由IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員會(huì)推薦的三字母符號(hào)或單字母符號(hào)來(lái)指稱。術(shù)語(yǔ)“基因”、“多核苷酸”、“核苷酸”和“核酸”在本文中可互換使用，而且除非另有明確說(shuō)明，通過(guò)它們普遍接受的單字母符號(hào)來(lái)指稱。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“組合物”意圖涵蓋包括規(guī)定量的規(guī)定組分的產(chǎn)物，以及任何直接或間接源自規(guī)定量的規(guī)定組分的組合的產(chǎn)物。所述術(shù)語(yǔ)在涉及藥物組合物時(shí)意圖涵蓋包括活性組分和構(gòu)成載體的任何惰性組分的產(chǎn)物，以及任何直接或間接緣于任何兩種或更多種組分的組合、復(fù)合或聚集、或緣于一種或多種組分的解離、或緣于一種或多種組分的其它類型反應(yīng)或相互作用的產(chǎn)物。因而，在本發(fā)明的語(yǔ)境中，短語(yǔ)“藥物組合物”涵蓋任何通過(guò)混合本發(fā)明的化合物和藥學(xué)或生理學(xué)可接受載體而制備的組合物。如本文中使用的，短語(yǔ)“藥學(xué)可接受載體”或“生理學(xué)可接受載體”表示藥學(xué)或生理學(xué)可接受的材料、組合物、物質(zhì)或媒介，包括但不限于活性組分從一個(gè)器官或身體部分到另一個(gè)器官或身體部分的攜帶或運(yùn)輸中涉及的液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或封裝材料。除非另有定義，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞”、“細(xì)胞毒性T細(xì)胞”和“CTL”在本文 中可互換使用，而且除非另有明確說(shuō)明，指能夠識(shí)別非自身細(xì)胞(例如病毒感染的細(xì)胞)并誘導(dǎo)此類細(xì)胞死亡的T淋巴細(xì)胞亞群。除非另有定義，術(shù)語(yǔ)“HLA-A24”指包含諸如HLA_A*2402等亞型的HLA-A24類型。除非另有定義，如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“HLA-A02”代表性指諸如HLA_A*0201等亞型。除非另有定義，如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“試劑盒”用于指試劑和其它材料的組合。術(shù)語(yǔ)“試劑盒”并非意圖限于試劑和/或材料的特定組合。就本發(fā)明的方法和組合物可用于由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)“治療”的語(yǔ)境而言，如果治療導(dǎo)致臨床效益，諸如受試者中色素上皮剝離減少、色素上皮剝離改善、泄漏減少、或變形改善的話，認(rèn)為該治療是“有效”的。有效性結(jié)合用于治療由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的任何已知方法來(lái)加以確定。除非另有定義，本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員的普遍理解相同的含義。本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物和用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽(以下稱作“VEGFR-1肽”)(以下，該組合物可統(tǒng)稱為“本發(fā)明的藥物組合物”)和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。而且，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗和用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其包含VEGFR-I(以下，該疫苗可統(tǒng)稱為“本發(fā)明的疫苗”)和/或編碼它的多核苷酸。上述藥物組合物和疫苗可包含任何其它物質(zhì)，例如免疫刺激物。優(yōu)選地，可含有包含自其它蛋白質(zhì)衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的的肽。更優(yōu)選地，包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽(以下稱作“VEGFR-2肽”)。本發(fā)明基于本發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)，即包含VEGFR-I肽的藥物組合物/疫苗有效抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成。
VEGFR-1 At本發(fā)明的藥物組合物和疫苗中含有的VEGFR-I肽(以下，“VEGFR-1肽”可稱作“本發(fā)明的肽”)可通過(guò)自已知VEGFR-I蛋白的氨基酸序列中的任何位置開(kāi)始合成肽來(lái)獲得。本發(fā)明可含有VEGFR-2肽，而且也可通過(guò)自已知VEGFR-2的氨基酸序列中的任何位置開(kāi)始合成肽來(lái)獲得。人VEGFR-I和人VEGFR-2的氨基酸序列是已知的，而且本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地自互聯(lián)網(wǎng)上可得的蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)獲得它們。人VEGFR-I蛋白的氨基酸序列的一個(gè)例子是SEQ ID NO 19的氨基酸序列(由GenBank登錄號(hào)NM_002019的核苷酸序列編碼的氨基酸序列)。人VEGFR-2蛋白的氨基酸序列的一個(gè)例子是SEQ ID NO 21的氨基酸序列(由GenBank登錄號(hào)NM_002253的核苷酸序列編碼的氨基酸序列)?？梢砸勒针幕瘜W(xué)中常規(guī)使用的方法來(lái)實(shí)施肽合成。常規(guī)合成方法記載于文件諸如"Peptide Synthesis" , Interscience, New York,1966 ； " The Proteins" , Vol. 2,Academic Press Inc., New York,1976 ； " Peptide Synthesis (Peptide Gosei)",Maruzen,1975 ； " Fundamentals and Experiments of Peptide Synthesis (PeptideGosei no Kiso to Jikken) " , Maruzen, 1985 ；及"The sequel of Development of Pharmaceuticals(Zoku Iyakuhin no Kaihatsu)" , Vol. 14, Peptide Synthesis(PeptideGosei), Hirokawa Shoten，1991，及出版物諸如國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朩O 99/67288。也可以通過(guò)已知遺傳工程方法來(lái)合成本發(fā)明的肽。下文是遺傳工程合成方法的一個(gè)例子。將其中已經(jīng)插入有編碼本發(fā)明肽的DNA的載體導(dǎo)入合適宿主細(xì)胞以生成轉(zhuǎn)化細(xì)胞?？梢酝ㄟ^(guò)收集這些轉(zhuǎn)化細(xì)胞中生成的肽來(lái)獲得本發(fā)明的肽。也可以最先將本發(fā)明的肽作為融合蛋白產(chǎn)生出來(lái)，然后使用適宜蛋白酶切割以獲得肽。在一種用于制備融合蛋白的方法中，可以將編碼本發(fā)明肽的多核苷酸與編碼另一種肽的多核苷酸符合讀碼框地連接，并可以將此插入表達(dá)載體，用于在宿主中表達(dá)。為此目的可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的技術(shù)。對(duì)于與本發(fā)明肽融合的肽，可以使用已知肽，諸如FLAG (Ηορρ，Τ· P.等，BioTechnology (1988) 6，1204-1210)、由六個(gè)組氨酸(His)殘基組成的6x HisUOx His、流感血凝素(HA)、人 c-myc 片段、VSV-GP 片段、pl8HIV 片段、T7 標(biāo)簽、HSV標(biāo)簽、E標(biāo)簽、SV40T抗原片段、Ick標(biāo)簽、α-微管蛋白片段、B標(biāo)簽、和蛋白C片段。也可能將本發(fā)明的肽連接至谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、流感血凝素(HA)、免疫球蛋白恒定區(qū)、β_半乳糖苷酶、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)、等等以生成融合蛋白?？梢酝ㄟ^(guò)用合適蛋白酶處理以這種方式生成的融合蛋白，然后收集感興趣肽來(lái)獲得本發(fā)明的肽?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法，諸如親和層析來(lái)收集肽。作為本發(fā)明肽的氨基酸序列，例如可以使用對(duì)HLA抗原的結(jié)合親和力作為指標(biāo)自VEGFR-I蛋白的完整氨基酸序列或VEGFR-2蛋白的完整氨基酸序列選擇任何序列。對(duì)HLA抗原的結(jié)合親和力可如下測(cè)量分離在細(xì)胞表面上具有HLA抗原的細(xì)胞,諸如樹(shù)突細(xì)胞,并使用通常實(shí)施的方法的測(cè)量肽對(duì)細(xì)胞的結(jié)合?；蛘撸梢栽谟?jì)算機(jī)上(in silico)通過(guò)當(dāng)前在互聯(lián)網(wǎng)上可得的軟件來(lái)計(jì)算結(jié)合親和力，諸如Parker K. C. , J. Immunol. 152,1994中記載的那些。當(dāng)應(yīng)用于例如日本人時(shí)，優(yōu)選使用據(jù)說(shuō)在日本人群中頻繁表達(dá)的A-24型、A-02型、等等作為HLA抗原來(lái)獲得有效結(jié)果。HLA抗原諸如A-02和A-24型各自包括亞型，諸如A-0201或A-2402。對(duì)HLA_A*0201具有高結(jié)合親和力的VEGFR-I肽的例子包括包含SEQ IDNO : I至3的氨基酸序列的肽，而對(duì)HLA-A*2402具有高結(jié)合親和力的VEGFR-I肽的例子包括包含SEQ ID NO :4的氨基酸序列的肽(WO 2006/093030)。對(duì)HLA_A*0201具有高結(jié)合親和力的VEGFR-2肽的例子包括包含SEQ ID NO : 11至17的氨基酸序列的肽，而對(duì)HLA_A*2402具有高結(jié)合親和力的VEGFR-2肽的例子包括包含SEQ ID NO :5至10的氨基酸序列的肽(TO2004/024766)。在臨床實(shí)踐中，可以通過(guò)預(yù)先調(diào)查HLA抗原的類型來(lái)恰當(dāng)選擇對(duì)需要治療的患者攜帶的HLA抗原具有該結(jié)合親和力的肽。對(duì)HLA抗原具有高結(jié)合親和力的肽很有可能作為具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的活性的細(xì)胞是有效的。還有，期望檢查使用存在高結(jié)合親和力作為指標(biāo)選擇的候選肽是否實(shí)際具有誘導(dǎo)CTL的活性?？扇缦麓_認(rèn)CTL誘導(dǎo)活性，即用候選肽刺激包含人MHC抗原的抗原呈遞細(xì)胞(諸如B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、和樹(shù)突細(xì)胞)，優(yōu)選自人外周血單個(gè)核細(xì)胞衍生的樹(shù)突細(xì)胞；將細(xì)胞與CD8陽(yáng)性細(xì)胞混合；然后測(cè)量針對(duì)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性。作為反應(yīng)系統(tǒng)，可使用為表達(dá)人HLA抗原而生成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如Hum. Immunol. 2000Aug ；61 (8)764-79 Related Articles, Books, Linkout Induction of CTL response by a minimalepitope vaccine in HLAA*0201/DR1 transgenic mice !dependence on HLA class IIrestricted T(H) response. , Ben Mohamed L. , Krishnan R. , Longmate J. , Auge C. , Low L. , Primus J. , Diamond DJ.中記載的那些)?？梢愿鶕?jù)自用例如51Cr等等放射性標(biāo)記物的靶細(xì)胞釋放的放射性計(jì)算細(xì)胞毒性?；蛘?，可以通過(guò)使用抗IFN-Y單克隆抗體在培養(yǎng)基上顯現(xiàn)抑制區(qū)及測(cè)量在攜帶肽的抗原呈遞細(xì)胞存在下由CTL生成并釋放的IFN-Y來(lái)檢查活性。本發(fā)明的肽的長(zhǎng)度不受特別限制，只要它們具有CTL誘導(dǎo)活性，但是優(yōu)選為50個(gè)氨基酸或更少，更優(yōu)選30個(gè)氨基酸或更少，進(jìn)一步更優(yōu)選15個(gè)氨基酸或更少。例如，當(dāng)在體內(nèi)呈遞在抗原呈遞細(xì)胞上時(shí)，各種蛋白質(zhì)被降解成9聚物肽(九肽)，然后呈遞。因此，本發(fā)明的肽期望是9聚物(九肽)或10聚物(十肽)。優(yōu)選的VEGFR-I肽包括包含SEQ IDNO :1至4(W02006/093030)的氨基酸序列的肽。優(yōu)選的VEGFR-2肽包括包含SEQ ID NO 5至17 (W0 2004/024766)的氨基酸序列的肽。而且，可以對(duì)天然存在VEGFR-I或VEGFR-2的部分肽的氨基酸序列替代、刪除、添力口、和/或插入一個(gè)、兩個(gè)、或幾個(gè)氨基酸。在本文中，“幾個(gè)”意指五個(gè)或更少，和優(yōu)選三個(gè)或更少。在修飾氨基酸殘基時(shí)，期望用維持氨基酸側(cè)鏈特性的氨基酸替代。氨基酸側(cè)鏈特性的例子有疏水性氨基酸(A，I，L，M，F(xiàn)，P，W，Y，和V);親水性氨基酸(R，D，N, C，E，Q，G，H，K，SjPT);包含脂肪族側(cè)鏈的氨基酸(G，A，V，L，I，和P);包含含羥基側(cè)鏈的氨基酸(S，TjPY);包含含硫原子側(cè)鏈的氨基酸(C和M);包含含羧酸或酰胺側(cè)鏈的氨基酸(D，N, E，和Q);包含堿性側(cè)鏈的氨基酸(R，K，和H);和包含含芳基側(cè)鏈的氨基酸(H，F(xiàn)，Y，和W)(所有氨基酸用括弧中的單字母代碼來(lái)表示)。這每一組內(nèi)的氨基酸替代一般稱作保守替代。已知包含經(jīng)修飾氨基酸序列(其中對(duì)某種氨基酸序列替代、刪除、添加、和/或插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基)的肽保留其原始肽的生物學(xué)活性(Mark, D. F.等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA(1984)81,5662-6 ；Zoller,M. J. Smith,M. ,Nucleic Acids Res. (1982) 10，6487-500 ；Wang, A.等，Science (1984) 224 :1431-3 ；Dalbadie-McFarland, G.等，Proc. Natl. Acad.Sci. USA (1982) 79 :6409-13)。此類經(jīng)修飾VEGFR-1肽的優(yōu)選例子包括包含在SEQ ID NO: I至4任一的氨基酸序列中具有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。經(jīng)修飾VEGFR-2肽的優(yōu)選例子包括包含在SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中具有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。而且，由于早就知道通過(guò)結(jié)合HLA抗原而展示的肽的序列規(guī)律(J. Immunol.，152 3913,1994 ；Immunogenetics,41 :178,1995 ；J. Immunol.，155 :4307,1994),因此可選擇具有此類規(guī)律的序列，或者可以對(duì)如上所述獲得的肽進(jìn)行基于這種規(guī)律的修飾。例如，已知具有高HLA-24結(jié)合親和力的肽是其中自肽N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。因此，對(duì)于要施用于攜帶HLA-24型HLA抗原的受試者的藥物組合物或疫苗要含有的肽，可以選擇自N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/ 或C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽?；蛘?，獲得的肽自N末端起第二個(gè)氨基酸可修飾為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸，或者C末端氨基酸可修飾為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸。此類VEGFR-I肽的優(yōu)選例子包括在SEQ ID NO :4的氨基酸序列中自N末端起第二個(gè)氨基酸修飾為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/或C末端氨基酸修飾為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。而且，此類VEGFR-2肽的優(yōu)選例子包括在SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列中自N末端起第二個(gè)氨基酸修飾為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/或C末端氨基酸修飾為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。同時(shí)，已知具有高HLA-02結(jié)合親和力的肽是自肽N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽。因此，作為要施用于攜帶HLA-02型HLA抗原的受試者的藥物組合物或疫苗中要含有的肽，可以選擇其中自N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸和/或C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽?；蛘撸@得的肽自N末端起第二個(gè)氨基酸可以修飾為亮氨酸或甲硫氨酸且C末端氨基酸可以修飾為纈氨酸或亮氨酸。此類VEGFR-2肽的優(yōu)選例子包括在SEQ ID NO :1至3任一的氨基酸序列中自N末端起第二個(gè)氨基酸修飾為亮氨酸或甲硫氨酸和/或C末端氨基酸修飾為纈氨酸或亮氨酸的肽。HLA-02型的經(jīng)修飾VEGFR-2肽的一個(gè)例子是包含SEQ ID NO :11-17的氨基酸序列的肽?？扇缟纤鰜?lái)獲得本發(fā)明的肽，但是當(dāng)肽序列與具有不同功能的內(nèi)源或外源蛋白質(zhì)的氨基酸序列的一部分相同時(shí)，它可引起副作用，諸如針對(duì)特定物質(zhì)的自身免疫性疾病或變應(yīng)性癥狀。因此，優(yōu)選使用可用的數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)進(jìn)行同源性搜索，并檢查獲得的肽的序列是否匹配其它蛋白質(zhì)的氨基酸序列。如果肽序列匹配另一種蛋白質(zhì)的氨基酸序列的話，應(yīng)當(dāng)優(yōu)選避免選擇該肽序列。如果同源性搜索顯示不存在相差一個(gè)或兩個(gè)氨基酸的肽的話，上文所述用于提高對(duì)HLA抗原的結(jié)合親和力和/或CTL誘導(dǎo)活性的氨基酸序列修飾不會(huì)引起那些問(wèn)題。多核苷酸本發(fā)明還提供編碼任何上述本發(fā)明肽的多核苷酸。這些包括自天然存在的VEGFR-I 基因(GenBank登錄號(hào)NM_002019(例如 SEQ ID NO :18))或VEGFR-2基因(GenBank登錄號(hào)NM_002253(例如SEQ ID NO :20))衍生的多核苷酸以及具有其保守修飾核苷酸序列的多核苷酸。在本文中，短語(yǔ)“保守修飾核苷酸序列”指編碼相同或本質(zhì)上相同的氨基酸序列的序列。由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，大量的功能上相同的核酸編碼任何給定蛋白質(zhì)。例如，密碼子GCA、GCC、GCGjP G⑶都編碼氨基酸丙氨酸。因此，在每一個(gè)由密碼子規(guī)定為丙氨酸的位置，該密碼子可以改變成任何相應(yīng)所述密碼子，而不會(huì)改變編碼的多肽。此類核酸變異為“沉默變異”，是保守修飾變異中的一類。本文中編碼肽的每一種核酸序列也描述該核酸的每一種可能的沉默變異。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到可以修飾核酸中的每一個(gè)密碼子(AUG (它通常是甲硫氨酸的唯一密碼子)和TGG (其通常是色氨酸的唯一密碼子)除外)以產(chǎn)生功能上相同的分子。因而，每一種披露的序列隱含描述編碼肽的核酸的每一處沉默變
巳本發(fā)明的多核苷酸可以由DNA、RNA、或其衍生物構(gòu)成。諸如本領(lǐng)域公知的，DNA分子由堿基諸如天然存在堿基A、T、C、和G構(gòu)成，而且T在RNA中替換為U。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到多核苷酸中也可以包括非天然存在堿基。本發(fā)明的多核苷酸可以編碼多種本發(fā)明肽，有或無(wú)居間氨基酸序列。例如，居間氨基酸序列可以提供多核苷酸或翻譯的肽的切割位點(diǎn)(例如酶識(shí)別序列)。而且，多核苷酸可以在編碼本發(fā)明肽的編碼序列的基礎(chǔ)上包括任何額外的序列。例如，多核苷酸可以是包括肽表達(dá)需要的調(diào)節(jié)序列的重組多核苷酸，或者可以是具有標(biāo)志基因等等的表達(dá)載體(質(zhì) 粒)。通常，此類重組多核苷酸可以通過(guò)使用例如聚合酶和內(nèi)切核酸酶經(jīng)由常規(guī)重組技術(shù)操作多核苷酸來(lái)制備。重組和化學(xué)合成技術(shù)均可用于生成本發(fā)明的多核苷酸。例如，可以通過(guò)插入適宜載體，在轉(zhuǎn)染入感受態(tài)細(xì)胞后表達(dá)來(lái)生成多核苷酸?；蛘?，可以使用PCR技術(shù)或合適宿主中的表達(dá)來(lái)擴(kuò)增多核苷酸(參見(jiàn)例如Sambrook等，Molecular Cloning A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989)?；蛘撸梢允褂霉滔嗉夹g(shù)來(lái)合成多核苷酸，如記載于Beaucage SL&Iyer RP,Tetrahedron 1992,48 :2223-311 ;Matthes等，EMBO J 1984,3 :801_5。包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸的藥物組合物和疫苗本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物，其至少包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。本發(fā)明中的治療指減輕已經(jīng)實(shí)際發(fā)生由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的特征性癥狀的患者中的所述癥狀。在本發(fā)明中，減輕的程度不受特別限制，而且只要癥狀降低，即使程度非常輕微，它就包括在本發(fā)明的治療的含義中。在本發(fā)明中，預(yù)防意指預(yù)先阻抑由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病特征性的癥狀的進(jìn)展。在本發(fā)明中，阻抑的進(jìn)展的程度不受任何方式的限制，而且只要進(jìn)展得到阻抑，即使程度非常輕微，它就包括在本發(fā)明的預(yù)防的含義中。由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的癥狀包括視力降低。評(píng)估此癥狀是否減輕可通過(guò)視力測(cè)試來(lái)確定。而且，可以經(jīng)由使用熒光素眼底照相術(shù)或光學(xué)相干斷層攝影術(shù)的檢查通過(guò)評(píng)估脈絡(luò)膜新生血管的活性來(lái)確定癥狀的進(jìn)展是否得到阻抑。而且，本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其至少包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸作為活性組分。在本發(fā)明中，疫苗指在施用于生物體時(shí)能在該生物體中在體內(nèi)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物。在本發(fā)明中，在體內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特別指誘導(dǎo)靶向表達(dá)VEGFR-I的細(xì)胞的CTL。由于脈絡(luò)膜中新生血管形成中牽涉的血管內(nèi)皮細(xì)胞在細(xì)胞表面上表達(dá)VEGFR-1，因此它們可以變成通過(guò)施用此疫苗誘導(dǎo)的CTL的靶。就是說(shuō)，施用本發(fā)明的疫苗引起本發(fā)明的肽以高密度呈遞在抗原呈遞細(xì)胞的HLA抗原上，這誘導(dǎo)與在呈遞的肽和HLA抗原之間形成的復(fù)合物特異性反應(yīng)的CTL，而且提高攻擊脈絡(luò)膜中血管內(nèi)皮細(xì)胞的力量?；蛘?，通過(guò)自患者提取樹(shù)突細(xì)胞來(lái)獲得在其細(xì)胞表面上具有本發(fā)明肽的抗原呈遞細(xì)胞，并用本發(fā)明的肽刺激它們。經(jīng)由施用將細(xì)胞返還患者在患者中引起CTL誘導(dǎo)，而且能提高攻擊脈絡(luò)膜中血管內(nèi)皮細(xì)胞的力量。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗針對(duì)由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病是有效的。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗的靶疾病沒(méi)有限制，只要它們是由脈絡(luò)膜新生血管形成引起的疾病。優(yōu)選地，疾病包括與諸如滲出性年齡相關(guān)黃斑變性、近視性黃斑變性、血管樣條紋癥、中央滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變、各種視網(wǎng)膜色素上皮病、脈絡(luò)膜萎縮、無(wú)脈絡(luò)膜、和脈絡(luò)膜骨瘤等疾病有關(guān)的新生血管性黃斑病變。一個(gè)特別優(yōu)選的例子是滲出性年齡相關(guān)黃斑變性。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗選擇性攻擊血管內(nèi)皮細(xì)胞，并因此具有治療后快速視力降低和發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥(它們是常規(guī)治療方法中的問(wèn)題)的低風(fēng)險(xiǎn)。因此，本發(fā)明的藥物組合物不僅可應(yīng)用于具有嚴(yán)重癥狀的患者，而且還可應(yīng)用于具有相對(duì)較好視力的早期患者。由于視網(wǎng)膜損害在具有相對(duì)較好視力的早期病例中較低，因此預(yù)期晚期病例的治療后視力預(yù)后比常規(guī)治療有利得多。而且，已經(jīng)確認(rèn)了本發(fā)明的藥物組合物和疫苗在不響應(yīng)常規(guī)治療方法的病例中顯示了效果，可應(yīng)用于此類病例。
本發(fā)明基于如下的發(fā)現(xiàn)，即脈絡(luò)膜中的新生血管形成受到施用VEGFR-I肽的抑制。因此，本發(fā)明提供用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸每一種的至少一種類型。而且，包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸的藥物組合物可用作疫苗。因此，本發(fā)明還提供用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其至少包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸。抑制的程度不受特別限制，而且只要新生血管形成受到抑制，即使程度輕微，它就包括在抑制的含義中。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗不受特別限制，只要它們至少含有VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸，而且例如，它們可以包含多種類型的VEGFR-I肽和/或任何其它物質(zhì)，例如免疫刺激物。優(yōu)選地，可以含有包含自其它蛋白質(zhì)衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。更優(yōu)選地，包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽(以下稱作“VEGFR-2肽”)。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗除了肽之外可以在適當(dāng)時(shí)含有常用于藥品的載體、賦形劑等等。例如，它們可以以用水或其它藥學(xué)可接受液體制備的無(wú)菌溶液或懸浮液的可注射形式胃腸外使用。它們可以通過(guò)將它們與藥學(xué)可接受載體或媒介(更具體地，滅菌水或生理鹽水溶液、植物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、芳香劑、賦形劑、媒介、防腐劑、粘合劑、等等)適當(dāng)組合，并將它們以普遍接受的藥學(xué)實(shí)踐要求的單位劑量形式混合來(lái)配制。這些配制劑中包括一定量的活性組分以實(shí)現(xiàn)規(guī)定限制內(nèi)的適宜劑量。當(dāng)本發(fā)明為疫苗時(shí)，它可以包括佐劑，使得細(xì)胞免疫得到有效建立，而且它們也可以包括用于新生血管性黃斑病變等等的其它活性組分。它們也可以制成顆粒配制劑。對(duì)于佐劑，可使用文件(Johnson AG.，Clin. Microbiol. Rev. ,7 :277-289,1994)等等中記載的那些。其它配制劑可以是脂質(zhì)體制劑、通過(guò)結(jié)合至微米直徑的珠而生產(chǎn)的顆粒制劑、或脂質(zhì)結(jié)合的制劑。本發(fā)明的藥物組合物和疫苗中含有的VEGFR-I肽的量不受特別限制，只要它是藥學(xué)有效量。例如，每一種肽的有效量可以為O. OOlmg至100011^，優(yōu)選0.00111^至lOOOmg，和更優(yōu)選0. Img至10mg。而且，如果藥物組合物和疫苗含有VEGFR-2肽的話，VEGFR-I肽與VEGFR-2肽的組合比不受特別限制，只要含有兩種肽的藥學(xué)有效量。組合的VEGFR-I肽和VEGFR-2肽的量可以是相同的，或者組合的任一種肽的量可以大于另一種肽的量。雖然VEGFR-2在幾乎所有血管內(nèi)皮細(xì)胞的表面上表達(dá)，但是VEGFR-I只在特定部分的血管內(nèi)皮細(xì)胞的表面上表達(dá)；因此，組合的VEGFR-2肽的量可以大于VEGFR-I肽的量。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽也可以以藥學(xué)可接受鹽的形式施用。鹽的優(yōu)選例子包括與堿金屬的鹽、與金屬的鹽、與有機(jī)堿的鹽、與有機(jī)酸的鹽和與無(wú)機(jī)酸的鹽。本發(fā)明還包括VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的藥物組合物或疫苗中的用途。而且，本發(fā)明包括VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸在制造用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物或疫苗中的用途。本發(fā)明包括要施用于受試者以治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸。另外，本發(fā)明包括要與VEGFR-I肽和/或 編碼它的多核苷酸一起施用于受試者以治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的VEGFR-2肽和/或編碼它的多核苷酸。而且，本發(fā)明包括要與VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸一起施用于受試者以抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的VEGFR-2肽和/或編碼它的多核苷酸。另外，本發(fā)明包括要與VEGFR-2肽和/或編碼它的多核苷酸一起施用于受試者以抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸。用于治療或預(yù)防新生血■管性黃斑病變的試劑盒和用于抑制脈絡(luò)膜中新生血■管形成的試劑盒本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的試劑盒，其至少包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明還提供用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的試劑盒，其至少包含VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸。本發(fā)明的試劑盒中要包括的VEGFR-I肽可以單獨(dú)個(gè)別存在，或者通過(guò)與藥學(xué)可接受載體或媒介(或更具體地，滅菌水或生理鹽水溶液、植物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性齊U、穩(wěn)定劑、芳香劑、賦形劑、媒介、防腐劑、粘合劑、等等)適當(dāng)組合，它們可以以配制劑或疫苗的形式存在。在將它們生產(chǎn)成疫苗時(shí)，可以包括佐劑以便有效建立細(xì)胞免疫，而且也可以包括用于新生血管性黃斑病變等等的其它活性組分。優(yōu)選地，可以包括VEGFR-2肽。它們也可以制成顆粒配制劑。對(duì)于佐劑，可使用文件(Johnson AG. , Clin. Microbiol. Rev.,7:277-289,1994)等等中記載的那些。其它配制劑可以是脂質(zhì)體制劑、通過(guò)結(jié)合至微米直徑的珠子而生產(chǎn)的顆粒制劑、或脂質(zhì)結(jié)合的制劑。本發(fā)明的試劑盒可進(jìn)一步包括藥學(xué)可接受載體或媒介，諸如上文描述的那些，使得制備藥品的人能進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。用于治療或預(yù)防新生血管性黃斑病變的方法和用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的方法本發(fā)明進(jìn)一步提供用于治療和/或預(yù)防由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病的方法，包括對(duì)受試者至少施用VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸的步驟。而且，本發(fā)明提供用于抑制脈絡(luò)膜中新生血管形成的方法，包括對(duì)受試者至少施用VEGFR-I肽和/或編碼它的多核苷酸的步驟。
VEGFR-I肽可以以用水或其它藥學(xué)可接受液體制備的無(wú)菌溶液或懸浮液的可注射形式胃腸外施用于受試者。通過(guò)與藥學(xué)可接受載體或媒介(vehicles)(更具體地，滅菌水或生理鹽水溶液、植物油、乳化劑、懸浮劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、芳香劑、賦形劑、媒介、防腐齊U、粘合劑、等等)適當(dāng)組合，并將它們以普遍接受的藥學(xué)實(shí)踐要求的單位劑量形式混合，它們也可以以配制劑的形式施用于受試者。在作為疫苗施用VEGFR-I肽時(shí)，它們可以與佐劑一起施用，使得細(xì)胞免疫得到有效建立，而且它們也可以與用于新生血管性黃斑病變等等的其它活性組分一起施用。對(duì)于佐劑，可使用文件(Johnson AG. ,Clin. Microbiol. Rev.,7 =277-289,1994)等等中記載的那些。還可以一起施用VEGFR-2肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠依照需要施用本發(fā)明肽的患者(受試者)的癥狀來(lái)恰當(dāng)計(jì)劃VEGFR-I的施用方法、劑量和施用時(shí)程。VEGFR-I肽可作為本發(fā)明的藥物組合物或疫苗施用于受試者，或者它們可作為各別地含有每一種肽的藥物組合物或疫苗施用于受試者。VEGFR-I肽可通過(guò)系統(tǒng)施用或局部施用來(lái)施用。系統(tǒng)施用的例子包括口服施用、皮內(nèi)施用、皮下施用、和靜脈內(nèi)注射。局部施用的例子包括施用于脈絡(luò)膜附近。
VEGFR-I肽的劑量可以為例如O. OOlmg至lOOOmg，優(yōu)選O. OOlmg至lOOOmg，和更優(yōu)選0. Img至10mg，但不限于此。而且，并非限制，疫苗優(yōu)選幾天或幾個(gè)月施用一次，更優(yōu)選一周一次。
實(shí)施例下面援弓I實(shí)施例具體描述本發(fā)明，但是實(shí)施例不應(yīng)解釋為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例I受試者HLA-A0201-病例 I選擇了一名67歲男性年齡相關(guān)黃斑變性患者作為受試者，其已經(jīng)接受過(guò)光動(dòng)力學(xué)療法和Avastin給藥治療。這是一例通過(guò)常規(guī)治療方法沒(méi)有實(shí)現(xiàn)消退的病例。對(duì)HLA-A基因座的檢查確認(rèn)了該受試者攜帶HLA-A*0201。HLA-A0201-病例 3選擇了一名76歲男性年齡相關(guān)黃斑變性患者作為受試者，他已經(jīng)接受過(guò)在特農(nóng)氏囊下方注射類固醇(曲安西龍)、光動(dòng)力學(xué)療法、和Avastin給藥治療。這是一例通過(guò)常規(guī)治療方法沒(méi)有實(shí)現(xiàn)消退的病例。對(duì)HLA-A基因座的檢查確認(rèn)了該受試者攜帶HLA-A*0201。HLA-A2402-病例 I選擇了一名67歲男性年齡相關(guān)黃斑變性患者作為受試者。這是一例通過(guò)常規(guī)治療方法沒(méi)有實(shí)現(xiàn)消退的病例。對(duì)HLA-A基因座的檢查確認(rèn)了該受試者攜帶HLA-A*2402。Jt由 American Peptide Company Inc. (Sunnyvale, CA)合成了 HLA_A*2402 限制性 VEGFRl 肽(VEGFR1-A24-1084 ;SYGVLLWEI ;SEQ ID NO :4)、HLA_A*2402 限制性VEGFR2 肽(VEGFR2-A24-169 ;RFVPDGNRI ;SEQ ID NO :8)、HLA_A*0201 限制性 VEGFRl肽(VEGFRl-A2-77O ；TLFffLLLTL ；SEQ ID NO 2)和 HLA_A*0201 限制性 VEGFR2 肽(VEGFR2-A2-773 ；VIAMFFffLL ；SEQ ID NO : 12)(藥品生產(chǎn)質(zhì)量規(guī)范(Good ManufacturingPractice, GMP)級(jí))，HLA_A*2402 限制性 HIV-Env 蛋白衍生肽(HIV-A24 ；RYLRDQQLL ；SEQ IDNO 22)和 HLA-A*0201 限制性 HIV-Env 蛋白衍生肽(HIV-A2 ；SLYNTYATL ；SEQ ID NO :23)，并分析質(zhì)量。施用方法GMP 級(jí)合成肽，VEGFR-I 肽(TLFWLLLTL ；SEQ ID NO 2)和 VEGFR-2 肽(VIAMFFWLL ；SEQ ID NO 12),得自 the Human Genome Center, Institute of Medical Sciences,the University of Tokyo。將VEGFR-I肽和VEGFR-2肽各一毫克與ImL不完全弗氏佐劑(M0NTANIDE*ISA51VG，SEPPIC，F(xiàn)rance)混合，并將它們皮下施用于患者的腋窩。一周一次進(jìn)行施用。PBMC通過(guò)Ficoll-Plaque (Pharmacia)溶液自患者(HLA_A*2402 或 HLA_A*0201 陽(yáng)性) 分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。IFN-Y ELISP0T 測(cè)定在處理之前和在每個(gè)處理療程結(jié)束時(shí)，獲得PBMC并立即冷凍。對(duì)于免疫監(jiān)測(cè)，將來(lái)自每一名患者的所有冷凍的PBMC同時(shí)融化，并用IOii g/ml關(guān)聯(lián)肽和20IU/mL白介素-2(Chiron, Emeryville, CA)于37攝氏度及5% CO2條件刺激兩周。通過(guò)Dynal CD4陽(yáng)性分離試劑盒(Invitrogen, Carlsbad, CA)消減⑶4+細(xì)胞之后，將細(xì)胞應(yīng)用于干擾素I (IFNi)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(ELISP0T)測(cè)定。依照制造商的規(guī)程(BD BiosciencesjSanJose, CA)實(shí)施IFN-Y ELISP0T測(cè)定法。簡(jiǎn)言之，將HLA_A*2402陽(yáng)性B淋巴母細(xì)胞TISI細(xì)胞(IHWG Cell and Gene Bank，Seattle，WA)或HLA_A*0201 陽(yáng)性B 淋巴母細(xì)胞 T2 細(xì)胞(ATCC，Tokyo, Japan)與20 y g/ml關(guān)聯(lián)肽或HIV-Env肽一起溫育過(guò)夜。洗掉未結(jié)合至細(xì)胞上HLA的剩余肽之后，將制備的CD4-細(xì)胞(IXlO4個(gè)細(xì)胞/孔)在96孔板(Millipore，Bedford,MA)上使用經(jīng)相應(yīng)肽沖激的細(xì)胞(2X104個(gè)細(xì)胞/孔)于37攝氏度及5% CO2條件刺激過(guò)夜。在 ImmunoSpotS4 分析儀和 ImmunoSpot 圖像分析軟件 5. 0 版(Cellular Technology Ltd.,Cleveland, 0H)上掃描并分析板。將用關(guān)聯(lián)肽刺激時(shí)的點(diǎn)數(shù)目減去用HIV-Env肽刺激時(shí)的點(diǎn)數(shù)目來(lái)計(jì)算關(guān)聯(lián)肽特異性點(diǎn)的數(shù)目。所有ELISP0T測(cè)定實(shí)施一式三份孔。當(dāng)檢測(cè)過(guò)量的點(diǎn)時(shí)，因聚簇(clustering)而無(wú)法計(jì)算出精確的點(diǎn)數(shù)，將那些孔定義為飽和的。流式細(xì)胞術(shù)分析為了檢測(cè)肽特異性T細(xì)胞受體，將5X105個(gè)制備用于ELISP0T測(cè)定法的CD4-細(xì)胞用綴合有藻紅蛋白(PE)的 HLA-A*2402/VEGFRldextramer 或 HLA_A*0201/VEGFRldextramer (DAK0 Japan, Tokyo, Japan)、異硫氰酸突光素(FITC)綴合的抗人CD8 單抗(RPA-T8，BD Biosciences, San Jose, CA)、和別藻藍(lán)蛋白(APC)綴合的抗人CD3 單抗(UCHT1，BD Biosciences, San Jose, CA)染色，然后使用 FACSCanto 11 (BDBiosciences, San Jose, CA)分析。使用 HLA-A*2402/HIV_Env dextramer 或 HLA_A*0201/HIV-Envdextramer (DAKO Japan,Tokyo, Japan)作為陰性對(duì)照?；?7-ADD(Sigma-AldrichJapan, Tokyo, Japan)染色,將死細(xì)胞排除出分析。結(jié)果HLA-A0201-病例 I使用光學(xué)相干斷層攝影術(shù)、熒光素眼底成像、和眼底照相術(shù)分析了年齡相關(guān)黃斑變性的進(jìn)展階段。在開(kāi)始施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽之前，在光學(xué)相干斷層攝影術(shù)的斷層攝影術(shù)圖像中觀察到大片色素上皮剝離(圖1A)。在眼底照片中也清楚地觀察到色素上皮剝離(圖1B)。而且，在熒光素眼底照相術(shù)的圖像中觀察到大量滲漏(圖1D)。開(kāi)始施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽之后五個(gè)月，在光學(xué)相干斷層攝影術(shù)的斷層攝影術(shù)圖像中觀察到色素上皮剝離的顯著降低(圖1D)。眼底照相術(shù)也觀察到色素上皮剝離的改善(圖1E)。而且，在熒光素眼底照片中確認(rèn)了滲漏減少(圖1F)。還報(bào)告了主觀癥狀諸如畸變得到大大改善。右眼視力得到輕微改善(Rv = (0. 9)— > Rv = (I. 2))。這些結(jié)果確認(rèn)了施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽對(duì)年齡相關(guān)黃斑變性產(chǎn)生改善效果。沒(méi)有發(fā)生提示安全性問(wèn)題的問(wèn)題。 HLA~A0201-病例 3在開(kāi)始施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽之前，在光學(xué)相干斷層攝影術(shù)的斷層攝影術(shù)圖像中觀察到由新生血管滲漏導(dǎo)致的視網(wǎng)膜破裂和視網(wǎng)膜中的水腫(圖2A)。開(kāi)始施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽之后一個(gè)月，清楚地發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜的水腫與開(kāi)始施用之前相比降低(圖2B)。而且，觀察到明顯已纖維化且活動(dòng)減退的新生血管性膜(圖2B)。而且，還報(bào)告了主觀癥狀諸如畸變得到顯著改善。這些結(jié)果確認(rèn)了施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽在此病例中同樣對(duì)年齡相關(guān)黃斑變性的癥狀產(chǎn)生改善效果。沒(méi)有發(fā)生提示安全性問(wèn)題的問(wèn)題。HLA-A2402-病例 I在開(kāi)始施用VEGFR-I肽和VEGFR-2肽之前，在眼底照片中觀察到清楚的視網(wǎng)膜下出血(圖3，左上小圖)。開(kāi)始施用之后三個(gè)月，視網(wǎng)膜下出血與施用之前相比得到明顯減輕(圖3中上和右邊小圖)。而且，黃斑區(qū)的解剖學(xué)沒(méi)有影響(圖3，下部小圖)且視力得到改善。監(jiān)測(cè)丨分析實(shí)施了 IFN- y ELISP0T測(cè)定法和/或流式細(xì)胞術(shù)分析來(lái)監(jiān)測(cè)處理的患者。表I :監(jiān)測(cè)分析的匯總
權(quán)利要求
1.一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物，其包含至少一種類型的下述肽或編碼它的多核苷酸作為活性組分(a)包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
2.權(quán)利要求I的藥物組合物，其中該上文所述(a)的肽包括下述(i)和(ii)的肽 (i)至少一種包含選自SEQID NO :1至4的任一氨基酸序列的肽； (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :1至4的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
3.權(quán)利要求2的藥物組合物，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO 4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
4.權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含至少一種類型的下述肽(b)包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中該上文所述(b)的肽包括下文(i)和(ii) (i)至少一種包含選自SEQID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
7.權(quán)利要求I至6中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中該由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出性年齡相關(guān)黃斑變性，近視性黃斑變性，血管樣條紋癥，中央滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變，各種視網(wǎng)膜色素上皮病，脈絡(luò)膜萎縮，無(wú)脈絡(luò)膜，和脈絡(luò)膜骨瘤。
8.權(quán)利要求I至7中任一項(xiàng)的藥物組合物，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者。
9.一種用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的疫苗，其包含至少一種類型的下述肽或編碼它的多核苷酸作為活性組分(a)包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
10.權(quán)利要求9的疫苗，其中上文所述(a)的肽包括下面的(i)和(ii)的肽 (i)至少一種包含選自SEQID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :1至4的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
11.權(quán)利要求10的疫苗，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氣Ife的妝； (2)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸，且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
12.權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)的疫苗，其中該疫苗進(jìn)一步包含至少一種類型的下述肽(b)包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
13.權(quán)利要求12的疫苗，其中上文所述(b)的肽包括下面的⑴和(ii) (i)至少一種包含SEQID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
14.權(quán)利要求13的疫苗，其中上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)中的任一肽 (1)SEQID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
15.權(quán)利要求9至14任一項(xiàng)的疫苗，其中該由脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)選自滲出性年齡相關(guān)黃斑變性，近視性黃斑變性，血管樣條紋癥，中央滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變，各種視網(wǎng)膜色素上皮病，脈絡(luò)膜萎縮，無(wú)脈絡(luò)膜，和脈絡(luò)膜骨瘤。
16.權(quán)利要求9至15任一項(xiàng)的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者。
17.一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的藥物組合物，其包含至少一種類型的下述肽或編碼它的多核苷酸作為活性組分(a)即包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
18.權(quán)利要求17的藥物組合物，其中該上文所述(a)的肽包括下文(i)和 (ii)的肽 (i)至少一種包含選自SEQID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO 4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
20.權(quán)利要求17至19任一項(xiàng)的藥物組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含至少一種類型的下述肽(b)包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
21.權(quán)利要求20的藥物組合物，其中該上文所述(b)的肽包括下文(i)和(ii) (i)至少一種包含選自SEQID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
22.權(quán)利要求21的藥物組合物，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
23.權(quán)利要求15至19任一項(xiàng)的藥物組合物，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者。
24.一種用于抑制人脈絡(luò)膜中新生血管形成的疫苗，其包含至少一種類型的下述肽或編碼它的多核苷酸作為活性組分(a)包含自VEGF受體I蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
25.權(quán)利要求24的疫苗，其中該上文所述(a)的肽包括下文(i)和(ii)的肽 (i)至少一種包含選自SEQID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
26.權(quán)利要求25的疫苗，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO 4的氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
27.權(quán)利要求24至26任一項(xiàng)的疫苗，其中該疫苗進(jìn)一步包含至少一種類型的下述肽(b)包含自VEGF受體2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
28.權(quán)利要求27的疫苗，其中該上文所述(b)的肽包括下文(i)和(ii)的肽 (i)至少一種包含SEQID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一種包含在選自SEQID NO :5至17中的任一氨基酸序列中有一處或多處氨基酸替代、刪除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。
29.權(quán)利要求28的疫苗，其中該上文所述(ii)的肽是下文(I)至(6)的任一肽 (1)SEQID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸的肽； (2)SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (3)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為纈氨酸或亮氨酸的肽； (4)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽； (5)SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和 (6)SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二個(gè)氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸為苯丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。
30.權(quán)利要求24至29任一項(xiàng)的疫苗，其施用于HLA抗原為HLA-A02或HLA-A24的受試者。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的新型藥物作用劑和方法。本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防由人脈絡(luò)膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黃斑病變)的藥物組合物和疫苗，其包含下述任一種肽的至少一種類型包含自VEGFR-1蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽，和包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的活性的肽。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102802654SQ20108003565
公開(kāi)日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2010年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者辻川元一, 中村佑輔, 角田卓也 申請(qǐng)人:腫瘤療法科學(xué)股份有限公司