專利名稱：雙功能釘接多肽和其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
背景技術(shù)：
肽和蛋白質(zhì)作為激素、酶抑制劑、底物和神經(jīng)遞質(zhì)的重要生物作用已經(jīng)引起使用肽和/或肽模擬物作為治療劑。肽組合結(jié)構(gòu)元件得到的生物活性構(gòu)象，例如α-螺旋、 β -折疊、轉(zhuǎn)角和/或環(huán)極為重要，因為其允許受體、酶和核酸的選擇性生物識別，由此影響細(xì)胞-細(xì)胞通信和/或控制關(guān)鍵細(xì)胞功能，例如代謝、免疫防御和細(xì)胞分化(巴賓(Babine) 等人，化學(xué)評述(Chem. Rev.) (1997)97 :1359)。不幸的是，肽作為藥物的效用受到數(shù)個因素的嚴(yán)格限制，包括其在生理條件下被蛋白酶迅速降解、其較弱的細(xì)胞滲透性以及其由構(gòu)象柔性引起的結(jié)合特異性的缺乏。α-螺旋是肽的一個主要結(jié)構(gòu)組分。然而，α-螺旋肽傾向于解開并形成隨機(jī)線圈，這些線圈在大多數(shù)情況下具有較低生物活性，或甚至不具有活性，并且特別易于發(fā)生蛋白水解降解。許多研究團(tuán)體已經(jīng)開發(fā)出用于設(shè)計和合成更為穩(wěn)固的肽作為治療劑的策略。舉例來說，一種策略是將較為穩(wěn)固的官能團(tuán)并入肽鏈中，同時仍保持肽的獨特構(gòu)象和二級結(jié)構(gòu)(參看例如，甘特(Gante)，德國應(yīng)用化學(xué)(英文版)(Angew. Chem. Int. Ed. Engl.) (1994)33 :1699-1720 ；里斯克普(Liskamp)，荷蘭皇家化學(xué)協(xié)會雜志(Reel. Trav. Chim. Pays-Bas) (1994) 113 1 ；吉安尼絲(Giannis)，德國應(yīng)用化學(xué)(英文版)(1993)32 1244 ； 拜雷(Bailey)，肽化學(xué)(Peptide Chemistry)，威立出版公司(Wiley)，紐約(New York) (1990)，182;和其中引用的參考文獻(xiàn))。另一種方法是通過共價交聯(lián)使肽穩(wěn)定(參看例如，費荷蘭(Phelan)等人，美國化學(xué)協(xié)雜志(J. Am. Chem. Soc. ) (1997) 119 :455 ；盧克 (Leuc)等人，美國國家科學(xué)院院刊(Proc. Natl. Acad. Sci. USA) (2003) 100 :11273 ；布拉肯 (Bracken)等人，美國化學(xué)協(xié)會雜志(1994) 116 :6432 ；顏(Yan)等人，生物有機(jī)化學(xué)與醫(yī)藥化學(xué)通訊(Bioorg. Med. Chem.) (2004) 14 1403)。然而，大部分報導(dǎo)的方法都涉及使用極性和/或不穩(wěn)定的交聯(lián)基團(tuán)。“肽釘接(P印tide stapling)”是關(guān)于使用烯烴復(fù)分解反應(yīng)共價接合多肽鏈中存在的兩個含烯烴側(cè)鏈所使用的合成方法而造出的術(shù)語(有機(jī)化學(xué)雜志(J. Org. Chem.) (2001)66(16)；布萊克威爾(Blackwell)等人，德國應(yīng)用化學(xué)(1994)37 3281) 0經(jīng)顯示， 使用由烯烴復(fù)分解反應(yīng)產(chǎn)生的烴交聯(lián)劑進(jìn)行肽釘接有助于保持肽的天然構(gòu)象，尤其是在生理條件下(美國專利第7，192，713號；斯查梅斯特(khafmeister)等人，美國化學(xué)協(xié)會雜志(J. Am. Chem. Soc.) (2000) 122 :5891-5892 ；瓦倫斯基(Walensky)等人，科學(xué)(Science) (2004)305 :1466-1470 ；各文獻(xiàn)以引用的方式并入本文中)。這一策略已被應(yīng)用于細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)性BID-BH3 α -螺旋，在動物模型中引起比未釘接肽高的針對白血病惡性生長的抑制作用(瓦倫斯基等人，科學(xué)0004)305 :1466-1470 ；美國專利申請公開案第2005/02506890 號；美國專利申請公開案第2006/0008848號；各案以引用的方式并入本文中)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明源自對于釘接或接結(jié)肽的新用途的認(rèn)識。已知這些肽的穩(wěn)定性，故其可用作將蛋白質(zhì)或其它生物分子募集到特定蛋白質(zhì)、核酸、其它生物分子、細(xì)胞或細(xì)胞器(即， 將兩個細(xì)胞組件系栓在一起或使其緊密接近)的試劑。具體說來，本發(fā)明提供雙功能肽，其中一個或兩個結(jié)構(gòu)域可經(jīng)釘接或接結(jié)。所述雙功能肽的一個結(jié)構(gòu)域充當(dāng)結(jié)合于靶的靶向部分；另一結(jié)構(gòu)域充當(dāng)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域以將蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物募集到所述靶。效應(yīng)結(jié)構(gòu)域通常作用于或改變靶的活性。實質(zhì)上，雙功能肽用于使兩個蛋白質(zhì)或其它生物分子彼此緊密接近。靶向結(jié)構(gòu)域、效應(yīng)結(jié)構(gòu)域或兩個結(jié)構(gòu)域可經(jīng)釘接或接結(jié)以使所述肽的構(gòu)象穩(wěn)定。這兩個結(jié)構(gòu)域經(jīng)由連接子連接在一起，所述連接子的結(jié)構(gòu)范圍可為簡單的共價鍵到雙功能分子到聚合物連接子。一方面，本發(fā)明提供一種雙功能肽，其中靶向結(jié)構(gòu)域和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域中一者或兩者經(jīng)釘接或接結(jié)。本發(fā)明的雙功能肽包括靶向結(jié)構(gòu)域締合效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。必要時，每一肽包含 5到100個氨基酸以充當(dāng)靶蛋白質(zhì)的配體。必要時，所述肽可包括具有烯烴側(cè)鏈的非天然氨基酸以形成釘或接針，用于使肽的構(gòu)象穩(wěn)定。在某些實施例中，釘接或接結(jié)的肽是螺旋肽。通常，這兩個結(jié)構(gòu)域通過連接子彼此共價締合；但也可使用非共價締合。在某些實施例中，雙功能肽是SAH P53-8的釘接型式締合Bcl-9的釘接型式。在其它實施例中，雙功能肽是SAH p53-8的釘接型式締合Tcf4。所述本發(fā)明的雙功能肽通過將E3泛素連接酶募集到 β-連環(huán)蛋白來促進(jìn)連環(huán)蛋白降解。隨后Ε3泛素連接酶催化連環(huán)蛋白泛素化，引起蛋白酶體對其的降解。在某些實施例中，包含靶向結(jié)構(gòu)域、連接子和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的發(fā)明性雙功能釘接或接結(jié)肽是本發(fā)明的焦點。本發(fā)明提供雙功能釘接或接結(jié)肽，以及其制備和使用方法。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明雙功能釘接或接結(jié)肽和醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑的醫(yī)藥組合物。在某些實施例中，本發(fā)明提供雙功能、α螺旋釘接或接結(jié)肽，其中所述肽中至少一者是α螺旋且通過釘接或接結(jié)來穩(wěn)定。在某些實施例中，本發(fā)明的α-螺旋肽在生理條件下(例如在個體體內(nèi)，例如在胃腸道中；在血流中)保持其α-螺旋結(jié)構(gòu)。在某些實施例中，包含靶向結(jié)構(gòu)域、連接子和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的釘接或接結(jié)雙功能肽一般布置如下其中A和E是肽或類肽；A和/或E是釘接或接結(jié)肽；且L是連接子(例如共價鍵； 聚乙二醇(PEG)；基于氨基己酸的連接子；聚甘氨酸肽、單分散聚合物等)，且其中如果A是靶向結(jié)構(gòu)域，那么E是效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。一方面，本發(fā)明提供一種雙功能釘接或接結(jié)肽，其中一個或兩個結(jié)構(gòu)域(即A或E)具有下式
權(quán)利要求
1.一種雙功能釘接肽，其包含 靶向結(jié)構(gòu)域；連接子部分；和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域，其中至少一個結(jié)構(gòu)域經(jīng)釘接或針接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都經(jīng)釘接或針接。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中至少一個結(jié)構(gòu)域經(jīng)接結(jié)或針接。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都經(jīng)接結(jié)或針接。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述經(jīng)釘接或針接的肽包含α-螺旋。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的肽，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的肽，其中至少一個結(jié)構(gòu)域包含下式
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的肽，其中兩個結(jié)構(gòu)域都包含下式
18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是釘接或針接的蛋白質(zhì)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是釘接或針接的蛋白質(zhì)。
20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述連接子是蛋白質(zhì)的。
21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述連接子是非蛋白質(zhì)的。
22.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述連接子是聚合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述連接子是氨基己酸的單體或聚合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的肽，其中所述連接子是由1到10個氨基己酸單元構(gòu)成。
25.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述連接子是聚乙二醇。
26.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白質(zhì)、核酸或磷脂。
27.根據(jù)權(quán)利要求沈所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域結(jié)合β-連環(huán)蛋白、Myc、RaS或缺氧誘導(dǎo)因子。
28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域?qū)⑺鲂?yīng)結(jié)構(gòu)域定位于相關(guān)位點ο
29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是連環(huán)蛋白的配體。
30.根據(jù)權(quán)利要求四所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Bcl9的釘接型式。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的肽，其中所述Bcl9的釘接型式是截短的。
32.根據(jù)權(quán)利要求30所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Tcf-4的釘接型式。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的肽，其中所述Tcf-4的釘接型式是截短的。
34.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Myc的配體。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Max的釘接型式。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的肽，其中所述Max的釘接型式是截短的。
37.根據(jù)權(quán)利要求34所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Mad的釘接型式。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的肽，其中所述Mad的釘接型式是截短的。
39.根據(jù)權(quán)利要求34所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Mxi的釘接型式。
40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的肽，其中所述Mxi的釘接型式是截短的。
41.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Ras的配體。
42.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是缺氧誘導(dǎo)因子的配體。
43.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)酶的活性。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的肽，其中所述酶是泛素化酶、糖基化酶、組蛋白去乙?；?、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶或磷酸化酶。
45.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是泛素化酶的配體。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是E3泛素連接酶的配體。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的肽，其中所述E3泛素連接酶是hDM2。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的肽，其中所述hDM2的配體是p53的釘接型式。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的肽，其中所述p53的釘接型式是截短的。
50.根據(jù)權(quán)利要求46所述的肽，其中所述E3泛素連接酶是mDM2。
51.根據(jù)權(quán)利要求46所述的肽，其中所述E3泛素連接酶是泛素蛋白連接酶E3A。
52.根據(jù)權(quán)利要求46所述的肽，其中所述E3泛素連接酶是環(huán)指結(jié)構(gòu)域。
53.根據(jù)權(quán)利要求46所述的肽，其中所述E3泛素連接酶是SCFE3連接酶復(fù)合物。
54.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是糖基化酶的配體。
55.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是組蛋白去乙?；傅呐潴w。
56.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶的配體。
57.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是激酶的配體。
58.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是磷酸酶的配體。
59.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其具有下式
60.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其中〔SAH包含序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQID NO 29)。
61.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其中〔Tcf4)包含序列DELISFKDEGEQE(^Ala)2ERDL s5dvks5slvn (seq id n0:30)，其中 β Ala 是 β-丙氨酸。
62.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其中〔Tcf4)包含序列DELISFKDEGEQE ( β Ala) 2ER8DLADVKS5SLVN(SEQ ID NO :31)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸。
63.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其中丨…是包含2、3或4個氨基己酸殘基的連接子。
64.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其具有序列DELISFKDEGEQE( β Ala) 2ERDLS5DVKS5SLVN ( Ahx) nQSQQTFR8NLWRLLS5QN (SEQ ID NO: 15)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸，Ahx 是氨基己酸，且 η 是2、3或4。
65.根據(jù)權(quán)利要求59所述的肽，其具有序列DELISFKDEGEQE( β Ala) 2ER8DLADVKS5SLVN ( Ahx) nQSQQTFR8NLWRLLS5QN (SEQ ID NO: 16)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸，Ahx 是氨基己酸，且 η 是2、3或4。
66.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其具有下式
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其中〔SAH包含序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQID NO 29)。
68.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其中〔Tcf4)包含序列DELISFKDEGEQE ( β Ala) 2ERDL S5DVKS5SLVn (SEQ ID NO :30)，其中 β Ala 是 β-丙氨酸。
69.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其中〔Tcf4)包含序列DELISFKDEGEQE ( β Ala) 2ER8DLADVKS5SLVN(SEQ ID NO :31)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸。
70.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其中丨…是包含2、3或4個氨基己酸殘基的連接子。
71.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其具有序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(Ahx) nDELISFKDEGEQE (β Ala) 2ERDLS5DVKS5SLVN (SEQ ID NO: 13)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸，Ahx 是氨基己酸，且 η 是2、3或4。
72.根據(jù)權(quán)利要求66所述的肽，其具有序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(Ahx) nDELISFKDEGEQE (β Ala) 2ER8DLADVKS5SLVN (SEQ ID NO: 14)，其中 β Ala 是 β -丙氨酸，Ahx 是氨基己酸，且 η 是2、3或4。
73.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其具有下式
74.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其中〔SAH包含序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQID NO 29)。
75.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLR8HRERSLS5TLRDIQRMLF (SEQ ID NO :32)。
76.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLEHRERSLS5TLRS5IQRMLF(SEQ ID NO :33)。
77.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLEHRS5RSLS5TLRDIQRMLF(SEQ ID NO 34)
78.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其中^/w”是包含2、3或4個氨基己酸殘基的連接子。
79.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其具有序列SQEQLR8HRERSLS5TLRDIQRMLF(Ahx)nQSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQ ID NO :4)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
80.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其具有序列SQEQLEHRERSLS5TLRS5IQRMLF(Ahx) nQSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQ ID NO :5)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
81.根據(jù)權(quán)利要求73所述的肽，其具有序列SQEQLEHRS5RSLS5TLRDIQRMLF(Ahx) nQSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQ ID NO :6)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
82.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其具有下式
83.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其中〔SAH包含序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(SEQID NO 29)。
84.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLR8HRERSLS5TLRDIQRMLF (SEQ ID NO :32)。
85.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLEHRERSLS5TLRS5IQRMLF(SEQ ID NO :33)。
86.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其中〔Bcl9)包含序列 SQEQLEHRS5RSLS5TLRDIQRMLF(SEQ ID NO 34)
87.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其中丨…是包含2、3或4個氨基己酸殘基的連接子。
88.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其具有序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(Ahx) nSQEQLR8HRERSLS5TLRDIQRMLF (SEQ ID NO 1)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
89.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其具有序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(Ahx) nSQEQLEHRERSLS5TLRS5IQRMLF (SEQ ID NO :2)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
90.根據(jù)權(quán)利要求82所述的肽，其具有序列QSQQTFR8NLWRLLS5QN(Ahx) nSQEQLEHRS5RSLS5TLRDIQRMLF (SEQ ID NO :3)，其中 Ahx 是氨基己酸，且 η 是 2、3 或 4。
91.一種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的釘接肽。
92.一種治療個體的疾病、病癥或病況的方法，所述方法包含對有需要的個體投予治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的釘接肽。
93.根據(jù)權(quán)利要求92所述的方法，其中所述疾病是癌癥。
94.一種篩選根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽的文庫的方法，其包含提供根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽的文庫；和篩選具有使靶生物分子和效應(yīng)生物分子緊密接近的能力的肽。
95.一種篩選靶向結(jié)構(gòu)域的文庫的方法，其包含提供釘接的靶向結(jié)構(gòu)域的文庫，和關(guān)于針對所述靶生物分子的活性進(jìn)行篩選。
96.一種篩選效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的文庫的方法，其包含提供釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的文庫，和關(guān)于針對所述效應(yīng)生物分子的活性進(jìn)行篩選。
97.一種合成雙功能釘接肽的方法，其包含提供釘接的靶結(jié)構(gòu)域；提供釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域；和使所述釘接的靶結(jié)構(gòu)域與釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域交聯(lián)。
98.一種合成雙功能釘接肽的方法，其包含提供未釘接的靶結(jié)構(gòu)域，其中所述靶結(jié)構(gòu)域包含適于接結(jié)或釘接的非天然氨基酸殘基；提供未釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域包含適于接結(jié)或釘接的非天然氨基酸殘基；使所述未釘接的靶結(jié)構(gòu)域與未釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域交聯(lián)；和釘接所述肽。
99.一種合成雙功能釘接肽的方法，其包含提供接結(jié)或釘接的靶結(jié)構(gòu)域；提供接結(jié)或釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域；和將所述靶結(jié)構(gòu)域連接到所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。
100.一種合成雙功能釘接肽的方法，其包含提供未釘接的靶結(jié)構(gòu)域，其中所述靶結(jié)構(gòu)域包含適于接結(jié)或釘接的非天然氨基酸殘基；提供未釘接的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域包含適于接結(jié)或釘接的非天然氨基酸殘基；將所述靶結(jié)構(gòu)域連接到所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域；和接結(jié)或釘接所述未接結(jié)或未釘接的肽。
101.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Sin3的配體。
102.根據(jù)權(quán)利要求101所述的肽，其中所述靶向結(jié)構(gòu)域是Madl的Sin3相互作用結(jié)構(gòu)域SID的釘接型式。
103.根據(jù)權(quán)利要求102所述的肽，其中所述SID的釘接型式包含以下序列 VRMNIQMLLEAADYLERREREAEH(SEQ ID NO 85)；或VRMNIQMLLEAADYLERRER(SEQ ID NO :86)。
104.根據(jù)權(quán)利要求102所述的肽，其中所述SID的釘接型式包含以下序列 β Ala-VRRRIS5MLLS5AANYLER (SEQ ID NO :88)；或β Ala-VRRRIQMLLEAANKS5ERRS5R(SEQ ID NO :91)，其中所述非天然氨基酸&是交聯(lián)的。
105.根據(jù)權(quán)利要求104所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)Sin3調(diào)控的基因的活性。
106.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是MLL的釘接型式。
107.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域是cMyb的釘接型式。
108.根據(jù)權(quán)利要求106所述的肽，其中MLL是截短的。
109.根據(jù)權(quán)利要求107所述的肽，其中cMyb是截短的。
110.根據(jù)權(quán)利要求108所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域包含以下序列 ILP*DIM*FVLKNT(SEQ ID NO :81)，ILP*RIM*FVLKNT(SEQ ID NO :82)， ILPSDIM*FVL*NT(SEQ ID NO :83)，或ILPSRIM*FVL*NT(SEQ ID NO :84)，其中“*”是適于交聯(lián)的非天然氨基酸，且所述氨基酸經(jīng)交聯(lián)。
111.根據(jù)權(quán)利要求109所述的肽，其中所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域包含以下序列 K*KRI*ELELLLMSTENELKG(SEQ ID NO 73),K*KRI*RLELLLMSTENELKG(SEQ ID NO 74), KE*RIK*LELLLMSTENELKG(SEQ ID NO :75)， KR*RIK*LELLLMSTENELKG(SEQ ID NO :76)， KE*RIKELE*LLMSTENELKG(SEQ ID NO :77)， KE*RIKRLE*LLMSTENELKG(SEQ ID NO :78)， KR*RIKELE*LLMSTENELKG(SEQ ID NO:79)，或KEKRIKELELLLMSTE*ELK* (SEQ ID NO :80)，其中“*”是適于交聯(lián)的非天然氨基酸，且所述氨基酸經(jīng)交聯(lián)。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含靶向結(jié)構(gòu)域、連接子部分和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的雙功能釘接或針接肽，其可用于系栓至少兩個細(xì)胞實體(例如蛋白質(zhì))或使至少兩個細(xì)胞實體(例如蛋白質(zhì))緊密接近。某些方面涉及通過所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域結(jié)合到效應(yīng)生物分子且通過所述靶向結(jié)構(gòu)域結(jié)合到靶生物分子的雙功能釘接或針接肽。由本發(fā)明的雙功能釘接或針接肽系栓的多肽和/或多肽復(fù)合物，其中結(jié)合于所述雙功能釘接或針接肽的所述效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的效應(yīng)多肽修飾或改變結(jié)合于所述雙功能肽的所述靶向結(jié)構(gòu)域的靶多肽。還提供本發(fā)明雙功能釘接或針接肽的用途，包括治療疾病(例如癌癥、發(fā)炎性疾病)的方法。
文檔編號A61K38/00GK102510755SQ201080040139
公開日2012年6月20日 申請日期2010年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月13日
發(fā)明者格雷戈里·L·維爾戴恩, 梁樂, 湯姆·N·格羅斯曼, 玉柳斌, 約翰尼斯·松漢·葉, 雷蒙德·E·莫勒林 申請人:哈佛大學(xué)校長及研究員協(xié)會