專利名稱：經(jīng)改善貯藏穩(wěn)定性的脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及SPLA2可水解的脂質(zhì)體的藥物遞送系統(tǒng)，其具有經(jīng)改善的貯藏穩(wěn)定性，尤其是經(jīng)改善的于2-8攝氏度的貯藏穩(wěn)定性。
背景技術(shù)：
用于藥物遞送的脂質(zhì)體脂質(zhì)體是于20世紀(jì)80年代作為藥物遞送媒介物/系統(tǒng)而開發(fā)的微球體。于20世紀(jì)90年代，第一種脂質(zhì)體類藥物得以批準(zhǔn)用于商業(yè)用途。脂質(zhì)體具有能用來攜帯各種化合物比如藥物的三個(gè)不同腔室內(nèi)部含水腔室；疏水雙層；和內(nèi)和外層的極性中間相。取決于待包封化合物的化學(xué)性質(zhì)，其可以在任一腔室中局域化。目前，市場上存在數(shù)種腸胃外脂質(zhì)體-藥物配制劑。水可溶的藥物傾向于在脂質(zhì)體含水腔中局域化，脂質(zhì)體中包囊的藥物的實(shí)例是例如多柔比星(Doxil)，多柔比星(Myocet)和柔紅霉素(DaunoXone)。穿插于脂質(zhì)體膜中的藥物的實(shí)例是例如兩性霉素B(AmBisome),兩性霉素(AlbelcetB),苯并卩卜啉(Visudyne)和胞壁酰三肽-磷脂酰こ醇胺yunovan)。脂質(zhì)體被認(rèn)為是有前景的藥物遞送系統(tǒng)，原因是它們被動(dòng)地靶向腫瘤組織通過利用固體腫瘤的病理生理學(xué)特征比如增生和増加的血管滲透性以及淋巴引流的缺陷。這些特征使得便于納米粒子的外滲，而由于增強(qiáng)的滲透性和保留效果(EPR)脂質(zhì)體能夠得以在組織中保留更長時(shí)間。脂質(zhì)體作為藥物遞送媒介物的特性關(guān)鍵地取決于受脂質(zhì)體組合物中脂質(zhì)的顯著影響的它們的表面電荷、滲透性、溶解度、穩(wěn)定性等。此外，待包封于脂質(zhì)體中的藥物還需要符合其它要求以考慮用于制備穩(wěn)定的脂質(zhì)體配制劑。涉及安全性和藥物效力的考慮要求脂質(zhì)體配制劑保持它們的特性，也即從制備直至給藥的時(shí)間都保持穩(wěn)定。另外，希望的是在經(jīng)治療的受試者中運(yùn)輸直至它們到達(dá)其中藥物特異性釋放的靶標(biāo)位點(diǎn)期間所述配制劑保持不變。已描述了脂質(zhì)體的各種靶向策略，例如綴合至細(xì)胞特異性配體比如抗體。 SPLA2可水解脂質(zhì)體基于分泌性磷脂酶A2 (SPLA2)在癌性組織中以及在炎癥位點(diǎn)的升高水平，又一途徑已得以提出?；居^點(diǎn)是，能夠制備脂質(zhì)體，其又可被SPLA2水解，而被SPLA2水解則導(dǎo)致脂質(zhì)體中所包封藥物的釋放。此外，sPLA2水解的產(chǎn)品，溶血脂和脂肪酸充當(dāng)細(xì)胞膜的透化齊U，導(dǎo)致藥物的増加的細(xì)胞攝取。由于sPLA2水平在癌性組織中和在炎癥位點(diǎn)升高，sPLA2活化脂質(zhì)體可以用來將包封藥物優(yōu)先地遞送至所述位點(diǎn)。SPLA2可水解的脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性在慮及貯藏穩(wěn)定性吋，SPLA2可水解的脂質(zhì)體帶來特別的挑戰(zhàn)。這些挑戰(zhàn)基于有效的sPLA2水解所必需的特別的脂質(zhì)組合物。通常，許多參數(shù)影響貯藏穩(wěn)定性，并且還難以預(yù)測改變緩沖劑組成對貯藏穩(wěn)定性的影響，原因是這不僅影響摩爾滲透壓濃度，還影響膜穩(wěn)定性?，F(xiàn)有技術(shù)許多文獻(xiàn)已經(jīng)描述了 SPLA2活化的脂質(zhì)體，并且各種文獻(xiàn)已經(jīng)研究了脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性。然而，這些文獻(xiàn)中均未研究SPLA2可水解的脂質(zhì)體帶來的特定的貯藏問題。W00158910描述SPLA2活化脂質(zhì)體包含單醚溶血磷脂的前藥。該文獻(xiàn)也描述其它生物學(xué)活性化合物的包封。W00176555提出脂質(zhì)類藥物遞送系統(tǒng)用于治療與細(xì)胞外sPLA2在哺乳動(dòng)物皮膚組織或皮下組織中的局部增加有關(guān)的疾病或病癥的用途，其用于給藥由SPLA2活化的醚-溶血脂的前藥。該系統(tǒng)進(jìn)一步包含所謂的邊緣活性(edge active)化合物。W00176556表明脂質(zhì)類藥物遞送系統(tǒng)用于治療或預(yù)防選自利什曼病、錐蟲病、痕疾、溶組織內(nèi)阿米巴病(Entaboeba, Histolyticasis)和"東方肝吸蟲華枝睪吸蟲病(chlomorchis sinensis)"的寄生物感染的用途,其中所述系統(tǒng)含有由sPLA2活化的脂質(zhì)衍生物形式的前藥。脂質(zhì)體可以含有額外的生物學(xué)活性化合物。W006048017和W007107161確實(shí)也描述了 sPLA2活化的脂質(zhì)體。US5094854公開溫度敏感的脂質(zhì)體，其是加熱條件下穩(wěn)定性和釋放優(yōu)化的。描述于該文獻(xiàn)的脂質(zhì)體優(yōu)選具有比溫血?jiǎng)游矬w液高I. 2至2. 5倍的滲透壓且具有40-45攝氏度的相轉(zhuǎn)變溫度的內(nèi)部溶液。公開于該文獻(xiàn)的脂質(zhì)體并不是SPLA2的基質(zhì)，原因是它們確實(shí)不具有適當(dāng)?shù)闹|(zhì)組成。大多數(shù)脂質(zhì)體配制劑在貯藏期間沒有滲漏問題。相反，這些配制劑過于穩(wěn)定以致難以在期望場所釋放經(jīng)包囊的化合物。
發(fā)明概要在第一方面，本發(fā)明提供組合物，其包含SPLA2可水解的脂質(zhì)體，外部溶液，和脂質(zhì)體中的內(nèi)部溶液，-其中滲壓劑濃度在內(nèi)部溶液中比在外部溶液中更高。該組合物改善SPLA2可水解的脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性，尤其是于2_8攝氏度儲(chǔ)存時(shí)。脂質(zhì)體優(yōu)選包囊順鉬。本發(fā)明也提供制備本發(fā)明組合物的方法。


圖I.等值線圖，展示在脂質(zhì)體制備期間所用的蔗糖濃度和勻化壓力對顆粒尺寸的影響。在等值線圖內(nèi)的數(shù)值是指顆粒尺寸。圖2. 脂質(zhì)體中的總Pt濃度是顆粒尺寸的函數(shù)。
圖3.LPB0057-LPB0073在2-8 °C貯藏期間的顆粒尺寸變化。圖4.LPB0057-LPB0073 在 2-8°C貯藏期間的 PDI 變化。圖5.等值線圖，展示在脂質(zhì)體制備期間所用的內(nèi)部NaCl濃度和勻化壓力對初始DOE%的影響。在等值線圖內(nèi)的數(shù)是指DOE %。圖6.LPB0057-LPB0073Pt在貯藏期間的濃度。圖7.LPB0057-LPB0073 在貯藏期間的外部 Pt (% )。圖8.在2-8°C貯藏期間自LPB0057-LPB0073的滲漏量。圖9.等值線圖，展示在2-8 V貯藏56d之后內(nèi)部NaCl濃度和蔗糖濃度對DOE %的影響，其中勻化壓力保持于12，500KPa.等值線圖內(nèi)的數(shù)值是指在2_8°C貯藏56d之后的D0E%。圖10.等值線圖，展示在2_8°C貯藏56d之后內(nèi)部NaCl濃度和蔗糖濃度對％滲漏量的影響，其中勻化壓力保持于12，500KPa.等值線圖內(nèi)的數(shù)值指出在2_8°C貯藏56d之后的％滲漏量。圖IL在2_8°C貯藏期間自脂質(zhì)體順鉬配制劑的滲漏量。用變化滲透梯度制備各配制劑。詳見表3。圖12.在2_8°C貯藏期間，脂質(zhì)體順鉬配制劑的顆粒尺寸。有關(guān)緩沖劑組成參見表3。圖13.表I顯示各因素和反應(yīng)的真實(shí)實(shí)驗(yàn)設(shè)置。圖14.表2顯示在后向消除之后模型的回歸系數(shù)和顯著性(P)值。圖15.表3顯示用變化的滲透梯度制備的脂質(zhì)體順鉬配制劑的概覽。圖16.表4顯示用變化的分子量制備的不同的脂質(zhì)體藥物配制劑的概覽。 發(fā)明詳述本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)自SPLA2可水解的脂質(zhì)體的滲漏量可以通過在脂質(zhì)體外部溶液中貯藏得以減少，所述外部溶液具有比脂質(zhì)體內(nèi)部溶液更低的滲壓劑濃度。待用于I期研究的包囊在SPLA2可水解的脂質(zhì)體中的順鉬的貯藏中觀察到滲漏問題，所述I期研究涉及包囊在sPLA2可水解的脂質(zhì)體中的順鉬等滲配制劑。在該配制劑中，內(nèi)部溶液是O. 9% NaCl而外部溶液是pH 6. 5的IOmM磷酸緩沖劑、ImM NaCl和10%蔗糖。因?yàn)樵?-8攝氏度儲(chǔ)存的高度滲漏情況，等滲配制劑必須儲(chǔ)存在-80攝氏度，這并不是商業(yè)產(chǎn)品的最佳解決方案。從而，并不是所有醫(yī)院都具有在-80度貯藏的設(shè)施。此外，在-80攝氏度的運(yùn)輸非常笨重。額外地，在使用之前解凍小瓶時(shí)遇到小瓶斷裂的問題并且解凍引起自脂質(zhì)體的顯
著滲漏。
如上所述，據(jù)信滲漏問題是關(guān)于SPLA2可水解的脂質(zhì)體的脂質(zhì)組合物的特定需求的結(jié)果。尤其是，據(jù)信滲漏由SPLA2可水解的脂質(zhì)體不存在或存在少量穩(wěn)定劑比如膽固醇而引起。此外，SPLA2可水解的脂質(zhì)體的陰離子性質(zhì)可以影響滲漏。因此，需要包含SPLA2可水解的脂質(zhì)體的組合物，其于2_8攝氏度儲(chǔ)存時(shí)具有經(jīng)減少的滲漏量。關(guān)于SPLA2脂質(zhì)體的術(shù)語"經(jīng)減少的滲漏量"和"經(jīng)改善的穩(wěn)定性"在本文中可互換使用。應(yīng)理解，滲漏量涉及內(nèi)部溶液中治療劑濃度(或量)優(yōu)選隨時(shí)間的變化并且可以由其描述。在第一方面，本發(fā)明提供組合物，其包含SPLA2可水解的脂質(zhì)體，外部溶液，和脂質(zhì)體中的內(nèi)部溶液，-其中內(nèi)部溶液中的滲壓劑濃度高于外部溶液中的滲壓劑濃度。該組合物通常是藥物組合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，脂質(zhì)體包含包囊于所述脂質(zhì)體中的治療劑。該治療劑一般地溶于內(nèi)部溶液。然而，治療劑還可以是部分或完全沉淀的，例如由于在貯藏期間與包囊期間的溶解度相比降低的溶解度。在包囊期間的溶解度可以較高，原因是溫度較高。優(yōu)選的是，治療劑具有小于350g/mol的分子量,原因是滲漏問題一般對較小的試劑發(fā)生，并且據(jù)信較小的試劑能夠更容易地通過脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層。甚至更優(yōu)選地，治療劑是順鉬(順式-ニ氨ニ氯鉬(II))。如上文所提及，包囊順鉬的SPLA2可水解的脂質(zhì)體傾向于在貯藏期間滲漏。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，SPLA2可水解的脂質(zhì)體中僅有的治療劑是順鉬。從而，內(nèi)部溶液僅包含滲壓劑和順鉬和任選的緩沖劑。氯化物離子防止順鉬形成不希望的高度毒性的水化產(chǎn)品。因此，內(nèi)部溶液優(yōu)選包含濃度至少O. 2%或O. 4%，更優(yōu)選O. 2-2. 5% w/w，或O. 4-1. 8%和最優(yōu)選O. 8-1% ^ NaCl或KC1。在某些實(shí)施方式中，可以使用其它氯化物鹽。NaCl通常較KCl更優(yōu)選。在某些實(shí)施方式中，外部溶液優(yōu)選包含濃度至少O. 2%或0.4%，更優(yōu)選O. 2-2. 5% w/w，或O. 4-1. 8%和最優(yōu)選O. 8-1%的NaCl或KCl。典型的濃度是0.9%。從而，如果少量順鉬自脂質(zhì)體滲漏而出，則氯化物離子的存在將使得毒性水化產(chǎn)品的形成最小化。再次，NaCl通常較KCl更優(yōu)選。在一種實(shí)施方式中，外部溶液不存在ニ價(jià)陽離子，比如鈣離子。在又ー實(shí)施方式中，ニ價(jià)陽離子可以包括在外部溶液中。內(nèi)部溶液確實(shí)一般不包括緩沖劑。此外，硫酸鹽通常不包括在內(nèi)部溶液中。在組合物的一種實(shí)施方式中，內(nèi)部溶液包含至少I. 4% NaCl或KCl和更優(yōu)選1.8% NaCl或KCl且不包含粘度增強(qiáng)劑，所述粘度增強(qiáng)劑優(yōu)選選自糖類比如乳糖、蔗糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖和親水聚合物比如淀粉、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯-吡咯烷酮、糊精、黃原膠和部分地水解的纖維素低聚物和蛋白和多肽。在組合物的又一實(shí)施方式中，內(nèi)部溶液包含至少5%的粘度增強(qiáng)劑。優(yōu)選，粘度增強(qiáng)劑選自糖類比如乳糖，蔗糖，麥芽糖，半乳糖，葡萄糖和親水聚合物比如淀粉，右旋糖酐，聚乙烯醇，聚乙烯-吡咯烷酮，糊精，黃原膠和部分地水解的纖維素低聚物和蛋白和多肽。應(yīng)認(rèn)識(shí)到粘度增強(qiáng)劑也充當(dāng)滲壓劑。在內(nèi)部溶液包含粘度增強(qiáng)劑的情況下，濃度優(yōu)選大于5% w/w0甚至更優(yōu)選的是濃度大于6、7、8、9或10%%。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，粘度增強(qiáng)劑選自糖類比如乳糖，蔗糖，麥芽糖，半乳糖，葡萄糖和親水聚合物比如淀粉，右旋糖酐，聚乙烯醇，聚乙烯-吡咯烷酮，糊精，黃原膠和部分地水解的纖維素低聚物和蛋白和多肽。最優(yōu)選的是糖類，尤其是蔗糖。通常，外部溶液優(yōu)選具有約300mM的滲壓劑濃度，原因是其為生理學(xué)滲壓劑濃度。從而，在實(shí)施方式中，外部溶液優(yōu)選具有200至400mM，更優(yōu)選250_350mM和最優(yōu)選275至325mM的滲壓劑濃度。本發(fā)明組合物的特征在于，在內(nèi)部溶液與外部溶液之間存在滲壓劑濃度差異。該差異在本文中也稱為滲透梯度。如實(shí)施例部分所示，27mM的滲透梯度(內(nèi)部滲壓劑濃度減去外部滲壓劑濃度)不能充分降低滲漏。59mM的梯度減少滲漏，91mM的梯度也同樣減少滲漏。應(yīng)注意滲壓劑濃度是全部溶質(zhì)顆粒的總濃度，其常常稱為溶液的摩爾滲透壓濃度(Osm)。 在一種實(shí)施方式中，溶液的摩爾滲透壓濃度用溶質(zhì)顆粒的滲透系數(shù)進(jìn)行校正。優(yōu)選的是滲透梯度應(yīng)大于27mM。更優(yōu)選的是滲透梯度大于59mM或大于91mM。甚至更優(yōu)選大于IOOmM,比如大于150mM,大于 200mM，大于 250mM，大于 275mM 和大于 300mM。在一種實(shí)施方式中，假定內(nèi)部溶液中的滲壓劑濃度與制備脂質(zhì)體時(shí)使用的水化溶劑中的滲壓劑濃度相同。也即，由于其是水化溶劑中的滲壓劑濃度，在提及內(nèi)部溶液中的滲壓劑濃度時(shí)，該濃度能夠容易地確定。內(nèi)部溶液中的真實(shí)滲壓劑濃度可以不等同于水化溶劑中的滲壓劑濃度，原因是在形成之后水可以進(jìn)入脂質(zhì)體從而降低滲壓劑濃度(同時(shí)增加脂質(zhì)體中的滲透壓)。最大滲透梯度是優(yōu)選1500mM，更優(yōu)選1200mM和最優(yōu)選900mM。如果滲透梯度過高，據(jù)信脂質(zhì)體最初就將滲漏，從而滲壓劑會(huì)通過膜直至建立最大可忍耐梯度，在此情況下之后的滲漏會(huì)最小。從而，滲透梯度一般是27至900mM，更優(yōu)選200至600mM和最優(yōu)選280至320mM。外部溶液的pH —般具有5至7的pH而內(nèi)部溶液一般地具有5至7的pH?？梢允褂眠m當(dāng)?shù)木彌_液來將PH保持在所希望的值。然而，在一種實(shí)施方式中，內(nèi)部溶液和/或外部溶液不包含緩沖劑，優(yōu)選磷酸緩沖齊U。在某些實(shí)施方式中，磷酸緩沖液是不希望的，因?yàn)樗鼈兇龠M(jìn)順鉬轉(zhuǎn)化為副產(chǎn)物。
特別優(yōu)選的順鉬包囊在脂質(zhì)體中的組合物包含下述成分I)內(nèi)部溶液0. 8-1. 0% NaCl,比如 O. 9% NaCl 和 9-11%蔗糖，比如 10%蔗糖。外部溶液8-12mM磷酸緩沖劑(pH6. 5)，比如IOmM磷酸緩沖劑(pH6. 5)+9-11蔗糖％，比如10%蔗糖。2)內(nèi)部溶液1. 6-2. 0% NaCl，比如 I. 8% NaCl外部溶液8-12mM磷酸緩沖劑(pH6. 5)，比如IOmM磷酸緩沖劑(pH6. 5)+9-11%蔗糖，比如10%鹿糖。3)內(nèi)部溶液0. 8-1. 0% NaCl,比如 O. 9% NaCl 和 9-11%蔗糖，比如 10%蔗糖。外部溶液8-12mM磷酸緩沖劑(pH6. 5)，比如IOmM磷酸緩沖劑(pH6. 5)+0. 35% -O. 55% 比如 O. 45% NaCl+4-6%蔗糖，比如 5%蔗糖。4)內(nèi)部溶液1. 6-2. 0% NaCl，比如 I. 8% NaCl外部溶液8-12mM磷酸緩沖劑(pH6. 5)，比如IOmM磷酸緩沖劑(pH6. 5)+0. 8-1. 0% NaCl，比如 O. 9% NaCl.最終組合物中的治療劑濃度一般是O. lmg/ml至15mg/ml。在治療劑是順鉬的情況下，濃度優(yōu)選是O. 5mg/ml至I. 5mg/ml。上述濃度能夠通過在脂質(zhì)體制備期間在水化溶液中使用8mg/ml的順鉬濃度來實(shí)現(xiàn)。8mg/ml的濃度能夠通過將水化溶液加熱至65%攝氏度的溫度來實(shí)現(xiàn)。組合物的脂質(zhì)體優(yōu)選具有50至200nm,更優(yōu)選75至160nm的平均尺寸(直徑)。在2至8攝氏度的溫度貯藏56天之后，組合物的脂質(zhì)體應(yīng)具有小于20%，15%或10%,更優(yōu)選小于9%,8%或7%的滲漏量。如實(shí)施例部分所示,這能夠通過調(diào)節(jié)滲透梯度來實(shí)現(xiàn)。在提及的滲漏百分比時(shí)是指在透析或超濾步驟之后脂質(zhì)體中的順鉬的量與在貯藏之后脂質(zhì)體中的順鉬的量相比。在透析或超濾步驟之后，外部溶液可以包含組合物中順鉬總量的5%。從而，內(nèi)部溶液包含組合物中95%的順鉬。在貯藏之后，內(nèi)部溶液可以包含順鉬總量的85. 5%而外部溶液因而包含14. 5%。那么，滲漏量是9. 5/95 = 10%。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，第一方面的組合物通過第二方面的方法來制備。sPLA2可水解脂質(zhì)體用于本發(fā)明組合物的SPLA2可水解的脂質(zhì)體在下述實(shí)施方式中進(jìn)ー步詳細(xì)定義。在其最寬泛實(shí)施方式中，術(shù)語SPLA2可水解脂質(zhì)體是指在生理學(xué)條件下特別是在癌性組織中可水解的脂質(zhì)體。優(yōu)選，SPLA2可水解脂質(zhì)體包含20%至45% (mol/mol)的陰離子脂質(zhì)。陰離子脂質(zhì)的含量影響脂質(zhì)體的重要特征，比如脂質(zhì)體的SPLA2介導(dǎo)脂質(zhì)水解的速率以及對脂質(zhì)體的免疫應(yīng)答。隨陰離子脂質(zhì)含量増加，SPLA2(和藥物釋放)介導(dǎo)的脂質(zhì)水解速率也増加。已展示的是，合理的水解速率能夠通過20%至45%的陰離子脂質(zhì)含量來實(shí)現(xiàn)。從而，在ー種實(shí)施方式中，陰離子脂質(zhì)的含量是至少20%。在又一種實(shí)施方式中，陰離子脂質(zhì)的含量是不超過45%。在又一種實(shí)施方式中，脂質(zhì)體的陰離子脂質(zhì)含量選自20%至45%，25%至45%，28%至 42%，30%至 40%，32%至 38%和 34%至 36%。如上所述，對脂質(zhì)體的免疫應(yīng)答也受陰離子脂質(zhì)含量影響。因此，體內(nèi)脂質(zhì)體的清除速率可以通過將脂質(zhì)體中陰離子脂質(zhì)含量保持在某水平以下來降低，從而發(fā)明人已經(jīng)認(rèn)識(shí)到脂質(zhì)體中陰離子脂質(zhì)的含量能夠用來達(dá)成SPLA2水解速率和經(jīng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的清除速率之間的平衡。、
優(yōu)選地，陰離子脂質(zhì)是磷脂，優(yōu)選地，所述磷脂選自PI (磷脂酰肌醇)，PS (磷脂酰絲氨酸)，DPG (雙磷脂酰基甘油)，PA (磷脂酸)，PEOH (磷脂酰醇)，和PG (磷脂酰甘油)。更優(yōu)選，陰離子磷脂是PG。優(yōu)選，脂質(zhì)包含硬脂酰鏈。從而，優(yōu)選PG是DSPG等。親水聚合物在優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于本發(fā)明中的SPLA2可水解脂質(zhì)體還包含親水聚合物，其選自PEG[聚(乙二醇)],PAcM[聚(N-丙烯?；鶈徇?]，PVP[聚(乙烯基吡咯烷酮)]，PLA[聚(丙交酯)]，PG[聚(乙交酯)]，POZO[聚(2-甲基_2_噁唑啉)]，PVA[聚乙烯醇)]，HPMC(羥丙基甲基纖維素)，ΡΕ0[聚(環(huán)氧乙烷)]，脫乙酰殼多糖[聚(D-氨基葡萄糖)]，PAA[聚(氨基酸)]，聚HEMA[聚(2-甲基丙烯酸羥乙 酯)]及其共聚物。最優(yōu)選地，聚合物是分子量IOODa至IOkDa的PEG。特別優(yōu)選的是尺寸2_5kDa的PEG (PEG2000 至 PEG5000)，而最優(yōu)選的是 PEG2000。將聚合物包含在脂質(zhì)體上是技術(shù)人員熟知的并且能夠大致通過經(jīng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)降低清除率用來增加脂質(zhì)體在血流中的半衰期。優(yōu)選，將聚合物綴合至磷脂酰基乙醇胺的頭部基團(tuán)。又一選擇是綴合至神經(jīng)酰胺(盡管該脂質(zhì)不可經(jīng)SPLA2水解)。在聚合物綴合至磷脂?；掖及返那闆r下，負(fù)電荷得以引入，因此DSPE-PEG視為陰離子脂質(zhì)(與DSPE相反，其視為中性脂質(zhì))。聚合物-綴合的脂質(zhì)優(yōu)選以至少2%的量存在。更優(yōu)選，該量是至少5%和不超過15%。甚至更優(yōu)選，聚合物-綴合的脂質(zhì)的量是至少3%且不超過6%。含有陰離子磷脂和(2. 5%DSPE-PEG2000的脂質(zhì)體在鈣存在下具有增加的聚集傾向。這能夠通常通過形成高粘度凝膠得以觀察到。含有陰離子磷脂和> 7. 5% DSPE-PEG2000的脂質(zhì)體會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體沉淀或分相。脂質(zhì)體中的電中性的脂質(zhì)組分優(yōu)選，待用于本發(fā)明中的脂質(zhì)體也包含未帶電磷脂，其選自包含PC (磷脂酰膽堿)和PE (磷脂酰乙醇胺)的兩性離子磷脂。最優(yōu)選，所述兩性離子磷脂是PC。與陰離子磷脂相對，兩性離子磷脂充當(dāng)脂質(zhì)體中的電中性SPLA2-可水解脂質(zhì)組分。通過在相同的脂質(zhì)體中組合兩性離子磷脂和陰離子磷脂，則可能將其調(diào)節(jié)至希望的表面電荷密度，該表面電荷密度適應(yīng)血液中的充分高的SPLA2水解速率和低的清除速率。脂質(zhì)體中兩性離子磷脂的量是優(yōu)選40%至75%和更優(yōu)選50至70%。優(yōu)選，脂質(zhì)(陰離子脂質(zhì)，中性脂質(zhì)和聚合物綴合型脂質(zhì))包含硬脂酰鏈。從而優(yōu)選PG是DSPG，PE優(yōu)選是DSPE等醚-磷脂磷脂中某些或全部可以是醚-磷脂。從而，它們在磷脂甘油骨架的sn-Ι位可以具有醚-鍵而不是酯-鍵。在SPLA2水解該特別類型的磷脂的情況下，產(chǎn)生單醚溶血磷脂，而它們對例如癌細(xì)胞有毒性。也即醚磷脂可以視為單醚溶血磷脂的前藥，而本發(fā)明脂質(zhì)體能夠用來將所述前藥遞送至癌細(xì)胞的SPLA2-增強(qiáng)環(huán)境，在該環(huán)境中所述前藥被SPLA2水解活化。醚-磷脂已描述于EP 1254143和TO 2006/048017，通過援引將其內(nèi)容并入本文。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的SPLA2活化脂質(zhì)體不包含醚-磷脂。其它前藥
通過SPLA2釋放自脂質(zhì)以形成溶血脂的部分也可以是藥物。從而，脂質(zhì)體可以包含單醚溶血脂的前藥、通過SPLA2釋放自脂質(zhì)的前藥和下文進(jìn)ー步述及的其它治療劑。在一種實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的SPLA2活化脂質(zhì)體不包含通過sPLA2釋放自脂質(zhì)的前藥。穩(wěn)定劑脂質(zhì)體還可以通過包含入作為脂質(zhì)體膜組分的膽固醇而得以穩(wěn)定化。然而，月旨質(zhì)體中的高膽固醇量對通過SPLA2的水解具有負(fù)面效果，因此優(yōu)選的是脂質(zhì)體包含不超過10%的膽固醇。甚至更優(yōu)選，脂質(zhì)體包含小于1%的膽固醇，小于O. 1%的膽固醇或完全不包含任何膽固醇。構(gòu)成脂質(zhì)體的脂質(zhì)的烷基鏈長可以進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而獲得最佳的PLA2水解速率和包埋化合物自脂質(zhì)體的最小滲漏。優(yōu)選，烷基鏈?zhǔn)荂18或C16飽和鏈。如上所述，脂質(zhì)體可以包含單醚溶血脂質(zhì)的前藥和/或通過SPLA2釋放自脂質(zhì)的部分的前藥以形成溶血脂。脂質(zhì)體的理化特征脂質(zhì)體能夠是單層或多層的。最優(yōu)選，脂質(zhì)體是單層的。脂質(zhì)體的直徑應(yīng)是50至400nm,優(yōu)選80至160nm和最優(yōu)選90至120nm。優(yōu)選，本發(fā)明第二方面的脂質(zhì)體配制劑的多分散性指數(shù)(PDI)不應(yīng)超過O. 2，更優(yōu)選是O. 10或更低。在該范圍內(nèi)的PDI值表示配制劑中相對窄的顆粒尺寸分布。由上文可知，優(yōu)選的是構(gòu)成脂質(zhì)體的脂質(zhì)中的至少ー種當(dāng)存在于脂質(zhì)體中時(shí)是SPLA2的底物。在一種實(shí)施方式中，脂質(zhì)體包含由SPLA2在sn-3位而不是在sn_2位水解的脂質(zhì)。所述非天然脂質(zhì)和包含非天然脂質(zhì)的脂質(zhì)體已公開于WO 2006/048017，通過援引將其內(nèi)容并入本文。在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明所用的脂質(zhì)體包含70 % DSPC，25 % DSPG和5 %DSPE-PEG。制備的方法本發(fā)明的第二方面是包括下述步驟的方法a)通過將所選脂質(zhì)溶于有機(jī)溶劑來制備脂質(zhì)混合物b)用含水的水化溶劑來水化步驟a)的產(chǎn)品以便形成脂質(zhì)體c)在加入含水水化溶劑之前或在加入含水水化溶劑之后除去步驟a)的有機(jī)溶劑d)將水化溶劑與具有比水化溶液更低的滲壓劑濃度的外部溶液交換e)由此形成在本發(fā)明第一方面中描述的組合物。水化溶劑可以通過離心、超濾、透析或相似方法交換。在將水化溶劑變?yōu)橥獠咳芤褐?，?yōu)選小于15%，小于10%或更優(yōu)選小于8%或6%的治療劑存在于外部溶液中。優(yōu)選，脂質(zhì)體中的藥物包囊度應(yīng)是> 70%，更優(yōu)選> 95%和最優(yōu)選> 99%。藥物包囊度是包囊的藥物與配制劑中藥物總量的比率。優(yōu)選，在加入水化溶劑之前除去有機(jī)溶劑。該方法可以還包括高剪切混合以減小脂質(zhì)體尺寸 。該方法可以包括通過濾器擠出在步驟c)中產(chǎn)生的脂質(zhì)體以產(chǎn)生一定平均尺寸的脂質(zhì)體的步驟。該方法還可以包括超聲脂質(zhì)體配制劑以產(chǎn)生一定尺寸的脂質(zhì)體的步驟。該方法還可以包括在壓力5000至20000KPa進(jìn)行勻化。優(yōu)選，脂質(zhì)體是在本發(fā)明的第一方面中描述的脂質(zhì)體，也即相應(yīng)地選擇脂質(zhì)。
脂質(zhì)體可以與至少一種治療劑一起通過將藥物溶劑化于用來制備脂質(zhì)體的有機(jī)溶劑或水化溶劑中加載。優(yōu)選，治療劑溶劑化在水化溶劑中而治療劑優(yōu)選是順鉬。另選地，可離子化治療劑能夠這樣加載入脂質(zhì)體中首先形成脂質(zhì)體，例如通過PH梯度跨最外層脂質(zhì)體層建立電化學(xué)勢，然后將可離子化治療劑加入脂質(zhì)體外部的含水媒介。
實(shí)施例實(shí)施例I，優(yōu)化SPLA2可水解的脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性摘要已觀察到在2_8°C貯藏時(shí)，LiPlaCis (脂質(zhì)體的順鉬)在前幾個(gè)月期間可以具有多至30%的滲漏量。滲漏在前兩個(gè)月期間最為普遍，而在該時(shí)間段之后僅發(fā)生少量滲漏。建立因子設(shè)計(jì)以試驗(yàn)LiPlacis在2_8°C的穩(wěn)定性。根據(jù)復(fù)合表面設(shè)計(jì)，用變化內(nèi)部緩沖劑組成來制備配制劑，并在不同壓力下勻化。于3個(gè)水平測試3個(gè)因素內(nèi)部NaCl 濃度(O. 9，I. 4，和 I. 9% )內(nèi)部蔗糖濃度(0，5，和10% )在制備期間使用的勻化壓力(5000，12500，和20000KPa)。自配制劑的滲漏經(jīng)展示受全部參數(shù)測試影響。在脂質(zhì)體制備期間增加脂質(zhì)體內(nèi)部的蔗糖和NaCl濃度并具有低勻化壓力引起在貯藏期間的較高藥物保留。在貯藏2個(gè)月之后具有最高包囊度的配制劑用脂質(zhì)體內(nèi)部的I. 9% NaCl和10%蔗糖制備，并于5000KPa勻化。在貯藏期間未觀察到制備的任意配制劑的顆粒尺寸顯著變化。物質(zhì)和方法制備sPLA2 脂質(zhì)體(LiPlaCis)I，2_ 二(十八燒酸基)-sn_甘油_3_憐酸膽喊(DSPC), 1, 2_ 二(十八燒酸基)-sn-甘油-3-磷酸甘油(DSPG)，和1，2_ 二(十八烷?；?磷脂酰乙醇胺_甲氧基聚(乙二醇)2000 (DSPE-PEG 2000)全部購自 Lipoid(Ludvigshafen,德國)。鹿糖購自Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)。氯化鈉和磷酸二氫鈉分別購自Merck (Darmstadt,德國)和J. T. Baker (Deventer,荷蘭)。銥原子吸收標(biāo)準(zhǔn)溶液購自 Sigma-Aldrich (St. Louis, Mo)。Slide-A-Lyzer IOK MWCO 透析盒購自 Thermo Scientific (Rockford, IL)。Amicon Ultra-4Ultracel-30k 離心過濾裝置購自 Millipore (Bedford, MA)。制備LiPlaCis均質(zhì)脂質(zhì)混合物(DSPC/DSPG/DSPE-PEG200070 25 5mol_% )這樣制備將脂質(zhì)溶于氯仿/甲醇9 I (v/v) 0在50°C的溫度，用溫和的氮?dú)饬?，將溶劑自脂質(zhì)混合物蒸發(fā)。在真空下在 Martin Christ Dryers GmbH (Harz,德國)的 Christ Epsilon 2-4 凍干器中儲(chǔ)存過夜，殘余溶劑得以蒸發(fā)。多層囊泡(MLVs)這樣制備；將脂質(zhì)膜分散于65°C熱水化介質(zhì)中，其中含有8mg/mL順鉬和根據(jù)表I的變化濃度的蔗糖和氯化鈉。在65°C將脂質(zhì)水化O. 5小吋。在水化期間，渦流攪拌樣品各5分鐘。在根據(jù)表I的變化壓力(5000-20，OOOKPa)下，將水化的脂質(zhì)懸浮液在Avestin, Inc. (Ontartio,加拿大)的EmulsiFlex_C3中勻化。全部勻化步驟都在65°C的溫度進(jìn)行。通過沉淀和透析從配制劑除去未包囊的順鉬。沉淀以2個(gè)步驟進(jìn)行；首先在25 °C進(jìn)行I小時(shí)，然后在5 °C進(jìn)行I小吋。在含有10%蔗糖pH 6.5的IOmM磷酸緩沖劑中，分別相對IOOx體積透析18和24h2次。在制備之后立即將配制劑分入各小瓶含500μ I樣品的玻璃小瓶中。用蓋密封小瓶，井置于冷藏器(2-8°C)中。置于冷藏器的這天認(rèn)為是初始日 期。在忙藏期間連續(xù)地取出樣品，并通過ICP-MS和Zetasizernano分別進(jìn)行分析以確定Pt濃度和顆粒尺寸。確定顆粒尺寸將兩滴LiPlaCis混入IOmL Milli-Q水。將ImL混合物轉(zhuǎn)移入一次性池并在Malvern Inc. (Worcestershire, United Kingdom)的 Zetasizer Nano ZS 動(dòng)態(tài)光散身寸裝直上測量顆粒尺寸。在25°C的溫度用水作為內(nèi)部參比物質(zhì)，測量顆粒尺寸三次。平均的Z-平均顆粒尺寸(也即直徑)基于這三次測量進(jìn)行計(jì)算。確定包囊度將脂質(zhì)體以因子100稀釋于透析溶液中。隨后，在25°C平衡經(jīng)稀釋的脂質(zhì)體lh。然后，在 15°C在 Millipore (Billerica,MA)的Amicoil Ultra 離心過濾裝置(30K MWC0)中，將稀釋脂質(zhì)體的一部分于2500g離心30分鐘。將在離心之前(也即100倍稀釋的脂質(zhì)體)和在離心之后(滲透)的樣品在Milli-Q水中稀釋100倍。I體積％的銥原子吸收標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.05ppm)作為內(nèi)標(biāo)加入全部樣品。將配有錯(cuò)流霧化器和Pt錐的感應(yīng)偶聯(lián)等離子體裝置的 Perkin-Elmer PESCIEX Elan 6000 (Ontario，加拿大)用來測量LiPlaCis 樣品中的鉬水平。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用中央復(fù)合表面設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以研究三個(gè)因素的線性、二次和叉乘效果，各因素以三個(gè)水平變化并且包括三個(gè)重復(fù)中心點(diǎn)。因素及其水平示于表I。選擇的三個(gè)因素是內(nèi)部NaCl濃度(w/v% )，內(nèi)部蔗糖濃度(w/v% )，和勻化壓力(KPa)。所用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示于表I。用軟件包(Modde 8. O, Umetri7Umeai Sweden)來將ニ次模型與獨(dú)立變量擬合。反應(yīng)表面模型與下述公式擬合
YiYin—\ YiY = P0^yjパス+ Σガス2 + Σ Σε
i=\i=\i=\ ノ.=/+1其中Y是反應(yīng)變量，Xi是第i個(gè)獨(dú)立變量，β ο是截距，β i是一次模型系數(shù)，β π是變量i的二次系數(shù)和β 是因素i與因素j之間的相互作用的模型系數(shù)，ε是各因素實(shí)驗(yàn)誤差的組合。二次項(xiàng)使得可能獲得有關(guān)反應(yīng)曲度的信息。用決定系數(shù)(R2)和不貼合性(lack-of-fit)試驗(yàn)來確定構(gòu)建的模型是否適于描述觀察到的數(shù)據(jù)。R2 >0.8指出模型可接受。在可能的情況下，通過去掉經(jīng)方差分析不顯著(P >0.05)的項(xiàng)目來簡化模型。然而，如果R2變得低于0.8則不從模型去掉項(xiàng)目。用RSM來評價(jià)所選因素對初始顆粒尺寸、在制備之后立即的D0E%、在2_8°C貯藏56d之后的D0E%和滲漏量的效果。結(jié)果和討論
模型擬合通過多回歸和反向消除來確定最佳擬合模型。觀察值和預(yù)測值充分地相關(guān)。計(jì)算反應(yīng)變量的模型系數(shù)和可能性(P)值的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)(表2)。產(chǎn)生的模型一般對于評價(jià)是令人滿意的，原因是觀察結(jié)果和預(yù)測結(jié)果良好地相關(guān)。根據(jù)方差分析對于任意產(chǎn)生的模型都不存在不貼合性。顆粒尺寸數(shù)據(jù)顯示勻化壓力對顆粒尺寸具有最顯著的影響。隨在制備期間所用的勻化壓力升高，則顆粒尺寸減小。在制備期間使用的蔗糖濃度也展示對顆粒尺寸具有顯著影響。增加的蔗糖濃度引起較大的顆粒尺寸。如圖I所示的等值線圖展示在脂質(zhì)體制備期間使用的內(nèi)部蔗糖濃度和勻化壓力對顆粒的影響。自圖2能夠看到，較大的顆粒尺寸通常意味著較高的包囊順鉬量。由于顆粒尺寸較大，則也會(huì)期望內(nèi)部體積會(huì)增加，這允許更多Pt被包囊。在貯藏期間顆粒尺寸和roi的變化示于圖3-4。在冷藏期間所制備的任意脂質(zhì)體配制劑未觀察到顆粒尺寸顯著變化。初始包囊度)配制劑具有84至92%的初始包囊度。經(jīng)展示NaCl對初始包囊度(DOE)具有最顯著影響。水化溶液中所用的鹽濃度越高則獲得越高的初始D0E。另外在制備期間使用的較高勻化壓力引起較低的D0E。這可能是由于在較高勻化壓力獲得較小脂質(zhì)體，從而能夠期望脂質(zhì)體外部存在更多的鉬。如圖5所示的等值線圖展示在脂質(zhì)體制備期間所用的內(nèi)部NaCl濃度和勻化壓力對初始D0E%的影響。在2_8°C貯藏56d之后，各參數(shù)對0(^%和滲漏量的影響在忙藏期間的Pt分析(總Pt含量,脂質(zhì)體外部Pt含量和滲漏量)示于圖6-8。經(jīng)展示內(nèi)部NaCl和蔗糖濃度在貯藏56d之后對包囊度(DOE)具有顯著影響。月旨質(zhì)體內(nèi)部的NaCl和蔗糖濃度越高，則獲得的DOE越高。對于勻化壓力未觀察到主要效果；然而觀察到了在勻化壓力與蔗糖之間的相互作用。在高內(nèi)部蔗糖濃度和低勻化壓力下，與較高勻化壓力相比，引起較高D0E。在貯藏56d期間順鉬自配制劑滲漏的量取決于所檢查的全部因素。然而，對滲漏量具有最顯著效果的因素是蔗糖濃度。觀察到增加內(nèi)部NaCl和蔗糖濃度會(huì)增長在貯藏期間的藥物保留。與在較高壓力制備的那些相比，能觀察到自在低壓力制備的脂質(zhì)體更多滲漏。對于用含有10%蔗糖和1.9% NaCl的水化溶液制備并于20000KPa勻化的配制劑觀察到最低滲漏量。在2-8°C貯藏56d之后具有最高DOE的配制劑是用含有10%蔗糖和I. 9% NaCl的水化溶液制備并于5000KPa勻化的。結(jié)論反應(yīng)模型令人滿意地表達(dá)在所選參數(shù)與反應(yīng)之間的關(guān)系。結(jié)果展示內(nèi)部NaCl和 蔗糖濃度對在2-8°C貯藏期間自LiPlacis配制劑的滲漏量具有顯著影響。在貯藏期間對藥物保留具有最顯著影響的因素是蔗糖。增加NaCl也改善藥物保留。對于在脂質(zhì)體內(nèi)部具有高NaCl和蔗糖濃度的配制劑觀察到在56d之后的最高包囊度。DOE經(jīng)展示通過增加水化媒介中的NaCl濃度得以改善。
與在高壓制備的脂質(zhì)體相比，于低壓力制備的脂質(zhì)體的滲漏最為顯著。對于在較低壓カ制備的脂質(zhì)體初始DOE也較高。由于勻化壓カ對于顆粒尺寸具有主要影響，該結(jié)果指出藥物保留在某種程度上受顆粒尺寸影響。i在!)t減2個(gè)月之后具有最聞包囊度的配制劑是用在脂質(zhì)體內(nèi)部的I. 9% NaCl和10%蔗糖制備并在低壓カ勻化的。對于制備的任意配制劑，在貯藏期間為觀察到顆粒尺寸的顯著變化。實(shí)施例2脂質(zhì)體順鉬配制劑通過膜水化隨后擠出來制備。水化溶液用變化的滲壓劑濃度制備。在擠出之后，在不同媒介中透析脂質(zhì)體。制備的配制劑具有不同的滲透梯度(在內(nèi)部與外部之間的摩爾滲透壓濃度差異)，如表3所示。為了比較，其它化療藥物的脂質(zhì)體配制劑如表4所示而制備。全部配制劑置于2-8°C的冷藏器，在貯藏期間連續(xù)地取出樣品。
制備脂質(zhì)體配制劑將磷脂(DSPC/DSPG/DSPE-PEG2000，70 25 5mol%)溶于 9 I (v/v)氯仿 /甲醇。然后，將溶解的脂質(zhì)混合物的溶劑在氮?dú)饬飨略?0°C熱水浴中蒸發(fā)，直至經(jīng)觀察為干燥。樣品進(jìn)一歩在真空下干燥過夜。在65°C的溫度，將含有化療藥物的水化液體(根據(jù)表3和4變化鹽和蔗糖濃度)加入干燥的脂質(zhì)混合物用于制備多層囊泡(MLV)。將脂質(zhì)懸浮液保持在65°C至少30分鐘以便確保完全水化。在該時(shí)間段期間，每5分鐘將脂質(zhì)懸浮液渦旋。大單層囊泡(LUV)通過于65°C經(jīng)定義的孔徑尺寸(IOOnm)的膜擠出而制備。隨后，將LUV轉(zhuǎn)移至透析盒(MWC0 :IOkDa)以便除去未包埋的藥物。在不同的緩沖溶液中透析脂質(zhì)體配制劑，如表3和4所示。在制備之后立即將配制劑分入玻璃小瓶中。玻璃小瓶用蓋密封井置于冷藏器(2-80C )中。將置于冷藏器中這天視為初始日期。在貯藏期間連續(xù)地采樣，測定顆粒尺寸和藥物濃度(外部和總和)。結(jié)果用順鉬、奧沙利鉬、MTX、博來霉素或5FU制備脂質(zhì)體配制劑。在內(nèi)部與外部之間的滲透梯度低的情況下，含有小分子量藥物(< 350g/mol)比如順鉬和5FU的配制劑經(jīng)觀察是滲漏的。含有較高分子量(> 350g/mol)的藥物的脂質(zhì)體配制劑經(jīng)展示在2-8°C貯藏期間是基本上不滲漏的。増加順鉬配制劑滲透梯度的試驗(yàn)經(jīng)展示是最小化貯藏期間滲漏量的有效方式。在內(nèi)部與外部之間滲透梯度差異是> 282m0sM，觀察到貯藏期間的滲漏量保持在可接受的水平(參見表3和圖11)。在2_8°C貯藏期間，為觀察到顆粒尺寸的變化(圖12)。從而，配制劑的顆粒尺寸不受順鉬配制劑中較高滲透梯度的影響。
權(quán)利要求
1.一種組合物，包含 sPLA2可水解的脂質(zhì)體， 外部溶液， 和脂質(zhì)體中的內(nèi)部溶液， -其中滲壓劑濃度在內(nèi)部溶液中比在外部溶液中更高。
2.權(quán)利要求I的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)體包含包囊于所述脂質(zhì)體中的治療劑。
3.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述治療劑具有小于350的分子量。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述治療劑是順鉬。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述僅有的治療劑是順鉬。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述內(nèi)部溶液包含濃度O.8-1% w/w的NaCl 或 KCl。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述外部溶液包含濃度O.8-1% w/w的NaCl 或 KCl。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中內(nèi)部溶液與外部溶液之間的滲壓劑濃度差異(內(nèi)部滲壓劑濃度減去外部滲壓劑濃度)是至少91mM。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中內(nèi)部溶液與外部溶液之間的滲壓劑濃度差異(內(nèi)部滲壓劑濃度減去外部滲壓劑濃度)是至少275mM。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)體在2至8攝氏度貯藏2個(gè)月之后具有小于30%的滲漏量。
全文摘要
本發(fā)明提供組合物，其包含sPLA2可水解的脂質(zhì)體，外部溶液，和脂質(zhì)體中的內(nèi)部溶液，-其中滲壓劑濃度在內(nèi)部溶液中比在外部溶液中更高。該組合物改善sPLA2可水解的脂質(zhì)體的貯藏穩(wěn)定性，尤其是于2-8攝氏度儲(chǔ)存的情況下。脂質(zhì)體優(yōu)選包囊順鉑。本發(fā)明也提供制備本發(fā)明組合物的方法。
文檔編號A61K9/127GK102639114SQ201080047402
公開日2012年8月15日 申請日期2010年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月23日
發(fā)明者A·F·維克吉格, M·W·麥德森, S·A·彼得森 申請人:拜奧貝德斯特有限責(zé)任公司