專利名稱：用于治療lewy體病的alpha-突觸核蛋白表位之模擬表位的用途的制作方法
用于治療Iewy體病的alpha-突觸核蛋白表位之模擬表位
的用途本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病(synucleinopathy)的藥物。突觸核蛋白病是多種多祥的一組共享共同的病理學(xué)特征的神經(jīng)變性性病癥在神經(jīng)病理學(xué)檢查中，可以檢出特征性損傷，其在神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的選定群體中含有 alpha-突觸核蛋白(alpha-syn，a-syn)蛋白的異常聚集體。alpha-syn(最初鑒定為PARKl和PARK4)是ー種在新皮質(zhì)、海馬、齒狀回、嗅球、紋狀體、丘腦和小腦中廣泛表達(dá)的140個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。alpha-Syn也在造血細(xì)胞，包括B-、 T-、和NK細(xì)胞及單核細(xì)胞和血小板中高度表達(dá)。在這些細(xì)胞中的確切作用是未知的，但是其已經(jīng)牽涉巨核細(xì)胞(血小板前體)的分化。最常見的突觸核蛋白病包括但不限于Lewy體病(Lewy Body Disorder，LBD)， 如帕金森氏病(Parkinson，s Disease, PD)、帕金森氏病伴癡呆(Parkinson，s Disease with Dementia, PDD)禾ロ癡呆伴 Lewy 體(Dementia with Lewy Bodies, DLB)，及多系統(tǒng)妻 if (Multiple System Atrophy, MSA) 申(Neurodegeneration with Brain Iron Accumulation) I型(NBIA I型)。這些疾病目前的治療選項(xiàng)包括癥狀藥物，諸如L-多巴、抗膽堿能藥物及單胺氧化酶抑制劑。然而，目前存在的所有治療機(jī)會(huì)僅導(dǎo)致癥狀性緩解，而沒有在患者中誘導(dǎo)長效的疾病減輕效果。Lewy體病(LBD)是以震顫、強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)徐緩及以腦中喪失多巴胺能神經(jīng)元為特征的進(jìn)行性神經(jīng)變性性病癥。在DLB和PDD的病例中，體征還包括認(rèn)知病損(cognitive impairment)。在西方國家年齡60歲之上的人群的多至2%形成PD/LBD的典型體征。目前，僅可用癥狀治療。不幸地，這些療法僅提供早期癥狀的暫時(shí)緩解，而不停止疾病進(jìn)展。 PD/LBD的發(fā)病機(jī)制仍不完全了解，但是似乎疾病的形成中牽涉遺傳易感性和環(huán)境因素。盡管所有遺傳進(jìn)展，PD/LBD仍主要是沒有已知原因的散發(fā)性病癥(又稱作特發(fā)性PD/LBD)?；加写思膊〉幕颊咴谀X的皮質(zhì)和皮質(zhì)下區(qū)中形成稱作Lewy體(LB)的特征性泛素化胞內(nèi)內(nèi)含物。特別地，具有高含量多巴胺能神經(jīng)元或神經(jīng)元投射的區(qū)域顯示這種典型的病理學(xué)特征。最近，幾項(xiàng)研究可以顯示突觸蛋白alpha-syn在LBD發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮中心作用。在LBD中，alpha-syn在遍及受影響的腦區(qū)的LB中積累。另タト，可以表明alpha-syn基因中的單一點(diǎn)突變及雙倍或多倍増殖(duplication or multiplication)與罕見的家族型帕金森氏綜合征(parkinsonism)有關(guān)。重要地，基于來自轉(zhuǎn)基因(tg)小鼠中及黑腹果蠅 (Drosophila melanogaster)中的過表達(dá)研究的結(jié)果，強(qiáng)調(diào)其在PD/LBD發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用，因?yàn)檫@些動(dòng)物模型模擬PD的數(shù)種特征。另ー種非常重要的突觸核蛋白病是多系統(tǒng)萎縮(MSA)。MSA是ー種以L-多巴抗性帕金森氏綜合征、小腦性共濟(jì)失調(diào)(cerebellar ataxia)、和家族性自主神經(jīng)異常 (dysautonomia)的癥狀為特征的散發(fā)性神經(jīng)變性性病癥?；颊咴馐苡绊懜鱾€(gè)腦區(qū)，包括紋狀體、黑質(zhì)、小腦、腦橋，及下橄欖體和脊髄的多系統(tǒng)神經(jīng)元損失。MSA以遍及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的alpha-syn-陽性神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物(GCI)和罕見的神經(jīng)元內(nèi)含物為特征。這些內(nèi)含物與紋狀體黑質(zhì)變性(striatonigral degeneration)、橄欖體腦橋小腦萎縮、及髓質(zhì)和脊髄中牽涉自主核有關(guān)。GCI對于MSA發(fā)病機(jī)制的重要性得到普遍公認(rèn)，并且通過分析 alpha-syn過表達(dá)在少突神經(jīng)膠質(zhì)中的效果的對轉(zhuǎn)基因小鼠模型的新近分析得到強(qiáng)調(diào)。在過表達(dá)人alpha-syn的tg小鼠中，觀察到GCI樣聚集體和MSA的生化標(biāo)志物兩者。雖然alpha-syn積累導(dǎo)致突觸核蛋白病中的典型神經(jīng)變性特征的精確機(jī)制沒有得到完全了解，但是新近的研究暗示alpha-syn的異常形成和積累牽涉突觸核蛋白病根本的變性過程。最近，已經(jīng)在LB中鑒定出不同形式的alpha-syn。除了蛋白質(zhì)的全長形式外， 已經(jīng)鑒定出不同形式的經(jīng)修飾的alpha-syn，包括磷酸化的、硝化的、和單-、ニ -、或三-泛素化的alpha-syn。另外，已經(jīng)在來自轉(zhuǎn)基因小鼠和PD病例兩者的腦組織中檢出蛋白質(zhì)的 C 端截短形式，如 alpha-syn 1-119, alpha-syn 1-122 和 alpha-syn 1-123。目前認(rèn)為，LB 和Lewy(Iewy)神經(jīng)突中檢出的多至15%的alpha-syn是截短的。使用截短的alpha-syn 的先前的體外研究可以證明，缺乏C端20-30個(gè)氨基酸的alpha-syn顯示聚集及形成Lewy 神經(jīng)突和LB中找到的細(xì)絲的趨勢升高。如此，這些截短的型式可以以與阿耳茨海默氏病 (Alzheimer' s disease, AD)中的淀粉狀蛋白beta (Α β )的截短和經(jīng)修飾形式相似的方式起作用。認(rèn)為Αβ的這些截短和經(jīng)修飾形式充當(dāng)斑沉積的種子分子(seed molecule)，并且在體內(nèi)及在體外顯示了較高的聚集傾向及高神經(jīng)毒性和突觸毒性。如此，然后，認(rèn)為積累全長alpha-syn及截短的和/或經(jīng)修飾形式的alpha-syn (其顯示潛在的播種效應(yīng))，導(dǎo)致寡聚物形成?；谛陆难芯?，認(rèn)為例如在突觸末端和軸突中的此類寡聚體形成對于PD/LBD形成發(fā)揮重要的作用，并且如此可以通過存在截短形式的 alpha-syn來增強(qiáng)。因此，alpha-syn沉積和寡聚化的降低在治療突觸核蛋白病，尤其是特發(fā)性LBD/PD和MSA中應(yīng)當(dāng)是有益的，并且在源自目前的治療策略，如L-多巴應(yīng)用的僅僅癥狀減輕外，可以呈現(xiàn)用于治療這些神經(jīng)變性性疾病的第一種策略。在 Iwatsubo T. (Neuropathology 27(5) (2007) :474-478)中，檢查了 alpha-突觸核蛋白沉積物及其磷酸化與alpha-突觸核蛋白病發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)。此出版物的作者發(fā)現(xiàn)，突觸核蛋白病損傷中沉積的alpha-突觸核蛋白的絲氨酸1 是廣泛磷酸化的。US 2007/213253涉及突變體人alpha-突觸核蛋白及自其衍生的肽，其可以用于抑制野生型人 alpha-突觸核蛋白的聚集。在WO 2004/041067中，披露了用于預(yù)防或治療與alpha-突觸核蛋白聚集體有關(guān)的疾病的手段和方法，其包括使用alpha-突觸核蛋白片段。在US 2003/166558中，描述了可用于誘導(dǎo)對蛋白質(zhì)沉積物的免疫應(yīng)答的肽。US 2005/198694涉及包含至少100個(gè)氨基酸，并具有1至23個(gè)氨基酸的C端刪除的alpha-突觸核蛋白片段。Liang 等(J. Neurochem. 99 Q006) =470-482)研究了在大鼠中調(diào)節(jié) alpha-突觸核蛋白。他們觀察到在好酒大鼠(alcohol preferring rat)中，與非好酒大鼠(alcohol-non preferring rat)相比，alpha-突觸核蛋白的表達(dá)速率增加。在Hamilton BA(Genomics 83(2004) :739-742)中，檢查了 alpha-突觸核蛋白 53Thr和53Ala在靈長類中的分布。在US 2005/0037013中，披露了免疫原性alpha-突觸核蛋白片段，其能夠誘導(dǎo)針對alpha-突觸核蛋白的殘基70-140內(nèi)的特定表位的免疫應(yīng)答。WO 2006/045037涉及C端截短的alpha-突觸核蛋白分子，其可以用于篩選具有可用于治療Lewy體病的藥理學(xué)活性的藥劑。雖然利用神經(jīng)營養(yǎng)因子并嫁接多巴胺能細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)療法已經(jīng)產(chǎn)生有希望的結(jié)果，
5但是需要為了降低alpha-syn的神經(jīng)元積累而設(shè)計(jì)的備選方法。積累了可以通過免疫療法靶向alpha-syn聚集體的令人信服的證據(jù)。實(shí)際上，最近已經(jīng)顯示了用于治療突觸核蛋白病的潛力。用人alpha-syn蛋白接種過表達(dá)人alpha-syn的Tg小鼠。在疫苗接種后生成高相對親和力抗體的小鼠中，神經(jīng)元細(xì)胞體和突觸中的聚集alpha-syn的積累降低， 這與降低的神經(jīng)變性有關(guān)。此外，由經(jīng)免疫的動(dòng)物生成的抗體也檢出與神經(jīng)元膜結(jié)合的 alpha-syn的異常聚集形式，并且可能經(jīng)由溶酶體途徑促進(jìn)對這些聚集體的降解。用外源應(yīng)用的alpha-syn特異性抗體使用被動(dòng)免疫療法(passive immunotherapy)觀察到類似的效果。這些結(jié)果提示了疫苗接種在降低alpha-syn聚集體的神經(jīng)元積累中是有效的，而且此方法的進(jìn)ー步開發(fā)可以引發(fā)LBD和突觸核蛋白病治療中的有益效果。本發(fā)明的目的是提供基于疫苗的用于預(yù)防和治療突觸核蛋白病的藥物。本發(fā)明涉及提供在預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病中使用的至少ー種包含以下氨基酸序列的肽或多肽(X1) J2X3X4X5GX6P (X7) m(式 I)，其中X1是任何氨基酸殘基，X2是選自下組的氨基酸殘基賴氨酸(K)、精氨酸(R)、丙氨酸(A)和組氨酸(H)，も是選自下組的氨基酸殘基天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、絲氨酸( 、甘氨酸(G) 和丙氨酸(A)，優(yōu)選地天冬酰胺(N)、絲氨酸(S)、甘氨酸(G)和丙氨酸(A)，X4是選自下組的氨基酸殘基谷氨酸Φ)、天冬氨酸(D)和丙氨酸(A)，X5是選自下組的氨基酸殘基谷氨酸Φ)和天冬氨酸(D)，X6是選自下組的氨基酸殘基丙氨酸㈧和酪氨酸⑴，X7是任何氨基酸殘基，η和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，且其中依照式I的氨基酸序列與具有氨基酸序列KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白的7聚體多肽片段不相同，或者不包含所述7聚體多肽片段，所述至少ー種肽或多肽具有對抗體的結(jié)合性能，所述抗體對包含氨基酸序列 KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白表位是特異性的。依照本發(fā)明的這些肽或多肽可以在適合于預(yù)期用于預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病的用途的組合物，特別地在藥物組合物中提供，優(yōu)選地與藥學(xué)可接受載體組合?？梢砸詫?shí)現(xiàn)預(yù)防和/或治療效果的有效量對有此需要的患者施用此類藥物組合物。依照本發(fā)明的肽和多肽能夠誘導(dǎo)針對(結(jié)合)alpha-突觸核蛋白，特別地包含氨基酸序列KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白片段的抗體及其片段的體內(nèi)形成。然而，針對(結(jié)合)所述肽和多肽的抗體沒有或基本上沒有顯示對beta-突觸核蛋白(beta-syn，b-syn) 的免疫反應(yīng)性。因此，與初始的alpha-突觸核蛋白或其片段不一祥，依照本發(fā)明的肽和多肽提供針對疾病相關(guān)媒介(agent)的特異性，并且避免與疾病無關(guān)的突觸核蛋白的交叉反應(yīng)性。這強(qiáng)烈地提示了關(guān)于功效和安全性的顯著優(yōu)越性，特別是后者，這是由于已經(jīng)對 beta-突觸核蛋白描述的神經(jīng)保護(hù)特征(Hashimoto Μ.等，J Biol Chem. 2004年5月28日； 279(22) :23622-9. Hashimoto M，Neuron. 2001 年 10 月 25 日；32 (2) :213-23)。通過施用本發(fā)明的化合物誘導(dǎo)的alpha-突觸核蛋白特異性抗體不僅能結(jié)合單體形式的alpha-突觸核蛋白，而且結(jié)合多聚體形式。這容許減少要治療的個(gè)體的身體中的 alpha-突觸核蛋白寡聚體的量。alpha-突觸核蛋白的減少在治療突觸核蛋白病中是特別有益的。認(rèn)為氨基酸序列(X1) J2X3X4X5GX6P (X7) m是包含氨基酸序列KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白表位的模擬表位。依照本發(fā)明，術(shù)語“模擬表位”指具有與其模擬的表位具有等同拓?fù)鋵W(xué)的構(gòu)象的分子。模擬表位結(jié)合免疫特異性結(jié)合期望抗原的抗體的同一抗原結(jié)合區(qū)。模擬表位會(huì)引發(fā)與其模擬的抗原反應(yīng)性的宿主中的免疫學(xué)應(yīng)答。模擬表位還可以在牽涉表位和結(jié)合所述表位的抗體的體外抑制測定法(例如，ELISA抑制測定法)中充當(dāng)其模擬的表位的競爭物。然而，本發(fā)明的模擬表位可以不必在體外抑制測定法中阻止或競爭其模擬的表位的結(jié)合，盡管它能夠在對哺乳動(dòng)物施用時(shí)誘導(dǎo)特定的免疫應(yīng)答。如本文中所使用的，術(shù)語“表位”指抗原中被特定的抗體分子識別的免疫原性區(qū)域。一般地，抗原會(huì)擁有ー個(gè)或多個(gè)表位，每個(gè)表位能夠結(jié)合識別特定表位的抗體。本發(fā)明的模擬表位可以通過本領(lǐng)域中公知的化學(xué)合成法以分離的肽或者作為另一種肽或多肽的一部分合成生成?；蛘撸梢栽谏呻哪M表位的微生物中生成肽模擬表位，然后，將其分離，并且若想要的話，將其進(jìn)ー步純化?？梢栽谖⑸铮T如細(xì)菌、酵母或真菌中，在真核細(xì)胞諸如哺乳動(dòng)物或昆蟲細(xì)胞中，或在重組病毒載體諸如腺病毒、痘病毒、皰疹病毒、塞姆利基(Simliki)森林病毒、桿狀病毒、噬菌體、辛德比斯病毒(sindbis virus) 或仙臺病毒中生成肽模擬表位。適合于生成肽模擬表位的細(xì)菌包括大腸桿菌(E.coli)、 枯草芽孢桿菌(B. subtilis)或任何其它能夠表達(dá)諸如肽模擬表位的肽的細(xì)菌。適合于表達(dá)肽模擬表位的酵母類型包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pombe)、假絲酵母屬(Candida)、巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)或任何其它能夠表達(dá)肽的酵母。相應(yīng)的方法是本領(lǐng)域中公知的。用于分離和純化重組生成的肽的方法也是本領(lǐng)域中公知的，并且包括例如凝膠過濾、親和層析、離子交換層析等。為了便于分離肽模擬表位，可以生成融合多肽，其中將肽模擬表位與通過親和層析實(shí)現(xiàn)分離的異源多肽在翻譯上融合(共價(jià)連接)。典型的異源多肽是His-Tag(例如 His6 ；6個(gè)組氨酸殘基),GST-標(biāo)簽(谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶)等。融合多肽不僅便于模擬表位的純化，而且還阻止模擬表位多肽在純化期間被降解。若期望在純化后除去異源多肽，則融合多肽可以包含肽模擬表位與異源多肽間接合處的切割位點(diǎn)。切割位點(diǎn)由用對該位點(diǎn)的氨基酸序列特異性的酶(例如蛋白酶)切割的氨基酸序列組成。依照本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，X2是選自下組的氨基酸殘基賴氨酸(K)和精氨酸(R)和/或X6是丙氨酸(A)。依照本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，肽或多肽包含選自下組的氨基酸序列(X1)nKNDEGAP (X7)m, (X1)nANEEGAP (X7)m, (X1)nKAEEGAP (X7)m, (X1)nKNAEGAP (X7)m, (X1) nRNEEGAP (X7) m，(X1) nHNEEGAP (X7) m，(X1) nKNEDGAP (X7) m，(X1) nKQEEGAP (X7) m，(X1) nKSEEGAP (X7) m，(X1)nKNDDGAP (X7)m, (X1)nRNDEGAP (X7)m, (X1)nRNEDGAP (X7)m, (X1)nRQEEGAP(X7)m, (X1) nRSEEGAP (X7) m, (X1) nANDEGAP (X7) m, (X1) nANEDGAP (X7) m, (X1) nHSEEGAP (X7) m, (X1) nASEEGAP (X7) m，(X1)nHNEDGAP (X7)m, (X1)nHNDEGAP (X7)m, (X1)nRNAEGAP (X7)m, (X1)nHNAEGAP(X7)m, (X1) nKSAEGAP (X7) m，(X1) nKSDEGAP (X7) m，(X1) nKSEDGAP (X7) m，(X1) nRQDEGAP (X7) m，(X1) nRQEDGAP (X7)m，(X1)nHSAEGAP (X7)m, (X1)nRSAEGAP (X7)m, (X1)nRSDEGAP (X7)m, (X1)nRSEDGAP(X7)m, (X1) nHSDEGAP (X7)m, (X1)nHSEDGAP (X7)m, (X1)nRQDDGAP (X7)m,優(yōu)選地(X1)nKNDEGAP (X2)m，(X1) nRNEEGAP (X2) m, (X1) nRNDEGAP (X2) m, (X1) nKNAEGAP (X2) m, (X1) nKSDEGAP (X2) m, (X1) nRNAEGAP (X2) m 或(X1)nRSEEGAP(X2)m0證明了不僅依照式I的肽和多肽可以在治療和預(yù)防突觸核蛋白病中使用，而且其它肽和多肽亦然。因此，本發(fā)明的另一方面涉及在預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病中使用，特別地用于生成供其使用的藥物的至少ー種肽或多肽，其包含選自下組的氨基酸序列(X1)nKNEAGAP (X7)m, (X1)nKNEEAAP (X7)m, (X1)nKNEEGAA (X7)m, (X1)nKPSFKNE (X7)m, (X1) nQPSFAME (X7) m，(X1) nSPSFKQE (X7) m，(X1) JPSffKGE (X7) m，(X1) nDPSFALE (X7) m，(X1) nLPSFRLE (X7) m，(X1)nEPNSRMD(X7)m, (X1)nQPS SKLD (X7)m, (X1)nHIHQSKFFDAPP(X7)m, (X1)nQASFAME (X7) m，(X1)nTASffKGE (X7)m, (X1)nQASSKLD (X7)m，(X1)nQPAFAME (X7)m, (X1)nTPAffKGE(X7)m, (X1) nQPASKLD (X7)m, (X1)nQPSFAMA(X7)m, (X1)nTPSffKGA(X7)m, (X1)nQPSSKLA(X7)m, (X1)nAPSffKGE (X7) m，(X1)nTPSAKGE(X7)m, (X1)nTPSffAGE(X7)m, (X1)nTPSffKAE(X7)m, (X1)nTPSffKGE(X7)m,特另Ij 地選自下組的氨基酸序列(X1)nQASFAME (X7)m, (X1)nTASffKGE(X7)m, (X1)nQAS SKLD(X7)m, (X1) JPAffKGE (X7) m，(X1) JPSffAGE (X7) m，(X1) JPSffKGE (X7) m其中X1是任何氨基酸殘基，X7是任何氨基酸殘基，η和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，所述至少ー種肽或多肽具有對抗體的結(jié)合性能，所述抗體對包含氨基酸序列 KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白表位是特異性的。本發(fā)明的肽和多肽也可以其N-和/或C-端處或附近修飾，使得在所述位置，半胱氨酸殘基被其結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用末端定位的(位于肽的N-和C-端) 半胱氨酸殘基來交聯(lián)所述分子與載體分子諸如KLH或者經(jīng)由ニ硫鍵環(huán)化所述肽。因此，優(yōu)選地，η和/或m是1，而優(yōu)選地，ん和/或X7是半胱氨酸(C)。本發(fā)明的模擬表位也可以在各種測定法和試劑盒，特別地在免疫學(xué)測定法和試劑盒中使用。因此，特別優(yōu)選的是，本發(fā)明的肽和多肽可以是另ー種肽或多肽，特別地在免疫學(xué)測定法中用作報(bào)告物的酶的一部分。此類報(bào)告酶包括例如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。優(yōu)選地，依照本發(fā)明的alpha-突觸核蛋白模擬表位是抗原性多肽，該抗原性多肽在其氨基酸序列上與alpha-突觸核蛋白或alpha-突觸核蛋白片段的氨基酸序列不同。在此方面，發(fā)明性的模擬表位不僅可以包含ー個(gè)或多個(gè)天然存在的氨基酸殘基的氨基酸替代，而且包含ー個(gè)或多個(gè)非天然的氨基酸(即，不來自20種“經(jīng)典的”氨基酸)的氨基酸替代或者它們可以是此類非天然的氨基酸完全合成的。此外，誘導(dǎo)抗alpha-突觸核蛋白抗體的發(fā)明性抗原可以是D-或L-氨基酸或DL-氨基酸組合裝配的，并且任選地，它們可以已經(jīng)通過進(jìn)ー步修飾、環(huán)閉合或衍生物來改變?？梢宰陨唐坊奈膸焯峁┖线m的抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原。優(yōu)選地，這些肽是至少7個(gè)氨基酸，且優(yōu)選的長度可以多至16，優(yōu)選地多至14或20個(gè)氨基酸殘基(例如7或8至20，7或8至16等)。如此，本發(fā)明的肽或多肽包含7至30，優(yōu)選地7至20，更優(yōu)選地7至16，最優(yōu)選地8個(gè)氨基酸殘基。然而，依照本發(fā)明，更長的肽也可以非常好地作為抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原采用。此外，本發(fā)明的模擬表位也可以是多肽的一部分，并且因此在其N和/或C端包含至少ー個(gè)別的氨基
酸殘基。當(dāng)然，為了制備alpha-突觸核蛋白模擬表位(即抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原)，噬菌體文庫、肽文庫也是合適的，例如依靠組合化學(xué)生成或者依靠用于變化最大的結(jié)構(gòu)的高通量篩選技術(shù)來獲得(Display :A Laboratory Manual by Carlos F. Barbas (編) ^ ；Willats WG Phage display !practicalities and prospects. Plant Mol. Biol. 2002 年 12 月；50 (6) :837-54)。此外，依照本發(fā)明，也可以采用基于核酸(“適體”)的抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原，并且這些也可以用變化最大的(寡核苷酸)文庫(例如，具有2-180個(gè)核酸殘基) 找到(例如 Burgstaller 等，Curr. Opin. Drug Discov. Dev. 5 (5) (2002)，690-700 ；Famulok 等，Acc. Chem. Res. 33 (2000)，591-599 ；Mayer 等，PNAS 98 (2001)，4961-4965,等等)。在基于核酸的抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原中，核酸主鏈可以例如通過天然磷酸ニ酯化合物，或者也通過磷硫酰化合物(phosphorotioate)或組合或化學(xué)變化(例如以PNA)提供，其中依照本發(fā)明，主要可以采用U、Τ、A、C、G、H和mC作為堿基。優(yōu)選地，可以依照本發(fā)明使用的核苷酸的2’ -殘基是H、0H、F、Cl、NH2, 0-甲基、0-乙基、0-丙基或0- 丁基，其中核酸也可以差別修飾，即例如用保護(hù)基團(tuán)，因?yàn)樗鼈兺ǔＴ诠押塑账岷铣芍胁捎?。如此，基于適體的抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原也是本發(fā)明范圍內(nèi)的優(yōu)選的抗alpha-突觸核蛋白抗體誘導(dǎo)抗原。依照本發(fā)明，術(shù)語“突觸核蛋白病”包括以病理性突觸核蛋白聚集體為特征的所有神經(jīng)變性性病癥。數(shù)種神經(jīng)變性性病癥共同分組為突觸核蛋白病，包括帕金森氏病(PD)、 Lewy體病(LBD)、彌漫性Lewy體病(DLBD)、癡呆伴Lewy體(DLB)、帕金森氏綜合征伴癡呆 (PDD)、多系統(tǒng)萎縮(MSA)和神經(jīng)變性伴腦鐵積累I型(NBIAI型)。依照本發(fā)明的肽和多肽不僅可以用于治療突觸核蛋白病，而且還可用于預(yù)防有風(fēng)險(xiǎn)形成突觸核蛋白病(例如，有形成突觸核蛋白病的素因，例如遺傳素因)的個(gè)體中的所述疾病。本發(fā)明中公開的氨基酸殘基的縮寫遵循IUPAC推薦
權(quán)利要求
1.在預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病中使用的包含至少一種肽或多肽的組合物，所述肽或多肽包含氨基酸序列(X1) AW5GX6P (X7)m(式 I)，其中X1是任何氨基酸殘基，X2是選自下組的氨基酸殘基賴氨酸(K)、精氨酸(I )、丙氨酸(A)和組氨酸(H)， )(3是選自下組的氨基酸殘基天冬酰胺(N)、谷氨酰胺⑴)、絲氨酸(S)、甘氨酸(G)和丙氨酸(A)，優(yōu)選地天冬酰胺(N)、絲氨酸(S)、甘氨酸(G)和丙氨酸(A)， &是選自下組的氨基酸殘基谷氨酸(E)、天冬氨酸(D)和丙氨酸(A)， &是選自下組的氨基酸殘基谷氨酸(E)和天冬氨酸(D)， &是選自下組的氨基酸殘基丙氨酸(A)和酪氨酸(Y)， X7是任何氨基酸殘基， η和m獨(dú)立的是0或大于0的整數(shù)，且其中依照式I的氨基酸序列與具有氨基酸序列KNEEGAP的alpha-突觸核蛋白的7 聚體多肽片段不相同，或者不包含所述7聚體多肽片段，所述至少一種肽或多肽具有對抗體的結(jié)合能力，所述抗體對包含氨基酸序列KNEEGAP 的alpha-突觸核蛋白的表位是特異性的。
2.依照權(quán)利要求1的組合物，其中\(zhòng)是選自下組的氨基酸殘基賴氨酸(K)和精氨酸 (R)和/或X6是丙氨酸(A)。
3.依照權(quán)利要求1或2的組合物，其特征在于所述肽或多肽包含選自下組的氨基酸序列(X1) nKNDEGAP (X7) m、(X1) nANEEGAP (X7) m、(X1) nKAEEGAP (X7) m、(X1) nKNAEGAP (X7) m、(X1) nRNEEGAP (X7) m、(X1) nHNEEGAP (X7) m、(X1) nKNEDGAP (X7) m、(X1) nKQEEGAP (X7) m、(X1) nKSEEGAP (X7) m、(X1)nKNDDGAP (X7)m, (X1)nRNDEGAP (X7)m, (X1)nRNEDGAP (X7)m, (X1)nRQEEGAP(X7)m, (X1) nRSEEGAP (X7) m、(X1) nANDEGAP (X7) m、(X1) nANEDGAP (X7) m、(X1) nHSEEGAP (X7) m、(X1) nASEEGAP (X7) m、(X1)nHNEDGAP (X7)m, (X1)nHNDEGAP (X7)m, (X1)nRNAEGAP (X7)m, (X1)nHNAEGAP(X7)m, (X1) nKSAEGAP (X7) m、(X1) nKSDEGAP (X7) m、(X1) nKSEDGAP (X7) m、(X1) nRQDEGAP (X7) m、(X1) nRQEDGAP (X7) m、(X1)nHSAEGAP (X7)m, (X1)nRSAEGAP (X7)m, (X1)nRSDEGAP (X7)m, (X1)nRSEDGAP(X7)m, (X1) nHSDEGAP(X7)m、(X1)nHSEDGAP (X7)m, (X1)nRQDDGAP (X7)m,優(yōu)選地(X1)nKNDEGAP (X2)m, (X1) nRNEEGAP (X2) m、(X1) nRNDEGAP (X2) m、(X1) nKNAEGAP (X2) m、(X1) nKSDEGAP (X2) m、(X1) nRNAEGAP (X2) 111或(X1)nRSEEGAP(X2)m0
4.在預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病中使用的包含至少一種肽或多肽的組合物，所述肽或多肽包含選自下組的氨基酸序列(X1) nQASFAME (X7) m、(X1) JASffKGE (X7) m、(X1) nQAS SKLD (X7) m、(X1) JPAffKGE (X7) m、(X1) JPSffAGE (X7) m、(X1) JPSffKGE (X7) m，其中X1是任何氨基酸殘基， X7是任何氨基酸殘基， η和m獨(dú)立地是0或大于0的整數(shù)，所述至少一種肽或多肽具有對抗體的結(jié)合能力，所述抗體對包含氨基酸序列KNEEGAP 的alpha-突觸核蛋白的表位是特異性的。
5.依照權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于η和/或m是1，而X1和/或 X7是半胱氨酸(C)。
6.依照權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述肽或多肽包含7至30，優(yōu)選地7至20，更優(yōu)選地7至16，最優(yōu)選地8個(gè)氨基酸殘基。
7.依照權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述突觸核蛋白病選自下組 Lewy 體病(Lewy Body Disorder，LBD)，優(yōu)選地帕金森氏病(Parkinson's Disease，PD)、帕金森氏病伴癡呆(Parkison's Disease with Dementia,PDD)禾ロ癡呆伴 Lewy 體(Dementia with Lewy Bodies，DLB)，及多系統(tǒng)萎縮(Multiple System Atrophy，MSA)或神經(jīng)變性伴腦鐵禾只累(Neurodegeneration with Brain Iron Accumulation) I 型(NBIA I 型)。
8.依照權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述至少ー種肽或多肽與藥學(xué)可接受載體，優(yōu)選地KLH(匙孔i威血藍(lán)蛋白)偶聯(lián)。
9.依照權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述至少ー種肽或多肽配制用于靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)或肌肉內(nèi)施用。
10.依照權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述至少ー種肽或多肽與佐劑，優(yōu)選地氫氧化鋁一起配制。
11.依照權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的組合物，其特征在于所述至少ー種肽或多肽以 0. Ing至10mg，優(yōu)選地IOng至lmg，特別地IOOng至100 μ g的量包含在所述藥物中。
12.具有選自下組的氨基酸序列的肽(X1)nKNDEGAP(X7)m、(X1)nANEEGAP(X7)m、(X1) nKAEEGAP (X7) m、(X1) nKNAEGAP (X7) m、(X1) nRNEEGAP (X7) m、(X1) nHNEEGAP (X7) m、(X1) nKNEDGAP (X7) m、(X1)nKQEEGAP (X7)m, (X1)nKSEEGAP (X7)m, (X1)nKNDDGAP (X7)m, (X1)nQASFAME(X7)m, (X1) JASffKGE (X7) m、(X1) nQASSKLD (X7) m、(X1) JPAffKGE (X7) m、(X1) JPSffAGE (X7) m、(X1) JPSffKGE (X7) m、(X1)nRNDEGAP (X7)m, (X1)nRNEDGAP (X7)m, (X1)nRQEEGAP (X7)m, (X1)nRSEEGAP(X7)m, (X1) nANDEGAP (X7) m、(X1) nANEDGAP (X7) m、(X1) nHSEEGAP (X7) m、(X1) nASEEGAP (X7) m、(X1) nHNEDGAP (X7) m、(X1)nHNDEGAP (X7)m, (X1)nRNAEGAP (X7)m, (X1)nHNAEGAP (X7)m, (X1)nKSAEGAP(X7)m, (X1) nKSDEGAP (X7) m、(X1) nKSEDGAP (X7) m、(X1) nRQDEGAP (X7) m、(X1) nRQEDGAP (X7) m、(X1) nHSAEGAP (X7) m、(X1)nRSAEGAP (X7)m, (X1)nRSDEGAP (X7)m, (X1)nRSEDGAP (X7)m, (X1)nHSDEGAP(X7)m, (X1) nHSEDGAP (X7) m和(X1) nRQDDGAP (X7) m，其中X1和X7是半胱氨酸，而η和m獨(dú)立的是0或1。
13.依照權(quán)利要求12的肽，其特征在于所述肽與藥學(xué)可接受載體，優(yōu)選地KLH(匙孔蟲威血藍(lán)蛋白)偶聯(lián)。
14.依照權(quán)利要求12或13的肽，其用于預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病。
15.藥物配制劑，優(yōu)選地疫苗，其包含至少ー種依照權(quán)利要求12至14中任ー項(xiàng)的肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于生成供預(yù)防和/或治療突觸核蛋白病用的藥物的肽或多肽。
文檔編號A61P25/28GK102596224SQ201080047744
公開日2012年7月18日 申請日期2010年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月21日
發(fā)明者C.拉辛格, H.韋寧格, M.曼德勒, R.桑蒂克 申請人:阿費(fèi)里斯股份公司