專利名稱：抗簇蛋白抗體和抗原結(jié)合片段及其減小腫瘤體積的用途的制作方法
抗簇蛋白抗體和抗原結(jié)合片段及其減小腫瘤體積的用途
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗簇蛋白抗體和其減小腫瘤體積的用途。本發(fā)明更具體地涉及與簇蛋白結(jié)合的人源化抗體、雜合抗體和抗原結(jié)合片段及其減小腫瘤體積以抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的用途。發(fā)明背景癌是最常見的人類惡性腫瘤，其起源于上皮細(xì)胞。上皮癌的進(jìn)程起始于細(xì)胞間接觸的破壞以及遷移(間充質(zhì)樣)表型的獲得。該現(xiàn)象稱作上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，其被認(rèn)為是晚期腫瘤進(jìn)程和轉(zhuǎn)移中的關(guān)鍵事件。
分泌蛋白TGF-β抑制腫瘤生長最初較大程度地由于其對上皮來源的腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用所導(dǎo)致，然后在較晚期促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)程和轉(zhuǎn)移。TGF-β可借以促進(jìn)腫瘤進(jìn)程的一種機(jī)制是通過EMT的誘導(dǎo)。由于TGF-β在致癌作用中的雙重作用，TGF-β的直接抑制劑可能是有風(fēng)險的，因為雖然其可有利于晚期腫瘤，但其也可能加速瘤前病變。較好的治療物可以是ー種抑制TGF-β的原癌促EMT作用，同時使TGF-β的腫瘤抑制基因生長抑制作用不受影響。為開發(fā)這樣的抑制劑，需要鑒定TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的分叉點，使得途徑的一個分支中的介體參與EMT應(yīng)答，而不參與對TGF- β的生長抑制應(yīng)答。抑制僅位于TGF- β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的促EMT分支中的治療劑將減少轉(zhuǎn)移并且對瘤前病變的加速影響甚小或無影響。整體上還未鑒定出促進(jìn)或介導(dǎo)TGF-β的促EMT作用并且也不參與TGF-β的生長抑制作用的TGF-β信號途徑特異性組分。相比之下，已鑒定的內(nèi)源性蛋白(YYl核因子)能夠干擾(與促進(jìn)相反)TGF-β的促腫瘤生長的EMT作用，并保留完整的腫瘤抑制作用(生長抑制)(Kurisaki等，2004)。革巴向TGF-β配體、受體和Smad信號傳導(dǎo)蛋白的抑制齊[J是已知的。尤其是，可溶性受體外功能區(qū)、抗體和其它結(jié)合蛋白能夠通過與TGF-β配體相互作用并阻止其遠(yuǎn)離細(xì)胞表面受體而作為拮抗劑。抑制I型TGF- β受體的激酶活性的小分子是可獲得的，且Smad信號傳導(dǎo)蛋白的內(nèi)源性抑制劑也是已知的。因為所有這些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑組分參與TGF-β的前致癌作用和抗致癌作用，靶向它們的這些抑制劑可有益于晚期腫瘤，然而，它們也可加速瘤前病變。2006年9月13日提交的國際專利申請第PCT/CA2006/001505號和2007年3月22日公布的W02007/030930描述了抗簇蛋白抗體和抗原結(jié)合片段，其針對簇蛋白的特異性表位并且能夠抑制癌細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。該專利申請更具體地顯示了抗簇蛋白抗體在前列腺癌和乳腺癌中抑制EMT的能力。發(fā)明概述本發(fā)明在其一方面涉及ー種抗體，所述抗體能夠與簇蛋白特異性結(jié)合且其包括人源化輕鏈可變區(qū)和/或人源化重鏈可變區(qū)。更具體地，本發(fā)明提供了能夠與簇蛋白特異性結(jié)合的非人親本抗體的人源化抗體以及雜合抗體和其抗原結(jié)合片段。
本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)可包含天然人抗體的非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基。本發(fā)明還涉及抗原結(jié)合片段，所述抗原結(jié)合片段包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)包含非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基。本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段可用于抑制由簇蛋白誘導(dǎo)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。在另一方面，本發(fā)明涉及用于減小腫瘤體積的抗簇蛋白抗體(多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、分離的人抗體、雜合抗體或其片段)和用于進(jìn)行如此減小的方法。本發(fā)明還包括的是編碼本文所描述的人源化抗體、雜合抗體或抗原結(jié)合片段或本
文所描述的分離的抗體的輕鏈可變區(qū)和/或重鏈可變區(qū)的分離的核酸。本文還包括的是載體或構(gòu)建體,所述載體或構(gòu)建體包括本文所描述的核酸。根據(jù)本發(fā)明，載體可為例如但不限于哺乳動物表達(dá)載體、細(xì)菌表達(dá)載體等。本發(fā)明還涉及包含或表達(dá)本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段或包括本發(fā)明的核酸或載體的細(xì)胞。在又ー另外的方面，本發(fā)明提供了包括ー個或多個小瓶的試劑盒，所述小瓶可包括例如本文所描述的人源化抗體、本文所描述的雜合抗體、本文所描述的抗原結(jié)合片段、本文所描述的分離的抗體、本文所描述的分離的核酸或本文所描述的載體。在另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，所述藥物組合物可包括例如本文所描述的人源化抗體、本文所描述的雜合抗體、本文所描述的抗原結(jié)合片段、本文所描述的分離的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的又ー另外的方面涉及組合療法，所述組合療法包括本文所描述的藥物組合物和化學(xué)治療劑。本文還包括產(chǎn)生人源化或雜合抗簇蛋白抗體或抗原結(jié)合片段的方法以及利用人源化或雜合的抗簇蛋白抗體或抗原結(jié)合片段治療與簇蛋白表達(dá)或分泌相關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明的進(jìn)ー步的范圍、適用性和優(yōu)點將通過下文的非限制性詳細(xì)描述而變得明顯。然而應(yīng)理解，該參照附圖、同時示出本發(fā)明示例性實施方案的詳細(xì)描述僅通過舉例的方式給出。附圖簡述圖I.小鼠16B5抗簇蛋白抗體的可變區(qū)的同源3D模型。⑶R被標(biāo)記(輕鏈中為LI、し2、し3，且重鏈中為!11、!12和!13)。由人框架殘基所替代的小鼠框架殘基顯示為球模型。圖2.小鼠16B5、人源化16B5和選擇的人框架的序列比對(提供了 NCBI數(shù)據(jù)庫)。頂端顯示了 Kabat編號。⑶R被突出顯示。根據(jù)對于⑶R的逼近(5: 5人以內(nèi))、表面暴露(B :隱藏)和與配對可變域的接觸在序列比對下突出顯示了回復(fù)突變的候選殘基。圖3· 16B5鼠類和人源化抗簇蛋白抗體的動力學(xué)分析。圖4. hl6B5阻滯癌細(xì)胞系的遷移。在針對小鼠乳腺癌細(xì)胞的刮傷測定中，hl6B5至少具有與小鼠16B6—祥的活性。圖顯示了呈各種構(gòu)型的的抗體在體外阻滯細(xì)胞遷移的能力。圖5. hl6B5的抑制降低了人前列腺癌細(xì)胞的侵襲力。用200 μ L減生長因子基質(zhì)膠(Becton Dickinson)覆蓋12孔平板的底部。將細(xì)胞(2. 5X IO4)重懸于200 μ L基質(zhì)膠中，層放于其上部，并最后將500 μ L的細(xì)胞特異性生長培養(yǎng)基添加到基質(zhì)膠的上部。將hl6B5以8μ g/mL的濃度添加到每層基質(zhì)膠和培養(yǎng)基。將平板在37°C下孵育長達(dá)3周，在該過程中每周補(bǔ)充生長培養(yǎng)基(+/_hl6B5)。箭頭表示上皮樣細(xì)胞的區(qū)域。圖6.用hl6B5處理前列腺癌腫瘤降低了腫瘤的生長并增高了其對于化療的應(yīng)答。將DU145前列腺癌細(xì)胞(2X IO6)皮下移植到SCID小鼠中并使其生長直至腫瘤大小為近IOOmm30用數(shù)字卡尺每兩周測量腫瘤并按照LXWXH計算腫瘤體積。每組含8只動物，其在開始結(jié)束處理前隨機(jī)分組。結(jié)果表示為mm3土SEM。利用斯氏T檢驗計算P值。圖7.小鼠21B12抗簇蛋白抗體的可變區(qū)的同源3D模型。⑶R被標(biāo)記(輕鏈中為L1、L2、L3，且重鏈中為H1、H2和H3)。由人框架殘基所替代的小鼠框架殘基顯示為球模型。圖8.小鼠16B5、人源化21B12和選擇的人框架的序列比對(提供了 NCBI數(shù)據(jù)庫)。頂端顯示了 Kabat編號。⑶R被突出顯示。根據(jù)對于⑶R的近似(5: 5▲以內(nèi))、表面暴露(B :隱藏)和與配對可變域的接觸在序列比對下突出顯示了回復(fù)突變的候選殘基。圖9· 21B12鼠類和人源化抗簇蛋白抗體的動力學(xué)分析。

圖10. hl6B5抑制PC-3前列腺腫瘤的生長。將PC-3前列腺癌細(xì)胞(2X IO6)皮下移植到SCID小鼠中并使其生長直至腫瘤大小為近100mm3。用數(shù)字卡尺每兩周測量腫瘤并按照LXWXH計算腫瘤體積。每組含8只動物，其在開始結(jié)束處理前隨機(jī)分組。結(jié)果表示為 mm3 土 SEM。圖11.簇蛋白在人前列腺腫瘤中表達(dá)。使來源于前列腺癌細(xì)胞系的腫瘤(如所示)生長于SCID小鼠中，將其收獲，固定于福爾馬林中，制成切片并利用hl6B5的免疫組織化學(xué)進(jìn)行檢查。利用HRP綴合的ニ級抗體通過標(biāo)準(zhǔn)方法觀察陽性染色。利用同種型對照抗體在相同的條件下進(jìn)行陰性對照。圖12. H16B5抑制前列腺癌細(xì)胞系的遷移。將PANC-I細(xì)胞接種于含基質(zhì)膠阻礙物的24孔Transwell平板的上部室中。下部的孔用作為化學(xué)誘導(dǎo)劑的含10%FBS的培養(yǎng)基填充。在TGFii和/或hl6B5存在或不存在(如所示)下孵育24小時之后，對基質(zhì)膠層的細(xì)胞進(jìn)行染色并計數(shù)細(xì)胞的數(shù)目。圖13.分泌型簇蛋白被內(nèi)化到癌細(xì)胞中。在293-6E細(xì)胞中表達(dá)重組人簇蛋白，將其純化并利用商業(yè)標(biāo)記試劑盒(Invitrogen)用AlexaFluor 488進(jìn)行標(biāo)記。將BRI-JMOl小鼠乳腺癌細(xì)胞接種到蓋玻片上并用250ng/ml的標(biāo)記的分泌型簇蛋白進(jìn)行處理。在指定的時間，用冰冷的PBS洗滌細(xì)胞并將細(xì)胞固定于2%的多聚甲醛中。用Antifade Gold封片并用熒光顯微鏡生成圖像。圖14. H16B5抑制分泌型簇蛋白在癌細(xì)胞中的內(nèi)化。如關(guān)于圖13所描述的進(jìn)行實驗。以 10μ g/ml 添加 H16B5。圖15.顯示了人簇蛋白(NP_001822)和鼠類簇蛋白(NP_038520)之間的同源區(qū)域。圖16.顯示了 hl6B5 (在圖中標(biāo)記為AB-16B5)與在由4T1小鼠乳腺腫瘤生成的固定的冰凍切片中表達(dá)的鼠類簇蛋白的結(jié)合。利用免疫組織化學(xué)進(jìn)行實驗并利用HRP綴合的 ニ級抗體完成檢測。發(fā)明詳述本發(fā)明在其一方面涉及抗體，所述抗體能夠與簇蛋白特異性結(jié)合且其包括人源化輕鏈可變區(qū)和/或人源化重鏈可變區(qū)。
人簇蛋白的序列可見于RefSeq檢索號；NM_001831. 2 (蛋白編號=NP_001822)，而鼠類簇蛋白的序列可見于RefSeq檢索號；NM_013492. 2 (蛋白編號=NP_038520)。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可能夠與簇蛋白的鼠類形式和/或人形式結(jié)合。本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段還能夠結(jié)合天然存在的變體以及與人或鼠類簇蛋白具有至少75% (例如，80%、85%、90%、95%、99%)氨基酸同一性的合成簇蛋白變體。本發(fā)明因此提供了非人親本抗體的人源化抗體，其能夠與簇蛋白或其抗原結(jié)合片段以及雜合抗體和其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，人源化抗體或雜合抗體可抑制(降低)表達(dá)或分泌簇蛋白的腫瘤細(xì)胞的生長。
根據(jù)本發(fā)明的另ー個實施方案，人源化抗體或雜合抗體可減小包含表達(dá)或分泌簇蛋白的腫瘤的體積。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，人源化抗體或雜合抗體可抑制(降低)表達(dá)或分泌簇蛋白的腫瘤細(xì)胞的遷移或侵襲。因此，根據(jù)本發(fā)明的又ー個另外的實施方案，人源化抗體或雜合抗體可抑制(降低)表達(dá)或分泌簇蛋白的腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移發(fā)生。在另一方面，本發(fā)明涉及減小包含簇蛋白表達(dá)細(xì)胞的腫瘤的體積的方法，所述方法包括向有需要的哺乳動物施用抗簇蛋白抗體(多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、分離的人抗體、雜合抗體或其片段)。該方法更具體地考慮了施用嵌合抗體、人源化抗體或雜合抗體。在一個實施方案中，雜合抗體或其片段可包括例如非人抗體的輕鏈可變區(qū)和人源化抗體的重鏈可變區(qū)。在另ー個實施方案中，雜合抗體或其片段可包括例如非人抗體的輕鏈可變區(qū)和人源化抗體的重鏈可變區(qū)。術(shù)語“抗體”是指完整的抗體，單克隆抗體、(完全或部分)人源化抗體、雜合抗體、嵌合抗體或多克隆抗體以及分離的人抗體。術(shù)語“抗體”還包括多特異性抗體諸如雙特異性抗體。人抗體通常由兩個輕鏈和兩個重鏈組成，每個鏈包括可變區(qū)和恒定區(qū)。輕鏈可變區(qū)包含3個⑶R，本文稱作⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3，兩側(cè)為框架區(qū)。重鏈可變區(qū)包含3個⑶R，本文稱作⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3，兩側(cè)為框架區(qū)。術(shù)語“人源化抗體”指包括I至6個CDR的抗體，所述⑶R包含非人⑶R氨基酸殘基和其來自人抗體譜的重鏈和/或輕鏈框架區(qū)的置換部分。在一些情況下，人源化抗體的重鏈和/或輕鏈框架區(qū)的總數(shù)可與由人抗體譜(天然人抗體)所編碼的(可編碼的)那些相同。在其它情況下，人源化抗體的重鏈和/或輕鏈框架區(qū)可包括I至30個來自待人源化非人抗體的氨基酸且剩余的部分來自天然人抗體。在其它情況下，人源化抗體可包括I至6個完全非人CDR且通常該6個CDR是完全非人的。在其它情況下，“人源化抗體”可包括人或其它來源(來自哺乳動物)的恒定區(qū)。術(shù)語“雜合抗體”指包括其重鏈或輕鏈可變區(qū)(其重鏈或輕鏈)的ー個為(對簇蛋白具有親和カ的)人源化抗體或來自天然人抗體而重鏈或輕鏈可變區(qū)(重鏈或輕鏈)的另ー個為非人的抗體。術(shù)語“嵌合抗體”指具有非人可變區(qū)和人恒定區(qū)的抗體。
術(shù)語“天然人抗體”指由人抗體譜，即，種系序列所編碼的(可編碼的)抗體。如本文所用，如果利用人免疫球蛋白序列，例如通過使攜帯人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠免疫或通過篩選人免疫球蛋白基因文庫從系統(tǒng)獲得抗體，則分離的人抗體“來源干”特定的種系序列。由此通過將人抗體的氨基酸序列與人種系免疫球蛋白的氨基酸序列相比較可鑒定“來源干”人種系免疫球蛋白序列的分離的人抗體。選擇的人抗體通常在氨基酸序列中與由人種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列至少90%同一，并含有當(dāng)與其它物種的種系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠類種系序列)相比較時將人抗體鑒定為人的氨基酸殘基。在某些情況中，人抗體在氨基酸序列中可與由種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列至少95%，或甚至至少96%、97%、98%或99%同一。通常，來源于特定的人種系 序列的人抗體將表現(xiàn)出與由人種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列不同的不超過10個氨基酸差異。在某些情況中，人抗體可表現(xiàn)出表現(xiàn)出與由人種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列不同的不超過5個，或甚至不超過4個、3個、2個或I個氨基酸差異。如本文所用，術(shù)語“抗原結(jié)合片段”指保留與抗原結(jié)合的能力的抗體的一個或多個片段。已顯示抗體的抗原結(jié)合功能可由完整的抗體的片段來執(zhí)行。包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”中的結(jié)合片段的實例包括(i) Fab片段，由\、Vh、Q和Cm結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(i i ) F (ab' ) 2片段，包括在鉸鏈區(qū)通過ニ硫橋連接的兩個Fab片段；(i i i ) Fd片段，由Vh和Cm結(jié)構(gòu)域組成；(iv) Fv片段，由抗體的單臂的Vl和Vh結(jié)構(gòu)域組成，(V) dAb片段(Ward等,(1989) Nature341:544-546),其由Vh結(jié)構(gòu)域組成；和(vi)分離的互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)，例如，VH⑶R3。并且，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL和VH由獨立的基因所編碼，可利用重組方法通過能使它們作為單ー多肽鏈的合成的連接物將它們?nèi)诤?，所述單ー多肽鏈其中VL和VH區(qū)配對以形成單價分子(稱為單鏈Fv (scFv);參見，例如，Bird等(1988)Science 242:423-426 ;和 Huston 等(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。所述單鏈抗體也將包括在術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合片段”之中。并且，抗原結(jié)合片段包括結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白，其包括(i)結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽(諸如重鏈可變區(qū)，輕鏈可變區(qū)，或通過連接物肽與輕鏈可變區(qū)融合的重鏈可變區(qū))，其與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合，(ii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)，和(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)?？赏ㄟ^將ー個或多個半胱氨酸殘基用絲氨酸殘基來取代以防止ニ聚化來修飾鉸鏈區(qū)。US 2003/0118592和US 2003/0133939中也公開了所述結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白。利用本領(lǐng)域中的技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得這些抗體片段，并篩選所述片段的與完整的抗體同樣的效用。 典型的抗原結(jié)合位點包括由免疫球蛋白輕鏈和免疫球蛋白重鏈的配對形成的可變區(qū)?？贵w可變區(qū)的結(jié)構(gòu)是非常一致的并表現(xiàn)出非常相似的結(jié)構(gòu)。這些可變區(qū)通常包括相對同源的框架區(qū)(FR)，以稱作互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)的3個高變區(qū)間隔。抗原結(jié)合片段的總體結(jié)合活性通常受⑶R序列的支配。然而，F(xiàn)R通常在用于最優(yōu)抗原結(jié)合的⑶R的適當(dāng)定位和三維排列中起作用。本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可包括重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)可包括非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和天然人抗體的人框架區(qū)氨基酸殘基或互補(bǔ)的輕鏈。本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可包括輕鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)可包括非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和天然人抗體的人框架區(qū)氨基酸殘基和互補(bǔ)的重鏈。
本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可抑制轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞遷移或侵襲或可抑制簇蛋白表達(dá)細(xì)胞的生長，所述簇蛋白表達(dá)細(xì)胞包括例如癌細(xì)胞。事實上，申請人意外的發(fā)現(xiàn)包含本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體的抗簇蛋白抗體在體內(nèi)減小腫瘤體積?？蛇x地，本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可用于檢測表達(dá)簇蛋白的細(xì)胞。選擇用于非人親本抗體的人源化天然人抗體可包括可變區(qū)，所述可變區(qū)具有與非人親本抗體的(模型的)可變區(qū)相似的(可重疊的)三維結(jié)構(gòu)。因此，人源化抗體或雜合抗體具有包含與非人親本抗體的三維結(jié)構(gòu)相似的三維結(jié)構(gòu)的較大機(jī)會。本發(fā)明的人 源化抗體具有對于簇蛋白的高親和力。事實上，本文已顯示人源化抗體以4. 49X 1(Γ9Μ±8. 5Χ 10,或更佳的親和カ與重組單體簇蛋白結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明，人源化抗體或雜合抗體輕鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基來自天然人抗體輕鏈框架區(qū)。選擇用于人源化目的的天然人抗體的輕鏈框架區(qū)可具有，例如，與非人親本抗體的輕鏈框架區(qū)的至少70%同一性。優(yōu)選地，選擇用于人源化目的的天然人抗體在其輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)中可具有與非人親本抗體的輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)相同或基本上相同數(shù)目的氨基酸。在本發(fā)明的另外的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體輕鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基來自與非人親本抗體的輕鏈框架區(qū)具有至少75%、80%、83% (或更高)同一性的天然人抗體輕鏈框架區(qū)。還根據(jù)本發(fā)明，人源化抗體或雜合抗體重鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基來自與非人親本抗體的重鏈框架區(qū)具有至少70%同一性的天然人抗體重鏈框架區(qū)。優(yōu)選地，選擇用于人源化目的的天然人抗體在其重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)中可具有與非人親本抗體的重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)相同或基本上相同數(shù)目的氨基酸。在本發(fā)明的另外的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體重鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基來自與非人親本抗體的重鏈框架區(qū)具有至少75%、80%、83%同一性的天然人抗體重鏈框架區(qū)。在本發(fā)明的一個實施方案中，人源化抗體或雜合抗體的重鏈可變區(qū)可因此包括至少ー個非人互補(bǔ)性決定區(qū)?？蛇x地，在本發(fā)明的另外的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體的重鏈可變區(qū)可包括至少兩個非人互補(bǔ)性決定區(qū)或甚至3個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。在本發(fā)明的另外的實施方案中，輕鏈可變區(qū)可包括至少ー個非人互補(bǔ)性決定區(qū)?？蛇x地，在又ー些另外的實施方案中，輕鏈可變區(qū)包含至少2個非人互補(bǔ)性決定區(qū)或甚至3個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。人源化抗體可因此有利地包括非人抗體的全部6個⑶R。就ニ價人源化抗體而言，全部12個⑶R可來自非人抗體。可通過人源化抗體或雜合抗體檢測的簇蛋白表達(dá)細(xì)胞包括癌細(xì)胞。人源化抗體或雜合抗體還可用于抑制表達(dá)簇蛋白的癌細(xì)胞且尤其是人癌細(xì)胞的生長。已顯示若干類型的人癌細(xì)胞表達(dá)或分泌簇蛋白，其中有，子宮內(nèi)膜癌的細(xì)胞、乳腺癌的細(xì)胞、肝細(xì)胞癌的細(xì)胞、前列腺癌的細(xì)胞、腎細(xì)胞癌的細(xì)胞、卵巢癌的細(xì)胞、結(jié)直腸癌的細(xì)胞、胰腺癌的細(xì)胞等。本發(fā)明的一個示例性實施方案包括例如人源化抗體或雜合抗體,所述人源化抗體或雜合抗體包括如本文所描述的天然人抗體重鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基，和選自由以下組成的組的重鏈⑶R :具有SEQ ID NO 1的氨基酸序列的⑶RH1、具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的⑶RH2和具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列的⑶RH3及其組合，或選自由以下組成的組的重鏈CDR :具有SEQ ID NO :11的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID N0:12的氨基酸序列的⑶RH2和具有SEQ ID NO 13的氨基酸序列的⑶RH3及其組合。在另ー個示例性實施方案中，人源化抗體或雜合抗體可包括如本文所描述的天然人抗體重鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基，和選自由以下組成的組的至少2個重鏈CDR :具有SEQID NO 1的氨基酸序列的CDRHl、具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ IDNO :3的氨基酸序列的⑶RH3，或選自由以下組成的組的至少兩個重鏈⑶R :具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的⑶RHl、具有SEQ ID NO : 12的氨基酸序列的⑶RH2和具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的⑶RH3及其組合。
可選地，在另ー個示例性實施方案中，本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可包括如本文所描述的天然人抗體重鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基，和具有SEQ ID NO :1的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO : 3的氨基酸序列的CDRH3，或具有SEQ ID NO :11的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO : 12的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO 13的氨基酸序列的CDRH3。在本發(fā)明的ー個更特定的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 26的輕鏈可變區(qū)(hl6B5VL共有序列I)DIVMXQSPXSLAVSXGEXXTXXCKSSQSLLNSRTRKNYLAff YQQKPGQXPKLLIYWASTRESGVPDRFXGSGSGTDFTLTISSXQ AEDXAVYYCKQSYNLffTFGXGTKLEXK ;其中由 X 表示的氨基酸中的至少ー個是與SEQ ID N025 (鼠類16B5VL)中所列的多肽中的對應(yīng)氨基酸相比較的氨基酸置換。氨基酸置換可以是例如保守性的或非保守性的。根據(jù)本發(fā)明，氨基酸置換可以是保守性的。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 27的輕鏈可變區(qū)(16B5VL共有序列2)DIVMXalQSPXa2SLAVSXa3GEXa4Xa5TXa6Xa7CKSSQSLLNSRTR KNYLAffYQQKPGQXa8PKLLIYffASTRESGVPDRFXa9GSGSGTD FTLTISSXal0QAEDXallAVYYCKQSYNLWTFGXal2GTKLEXal3K ；其中Xal可以是中性親水性氨基酸，例如T或S ;其中Xa2可以是例如D或S ;其中Xa3可以是疏水性氨基酸，例如L或A ;其中Xa4可以是堿性氨基酸，例如R或K ;其中Xa5可以是疏水性氨基酸，例如A或V ;其中Xa6可以是疏水性氨基酸，例如I或M ;其中Xa7可以是例如N或S ;其中Xa8可以是例如P或S ;其中Xa9可以是中性親水性氨基酸，例如S或T ;其中Xaltl可以是疏水性氨基酸，例如L或V ;其中Xall可以是疏水性氨基酸，例如V或L ;其中Xal2可以是例如Q或G ;其中Xal3可以是例如I或F ;且
其中輕鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :25相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 28的輕鏈可變區(qū)(16B5VL共有序列3)DIVMXalQSPXa2SLAVSXa3GEXa4Xa5TXa6Xa7CKSSQSLLNSRTR KNYLAffYQQKPGQXa8PKLLIYffASTRESGVPDRFXa9GSGSGTD FTLTISSXal0QAEDXallAVYYCKQSYNLWTFGXal2GTKLEXal3K ；其中Xal可以是例如T或S ;其中Xa2可以是例如D或S ;其中Xa3可以是例如L或A ;其中Xa4可以是例如R或K ;其中Xa5可以是例如A或V ;其中Xa6可以是例如I或M ;其中Xa7可以是例如N或S ;其中Xa8可以是例如P或S ;其中Xa9可以是例如S或T ;其中Xal?？梢允抢鏛或V;其中Xall可以是例如V或L ;其中Xal2可以是例如Q或G ;其中Xal3可以是例如I或F ;且其中輕鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :25相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。在本發(fā)明的另ー個更特定的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 30的重鏈可變區(qū)(16B5VH共有序列I)；XVQLXQSGAEXXKPGAXVXXSCXXSGFNIKDIYMHWVXQX PXXGLEffXGRIDPAYGNTKYDPKFQGXXTITADTSXXTAYXXL SSLXSEDTAVYYCArRYDTAMDYwgqgtXvtvsS ；其中由X表示的氨基酸中的至少ー個是與SEQ ID NO 29 (鼠類16B5VH沖所列的多肽中的對應(yīng)的氨基酸相比較的氨基酸置換。氨基酸置換可以是例如保守性的或非保守性的。根據(jù)本發(fā)明，氨基酸置換可以是保守性的。
人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 31的重鏈可變區(qū)(16B5VH共有序列2)XblVQLXb2QSGAEXb3Xb4KPGAXb5VXb6Xb7SCXb8Xb9SGFNIKDI YMHffVXbloQXbllPXbl2Xbl3GLEffXbl4GRIDPAYGNTKYDPKFQG Xbl5Xbl6TITADTSXbl7Xbl8TAYXbl9Xb2(lLSSLXb21SEDTAVYYCArRYDTAMDYwgqgtXb22vtvsS ；其中Xbl可以是例如Q或E ;其中Xb2可以是例如V或Q ;其中Xb3可以是疏水性氨基酸，例如V或L ;其中Xb4可以是例如K或V;其中Xb5可以是中性親水性氨基酸，例如T或S ;其中Xb6可以是堿性氨基酸，例如K或R ;其中Xb7可以是疏水性氨基酸，例如I或L ;其中Xb8可以是例如K或T ;
其中Xb9可以是例如V或T ;其中Xbltl可以是堿性氨基酸，例如Q或K ;其中Xbll可以是例如A或R ;其中Xbl2可以是例如G或E ;
其中Xbl3可以是堿性氨基酸，例如K或Q ;其中Xbl4可以是疏水性氨基酸，例如M或I ;其中Xbl5可以是堿性氨基酸，例如R或K ;其中Xbl6可以是疏水性氨基酸，例如V或A ;其中Xbl7可以是中性親水性氨基酸，例如T或S ;其中Xbl8可以是例如D或N;其中Xbl9可以是疏水性氨基酸，例如M或L ;其中Xb2?？梢允抢鏓或Q ;其中Xb21可以是例如R或T ;其中Xb22可以是例如L或S ;且其中重鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :29相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 32的重鏈可變區(qū)(16B5VH共有序列3)XblVQLXb2QSGAEXb3Xb4KPGAXb5VXb6Xb7SCXb8Xb9SGFNIKDI YMHffVXbloQXbllPXbl2Xbl3GLEffXbl4GRIDPAYGNTKYDPKFQG Xbl5Xbl6TITADTSXbl7Xbl8TAYXbl9Xb2(lLSSLXb21SEDTAVYYCArRYDTAMDYwgqgtXb22vtvsS ；其中Xbl可以是例如Q或E ;其中Xb2可以是例如V或Q ;其中Xb3可以是例如V或L ;其中Xb4可以是例如K或V ;其中Xb5可以是例如T或S ;其中Xb6可以是例如K或R ;其中Xb7可以是例如I或L ;其中Xb8可以是例如K或T ;其中Xb9可以是例如V或T ;其中Xbltl可以是例如Q或K ;其中Xbll可以是例如A或R ;其中Xbl2可以是例如G或E ;其中Xbl3可以是例如K或Q ;其中Xbl4可以是例如M或I ;其中Xbl5可以是例如R或K;其中Xbl6可以是例如V或A ;其中Xbl7可以是例如T或S ;其中Xbl8可以是例如D或N;其中Xbl9可以是例如M或L ;
其中Xb2?？梢允抢鏓或Q ;其中Xb21可以是例如R或T ;其中Xb22可以是例如L或S ;且其中重鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :29相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。在本發(fā)明的另ー特定的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 34的輕鏈可變區(qū)(21B12VL共有序列I)；DIVMXcQSPXSLAVSXGEXXTXXCKSSQSLLYSSNQKNYLA WYQQXPGQXPKLLIYWASTRESGVPDRFXGSGSGTDFTLTISSX XAEDXAVYYCQQYYIYPRTFGXGTKLEIK ；其中由X表示的氨基酸中的至少ー個是與SEQ ID NO 33 (鼠類21B12VL)中所列的多肽中的對應(yīng)的氨基酸相比較的氨基酸置換。氨基酸置換可以是例如保守性的或非保守性的。根據(jù)本發(fā)明，氨基酸置換可以是保守性的。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 35的輕鏈可變區(qū)(21B12VL共有序列2)DIVMXc1QSPXc2SLAVSXc3GEXc4Xc5TXc6Xc7CKSSQSLLYSSNQ KNYLAffYQQXc8PGQXc9PKLLIYffASTRESGVPDRFXcl0GSGSGT DFTLTISSXcllXcl2AEDXcl3AVYYCQQYYIYPRTFGXcl4GTKLEIK ；其中Xca可以是中性親水性氨基酸，例如T或S ;其中Xe2可以是例如D或S ;其中Xe3可以是疏水性氨基酸，例如L或V ;其中Xe4可以是堿性氨基酸，例如R或K ;其中Xe5可以是疏水性氨基酸，例如A或V ;其中Xe6可以是疏水性氨基酸，例如I或M ;其中Xe7可以是例如N或S ;其中Xe8可以是例如堿性氨基酸K或R ;其中Xc9可以是例如P或S ;其中Xcatl可以是中性親水性氨基酸，例如S或T ;其中Xcai可以是疏水性氨基酸，例如L或V ;其中Xel2可以是堿性氨基酸，例如Q或K ;其中Xca3可以是疏水性氨基酸，例如V或L ;其中Xcl4可以是例如Q或G ;且其中輕鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :33相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 36的輕鏈可變區(qū)(21B12VL共有序列3)DIVMXc1QSPXc2SLAVSXc3GEXc4Xc5TXc6Xc7CKSSQSLLYSSNQ KNYLAffYQQXc8PGQXc9PKLLIYffASTRESGVPDRFXcl0GSGSGT DFTLTISSXcllXcl2AEDXcl3AVYYCQQYYIYPRTFGXcl4GTKLEIK ；其中Xel可以是T或S ;其中Xe2可以是例如D或S ;其中Xc3可以是L或V ;其中Xc4可以是R或K ;其中Xe5可以是例如A或V ;
其中Xc6可以是例如I或M ;其中Xe7可以是例如N或S ;其中Xci8可以是例如K或R ;其中Xe9可以是例如P或S ;其中Xcatl可以是例如S或T ;其中Xcai可以是例如L或V ;其中Xcl2可以是例如Q或K; 其中Xcl3可以是例如V或L ;其中Xcl4可以是例如Q或G ;且其中輕鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :33相比較的以上氨基酸置換中的至少ー個。在本發(fā)明的另一個示例性實施方案中，人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 38的重鏈可變區(qū)(21B12VH共有序列I)QXQLVQSGXELKKPGXXVKXSCKASGYTFTNYGMHWVXQ APGXGLXWMGffINTYTGEPTYADDFKGRFXFSLXTSXSTAYLQ IXXLKXEDTAXYXCARdGFLYFFDYwgqgtXXtvss ；其中由X表示的氨基酸中的至少ー個是與SEQ ID NO 37 (鼠類21B12VH)中所列的多肽中的對應(yīng)的氨基酸相比較的氨基酸置換。氨基酸置換可以是例如保守性的或非保守性的。根據(jù)本發(fā)明，氨基酸置換可以是保守性的。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ IDNO 39的重鏈可變區(qū)(21B12VH共有序列2)QXdlQLVQSGXd2ELKKPGXd3Xd4VKXd5SCKASGYTFTNYGM HffVXd6QAPGXd7GLXd8WMGffINTYTGEPTYADDFKGRFXd9FSL Xdl0TSXdllSTAYLQIXdl2Xdl3LKXdl4EDTAXdl5YXdl6CARdGFLYFFDYwgqgtXdl7Xdl8tvss ；其中Xdl可以是疏水性氨基酸，例如V或I ;其中Xd2可以是例如S或P ;其中Xd3可以是例如A或E ;其中Xd4可以是中性親水性氨基酸，例如S或T ;其中Xd5可以是疏水性氨基酸，例如V或I ;其中Xd6可以是堿性氨基酸，例如R或K ;其中Xd7可以是堿性氨基酸，例如Q或K ;其中Xd8可以是例如E或K;其中Xd9可以是疏水性氨基酸，例如V或A ;其中Xdltl可以是酸性氨基酸，例如D或E ;其中Xdll可以是疏水性氨基酸，例如V或A ;其中Xdl2可以是例如S或N;其中Xdl3可以是例如S或N ;其中Xdl4可以是例如A或N ;其中Xdl5可以是例如V或T ;其中Xdl6可以是芳香族氨基酸，例如Y或F ;其中Xdl7可以是例如L或T ;
其中Xdl8可以是疏水性氨基酸，例如V或L ;且其中重鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :37相比較的以上氨基酸置換中的至少一個。人源化抗體或雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 40的重鏈可變區(qū)(21B12VH共有序列3)QXdlQLVQSGXd2ELKKPGXd3Xd4VKXd5SCKASGYTFTNYGM HWVXd6QAPGXd7GLXd8WMGWI NTYTGEPTYADDFKGRFXd9FSL Xdl0TSXdllSTAYLQIXdl2Xdl3LKXdl4EDTAXdl5YXdl6CARdGFLYFFD YwgqgtXdl7Xdl8tvss ；其中Xdl可以是例如V或I ;其中Xd2可以是例如S或P ;其中Xd3可以是例如A或E ;其中Xd4可以是例如S或T ;其中Xd5可以是例如V或I ;其中Xd6可以是例如R或K ;其中Xd7可以是例如Q或K ;其中Xd8可以是例如E或K ;其中Xd9可以是例如V或A ;其中Xdl(l可以是例如D或E ;其中Xdll可以是例如V或A ;其中Xdl2可以是例如S或N ;其中Xdl3可以是例如S或N ;其中Xdl4可以是例如A或N ;其中Xdl5可以是例如V或T ;其中Xdl6可以是例如Y或F ;其中Xdl7可以是例如L或T ;其中Xdl8可以是例如V或L ;且其中重鏈可變區(qū)可包括與SEQ ID NO :37相比較的以上氨基酸置換中的至少一個。在一個更特定的實施方案中，人源化抗體或雜合抗體可包括具有SEQ ID N0:7或 SEQ ID NO :17的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的又一個更特定的實施方案包括人源化抗體或雜合抗體，所述人源化抗體 或雜合抗體可包括具有SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 19的氨基酸序列的重鏈。本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可具有如本文所示的重鏈或重鏈可變區(qū)和互補(bǔ) 輕鏈或輕鏈可變區(qū)。另一方面，本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可具有如本文所示的輕鏈或輕鏈可變 區(qū)和互補(bǔ)重鏈或重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可因此包括如本文所描述的天然人抗體輕鏈的 人框架區(qū)氨基酸殘基和選自由例如以下組成的組的輕鏈CDR :具有SEQ ID NO 4的氨基酸 序列的CDRL1、具有SEQ ID NO :5的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO :6的氨基酸序 列的⑶RL3或選自由以下組成的組的重鏈⑶R :具有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的⑶RL1、 具有SEQ ID N0 :15的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO 16的氨基酸序列的CDRL3及
4*, XMfofàWWi&'kfàWü Qf ln&jtB W AM A jl#gMAtg|￡EM$M5$ g ê2 ^glil CDR :M SEQ ID NO :4 mU W.Ff^m CDRLU^W SEQ ID NO :5 CDRL2SEQ ID NO :6 &}U MFfH CDRL3 sKit g ê 2 CDR :M SEQ ID NO :14 MS^^lJWCDRLU^WSEQ ID NO :15 mU MFfH CDRL2 SEQ ID NO 16 ltK,$S^JWCDRL3 OT^o4*,AM
A^gMAtg^EMSM^RJIW SEQ ID N0:4 ^MSmj￥^JWCDRLUi|WSEQID NO :5 mU^MFfH ftj CDRL2SEQ ID NO :6 mU^MFfH ftj CDRL3SEQ ID
NO :14 atJM ^f !JatJ CDRLU^W SEQ ID NO :15 mU^MFfHftj CDRL2SEQ ID
no : i6cdrl3AUik$LW$L&&$iWü &f Mt^i SEQ ID NO :8 ^SEQ ID NO :18fe—4*, 0J atJ AMVt iWWfa^$iWü\Qfa^SEQ ID NO :10 sK SEQ ID NO :20^Rm^^^^^^MTjM^^AMitifiW^f ièAMitifiW ^^ SEQID NO :7 SEQ ID NO :17 ftM SI^J Mfil T^EíR^W SEQ ID NO :8 ^ SEQ ID NO:18yt^^\'^’WJa^ à7jM^A'Mit iW,PJii&AM t iW ^^SEQ ID N0:9 SEQ ID NO :10% \',#RWfà—^%ftfàifefefà%fàjj%.&fêAMikiiiW,ffti&AMikiiiWMt SEQ ID NO : 19SEQ ID NO :20 mU MFfH—^#^ ^JIC^>tlx:, T W%SEQ ID NO :25 M4> 80% |sj— ({MU, 85%,90%,95%,99%)0^g!i|nT^g^P / SEQ ID NO :29 M4> 80% |sj— (íMU, 85%,90%,95%,99%) éKJ
SEQ ID NO =25^ seq id NO:ID N0:33M4>80%|sJ—(Mftl,85%>90%>95%,99%)0^g!i|nT^g^R / SEQ ID NO :37 M4> 80% |sj—(M￡tI,85%>90%>95%>99%)éKj
SEQ ID NO =33^ SEQ ID N0:37t@0j,°m, M4>—'hM^S& T4* °Sí^ T^ oAM^ o本發(fā)明的另一個實施方案，本發(fā)明的抗體和抗原結(jié)合片段結(jié)合鼠類簇蛋白。本發(fā)明的抗體 和抗原結(jié)合片段還可結(jié)合天然存在的人簇蛋白或人簇蛋白的鼠類的合成變體。所述變體可 以例如與人簇蛋白或與鼠類簇蛋白具有至少75%氨基酸序列同一性。利用Kabat 和 Chothia 定義鑒定了 SEQ ID NO 29 的 CDR(與 SEQ ID NO. 30、31、32 和7的那些同一)。本文所鑒定的對應(yīng)的⑶R序列如下；重鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO :1，重鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO :2和重鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO :3。在2006年9月13日提交的(即，1505申請)并以第W02007/030930號公布的國際 申請第PCT/CA2006/001505號中展示了 SEQ ID NO : 1、2和3的較短形式。在該專利申請中， 利用執(zhí)行頂GT定義的MGT/V搜索軟件鑒定了 SEQ ID NO 29的⑶R (對應(yīng)于‘1505申請 中的SEQID N0:23)。本文中鑒定的對應(yīng)序列如下；重鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO: 44，重鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO 45和重鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO :46。如本文所用，關(guān)于SEQ ID NO 29的術(shù)語“氨基酸置換…在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之 外” 一般指SEQ ID N0:l、2和3 (外的)周圍的氨基酸。在一些實施方案中，該術(shù)語可可選 地指SEQ ID N0:44、45和46 (外的)周圍的氨基酸。利用Kabat 和 Chothia 定義鑒定了 SEQ ID NO 25 的 CDR(與 SEQ ID NO. 26、27、28 和8的那些同一)。本文所鑒定的對應(yīng)的⑶R序列如下；輕鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO :4，輕鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO :5和輕鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO :6。在2006年9月13日提交的(即，1505申請)并以第W02007/030930號公布的國際 申請第PCT/CA2006/001505號中展示了 SEQ ID NO :4、5和6的較短形式。在該專利申請 中，利用執(zhí)行頂GT定義的MGT/V搜索軟件鑒定了 SEQ ID NO 25的CDR (對應(yīng)于‘1505申 請中的SEQ ID N0:12)。本文中鑒定的對應(yīng)序列如下；輕鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO :47，輕鏈可變區(qū)的⑶R2對應(yīng)于氨基酸序列“WAS”和輕鏈可變區(qū)的⑶R3對應(yīng)于SEQ ID NO :49。如本文所用，關(guān)于SEQ ID NO 25的術(shù)語“氨基酸置換…在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之 夕卜” 一般指SEQ ID N0:4、5和6 (外的)周圍的氨基酸。在一些實施方案中，該術(shù)語可可選 地指SEQ ID NO :47、輕鏈可變區(qū)的⑶R2和49 (外的)周圍的氨基酸。利用Kabat 和 Chothia 定義鑒定了 SEQ ID NO 37 的 CDR (與 SEQ ID NO. 38、39、 40和17的那些同一)。本文所鑒定的對應(yīng)的⑶R序列如下；重鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO : 11，重鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO : 12和重鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO :13。在2006年9月13日提交的(即，1505申請)并以第W02007/030930號公布的國際 申請第PCT/CA2006/001505號中展示了 SEQ ID N0:ll、12和13的較短形式。在該專利申 請中，利用執(zhí)行頂GT定義的MGT/V搜索軟件鑒定了 SEQ ID NO 37的CDR (對應(yīng)于‘1505 申請中的SEQ ID NO :22)。本文中鑒定的對應(yīng)序列如下；重鏈可變區(qū)的⑶R1對應(yīng)于SEQ ID NO : 50，重鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO :51和重鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO: 52。如本文所用，關(guān)于SEQ ID NO 37的術(shù)語“氨基酸置換…在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之 外”一般指SEQ ID N0:ll、12和13 (外的)周圍的氨基酸。在一些實施方案中，該術(shù)語可可 選地指SEQ ID N0:50、51和52 (外的)周圍的氨基酸。
利用Kabat 和 Chothia 定義鑒定了 SEQ ID NO 33 的 CDR (與 SEQ ID NO. 34、35、 36和18的那些同一)。本文所鑒定的對應(yīng)的⑶R序列如下；輕鏈可變區(qū)的⑶Rl對應(yīng)于SEQ ID NO : 14，輕鏈可變區(qū)的CDR2對應(yīng)于SEQ ID NO : 15和輕鏈可變區(qū)的CDR3對應(yīng)于SEQ ID NO :16。在2006年9月13日提交的(即，1505申請)并以第W02007/030930號公布的國際 申請第PCT/CA2006/001505號中展示了 SEQ ID NO :14、15和16的較短形式。在該專利申 請中，利用執(zhí)行頂GT定義的頂GT/V搜索軟件鑒定了 SEQ ID NO 33的CDR (對應(yīng)于‘1505 申請中的SEQ ID NO :11)。本文中鑒定的對應(yīng)序列如下；輕鏈可變區(qū)的⑶Rl對應(yīng)于SEQ ID NO 53,輕鏈可變區(qū)的⑶R2對應(yīng)于氨基酸序列“WAS”和重鏈可變區(qū)的⑶R3對應(yīng)于SEQ ID NO :55。如本文所用，關(guān)于SEQ ID NO 33的術(shù)語“氨基酸置換…在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之 夕ド’ 一般指SEQ ID N0:14、15和16 (外的)周圍的氨基酸。在一些實施方案中，該術(shù)語可可 選地指SEQ ID N0:53、輕鏈可變區(qū)的⑶R2和55 (外的)周圍的氨基酸。本發(fā)明的人源化抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括選自由SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :26或SEQ ID NO :27組成的組的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :29或SEQ ID NO 30組成的組的重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括選自由SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 26或SEQ ID NO 27組成的組的輕鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO 28的重鏈可變區(qū)?？蛇x地，本發(fā)明的雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 25的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQ ID NO :8、SEQ ID NO 29或SEQ ID NO 30的重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的人源化抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括選自由SEQ ID NO 18, SEQ ID N0:32或SEQ ID NO :33組成的組的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQ ID NO 17, SEQ ID NO 35或SEQ ID NO 36組成的組的重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括選自由SEQ ID NO 18,SEQ ID N0:32或SEQ ID NO :33組成的組的輕鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:34的重鏈可變區(qū)?？蛇x地，本發(fā)明的雜合抗體(或來源于其的任何抗原結(jié)合片段)可包括包含SEQ ID NO 31的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :35或SEQ ID NO 36組成的組的
重鏈可變區(qū)。本發(fā)明的人源化抗體或抗原結(jié)合片段的另ー個示例性實施方案包括例如，具有輕 鏈可變區(qū)的抗體或抗原結(jié)合片段，所述輕鏈可變區(qū)可包含SEQ ID NO 26, SEQ ID NO :27、 SEQ ID NO 28或SEQ ID NO 8的任何ー個的至少90個連續(xù)氨基酸。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 26的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111 或至少 112個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :26的至少90個連續(xù)氨基酸”包括存在于SEQ ID NO 26的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO 26的3個⑶R 的那些序列，例如包含SEQ ID NO 26的第6位到第108位氨基酸、第5位到第109位氨基酸、第13位到第103位氨基酸、第9位到第111位氨基酸等的序列。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 27的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111 或至少 112個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :27的至少90個連續(xù)氨基酸”包括存在于SEQ ID NO 27的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO 27的3個⑶R 的那些序列，例如包含SEQ ID NO 27的第7位到第109位氨基酸、第12位到第104位氨基 酸、第22位到第113位氨基酸、第18位到第112位氨基酸等的序列。術(shù)語“SEQ ID NO 28的至少90個連續(xù)氨基酸”或“SEQ ID NO 8的至少90個連 續(xù)氨基酸”具有相似的含義。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID N0 :8中所列 的輕鏈可變區(qū)。還根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID N0:10中所 列的輕鏈。本發(fā)明的人源化抗體或抗原結(jié)合片段包括(或還包括)，例如，可包含SEQ ID NO: 30、31、32或7的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸的重鏈可變區(qū)。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 30的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116或至少117個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO 30的至少90個連續(xù)氨基 酸”包括存在于SEQ ID NO :30的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO 30的3個⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 30的第1位到第108位氨基酸、第 2位到第112位氨基酸、第11位到第113位氨基酸、第7位到第109位氨基酸等的序列。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 31的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116或至少117個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :31的至少90個連續(xù)氨基 酸”包括存在于SEQ ID NO :31的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO 31的3個⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 31的第6位到第109位氨基酸、第 8位到第113位氨基酸、第1位到第108位氨基酸、第2位到第115位氨基酸等的序列。術(shù)語“SEQ ID NO 32的至少90個連續(xù)氨基酸”或“SEQ ID NO 7的至少90個連 續(xù)氨基酸”具有相似的含義。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID N0 :7中所列 的重鏈可變區(qū)。還根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID NO :9中所 列的重鏈。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包括例如a)可包含SEQ ID NO 26的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 3USEQ ID NO :32或SEQ ID NO :7的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸 的重鏈可變區(qū)；b)可包含SEQ ID NO 27的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO 30,SEQ ID NO :31、SEQ ID NO 32或SEQ ID NO 7的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸的重鏈可變區(qū)；c)可包含SEQ ID NO 28的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID N0:30、SEQ ID NO 3USEQ ID NO :32或SEQ ID NO :7的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸 的重鏈可變區(qū)；或d)可包含SEQ ID NO :8的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO 30,SEQ ID NO 3USEQ ID NO :32或SEQ ID NO :7的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸
的重鏈可變區(qū)。根據(jù)本發(fā)明的更特定的實施方案，輕鏈可變區(qū)可包含SEQ ID NO :8的至少90個連 續(xù)氨基酸且重鏈可變區(qū)可包含SEQ ID N07的至少90個連續(xù)氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的甚至更特定的實施方案，輕鏈可變區(qū)可以是如SEQ ID NO 8中所列 的且重鏈可變區(qū)可以是如SEQ ID NO :7中所列的。本發(fā)明的人源化抗體或抗原結(jié)合片段的其它示例性實施方案是可包括輕鏈可變 區(qū)的那些，所述輕鏈可變區(qū)可包含SEQ ID No. 34、35、36或18的任何一個的至少90個連續(xù)
氨基酸。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 34的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112 或
至少113個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO 34的至少90個連續(xù)氨基酸”包括存在于SEQ ID NO :34的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO :34的3個 ⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 34的第6位到第103位氨基酸、第11位到第106位 氨基酸、第1位到第106位氨基酸、第3位到第110位氨基酸、第5位至第107位氨基酸等 的序列。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 35的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112 或
至少113個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :35的至少90個連續(xù)氨基酸”包括存在于SEQ ID NO :35的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包含SEQ ID NO :35的3個 ⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 35的第9位到第106位氨基酸、第10位到第113位 氨基酸、第1位到第109位氨基酸、第20位到第110位氨基酸、第7位至第107位氨基酸等 的序列。術(shù)語“SEQ ID NO 36的至少90個連續(xù)氨基酸”或“SEQ ID NO 18的至少90個連
續(xù)氨基酸”具有相似的含義。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ IDN0:18中所列 的輕鏈可變區(qū)。還根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID N0:20中所 列的重鏈。本發(fā)明的人源化抗體或抗原結(jié)合片段包括(或還包括)，例如，可包含SEQ ID NO: 38、39、40或17的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸的重鏈可變區(qū)。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 38的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116、117或至少118個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :38的至少90個連續(xù)氨基酸”包括存在于SEQ ID NO 38的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包 含SEQ ID NO 38的3個⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 38的第6位到第111位氨 基酸、第1位到第114位氨基酸、第12位到第109位氨基酸、第5位到第113位氨基酸、第 10位到第107位氨基酸等的序列。如本文所用，術(shù)語“SEQ ID NO 39的至少90個連續(xù)氨基酸”還包括術(shù)語“至少91、 92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、 113、114、115、116、117或至少118個連續(xù)氨基酸”。術(shù)語“SEQ ID NO :39的至少90個連續(xù) 氨基酸”包括存在于SEQ ID NO 39的至少90個連續(xù)氨基酸的任何可能的序列且特別是包 含SEQ ID NO 39的3個⑶R的那些序列，例如包含SEQ ID NO 39的第3位到第109位氨 基酸、第1位到第115位氨基酸、第1位到第110位氨基酸、第22位到第116位氨基酸、第 20位到第115位氨基酸等的序列。術(shù)語“SEQ ID NO 40的至少90個連續(xù)氨基酸”或“SEQ ID NO 17的至少90個連
續(xù)氨基酸”具有相似的含義。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ IDN0:17中所列 的重鏈可變區(qū)。還根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段可具有，例如，如SEQ ID N0:19中所 列的重鏈。根據(jù)本發(fā)明，抗體或抗原結(jié)合片段可包括例如a)可包含SEQ ID NO :34的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO 40 或 SEQ ID NO 17 的任何一個的至少 90 個連續(xù)氨基
酸的重鏈可變區(qū)；b)可包含SEQ ID NO 35的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO 40 或 SEQ ID NO 17 的任何一個的至少 90 個連續(xù)氨基
酸的重鏈可變區(qū)；c)可包含SEQ ID NO 36的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO 38,SEQ ID NO 39,SEQ ID NO 40或SEQID NO 17的任何一個的至少90個連續(xù)氨基酸 的重鏈可變區(qū)；或d)可包含SEQ ID NO 18的至少90個連續(xù)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和可包含SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO 40 或 SEQ ID NO 17 的任何一個的至少 90 個連續(xù)氨基
酸的重鏈可變區(qū)。根據(jù)本發(fā)明的更特定的實施方案，輕鏈可變區(qū)可具有SEQ ID NO 18的至少90個 連續(xù)氨基酸且重鏈可變區(qū)可具有SEQ ID NO 17的至少90個連續(xù)氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的甚至更特定的實施方案，輕鏈可變區(qū)可以是如SEQ ID NO :18中所列 的且重鏈可變區(qū)可以是如SEQ ID NO 17中所列的。當(dāng)然，本文所描述的輕鏈或重鏈或它們的可變區(qū)還可包含信號肽。所述信號太可 來自原始序列或可被設(shè)計以優(yōu)化多肽的特別的細(xì)胞定位。當(dāng)然，需要的信號肽是可允許多 肽的分泌的那些(例如，可裂解的)。本發(fā)明的人源化抗體或雜合抗體可具有恒定區(qū)，優(yōu)選地是人恒定區(qū)。雖然可選擇 其它亞型，人源化抗體或雜合抗體可包括IgGl、IgG2或IgG3亞型的免疫球蛋白的恒定區(qū)的
氨基酸殘基。
本發(fā)明在另一方面還涉及包括輕鏈可變區(qū)(或其片段)和重鏈可變區(qū)(或其片段) 的抗原結(jié)合片段，其可包含非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基。本發(fā)明的抗原結(jié)合片段可與簇蛋白結(jié)合且可有利地具有比非人親本抗體的抗原 結(jié)合片段更佳的親和力。事實上，本文已顯示抗原結(jié)合片段以1. 7X1(T8M±2. 97X1CT9或更佳的親和力與
重組單體簇蛋白結(jié)合。在一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體重鏈 的人框架區(qū)氨基酸殘基和選自由以下組成的組的重鏈CDR:具有SEQ ID N0:1的氨基酸序 列的CDRH1、具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO :3的氨基酸序列 的⑶RH3，或選自由以下組成的組的重鏈⑶R :具有SEQ ID NO 11的氨基酸序列的⑶RH1、 具有SEQ ID NO 12的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO 13的氨基酸序列的CDRH3。在另一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體重 鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基和選自由以下組成的組的至少兩個重鏈CDR:具有SEQ ID NO 1 的氨基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO :3的 氨基酸序列的⑶RH3，或選自由以下組成的組的至少兩個重鏈⑶R :具有SEQ ID NO 11的氨 基酸序列的CDRH1、具有SEQ ID NO :12的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO : 13的氨 基酸序列的⑶RH3。在另一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體重 鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基和具有SEQ ID NO :1的氨基酸序列的⑶RH1、具有SEQ ID NO 2 的氨基酸序列的CDRH2和具有SEQ ID NO 3的氨基酸序列的CDRH3，或具有SEQ ID N0 :11 的氨基酸序列的⑶RH1、具有SEQ ID NO : 12的氨基酸序列的⑶RH2和具有SEQ ID NO 13 的氨基酸序列的⑶RH3。在一個更具體的實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括具有SEQ ID N0:7或SEQ ID NO 17的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(或其片段)。在另一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體輕 鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基和選自由以下組成的組的輕鏈CDR :具有SEQ ID NO 4的氨基酸 序列的CDRL1、具有SEQ ID NO :5的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO :6的氨基酸序列 的⑶RL3，或選自由以下組成的組的輕鏈⑶R :具有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的⑶RL1、 具有SEQ ID NO 15的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO 16的氨基酸序列的CDRL3。在另一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體輕 鏈鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基和選自由以下組成的組的至少兩個輕鏈CDR:具有SEQ ID NO 4的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID N0 :5的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO 6的 氨基酸序列的⑶RL3，或選自由以下組成的組的至少兩個輕鏈⑶R:具有SEQ ID N0:14的氨 基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO :15的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO : 16的氨 基酸序列的⑶RL3。在又一個示例性實施方案中，抗原結(jié)合片段可包括如本文所描述的天然人抗體輕 鏈鏈的人框架區(qū)氨基酸殘基和具有SEQ ID NO 4的氨基酸序列的⑶RL1、具有SEQ ID NO 5的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO 6的氨基酸序列的CDRL3，或具有SEQ ID NO 14的氨基酸序列的CDRL1、具有SEQ ID NO :15的氨基酸序列的CDRL2和具有SEQ ID NO:16CDRL3 oSEQ ID NO :8 ^ SEQ ID
no : isWfà*%LW,mFab >ts> F (ab’ )2 )tS> Fd )tS> Fvi^dAbímmMm^tt& ^^ímnFah tt&mF(ah’ )2tf& m[^#^L# HC^>ti ]SU T A*g^4* tJ A CDR g nst&^írt#éKjSife CDR W W L^$f fêM riJK ên 1=M￡^R id ( Jones, P. T. ^ , Nature 321:522-525(1986) ;Verhoeyen, M. ^ , Science239:1534-1536(1988) ), ￡ % ^ tJ fi U ^ If S % ^ # & — ^(Riechmann, L.^ , Nature 332:323-327(1988)) ü c ^ (Queen, C. ^ , Proc. Natl. Acad. Sci.USA86:10029-10033 (1989) )íg^E^SoWnT KMê°í , H^JIí 7, 537,931 ^^,ii ^Lt #$f#ilJA^L#^^iiT%^LJICW^i=f Jiit A°$tiSAM^ìi^^ic^w^^àti#'ié(BP,#^'ié>^ij^) mxmímwmQ'kfàW, # AMS ^SSi^ AS1í SI oPA
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f :(a)S^é^Ej|!c^W #^W^,M^,>tMmiííEl )mo (b)fefé >￡h^^的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的堆積?；诠餐膫?cè)鏈性質(zhì)將天然存在的殘基分為以下的 組(組1)疏水性正亮氨酸、蛋氨酸(Met)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、亮氨酸 (Leu)、異亮氨酸(lie)(組2)中性親水性半胱氨酸(Cys)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)(組3)酸性天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)(組4)堿性天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gin)、組氨酸(His)、賴氨酸(Lys)、精氨酸 (Arg)(組5)影響鏈取向的殘基甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro);和(組6)芳香族色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)非保守置換將使這些種類之一中的一員替代另一個。表1A氨基酸置換
權(quán)利要求
1.抗簇蛋白抗體用于減小包含表達(dá)或分泌簇蛋白的細(xì)胞的腫瘤的體積的用途。
2.如權(quán)利要求I中所限定的用途，其中所述抗簇蛋白抗體選自由多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、分離的人抗體、雜合抗體及其片段組成的組。
3.如權(quán)利要求2所限定的用途，其中所述雜合抗體或其片段包括非人抗體的輕鏈可變區(qū)和人源化抗體的重鏈可變區(qū)。
4.如權(quán)利要求2所限定的用途，其中所述雜合抗體或其片段包括非人抗體的重鏈可變區(qū)和人源化抗體的輕鏈可變區(qū)。
5.如權(quán)利要求I至4中任ー項所限定的用途，其中所述腫瘤是選自由以下組成的組的癌子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、卵巣癌、胰腺癌和結(jié)直腸癌。
6.如權(quán)利要求5所限定的用途，其中所述癌是前列腺癌。
7.如權(quán)利要求5所限定的用途，其中所述癌是乳腺癌。
8.ー種非人親本抗體的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人源化抗體包括包含非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和天然人抗體的人框架區(qū)氨基酸殘基的重鏈可變區(qū)和互補(bǔ)輕鏈，并且其中所述人源化抗體或雜合抗體與簇蛋白特異性地結(jié)合。
9.如權(quán)利要求8所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述天然人抗體包括具有與非人親本抗體的可變區(qū)的三維結(jié)構(gòu)相似的三維結(jié)構(gòu)的可變區(qū)。
10.如權(quán)利要求8所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人源化抗體抑制簇蛋白表達(dá)細(xì)胞或簇蛋白分泌細(xì)胞的遷移、侵襲或生長。
11.如權(quán)利要求8至10中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體，其特征在于4. 49X 1(Γ9Μ±8. 5X KTiq或更佳的親和力。
12.如權(quán)利要求8至11中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述互補(bǔ)輕鏈包含來自天然人抗體輕鏈框架區(qū)的人框架區(qū)氨基酸殘基，所述天然人抗體輕鏈框架區(qū)與所述非人親本抗體的輕鏈框架區(qū)具有至少70%的同一性并在輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)中具有與所述非人親本抗體的對應(yīng)輕鏈互補(bǔ)性決定區(qū)相同或基本上相同的氨基酸。
13.如權(quán)利要求12所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人框架區(qū)氨基酸殘基來自與所述非人親本抗體的輕鏈框架區(qū)具有至少80%同一性的天然人抗體輕鏈框架區(qū)。
14.如權(quán)利要求13所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人框架區(qū)氨基酸殘基來自與非人親本抗體的輕鏈框架區(qū)具有至少83%同一性的天然人輕鏈框架區(qū)。
15.如權(quán)利要求8至14中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人源化抗體重鏈的所述人框架區(qū)氨基酸殘基來自天然人抗體重鏈框架區(qū)，所述天然人抗體重鏈框架區(qū)與所述非人親本抗體的重鏈框架區(qū)具有至少70%的同一性并在重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)中具有與所述非人親本抗體的對應(yīng)重鏈互補(bǔ)性決定區(qū)相同或基本上相同的大量氨基酸。
16.如權(quán)利要求15所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人源化抗體重鏈的所述人框架區(qū)氨基酸殘基來自與所述非人親本抗體的所述重鏈框架區(qū)具有至少73%同一性的天然人抗體重鏈框架區(qū)。
17.如權(quán)利要求16所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人源化抗體重鏈的所述人框架區(qū)氨基酸殘基來自與所述非人親本抗體的所述重鏈框架區(qū)具有至少80%同一性的天然人抗體重鏈框架區(qū)。
18.如權(quán)利要求8至17中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述重鏈可變區(qū)包含至少ー個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
19.如權(quán)利要求18所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述重鏈可變區(qū)包含至少2個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
20.如權(quán)利要求19所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述重鏈可變區(qū)包含3個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
21.如權(quán)利要求8至20中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含至少ー個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
22.如權(quán)利要求21所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含至少2個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
23.如權(quán)利要求22所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述輕鏈可變區(qū)包含3個非人互補(bǔ)性決定區(qū)。
24.如權(quán)利要求8所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述簇蛋白表達(dá)細(xì)胞是癌細(xì)胞。
25.如權(quán)利要求24所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述癌細(xì)胞是人癌細(xì)胞。
26.如權(quán)利要求25所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述人癌細(xì)胞來自選自由以下組成的組的癌子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、卵巣癌、黑素瘤、胰腺癌、肺癌、膀胱癌和結(jié)直腸癌。
27.如權(quán)利要求26所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述癌是前列腺癌。
28.如權(quán)利要求26所述的人源化抗體或雜合抗體，其中所述癌是乳腺癌。
29.ー種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段能夠與簇蛋白結(jié)合并選自由以下組成的組 a.抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有與SEQID NO:25至少80%同一的輕鏈可變區(qū)和/或與SEQ ID NO :29至少80%同一的重鏈可變區(qū)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段相比SEQ ID NO:25或SEQ ID NO :29包括至少ー個氨基酸置換，并且其中所述氨基酸置換在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之外；和 b.抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有與SEQID NO:33至少80%同一的輕鏈可變區(qū)和/或與SEQ ID NO :37至少80%同一的重鏈可變區(qū)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段相比SEQ ID NO:33或SEQ ID NO :37包括至少ー個氨基酸置換，并且其中所述氨基酸置換在互補(bǔ)性決定區(qū)(⑶R)之外。
30.如權(quán)利要求29所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述至少一個氨基酸置換在所述輕鏈可變區(qū)中。
31.如權(quán)利要求29或30所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述氨基酸置換在所述重鏈可變區(qū)中。
32.如權(quán)利要求29至31中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述氨基酸置換是保守的。
33.如權(quán)利要求29至32中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 26的至少90個連續(xù)氨基酸。
34.如權(quán)利要求33所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO27的至少90個連續(xù)氨基酸。
35.如權(quán)利要求34所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO28的至少90個連續(xù)氨基酸。
36.如權(quán)利要求35所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO8的至少90個連續(xù)氨基酸。
37.如權(quán)利要求36所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)為如SEQID NO8中所列出的。
38.如權(quán)利要求29至37中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 30的至少90個連續(xù)氨基酸。
39.如權(quán)利要求38所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQID NO31的至少90個連續(xù)氨基酸。
40.如權(quán)利要求39所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQID NO32的至少90個連續(xù)氨基酸。
41.如權(quán)利要求40所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQID NO7的至少90個連續(xù)氨基酸。
42.如權(quán)利要求41所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)為如SEQID NO7中所列出的。
43.如權(quán)利要求29所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO26的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 30的至少90個連續(xù)氨基酸。
44.如權(quán)利要求43所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO27的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 31的至少90個連續(xù)氨基酸。
45.如權(quán)利要求44所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:28的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 32的至少90個連續(xù)氨基酸。
46.如權(quán)利要求45所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO8的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 7的至少90個連續(xù)氨基酸。
47.如權(quán)利要求46所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含為如SEQIDNO 8中所列出的并且其中所述重鏈可變區(qū)為如SEQ ID NO 7中所列出的。
48.如權(quán)利要求29至32中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 34的至少90個連續(xù)氨基酸。
49.如權(quán)利要求48所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO35的至少90個連續(xù)氨基酸。
50.如權(quán)利要求49所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:36的至少90個連續(xù)氨基酸。
51.如權(quán)利要求50所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO18的至少90個連續(xù)氨基酸。
52.如權(quán)利要求51所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)為如SEQID NO18中所列出的。
53.如權(quán)利要求29至32或48至52中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 38的至少90個連續(xù)氨基酸。
54.如權(quán)利要求53所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO39的至少90個連續(xù)氨基酸。
55.如權(quán)利要求54所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:40的至少90個連續(xù)氨基酸。
56.如權(quán)利要求55所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:17的至少90個連續(xù)氨基酸。
57.如權(quán)利要求56所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)為如SEQID NO:17中所列出的。
58.如權(quán)利要求29所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO34的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 38的至少90個連續(xù)氨基酸。
59.如權(quán)利要求58所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:35的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 39的至少90個連續(xù)氨基酸。
60.如權(quán)利要求59所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO:36的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 40的至少90個連續(xù)氨基酸。
61.如權(quán)利要求60所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含SEQID NO18的至少90個連續(xù)氨基酸并且其中所述重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO 17的至少90個連續(xù)氨基酸。
62.如權(quán)利要求61所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述輕鏈可變區(qū)包含為如SEQIDNO 18中所列出的并且其中所述重鏈可變區(qū)為如SEQ ID NO 17中所列出的。
63.如權(quán)利要求8至62中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體包括恒定區(qū)的氨基酸。
64.如權(quán)利要求63所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述恒定區(qū)的氨基酸來自人抗體。
65.如權(quán)利要求8至64中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，包括人IgG2恒定區(qū)。
66.如權(quán)利要求8至65中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段是 scFv、Fab、Fab’ 或(Fab，)2。
67.如權(quán)利要求8至66中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段與細(xì)胞毒性部分綴合。
68.如權(quán)利要求8至66中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段與可檢測部分綴合。
69.如權(quán)利要求8至67中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段用于治療包含表達(dá)簇蛋白或簇蛋白變體的腫瘤細(xì)胞的癌癥。
70.如權(quán)利要求8至68中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段用于檢測包含表達(dá)簇蛋白或簇蛋白變體的腫瘤細(xì)胞的癌癥。
71.如權(quán)利要求I至68中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段，所述抗體或抗原結(jié)合片段用于預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移。
72.—種分離的抗體或抗原結(jié)合片段，所述分離的抗體或抗原結(jié)合片段能夠與權(quán)利要求I至68中任一項所述的抗體或抗原結(jié)合片段競爭。
73.—種抗原結(jié)合片段，所述抗原結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)非人互補(bǔ)性決定區(qū)氨基酸殘基和人框架區(qū)氨基酸殘基，并且其中所述抗原結(jié)合片段與簇蛋白特異性地結(jié)合并具有比非人親本抗體的抗原結(jié)合片段更佳的親和力。
74.如權(quán)利要求73所述的抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段來自權(quán)利要求8至28中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體。
75.如權(quán)利要求73或74所述的抗原結(jié)合片段，其特征在于17X 10_8M± 2. 97 X IO9或更佳的親和力。
76.一種分離的抗體，所述分離的抗體包含權(quán)利要求73或75中任一項所述的抗原結(jié)合片段的氨基酸序列。
77.一種分離的核酸，所述分離的核酸編碼權(quán)利要求8至72中任一項所述的抗體的所述輕鏈可變區(qū)和/或所述重鏈可變區(qū)、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段的所述輕鏈可變區(qū)和/或所述重鏈可變區(qū)或權(quán)利要求76所述的分離的抗體的所述輕鏈可變區(qū)和/或所述重鏈可變區(qū)。
78.—種載體,所述載體包含權(quán)利要求77所述的分離的核酸。
79.如權(quán)利要求78所述的載體，其中所述載體是哺乳動物表達(dá)載體。
80.一種分離的細(xì)胞，所述分離的細(xì)胞包含權(quán)利要求77所述的分離的核酸，或權(quán)利要求78或79所述的載體或表達(dá)權(quán)利要求8至72中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體。
81.如權(quán)利要求80所述的分離的細(xì)胞,其中所述細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。
82.ー種藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求8至72中任一項所述的抗體、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體和藥學(xué)上可接受的載體。
83.—種組合療法，所述組合療法包括權(quán)利要求82所述的藥物組合物和化學(xué)治療劑。
84.如權(quán)利要求83所述的組合療法，其中所述化學(xué)治療劑包括紫杉烷。
85.如權(quán)利要求84所述的組合療法，其中所述紫杉烷是紫杉醇或紫杉萜。
86.如權(quán)利要求83至85中任一項所述的組合療法，其中所述藥物組合物與所述化學(xué)治療劑同時施用。
87.如權(quán)利要求83至86中任一項所述的組合療法，其中所述藥物組合物和所述化學(xué)治療劑以不同的時間間隔施用。
88.一種降低表達(dá)簇蛋白的癌細(xì)胞生長的方法，所述方法包括向有需要的動物施用抗簇蛋白抗體。
89.如權(quán)利要求88所述的方法，所述方法包括施用權(quán)利要求8至72中任ー項所述的抗體、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體。
90.如權(quán)利要求88或89所述的方法，所述方法還包括施用化學(xué)治療劑。
91.如權(quán)利要求88至90中任一項所述的方法，其中有需要的哺乳動物具有升高的簇蛋白水平。
92.如權(quán)利要求88至90中任一項所述的方法，其中所述有需要的哺乳動物具有與升高的簇蛋白水平相關(guān)的疾病。
93.如權(quán)利要求88至90中任一項所述的方法，其中所述有需要的哺乳動物容易攜帶能夠進(jìn)行上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。
94.如權(quán)利要求88至90中任一項所述的方法，其中所述有需要的哺乳動物具有表達(dá)或分泌簇蛋白的腫瘤。
95.如權(quán)利要求88至94中任一項所述的方法，其中所述有需要的哺乳動物具有癌。
96.如權(quán)利要求95所述的方法，其中所述癌是前列腺癌。
97.如權(quán)利要求95所述的方法，其中所述癌是乳腺癌。
98.ー種治療與簇蛋白表達(dá)相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括向有需要的動物施用權(quán)利要求8至72中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體。
99.權(quán)利要求8至72中任一項所述的人源化抗體或雜合抗體、如權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體在制備用于治療與簇蛋白表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物中的用途。
100.ー種生成人源化或雜合抗簇蛋白抗體的方法，所述方法包括表達(dá)包含能夠與簇蛋白特異性結(jié)合的非人抗體的非人重鏈CDR氨基酸殘基和天然人抗體重鏈可變區(qū)的框架區(qū)殘基的重鏈可變區(qū)和表達(dá)互補(bǔ)輕鏈可變區(qū)。
101.如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述天然人抗體重鏈可變區(qū)具有a)與所述非人抗體的重鏈的三維結(jié)構(gòu)相似或相同的三維結(jié)構(gòu)，b)具有與所述非人抗體的重鏈框架區(qū)至少70%同一的氨基酸序列的框架區(qū)，和/或c)重鏈CDR中與所述非人重鏈CDR氨基酸殘基相同或基本上相同的大量氨基酸殘基。
102.ー種生成人源化或雜合抗簇蛋白抗體的方法，所述方法包括表達(dá)包含能夠與簇蛋白特異性結(jié)合的非人抗體的非人輕鏈CDR氨基酸殘基和天然人抗體輕鏈可變區(qū)的框架區(qū)氨基酸的輕鏈可變區(qū)和表達(dá)互補(bǔ)重鏈可變區(qū)。
103.如權(quán)利要求102所述的方法，其中所述天然人抗體輕鏈可變區(qū)具有a)與所述非人抗體的輕鏈的三維結(jié)構(gòu)相似或相同的三維結(jié)構(gòu)，b)具有與所述非人抗體的輕鏈框架區(qū)至少70%同一的氨基酸序列的框架區(qū)，和/或c)輕鏈CDR中與所述非人重鏈CDR氨基酸殘基相同或基本上相同的大量氨基酸殘基。
104.ー種試劑盒，其包括ー個或多個小瓶，所述小瓶包括權(quán)利要求8至72中任ー項所述的抗體、權(quán)利要求73至75中任一項所述的抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求76所述的分離的抗體、權(quán)利要求77所述的分離的核酸或權(quán)利要求78或79所述的載體。
105.一種用于在有需要的個體中減小包含表達(dá)或分泌簇蛋白的細(xì)胞的腫瘤的體積的方法，所述方法包括施用抗簇蛋白抗體。
106.如權(quán)利要求105所述的方法，其中所述抗簇蛋白抗體選自由多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、分離的人抗體、雜合抗體和其片段組的組。
107.如權(quán)利要求106所述的方法，其中所述雜合抗體或其片段包括非人抗體的輕鏈可變區(qū)和人源化抗體或人抗體的重鏈可變區(qū)。
108.如權(quán)利要求106所述的方法，其中所述雜合抗體或其片段包括非人抗體的重鏈可變區(qū)和人源化抗體或人抗體的輕鏈可變區(qū)。
109.如權(quán)利要求105至108中任一項所述的方法，其中所述腫瘤是選自由以下組成的組的癌子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、卵巣癌、胰腺癌和結(jié)直腸癌。
110.如權(quán)利要求109所述的方法，其中所述癌是前列腺癌。
111.如權(quán)利要求109所述的方法，其中所述癌是乳腺癌。
全文摘要
本發(fā)明開了與簇蛋白特異性結(jié)合的新穎抗體和抗原結(jié)合片段。在一些實施方案中，抗體阻滯簇蛋白的生物學(xué)活性并且可用于針對某些癌癥，更具體地用于針對諸如子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、卵巢癌、胰腺癌和結(jié)直腸癌的癌癥的組合物中。本發(fā)明還涉及表達(dá)人源化抗體或雜合抗體的細(xì)胞。此外，還公開了利用抗體和片段檢測和治療癌癥的方法。
文檔編號A61P35/00GK102666585SQ201080053106
公開日2012年9月12日 申請日期2010年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月24日
發(fā)明者G·B·特倫布利, M·菲利翁, T·蘇雷 申請人:加拿大國家研究委員會, 阿萊斯亞生物療法股份有限公司