專利名稱：細(xì)胞取樣裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)胞收集裝置。具體地，本發(fā)明涉及用于沿食道排列的細(xì)胞的取樣的細(xì)胞收集裝置。
背景技術(shù)：
已知某些細(xì)胞收集裝置。具體來說，膠囊海綿型細(xì)胞收集裝置描述于PCT專利申請第PCT/GB2006/003913號中。這種裝置包含能夠從食道的表面收集細(xì)胞的磨料，以及將其由患者內(nèi)收回的工具。通常，這種裝置是可吞咽的。已知的裝置通常通過吞咽呈壓縮或充填形式的磨料而操作。在達(dá)到胃腔后，將該 裝置維持在壓縮或充填形式的材料被溶解或削弱，以允許被壓縮的材料擴張回其原始尺寸。在此階段之后，通過物理性地將裝置從受試者口中拖曳出來而將其收回。此拖曳導(dǎo)致裝置從胃腔移出向上回穿過食道以及穿出患者的口腔和口。在沿受試者食道移動的過程中，食道內(nèi)層的細(xì)胞被收集于該裝置的磨料部分中。這些細(xì)胞隨后被分析以幫助對受試者的診斷或預(yù)后。一種如上所述的已知細(xì)胞取樣裝置稱為膠囊海綿。該裝置包含可壓縮的海綿狀材料。其一般與棉線連接。然后通過例如并入到明膠膠囊中而將裝置壓縮成可吞咽的形式。這種已知裝置一般已具有作為收回工具而連接的棉繩。這是個問題，因為棉繩能夠在受試者內(nèi)部脫落纖維。此外，此類型的棉繩可能過于粗糙。另外，材料可能在使用期間從繩上分離。此外，已知裝置受到遺落在被取樣的受試者內(nèi)部的問題的困擾。這一般是經(jīng)由未壓縮的裝置與用于其收回的繩分離而發(fā)生。此外，已知的裝置可能由于繩對口咽的摩擦而難以吞咽。因此，已知的細(xì)胞取樣裝置受到一系列問題和缺點的困擾。本發(fā)明設(shè)法克服與現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的問題。發(fā)明概述本發(fā)明人提供對已知細(xì)胞收集裝置的改進(jìn)。本發(fā)明人已使用連接至裝置的可壓縮磨料的不同繩或線以便改進(jìn)裝置的可吞咽性和易用性。此外，本發(fā)明人已設(shè)計了用于將繩連接至磨料的新連接系統(tǒng)。該連接系統(tǒng)包含提供優(yōu)良強度的某些特定類別的結(jié)。此外，所用的結(jié)有利地表明減少裝置在使用期間在受試者中的遺落。因此，本發(fā)明提供更強和更安全的細(xì)胞取樣裝置。該裝置還具有優(yōu)良的可吞咽性和易用性/易收回性的益處。因此，在一個方面，本發(fā)明提供一種可吞咽的細(xì)胞取樣裝置，其包含能夠從食道的表面上收集細(xì)胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含繩，其特征在于所述繩通過套結(jié)(hitch knot)連接至所述磨料。適宜地，所述套結(jié)為雙反手結(jié)(double overhand knot)。適宜地，所述磨料是可壓縮的。適宜地，所述磨料包含網(wǎng)狀聚氨酯。適宜地，所述繩經(jīng)由設(shè)置在所述磨料的表面下方的繩的環(huán)而連接至所述磨料，所述環(huán)由所述套結(jié)閉合。
適宜地，所述磨料被壓縮，并且其中所述磨料通過可溶性膠囊而維持在壓縮狀態(tài)。適宜地，所述可溶性膠囊包含明膠膠囊。適宜地，在浸入30°C水中后5分鐘內(nèi)，所述膠囊能夠溶解并且所述可壓縮的磨料能夠回復(fù)至其未壓縮的尺寸。適宜地，·所述裝置在遠(yuǎn)離可吞咽的磨料的末端包含不可吞咽的元件。在另一方面，本發(fā)明涉及一種試劑盒，其包含根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，和用于檢測細(xì)胞標(biāo)記物的試劑。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于在受試者中幫助診斷巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的方法，所述方法包含用如上所述的裝置對所述受試者的食道的細(xì)胞表面取樣以及分析細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示巴雷特或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的存在的增加的可能性。如上所述的試劑盒或如上所述的方法,其中所述標(biāo)記物選自表I所示的組。如上所述的試劑盒或如上所述的方法,其中所述標(biāo)記物選自表2所示的組。如上所述的試劑盒或如上所述的方法，其中所述標(biāo)記物選自表3所示的組。發(fā)明詳述本發(fā)明的優(yōu)選實施方案是‘膠囊海綿’裝置，其中所述磨料包含海綿或海綿狀材料如聚氨酯篩網(wǎng)，并且其中所述材料被填充或壓縮到明膠膠囊中以便于吞咽。因此，通用術(shù)語‘海綿’或‘膠囊海綿’有時用于論述本發(fā)明的裝置以便于理解，但顯然，可想到本發(fā)明的其它實施方案并且本發(fā)明不應(yīng)被理解為限于優(yōu)選的膠囊海綿實施方案。術(shù)語‘包含’ (comprises, comprise, comprising)應(yīng)理解為具有其在本領(lǐng)域內(nèi)的通常含義，即，包括所敘述的特征或特征的組，但該術(shù)語不排除也存在任何其它所敘述的特征或特征的組。收回本發(fā)明的裝置適宜地包含用于從被取樣的受試者中收回的工具。適宜地，用于收回的工具包含繩。該繩有時在本文中稱為線/帶。所用的繩應(yīng)適宜地為滑溜的。所謂滑溜的，是指具有低摩擦系數(shù)。這具有使裝置易于吞咽的優(yōu)點。這還具有使裝置易于收回的優(yōu)點。另一優(yōu)點為減少患者在使用期間的不適。所謂低摩擦系數(shù)，是指與具有類似直徑的棉繩相比更低的摩擦系數(shù)。所用的繩應(yīng)適宜地為光滑的。這具有更容易吞咽的優(yōu)點。這還具有避免與口中、喉中或口咽中的粘膜粘著的優(yōu)點。尺寸適宜地，應(yīng)選擇繩或線，以避免在使用期間損傷受試者的口咽。因此，在一個方面，本發(fā)明涉及以前僅用作縫合材料的手術(shù)線的新用途。縫合材料是用于本發(fā)明的適宜的繩的實例。適宜地，使用盡可能細(xì)的繩，同時維持足夠的粗細(xì)度以避免在使用期間割傷患者。應(yīng)注意選擇繩的正確粗細(xì)度。過粗的繩可能難以吞咽，而過細(xì)的繩可能導(dǎo)致喉部劃破。該繩應(yīng)當(dāng)適宜地粗，以避免在使用期間割傷患者。因此，適宜的是該繩具有至少O. 3mm的最小直徑。該繩應(yīng)當(dāng)適宜地細(xì)，以便使不適感最小并且提高可吞咽性。因此，適宜的是該繩具有O. 7mm的最大直徑。因此，根據(jù)本發(fā)明可以使用的繩適宜地包含具有O. 3至O. 7mm的直徑范圍、更適宜地為O. 4至O. 6mm的直徑范圍的繩。最適宜的繩直徑為大約O. 5mm,最適宜地為O. 5mm。應(yīng)注意，本文中對繩直徑所給出的值毫無疑問服從于通常的測量公差。具體來說，給出的數(shù)字應(yīng)當(dāng)允許+/-0. 05mm的公差。因此，O. 5mm的尺寸應(yīng)理解為包括具有所示公差的O. 45 至 O. 55mm。繩的長度對操作者而言是個問題。該繩需要足夠長以允許將裝置部署到受驗者的胃腔中，同時保留足夠的繩延伸到口腔中或更遠(yuǎn)，以允許開始收回。因此，最佳繩長度是從口腔至胃腔的距離加額外長度，如5cm，以允許抓緊并收回該裝置。更長的繩可能是有利的， 以便提供拉取的容易性和/或向受試者提供安慰。適宜地,繩至少為60cm長。適宜地,繩小于75cm長。適宜地，繩長度在60至75cm范圍內(nèi)，適宜地為64至69cm范圍內(nèi)，適宜地為約67cm長，適宜地為67cm長。強度繩必須被選擇為具有防止在拉取時斷裂的必要強度。適宜地,繩對至少2. 4Kg、適宜地對至少3. 2Kg、適宜地對至少3. 5Kg、適宜地對至少4. 6Kg的負(fù)載是抗斷裂的。其它性質(zhì)適宜地，所用的線或繩為淺色，如白色。這具有受到受試者歡迎的優(yōu)點。適宜地，所用的磨料或膠囊是深色，如黑色。這具有在使用期間受到受試者歡迎的優(yōu)點。這具有另外的優(yōu)點，既一旦從受試者收回，則掩飾截留在裝置的研磨部分上的任何活檢材料的外觀或使得該外觀較不突出。這可以幫助減少受試者在操作期間的不適。適宜地，該繩包含適于體內(nèi)使用的繩。適宜地，該繩包含批準(zhǔn)體內(nèi)使用的繩。批準(zhǔn)是指由相關(guān)衛(wèi)生當(dāng)局認(rèn)可，例如由UK MHRA(藥品和保健品管理局)認(rèn)可。適宜地，該繩不應(yīng)在受試者內(nèi)部脫落纖維。適宜地，該繩應(yīng)不顯示從繩上將材料遺落到受試者的消化系統(tǒng)中。該繩可以包含手術(shù)縫合材料。在非細(xì)胞收集端，適宜的是將繩拴至錨狀物以防止吞咽。適宜地，錨狀物可以包含紙板。連接用于收回的工具(例如繩)必須連接至裝置的細(xì)胞取樣磨料。本發(fā)明的關(guān)鍵教導(dǎo)在于使用特定的結(jié)系統(tǒng)將繩連接至裝置的研磨元件。適宜地，應(yīng)使用雙半結(jié)。特別適宜的雙半結(jié)的實例為雙反手結(jié)。該類結(jié)布置提供以下優(yōu)點即第一半結(jié)落在第二半結(jié)上或抵靠在第二半結(jié)上。這是有利的，因為在收回期間越多力被施加至繩，則該結(jié)就會越緊(而不是更松)。本發(fā)明中所用結(jié)系統(tǒng)的優(yōu)點在于，繩通過環(huán)連接至磨料。伴隨施加的力，環(huán)的尺寸可以減小。明確的說，環(huán)的尺寸的減小會部分束緊或壓縮磨料的內(nèi)部部分。然而，重要的是，該結(jié)設(shè)置不會顯著減小磨料的直徑。具體來說，該環(huán)設(shè)置不會顯著降低磨料的橫向直徑。所謂橫向直徑，是指在垂直于收回期間由繩施加的力的軸線上的直徑。這樣具有的優(yōu)點在于，盡管磨料的形狀可以在收回的力的作用下在環(huán)的束緊期間稍微改變，但磨料的橫向直徑維持基本恒定，并因此保持收回期間對食道的細(xì)胞有效地取樣。針對以下對將繩連接 至海綿的結(jié)進(jìn)行優(yōu)化對許多結(jié)進(jìn)行了研究，它們與滑溜的繩材料一起使用，所述材料包括當(dāng)潤濕時，例如當(dāng)與來自口或胃的粘液混合時，可以變得更加滑溜的材料?？梢允褂枚鄠€結(jié)。適宜地，僅使用單個結(jié)，其具有簡化裝置構(gòu)造的優(yōu)點。當(dāng)然，單個結(jié)可以包含多個套或元件，并且是指單一的整個結(jié)，而不是單獨結(jié)內(nèi)的單個線元件。適宜地，裝置的結(jié)具有一個或多個以下性質(zhì)(i)本發(fā)明的結(jié)在張力作用下適宜地拉緊以防止海綿在移除時從繩上脫離。(ii)該結(jié)適宜地不會在處于張力作用下時顯著影響諸如海綿的磨料的外徑。(iii)該結(jié)適宜地不將繩材料的外伸環(huán)留在諸如海綿的磨料的底部。適宜地，裝置的結(jié)具有所述性質(zhì)中的兩個或更多個；適宜地，裝置的結(jié)具有所有三個所述性質(zhì)。下文討論具有這些性質(zhì)的結(jié)的類型的實例以及特定結(jié)的實例。兩半結(jié)(twohalf hitch knot)兩個半結(jié)是一類結(jié)，明確地說是綁扎結(jié)(binding knot)或套結(jié)。其由系在桿周圍的反手結(jié)(overhand knot),和隨后的半結(jié)(half-hitch)組成。等同地,其由在桿周圍的半圈(half-turn),和隨后的在靜置部分(standing part)周圍的活動末端(running end)的雙套結(jié)(clove hitch)組成。此結(jié)有時也稱為自身上的雙套結(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會熟悉本文所用的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)名稱和術(shù)語，并且會因此能夠在沒有進(jìn)一步指導(dǎo)的情況下打這些結(jié)。盡管如此，為易于理解，提供以下用于拴兩個半結(jié)的三步法-通過在柱周圍形成順時針的環(huán)開始，并且繩索的工作端處于上部。使工作端穿過該環(huán)。此時，得到在該柱周圍的反手結(jié)。-使工作端向下并向左方。使其在靜置端下方成環(huán)。拖曳該工作端穿過剛才形成的環(huán)，拉緊，并且沿靜置端將該結(jié)滑動至桿。-正確拴好的兩個半結(jié)類似于拴在線的靜置端周圍的雙套結(jié)，而非雙合結(jié)(cowhitch)。在對本文中所示結(jié)的討論中，必須記住裝置的上下文。例如，很明顯，沒有‘柱’包括在本發(fā)明的裝置中?！瘍H僅是解釋拴結(jié)的公共點，并且在本發(fā)明的上下文中應(yīng)理解為正在其周圍拴結(jié)的材料，例如磨料的核的中心(當(dāng)繩適宜地運行于材料的表面下方，從而經(jīng)過裝置的磨料收集器部分的內(nèi)部周圍時)。替代的結(jié)適宜地，一個或多個以下的結(jié)可以用于連接錨狀套結(jié)(這是套結(jié)中的變化)。適宜地，該結(jié)為套結(jié)。除不適宜的單套結(jié)以外，所有類型的套結(jié)均可能潛在地用于連接。應(yīng)牢記，某些套結(jié)很復(fù)雜并因此對制造而言不太期望和/或不太實用。適宜地，該結(jié)為簡單的套結(jié)，其具有易于制造的優(yōu)點。
替代的套結(jié)替代的環(huán)結(jié)(ring hitching),錨狀彎頭變體(anchor bend variant),包索吊結(jié)(bale sling hitch),木桶吊結(jié)(barrel hitch),單編結(jié)(becket hitch),掛結(jié)(blackwallhitch),普魯士結(jié)(blake ' s hitch),帆桿結(jié)(boom hitch),底部負(fù)載釋放結(jié)(bottomloaded release hitch),帆索結(jié)(bunt line hitch),螺旋掛結(jié)(cat' s paw),鎖鏈結(jié)(chain hitch), clinging clara,雙套結(jié)，連續(xù)環(huán)結(jié)(continuous ring hitching),雙合結(jié)變體，帶栓扣雙合結(jié)(cow hitch with toggle),雙合結(jié)，雙半結(jié)，F(xiàn)arrimond摩擦結(jié)，加達(dá)結(jié)(garda hitch),活拖網(wǎng)索(Ground-line hitch),半結(jié)，掛馬結(jié)(halter hitch),highpoint 結(jié)，馬賊結(jié)(highwayman1 s hitch),活索結(jié)(hitching tie),冰柱結(jié)(iciclehitch),石錨結(jié)(killick hitch), knute 結(jié),駁船結(jié)(lighterman, s hitch),馬格納斯結(jié)(magnus hitch),吊鋪捆結(jié)(marline hitching)，纜維結(jié)(marlinespike hitch),方萁桿結(jié)(masthead knot),副官索(midshipman' s hitch),意大利結(jié)(munter hitch),意大利摩擦結(jié)(munter friction hitch),刺網(wǎng)結(jié)(ossel hitch),帕洛馬結(jié)(pa lomar knot),桅頂結(jié)(pile hitch),攀緣結(jié)(prusik knot),反向半結(jié)(reverse half hitches),圓結(jié)(roundhitch),系木結(jié)(round turn and two half hitches), 7jC 手抓握結(jié)(sailor' s grippinghitch),水手結(jié)(sailor, s hitch),西伯利亞結(jié)(Siberian hitch),單結(jié)(single hitch),小艇結(jié)(slippery hitch),斯內(nèi)爾結(jié)(snell knot),依彳畏結(jié)(snuggle hitch),拉繩結(jié)(taut-line hitch),曳木結(jié)(timber hitch), trilene 結(jié),貨運索結(jié)(trucker' s hitch),拖船結(jié)(tugboat hitch)，單一節(jié)(uni knot)，車夫結(jié)(wagoner' s hitch)。最適宜地，所述套結(jié)為雙反手結(jié)。這具有易拴的優(yōu)點。該結(jié)具有上述給定的性質(zhì)(i)、(ii)和(iii)中的每一個。其它優(yōu)點可以從本申請的實施例部分顯而易見。適宜地，在本發(fā)明中不使用雙環(huán)稱人結(jié)(Double loop bow line knot);適宜地，連接不包含雙環(huán)稱人結(jié)。已知的裝置未使用本文所述的結(jié)系統(tǒng)。已知的裝置僅使用了全結(jié)，而不是半結(jié)。具體來說，已知的裝置使用了多個“老奶奶結(jié)(granny knot) ”并且未如本文所述使用用于連接的可滑動套索系統(tǒng)。自由端繩的自由端是指在繩的細(xì)胞收集器端處的結(jié)之后的自由部分。適宜地，自由端為至少1cm。適宜地，自由端為I. O至2. Ocm。適宜地，自由端可以為至少I. 5cm,適宜地為至少I. 7cm，適宜地為2. Ocm0有問題的結(jié)不適宜的結(jié)包括接繩結(jié)(Sheet Bend)-該結(jié)不應(yīng)使用，因為其很滑溜并可能經(jīng)不起繩上的拖曳力；雙接繩結(jié)不應(yīng)使用，因為其很滑溜并可能經(jīng)不起繩上的拖曳力并還可能對實施而言較復(fù)雜；平結(jié)(reef knot)不應(yīng)在滑溜的線/繩上使用；雙套結(jié)是用于成環(huán)的線或繩的結(jié)，不用于單個自由端的線或繩，并且在自由端處留下兩根線，這對本發(fā)明裝置是不可接受的，所以適宜的是不應(yīng)使用雙套結(jié)。除上述以外，應(yīng)注意，稱人結(jié)是滑溜的；該結(jié)的結(jié)構(gòu)類似于接繩結(jié)；因此適宜的是避免稱人結(jié)。因此，適宜的是，對磨料的連接不包含本段中提及的結(jié)。非吞咽末端處的連接
應(yīng)注意，對連接和結(jié)的討論是指磨料與繩的接合。繩的非磨料端(即非吞咽末端)可以接合至另一元件，例如用于防止意外吞咽，有利于拉取或任何其它目的。繩在非吞咽末端處的接合可以通過任何適宜的方式進(jìn)行，例如焊接、縫合、裝訂、編織、粘合或包括打結(jié)在內(nèi)的任何其它方法，但當(dāng)通過打結(jié)而接合時，該結(jié)可以是用于安全緊固的任何適宜的結(jié)，并且以針對將繩接合至磨料的作為本發(fā)明的一部分所描述的方式進(jìn)行限制。磨料/膠囊磨料適宜地包含海綿或海綿狀材料。磨料的品質(zhì)在下文更詳細(xì)討論。關(guān)鍵特征在于該材料需要具有足夠的研磨性來盡可能多地收集細(xì)胞并同時避免損傷食道內(nèi)壁。這些有利特征可以例如通過使用海綿或蜂窩狀的磨料來實現(xiàn)。該多孔或成穴形式的材料使得在材料內(nèi)部或表面上的細(xì)胞的收集和/或夾帶最大化。此外，海綿狀或蜂窩狀材料(如網(wǎng)狀聚氨酯)中的空腔或中空還有利于壓縮，這有利于在例如通過可溶性膠囊給藥時減小材料的尺寸。適宜地，該材料具有均勻的形狀。適宜地，該材料具有均勻的直徑。適宜地，未壓縮的形狀是圓的，例如球狀。適宜地，未壓縮的直徑是3cm。適宜地，設(shè)定材料的尺寸以便適宜地以壓縮或充填的形式匹配入可吞咽的膠囊(例如明膠膠囊)中。適宜地，所述材料在被壓縮在膠囊內(nèi)部時不破壞該膠囊，而僅一旦例如在受試者內(nèi)部使用時才變形或使膠囊破碎。 適宜地，該膠囊具有均勻的形狀。適宜地，該膠囊具有均勻的尺寸。適宜地，該膠囊快速地溶解，例如在5分鐘內(nèi)溶于30°C水中。適宜地，所述膠囊整體完整，并且不具有任何破裂和尖銳的末端。這具有防止在吞咽時損傷的優(yōu)點。其它有利特征適宜地，本發(fā)明的裝置可以被輻照以便清潔。適宜地，本發(fā)明的裝置可以被輻照以便無菌。在最優(yōu)選的實施方案中，該裝置具有以下性質(zhì)-白色繩-繩的最小長度60cm-繩表面光滑-細(xì)胞收集磨料(如海綿)內(nèi)部的繩圈應(yīng)當(dāng)正好在表面下成環(huán)-在細(xì)胞收集器端處的結(jié)之后的繩的自由端最小為Icm-經(jīng)由結(jié)一雙套結(jié)將繩連接至細(xì)胞收集器-繩抗斷裂性最小要求為2.4kg-在非細(xì)胞收集器端將繩拴至紙板以防止吞咽在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于幫助在受試者中診斷巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的方法，所述方法包含對所述受試者的食道的細(xì)胞表面取樣，以及分析細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示巴雷特或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常存在的增加的可能性。優(yōu)選地，所述取樣不針對食道內(nèi)的具體位點。優(yōu)選地，僅對食道的表面取樣。這具有避免更侵入性取樣技術(shù)的優(yōu)點，所述更侵入性取樣技術(shù)例如穿透到食道的表面下的活檢收集技術(shù)。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于幫助診斷巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的非侵入式方法，所述方法包含分析來自受試者食道的表面的細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示巴雷特或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常存在的增加的可能性。在此實施方案中優(yōu)選的是，對細(xì)胞的實際取樣并非本發(fā)明方法的一部分。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于幫助診斷在受試者中的鱗狀細(xì)胞癌的方法，所述方法包含對所述受試者的食道的細(xì)胞表面取樣，以及分析細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示鱗狀細(xì)胞癌存在的增加的可能性。優(yōu)選地，所述取樣不針對食道內(nèi)的具體位點。優(yōu)選地，僅對食道的表面取樣。這具有避免更侵入性取樣技術(shù)的優(yōu)點，所述更侵入性取樣技術(shù)例如穿透到食道的表面下的活檢收集技術(shù)。在另一方面，本發(fā)明涉及一種用于幫助診斷鱗狀細(xì)胞癌的非侵入式方法，所述方 法包含分析來自受試者食道的表面的細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示鱗狀細(xì)胞癌存在的增加的可能性。在此實施方案中優(yōu)選的是，對細(xì)胞的實際取樣并非本發(fā)明方法的一部分。優(yōu)選，本發(fā)明的方法在體外進(jìn)行。優(yōu)選地對于巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常而言，該標(biāo)記物是非鱗狀細(xì)胞標(biāo)記物。優(yōu)選地，該標(biāo)記物是細(xì)胞增殖的標(biāo)記物。這對本發(fā)明的鱗狀細(xì)胞癌實施方案來說是優(yōu)選的。優(yōu)選地,該標(biāo)記物是柱狀細(xì)胞的標(biāo)記物。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的方法，其中對食道的細(xì)胞表面的取樣包含以下步驟(i)將如上所述的可吞咽的裝置引入到受試者中，(ii)通過穿過食道拉取來收回裝置，和(iii)從該裝置中收集細(xì)胞。優(yōu)選地，步驟(i)包含將如上所述的可吞咽的裝置引入受試者的胃中。試劑盒在另一方面，本發(fā)明提供一種包含如上所述的裝置的試劑盒。適宜地，所述試劑盒還包括局部麻醉劑。優(yōu)選地，所述局部麻醉劑是噴霧劑或錠劑，優(yōu)選是噴霧劑。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包括用于在拉取之后接收所述可吞咽的裝置的容器，所述容器中具有一定量的防腐液。優(yōu)選地，該容器是防水容器。優(yōu)選地，防腐液是細(xì)胞制備流體。優(yōu)選地，所述流體是制造用于取樣細(xì)胞的檢查的載玻片的稀制備流體。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其中所述裝置包含膠囊海綿。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其中所述可吞咽的裝置包含例如帶或繩的拉取工具。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包含用于割斷所述拉取工具的裝置。優(yōu)選地，所述裝置包含刀片或剪刀。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包含用于向受試者施用可飲用流體(如水)的容器。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包含手套。這些有利地保護(hù)樣品以免在拉取裝置之后被污染。優(yōu)選地，所述試劑盒還包含用于檢測細(xì)胞標(biāo)記物的試劑。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包含用于檢測至少一個標(biāo)記物的試劑，所述標(biāo)記物選自由表I所示的標(biāo)記物組成的組、或由表2所示的標(biāo)記物組成的組、或由表3所示的標(biāo)記物組成的組。
在另一方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，其還包含防水容器和防腐液。優(yōu)選地，所述液體用于液基細(xì)胞學(xué)檢查，優(yōu)選地，所述流體是制造用于取樣細(xì)胞檢查的載玻片的市售稀制備流體。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的試劑盒，其還包含局部麻醉性噴霧劑或錠劑。在另一方面，本發(fā)明提供如上所述的裝置在診斷巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常中的用途。巴雷特食道和發(fā)育異常巴雷特食道可以在沒有發(fā)育異常的情況下發(fā)生。每年，患巴雷特食道的患者的大約I %會發(fā)展成發(fā)育異常。在任意給定時間，患巴雷特食道的患者的大約20%會患有發(fā)育異常。癌癥(如腺癌)由發(fā)育異常發(fā)展而來，并且被視為發(fā)育異常的一種極端形式，即便這些病況在病理上明確不同。腺癌被視為發(fā)育異常的一種極端形式，并且在本文中討論其檢測和診斷。因此，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明可以應(yīng)用于檢測和診斷具有可識別的不連續(xù)階段的單一進(jìn)展性疾病狀態(tài)。這些階段包含巴雷特食道，巴雷特食道相關(guān)的發(fā)育異常，所述發(fā)育異常包括由此引發(fā)的腺癌。食道中細(xì)胞的正常狀態(tài)為鱗狀上皮的正常狀態(tài)。在巴雷特食道中，這些細(xì)胞呈現(xiàn)柱狀上皮的特性，并且當(dāng)它們經(jīng)過上述疾病狀態(tài)發(fā)展時經(jīng)受進(jìn)一步的變化。因此，食道中的非鱗狀細(xì)胞是異常的，并且與巴雷特食道相關(guān)以及潛在地與發(fā)育異常和本文討論的更嚴(yán)重異常相關(guān)。表面取樣和技術(shù)所述裝置有利于使用可吞咽的磨料從食道的表面對細(xì)胞取樣，所述磨料從患者中被收回并且隨后從其分離細(xì)胞用于分析。優(yōu)選地，基本上食道的整個表面皆被取樣，優(yōu)選整個表面，如全部內(nèi)腔。所謂研磨性，是指該材料能夠從食道的內(nèi)表面移除細(xì)胞。顯然，由于這意味著在受試者的食道中使用，所以‘研磨性’必須依據(jù)應(yīng)用來解釋。最佳地，磨料需要具有足夠的研磨性，以收集盡可能多的細(xì)胞，而不導(dǎo)致對受試者食道內(nèi)層的損傷。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語‘研磨性’具有上文給出的含義，其可以通過如下來測試使材料以合適的量/構(gòu)造穿過食道并且對其進(jìn)行檢查以確定細(xì)胞是否已從食道移除。材料必須具有足夠的研磨性，以對食道中存在的任何發(fā)育異常細(xì)胞取樣。優(yōu)選地，材料具有足夠的研磨性，以對存在的任何巴雷特或腺癌細(xì)胞取樣。在最優(yōu)選的實施方式中，優(yōu)選的是材料具有足夠的研磨性，以能夠?qū)φ麄€食道取樣，即，使得一些鱗狀細(xì)胞與可能存在的任何巴雷特和/或柱狀和/或腺癌細(xì)胞一起被收集。這是有利的，因為鱗狀細(xì)胞比發(fā)育異常細(xì)胞更難以移除，并且因此其取樣為操作者提供對照，使得如果正常鱗狀細(xì)胞被材料移除，則未取樣到所關(guān)注的細(xì)胞如巴雷特或發(fā)育異常細(xì)胞(如果存在的話)(其比正常鱗狀細(xì)胞更容易移除)的機會相應(yīng)地很小。優(yōu)選地，可吞咽的磨料是可擴張的。在此實施方案中優(yōu)選的是，磨料在吞咽時比在拉取時尺寸更小?？蓴U張的材料可以簡單地為壓縮的彈性材料，使得當(dāng)從壓縮狀態(tài)釋放時，其會再次擴張回近似其未壓縮尺寸的尺寸?；蛘撸淇梢允抢缭谖账粤黧w后擴張至超過其原始尺寸的最終尺寸的材料。
換句話說，優(yōu)選的是該裝置的材料在吞咽和拉取之間擴張、溶脹、膨脹或以其它方式增加尺寸。優(yōu)選地，該裝置可自動擴張，即在吞咽和擴張之間不需要進(jìn)一步干預(yù)。優(yōu)選地，該裝置不可膨脹。優(yōu)選地，該裝置在吞咽后約束移除之后，通過展開、鋪開、伸開或以其它方式增長尺寸。優(yōu)選地，該裝置的材料是可壓縮的，并且在吞咽之后回復(fù)近似其未壓縮的尺寸的尺寸。優(yōu)選地，該裝置由被壓縮的材料構(gòu)建，所述被壓縮的材料被可釋放地約束在壓縮狀態(tài)下。優(yōu)選地，該材料在吞咽之后從約束中釋放，允許裝置/材料在拉取之前的擴張。優(yōu)選地，該裝置包含被壓縮成膠囊形式的可壓縮材料。優(yōu)選地，可壓縮材料呈海綿材料的形式。優(yōu)選地，被壓縮的海綿至少部分地被可溶和/或可消化的包衣(如膠囊包衣)所包圍。優(yōu)選地，海綿是不可消化的。優(yōu)選地，該海綿包含聚氨酯如聚氨酯海綿，優(yōu)選為網(wǎng)狀聚氨酯。優(yōu)選地，膠囊包衣至少部分地由明膠形成。優(yōu)選地，膠囊包衣完全由明膠形成。在一個實施方案中，可能期望的是用可消化的材料制造整個裝置，以在裝置遺落于受試者中的情況下增加安全性。自然地，磨料需要以比膠囊更慢的速率被消化，并且該繩需要類似地被緩慢消化。優(yōu)選地，磨料是不可消化的。優(yōu)選地，繩是不可消化的。優(yōu)選地，該裝置是膠囊海綿。如從說明書中顯而易見的，膠囊海綿是包含可壓縮海綿作為磨料的裝置，所述海綿被壓縮成膠囊形狀，所述膠囊形的被壓縮的海綿優(yōu)選通過可溶和/或可消化的材料(如明膠)的至少部分包衣而被可逆地約束在其壓縮狀態(tài)下。優(yōu)選地，在垂直于食道的軸線的平面中，裝置的擴張的(如減壓的)磨料為大約3cm。優(yōu)選地，這是食道腔的近似直徑。更優(yōu)選地，這比食道腔的直徑稍微大，從而有利地確保在拉取/取樣進(jìn)行時與食道腔的內(nèi)表面的良好接觸。本發(fā)明的特征在于，取樣不針對(例如可視地針對)食道的任何具體部分。優(yōu)選地，食道表面的至少10%被取樣，優(yōu)選至少20%被取樣，優(yōu)選至少30%被取樣，優(yōu)選至少40%被取樣，優(yōu)選至少50%被取樣，優(yōu)選至少60%被取樣，優(yōu)選至少70%被取樣，優(yōu)選至少80%被取樣，優(yōu)選至少90%被取樣。在最優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選基本上整個食道被取樣，優(yōu)選食道的整個內(nèi)腔被取樣。即便當(dāng)本發(fā)明方法不包括樣品的收集時，這也同樣地應(yīng)用于體外樣品。篩選和監(jiān)視本發(fā)明的篩選方面涉及對巴雷特食道的檢測和/或診斷。一般地，在本發(fā)明的篩選實施方案中，被檢查的受試者，或者從其中獲得樣品的受試者，其巴雷特的狀態(tài)是未知的。本發(fā)明的監(jiān)視方面涉及對發(fā)育異常(包括腺癌)的檢測和/或診斷。盡管發(fā)育異常和腺癌明顯是病理上不同的病況，但腺癌可以被視為發(fā)育異常的一種極端形式。如下文所述，取決于所用的分子標(biāo)記物，本發(fā)明可以有利地應(yīng)用于區(qū)分腺癌與發(fā)育異常。然而，一般說來，對本發(fā)明的監(jiān)視方面的討論涉及對發(fā)育異常(包括腺癌)的檢測。通常，在本發(fā)明的監(jiān)視實施方案中，被檢查的受試者，或者從其中獲得樣品的受試者，其發(fā)育異常的狀態(tài)是未知的，但通常已知患有巴雷特。原則上，篩選方面和監(jiān)視方面之間的差異對本發(fā)明的實施來說具有極小的實際結(jié)果。該差異僅與所選標(biāo)記物有夫。在篩選和監(jiān)視之間，取樣方面和組合方面保持相同。實際上，可以有利地將篩選和監(jiān)視組合，即同時檢查細(xì)胞樣品的巴雷特的標(biāo)記物以及包括腺癌在內(nèi)的發(fā)育異常的標(biāo)記物，從而增加所得的信息的價值并且實現(xiàn)更強カ的組合的診斷輸出。標(biāo)記物可以應(yīng)用于巴雷特篩選和監(jiān)視的標(biāo)記物是不在正常食道組織中表達(dá)的任何標(biāo)記 物，優(yōu)選不在正常食道表面細(xì)胞中表達(dá)的任何標(biāo)記物。標(biāo)記物可以通過基于核苷酸的技術(shù)(例如通過RNA檢測來檢測表達(dá))或通過基于蛋白的技術(shù)(例如使用識別所關(guān)注的多肽的ー種或多種抗體的免疫化學(xué)；通過例如制備重組蛋白并且使適宜的宿主如兔或小鼠免疫，抗體可以很容易地針對所關(guān)注的標(biāo)記物基因而產(chǎn)生)來檢測。一些標(biāo)記物如阿爾新藍(lán)事實上是活體染料(組織化學(xué)著色劑)，并因此被簡單地直接分析。對于篩選方面(即對于巴雷特食道的檢測)，優(yōu)選使用區(qū)分腸化生(巴雷持)與鱗狀食道細(xì)胞或胃賁門的標(biāo)記物。這些標(biāo)記物包括上皮分化的標(biāo)記物。柱狀標(biāo)記物的使用是特別優(yōu)選的。使用柱狀標(biāo)記物的技術(shù)有益性在于使用它們僅檢測柱狀細(xì)胞。這意味著鱗狀細(xì)胞(無論正常的或癌性的)不被柱狀標(biāo)記物著色。這是有利的，因為巴雷特細(xì)胞和由其產(chǎn)生的發(fā)育異常細(xì)胞如腺癌細(xì)胞是柱狀的，并因此可以通過使用柱狀標(biāo)記物而被選擇性地識別。這有利地提高信號并減小背景，以及減少對應(yīng)用另外的區(qū)別標(biāo)記物的需要，從而通過以此方式直接檢測柱狀細(xì)胞而簡化程序?？梢允褂靡阎诎屠滋睾驼Ｊ车辣砻婕?xì)胞中差異性表達(dá)的任何其它標(biāo)記物?？梢允褂帽容^胃賁門與鱗狀細(xì)胞活檢的表達(dá)微陣列來識別替代性標(biāo)記物。在這些細(xì)胞類型中差異性存在的任何標(biāo)記物均可以在本發(fā)明中使用。對于監(jiān)視方面，優(yōu)選使用其表達(dá)與發(fā)育異常的程度相關(guān)的標(biāo)記物。優(yōu)選地，將這種標(biāo)記物用于對有風(fēng)險的患者進(jìn)行分級。優(yōu)選地，這種標(biāo)記物包括増殖標(biāo)記物，如Ki67和Mcm蛋白；増殖和DNA損傷標(biāo)記物，如PCNA ;細(xì)胞周期蛋白，如細(xì)胞周期蛋白D和/或細(xì)胞周期蛋白A ;異常p53，例如p53L0H ；p53突變；或？53過表達(dá)，如其免疫組織化學(xué)檢測；包括甲基化在內(nèi)的P16丟失；和例如通過流式細(xì)胞計量術(shù)或圖像細(xì)胞計量術(shù)測得的非整倍性。稍微更詳細(xì)地講，生長因子(如EGF)、生長因子受體(如EGFR)以及細(xì)胞因子(IL-4)和涉及炎性響應(yīng)的分子(C0X-2)表明在BE和隨后發(fā)展成AC中具有異常表達(dá)，并因此是根據(jù)本發(fā)明的有用的標(biāo)記物。體外和體內(nèi)工作已表明，酸和膽汁刺激誘發(fā)DNA損傷、MAP激酶通路和NF K B通路，并且減少細(xì)胞凋亡，因此涉及DNA突變和損傷的標(biāo)記物(例如ATM、ATR)、細(xì)胞凋亡的標(biāo)記物(P53)和來自MAPK通路的標(biāo)記物(erk、p38)和來自NF κ B的標(biāo)記物是有用的。此外，膽汁酸增加視黃酸通路(CYP26A1、RAR)，其與小雞胚胎食道中化生的誘導(dǎo)有聯(lián)系。BE的發(fā)展及向癌癥的進(jìn)展已涉及多種其它通路，例如TGFii和BMP通路。事實上，已知與發(fā)育異常的程度相關(guān)的任何標(biāo)記物均是適宜的，包括許多致癌基因和腫瘤抑制基因。特別地，在以下文獻(xiàn)中提及的標(biāo)記物可能適用于本發(fā)明Fitzgerald RC しIin Gastroenterol Hepatol しomplex diseases in gastroenterologyand hepatology:GERDj Barrett ! s，and esophageal adenocarcinoma. 2005，3:529-37 ；或 Fitzgerald RC Recent Results in Cancer Res Genetics and prevention ofoesophageal adenocarcinoma 2005166:35—46。現(xiàn)在討論根據(jù)本發(fā)明最適宜的標(biāo)記物。我們描述具有潛力作為生物標(biāo)記物以用于本發(fā)明(例如用于分析用膠囊海綿收集的細(xì)胞)的基因。因此，我們公開用于檢測巴雷特食道的生物標(biāo)記物。下表給出在實驗方法的各階段中基因斷裂的數(shù)目。方法進(jìn)行得越遠(yuǎn)，則具體基因越可能是更好的標(biāo)記物。
方法/類型_公開數(shù)據(jù)集內(nèi)部數(shù)據(jù)集
異常調(diào)節(jié)的基因謂191
采 W PCR1820由 PCR 確認(rèn)39
采J+]j免疫組織化予法3IE在 行
由免疫組織化學(xué)法確認(rèn)2N/A
采W膠囊海綿的基W2N/A根據(jù)以下來選擇來自采用PCR的內(nèi)部數(shù)據(jù)集的20個基因-高水平表達(dá)和高統(tǒng)計顯著性-適宜抗體的存在現(xiàn)在更詳細(xì)地討論特異性標(biāo)記物表I :目前與膠囊海綿一起使用的3個標(biāo)記物
標(biāo)記物(如基因)名稱詳情，如基園庫登錄號m
阿爾新藍(lán)書基_靶標(biāo)，而是繼■化學(xué)著色技術(shù)
Mcm2NMJ)04526Mem 2 WM-J T 鱗軟鑛腦癌
TFF3NMJ)03226表2 :在PCR水平下確認(rèn)的11個標(biāo)記物。(如果需要，可以在蛋白水平下 進(jìn)行確
認(rèn)。)標(biāo)B物名稱詳情》如基園庫晝錄號
ABPlNMJJO1091
DDCMMJ)00790 NM^OO 1082971
HOXClONMJ) 17409
KCN E3NMJW5472
LAMC2NM—005562 NM^OI 8891 MUC13NM—033049
MUCl 7NM^OO 1040105
NMUR2NM—020167
PIGRNM—002644
TSPANlNM—005727
HOXB5NM-002147表3 :在巴雷特與正常食道和胃賁門之間差異性表達(dá)的161個基因。將基因以最有利至最不優(yōu)選來排列(最高的統(tǒng)計顯著性和表達(dá)水平至最低的顯著性和表達(dá)水平)?；鶊@》號基園庫覺錄號
RNF217NMJ52553
CCL28NMJ 48672
AGR3NMJ76813
CFTRNM—000492
PAQR5NMJWl 104554 NMJ) 17705
BNIP3NM—004052
GOLMlNMJ77937
PLA2G10NM—003561
KCN KSNM—003740
ML-STDINMJ) 18099
SLC16A7NM—004731
NFE2L2NMJM)6164
CGNLlNM—032866
CALML4NM—001031733 NMJI33429
ACSLSNM—016234NM 一2033S0 NM—203379
KRT8NM—002273
TMC7NM—024847
FATNM—005245
CES3NM—024922
SLC7A7NM_003982
REG4NMJB204權(quán)利要求
1.一種可吞咽的細(xì)胞取樣裝置，其包含能夠從食道的表面上收集細(xì)胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含繩，其特征在于所述繩通過套結(jié)連接至所述磨料。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的裝置，其中所述套結(jié)為雙反手結(jié)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的裝置，其中所述磨料是可壓縮的。
4.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，其中所述磨料包含網(wǎng)狀聚氨酷。
5.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，其中所述繩經(jīng)由設(shè)置在所述磨料的表面下方的繩的環(huán)而連接至所述磨料，所述環(huán)由所述套結(jié)閉合。
6.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，其中所述磨料被壓縮，并且其中所述磨料通過可溶性膠囊而維持在壓縮狀態(tài)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的裝置，其中所述可溶性膠囊包含明膠膠囊。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的裝置，其中在浸入30°C水中后5分鐘內(nèi)，所述膠囊能夠溶解并且所述可壓縮的磨料能夠回復(fù)至其未壓縮的尺寸。
9.根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，其中所述裝置在遠(yuǎn)離可吞咽的磨料的末端包含不可吞咽的元件。
10.ー種試劑盒，其包含根據(jù)任一前述權(quán)利要求所述的裝置，和用于檢測細(xì)胞標(biāo)記物的試劑。
11.一種用于在受試者中幫助診斷巴雷特食道或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的方法，所述方法包含用根據(jù)權(quán)利要求I至9中任一項所述的裝置對所述受試者的食道的細(xì)胞表面取樣以及分析細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)記物，其中這種標(biāo)記物的檢測指示巴雷特或巴雷特相關(guān)的發(fā)育異常的存在的增加的可能性。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的試劑盒或根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述標(biāo)記物選自表I所示的組。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的試劑盒或根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述標(biāo)記物選自表2所示的組。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的試劑盒或根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述標(biāo)記物選自表3所示的組。
15.ー種裝置、試劑盒或方法，其參考ー個或多個附圖
在本文中公開。
全文摘要
本發(fā)明涉及可吞咽的細(xì)胞取樣裝置，其包含能夠從食道的表面上收集細(xì)胞的磨料，和用于收回的工具，其中所述用于收回的工具包含繩，其特征在于該繩通過套結(jié)而連接至磨料。本發(fā)明還涉及包含所述細(xì)胞取樣裝置的試劑盒和方法。
文檔編號A61B10/02GK102711628SQ201080061260
公開日2012年10月3日 申請日期2010年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者麗貝卡·C·菲茨杰拉德, 皮埃爾·勞-西里埃, 蘇尼·蘇達(dá)爾斯?jié)h·R·卡德里 申請人:醫(yī)藥研究委員會