專利名稱：包含荔枝核提取物的脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用組合物的制作方法
包含荔枝核提取物的脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用組合物
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含荔枝核提取物的肥胖或脂肪肝的預(yù)防或治療用組合物及包括給需要該組合物的對象投用的步驟的肥胖或脂肪肝的預(yù)防或治療方法。
背景技術(shù)：
據(jù)大韓中草藥藥典(生藥)規(guī)格集，荔枝核(荔枝核)是屬于無患子科(Sapindaceae)的蒸枝(Litchi chinensis Sonnerat)的種子，學(xué)名為 Litchi semen,也被稱為丹荔核、對荔核、離支、離枝核、枝核、荔仁及荔核等異名。荔枝核呈橢圓形-卵圓形，一側(cè)略扁，長度12mm-22mm，直徑6mm-16mm。表面呈棕紅色或紫棕色，平滑，有光澤，略有縱向折皺的細(xì)波紋，一端呈圓形，質(zhì)感比較堅硬。并且，無味，味道先微甘，后微苦。 通常而言，荔枝核去除寒氣，緩解疼痛，用于疝痛、睪丸炎、腹痛等癥狀(本草綱目)。據(jù)報道，目前為止科學(xué)上證明的荔枝核的藥理作用用于改善患有2型糖尿病的白鼠模型的膜島素抵抗性，并降低血糖(Guo J. et al. , Pharmacological mechanism of Semenlitchi on antagonizing insulin resistance in rats with type 2 diabetes, ZhongYao Cai, 200427 (6) :435_438)，并且，在肝癌細(xì)胞株(IfepG2)模型，荔枝核用于抑制通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡而導(dǎo)致的癌細(xì)胞增殖等(Xiong AH et al. , Effect of Semen litchicontaining serum on proliferation and apoptosis of HepG2 cells)。眾所周知，蒸枝核中含有的化學(xué)成分有著a_ (亞甲環(huán)丙基)甘氨酸(a _ (methylencyclopropyl)glycine)、3-輕基丁酮(3_acetoin)、2，3- 丁二醇(2，3-butanediol )、咕(王巴)烯(copaene)、順-丁香烯((^8-。3^<^117116116)、別香澄烯(3110-31'01]^(1611(1代116)、_草烯(11111]11116116)、5 -畢澄爺烯(6 -cadinene)、a_ 姜黃烯(a -curcumene)、菖蒲烯(calamenene)、喇口八茶醇(Iedol)、愈創(chuàng)木奧(guaiazulene)、黃根醇(xanthorrhizol)、掠櫚酸(palmitic acid)等(中藥材圖鑒)。世界人口中相當(dāng)于約25%的17億人口，目前處于超重(BMI>25)，包含作為主要市場的美國、歐美、日本的I億2千人口的西方地區(qū)的3億人口以上被分為肥胖患者(BMI>30)。并且，目前世界上5名兒童中的I名相當(dāng)于小兒肥胖，其數(shù)字也隨之劇增，因此小兒肥胖將成為嚴(yán)重的社會問題。小兒肥胖由于血中的膽固醇和中性脂肪的數(shù)值高，成為叫做生活習(xí)慣性疾病的糖尿、高血壓、腦瘁中等的主要原因，80%以上的小兒肥胖者連接到成人肥胖，因此隨著年紀(jì)越大，肥胖導(dǎo)致的健康上的問題將會更加嚴(yán)重。并且，隨著脂肪多，會刺激到性激素分泌，比正常年齡青春期相對來得早，因此會致使生長偏離，也會影響到血液循環(huán)及營養(yǎng)供應(yīng)，從而成為生長抑制因素。并且，隨著生活環(huán)境的變化現(xiàn)代人的內(nèi)臟脂肪型肥胖會增加，并且伴隨糖尿病、高血壓、脂質(zhì)代謝紊亂、胰島素抵抗性等的代謝綜合征(metabolic syndrome)的發(fā)病劇增,這些疾病增加相互間的發(fā)生危險，是與老化、應(yīng)激及免疫功能降低等多元化的生體代謝變化相關(guān)的共同疾病。就作為以往的代表性肥胖治療劑而言，將奧利斯他(Orlistat)作為主原料的賽尼可具有脂肪瀉、胃腸氣脹、漲肚等副作用，諾美婷具有頭疼、口渴、食欲不振、失眠、便秘等副作用。并且，奧利斯他抑制維生素E和維生素D的吸收,苯丁胺(phentermine)和西布曲明(sibutramine)具有造成心率增加/心丨季、暈眩的副作用。因此，隨著西方醫(yī)學(xué)在克服合成醫(yī)藥品的副作用和慢性疾病時受到局限，正要開發(fā)出新的天然物新藥。非酒精性脂肪肝疾病(non-alcoholicfatty liver disease,以下簡稱NAFLD)意味著與飲酒無關(guān)地中性脂肪堆積在肝內(nèi)的疾病，其中，包含單純脂肪肝(steatosis)和非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)。于 1980 年路德維希(Ludwig)等首次命名了 NASH，其特征在于，與脂肪肝一起伴隨炎癥或纖維化。另一方面，單純脂肪肝在臨床上被認(rèn)為預(yù)后的療效良好的陽性疾病，但NASH實際上被認(rèn)為是進(jìn)行性肝病，即為誘發(fā)肝硬化或肝癌的先驅(qū)疾病。作為非酒精性脂肪肝的危險因子，代表性的是肥胖、糖尿病及高脂血癥，除此之外，眾所周知，缺乏蛋白質(zhì)-卡路里、突然降低體重或用靜脈注射獲取整體營養(yǎng)時也會出現(xiàn)上述危險因子。這種脂肪肝有可能進(jìn)行到非酒精性脂肪性肝炎或肝硬化，因此，以后會逐漸被視為嚴(yán)重的肝病。

非酒精性脂肪肝的發(fā)病原因可說明為兩個機制。第一步驟是健康的肝成為脂肪肝的步驟，即為在末梢因胰島素抵抗性而致使增加脂肪酸從脂肪組織流入到肝的過程，第二步驟是脂肪堆積的肝細(xì)胞引起脂肪的過氧化、炎癥細(xì)胞的浸潤、氧自由基(oxygen freeradical)及脂肪醇硫酸鈉(FAS)配位體的活化的過程。即，脂肪酸的增加用于增加細(xì)胞色素過氧化物酶2E1 (CYP2EI, cytochrome peroxidase 2E1)的表達(dá),通過生成活性氧簇來誘導(dǎo)肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化，脂多糖(LPS)和氧化應(yīng)激的增加用于增加TNF-a (腫瘤壞死因子- a ),來誘導(dǎo)肝細(xì)胞的細(xì)胞凋亡(apoptosis)并損傷肝。非酒精性脂肪肝患者的69%_100%為肥胖患者，肥胖患者的20%_40%伴隨著非酒精性脂肪肝，尤其是，男性肥胖患者的肝病患病率比女性肥胖患者更高。據(jù)報道在西方國家，不僅是肥胖患者還是正常體重成人的3%-30%呈現(xiàn)非酒精性脂肪肝病變。與韓國膳食生活類似的日本的非酒精性脂肪肝患病率被估計為約20%，其中，1%被估計為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。非酒精性脂肪肝不僅是成人還在肥胖兒童身上也成為問題，3%的10-19歲韓國青少年，作為非酒精性脂肪肝的主要指標(biāo)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)數(shù)值偏高，就日本兒童(4^12歲)而言，非酒精性脂肪肝的患病率達(dá)到2. 6%。10%-77%的肥胖兒童(居住歐美、美國及亞洲)呈現(xiàn)非酒精性脂肪肝病變，這是因為非酒精性肝病的最主要的危險因子為肥胖。并且，目前為止非酒精性脂肪肝患者所使用的治療劑大體上分為兩種概念。第一個是肥胖治療劑(奧利斯他orlistat)、胰島素抵抗性治療劑(二甲雙胍metformin,.卩比格列酮pioglitazone,羅格列酮rosiglitazone)或者高脂血癥治療劑(氯貝丁酯clofibrate ;吉非貝齊:gemfibrozil,苯扎貝特bezafibrate,阿托伐他汀atorvastatin,辛伐他汀simvastatin)等通過危險因子的校正來治療及改善脂肪肝的藥劑，第二個是發(fā)揮與非酒精性脂肪肝的危險因子校正獨立地恢復(fù)肝細(xì)胞損傷的功能的藥物，與其相應(yīng)的是肝細(xì)胞保護(hù)劑(鵝去氧膽酸ursodeoxycholoc acid及牛磺酸t(yī)aurine)、抗氧化劑(維生素E :vitamin E)及營養(yǎng)補充劑(卵磷脂lecithin,甜菜堿betaine,N-乙酰半胱氨酸N_acetylcysteine)等。但是，目前尚未推出既沒有副作用也對非酒精性脂肪肝患者治療有效的理想的藥劑。在本說明書全文中，參照了多篇論文及專利文獻(xiàn)，并表示其引用部分。被引用的論文及專利文獻(xiàn)的公開內(nèi)容作為參照其整體插入于本說明書中，更加明確地說明本發(fā)明所屬的技術(shù)領(lǐng)域的水準(zhǔn)及本發(fā)明的內(nèi)容。

發(fā)明內(nèi)容發(fā)明要解決的技術(shù)課題本發(fā)明者銳意地努力研究了能夠有效地治療或預(yù)防肥胖或脂肪肝，而且對人體安全的物質(zhì)，尤其是植物-來源物質(zhì)，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)了以往開始用作中藥材的荔枝核對治療或預(yù)防脂肪肝或肥胖十分有效，由此完成了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種將荔枝核提取物用作有效成分的脂肪肝或肥胖的預(yù)防及治療用組合物。本發(fā)明的另一目的提供一種將荔枝核提取物用作有效成分的脂肪肝或肥胖預(yù)防或治療用藥劑學(xué)組合物。本發(fā)明的再一目的在于，提供一種將荔枝核提取物用作有效成分的脂肪肝或肥胖 預(yù)防或改善用食品組合物。本發(fā)明的還一目的在于，提供一種將荔枝核提取物用作有效成分的改善、預(yù)防或治療脂肪肝或肥胖的方法。本發(fā)明的其他目的及優(yōu)點，借助以下的發(fā)明的詳細(xì)內(nèi)容、權(quán)利要求及附圖將變得更加明確。解決課題的技術(shù)方案根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，本發(fā)明提供一種包含荔枝核提取物作為有效成分的脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用組合物。本發(fā)明者銳意地努力研究了能夠有效地治療或預(yù)防肥胖及脂肪肝，而且對人體安全的物質(zhì)，尤其是植物-來源物質(zhì)，其結(jié)果查明了以往開始用作中藥材的荔枝核對治療或預(yù)防肥胖及脂肪肝十分有效。本發(fā)明的組合物中用作有效成分的蒸枝核意味著屬于無患子科的蒸枝(L i t c h ichinensis Sonnnerat)的種子。將提取溶劑處理在荔枝核上得到本發(fā)明的組合物中利用的荔枝核提取物時，可利用多種提取溶劑。優(yōu)選地，可利用極性溶劑或非極性溶劑。適合作為極性溶劑的包含(i)水，(ii)醇(優(yōu)選地，甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、正-丙醇、異-丙醇、正-丁醇、I-戊醇、2- 丁氧基乙醇或乙二醇)，(iii)醋酸，(iv) 二甲基甲酰胺(DMFO, dimethyl-formamide)及(v)二甲基亞砜(DMSO, dimethyl sulfoxide)。適合作為非極性溶劑的包含丙酮、乙腈、醋酸乙酯、醋酸甲酯、氟代烷、戊烷、己烷、2，2，4-三甲基戊烷、癸烷、環(huán)己烷、環(huán)戊烷、二異丁烯、I-戊烯、I-氯丁烷、I-氯戊烷、0- 二甲苯、二異丙醚、2-氯丙烷、甲苯、I-氯丙烷、氯苯、苯、二乙醚、二乙硫醚、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、苯胺、二乙胺、醚、四氯化碳及四氫呋喃(THF)0更優(yōu)選地，在本發(fā)明中利用的提取溶劑包含(a)水，(b)碳數(shù)為1-4的無水或含水低級醇(甲醇、乙醇、丙醇及丁醇等)，(C)上述低級醇和水的混合溶劑，(d)丙酮，(e)醋酸乙酯，Cf)氯仿，(g)醋酸丁酯，(h) I, 3- 丁二醇，(i)己烷及(j) 二乙醚。最優(yōu)選地，本發(fā)明的提取物是將水、甲醇、乙醇或其組合物處理在荔枝核而獲得的。如上所述，本說明書中使用的術(shù)語‘提取物’，在本技術(shù)領(lǐng)域通用為粗提取物(crude extract),但在廣義層面上包含將提取物追加分懼(fractionation)的分懼物。即，荔枝核提取物不僅包含通過利用上述提取溶劑來獲得的提取物還包含在追加應(yīng)用精制過程來獲得的提取物。例如，使上述提取物通過具有規(guī)定的分子量臨界值的超濾膜而獲得的分餾物和通過基于多種層析法(大小、電荷、為了實現(xiàn)疏水性或親和性分離而制成)的分離等，追加實施的多種精制方法而獲得的分餾物也包含在本發(fā)明的荔枝核提取物中。在本發(fā)明中利用的荔枝核提取物通過減壓蒸餾及冷凍干燥或噴霧干燥等追加的過程可制成粉末狀態(tài)。本發(fā)明的組合物對預(yù)防或治療肥胖或脂肪 肝起到十分有效的作用。在本說明書中使用的術(shù)語“肥胖”意味著在體內(nèi)體脂肪過度堆積的狀態(tài)，術(shù)語“月旨肪肝”意味著因肝的脂肪代謝紊亂致使脂肪以過多的量堆積在干細(xì)胞的狀態(tài)。這將成為狹心癥、心肌梗塞、腦瘁中、動脈硬化及胰臟炎等多種疾病的發(fā)病原因。包含本發(fā)明的荔枝核提取物的組合物，對于改善代謝疾病的多種疾病，尤其改善脂肪肝或肥胖來說，具有十分優(yōu)秀的活性。本發(fā)明的組合物能夠借助多種活性來預(yù)防或治療脂肪肝或肥胖。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例，本發(fā)明的組合物減少肝脂肪，更優(yōu)選地減少肝的中性脂肪、膽固醇或游離脂肪酸來呈現(xiàn)脂肪肝預(yù)防或治療活性。在本發(fā)明的一實施例中，本發(fā)明的組合物通過減少中性脂肪濃度16%，膽固醇濃度16%，游離脂肪酸濃度23%，呈現(xiàn)脂肪肝的預(yù)防或治療活性(參考表2)。 在本發(fā)明中，術(shù)語“肝”及“內(nèi)臟”分別包含細(xì)胞或組織。在本發(fā)明中，術(shù)語“數(shù)值”意味著試樣(sample ;例如，血液、組織)內(nèi)包含的特定成分的量，其與術(shù)語“量”混用。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例，本發(fā)明的組合物通過減少內(nèi)臟脂肪的重量，更優(yōu)選地減少附睪脂肪、腎周脂肪、腸系膜脂肪或腹膜后腔脂肪的重量，來呈現(xiàn)肥胖預(yù)防或治療活性。在本發(fā)明的一實施例中，本發(fā)明的組合物通過減少總內(nèi)臟脂肪重量、附睪脂肪重量、腎周脂肪重量、腸系膜脂肪重量及腹膜后腔脂肪重量，來呈現(xiàn)體重下降及肥胖的預(yù)防或治療活性(參考圖2)。在本發(fā)明中，術(shù)語“丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT, alanine aminotransferase)”及“天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST, aspartate aminotransferase)”是當(dāng)肝受損時血中的數(shù)值分別增加的酶，即為利用這種特性來用作肝功能指標(biāo)的酶。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的實例，本發(fā)明的組合物顯著減少血液內(nèi)的ALT及AST的量。在本發(fā)明的一實施例中，本發(fā)明的組合物與高脂肪飼料對照組相比時，分別以53%及20%減少了血液內(nèi)ALT及AST的量，并顯著緩解了脂肪肝，更優(yōu)選為非酒精性脂肪肝現(xiàn)象，呈現(xiàn)顯著改善作為診斷肝功能異常的血液指標(biāo)的肝功能數(shù)值的效果(參考表2)。在脂肪祖細(xì)胞通過增殖及分化來轉(zhuǎn)換成脂肪細(xì)胞的過程中，脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2, fatty acid binding protein)的基因?qū)崿F(xiàn)表達(dá),過氧化物酶體增殖物活化受體Y(PPARy ,Peroxisome proliferator activated receptor gamma)及 CCAAT 增強子結(jié)合蛋白(C/EBPs, CCAAT enhancer-binding proterins)是調(diào)節(jié)用于表達(dá) aP2 基因的因子。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例，本發(fā)明的組合物減少PPAR y、C/EBPs或aP2的表達(dá)。本發(fā)明的組合物減少PPAR Y及C/EBPs的表達(dá)，并減少作為其靶基因的aP2的表達(dá)，由此呈現(xiàn)減少內(nèi)臟脂肪量的效果(參考圖3)。在本說明書中，術(shù)語解偶聯(lián)蛋白2 (UCP2, uncoupling protein 2)和解偶聯(lián)蛋白3 (UCP3, uncoupling protein 3)是線粒體內(nèi)的蛋白質(zhì)，UCP2在成人脂肪細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，而UCP3在骨骼肌中被發(fā)現(xiàn)。由于這些蛋白質(zhì)在線粒體內(nèi)起到作用而產(chǎn)熱，導(dǎo)致增加耗能，因而有可能成為肥胖治療劑的標(biāo)記。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例,本發(fā)明的組合物增加UCP2 (uncoupling protein 2)或UCP3 (uncoupling protein 3)的表達(dá)。作為有效成分的蒸枝核提取物通過增加作為細(xì)胞內(nèi)線粒體的發(fā)熱蛋白質(zhì)的UCP2和UCP3的表達(dá)來促進(jìn)發(fā)熱，由此發(fā)揮抗肥胖等功效。本發(fā)明的組合物可制成藥劑學(xué)組合物。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例，本發(fā)明的組合物是如下藥劑學(xué)組合物，該組合物包含(a)、本發(fā)明的上述荔枝核提取物的藥劑學(xué)有效量；以及(b)藥劑學(xué)上許可的載體。并且，本發(fā)明提供一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或改善方法，該方法包括如下步驟給需要包含(a)上述組合物的藥劑學(xué)有效量；以及(b)藥劑學(xué)上許可的載體的組合物的對象(Subject)進(jìn)行投用。在本說明書中，術(shù)語“藥劑學(xué)有效量”意味著充分達(dá)成上述荔枝核提取物的功效或活性的量。本發(fā)明的組合物制成藥劑學(xué)組合物時，本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物包含藥劑學(xué)上許可的載體。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物中所包含的藥劑學(xué)上許可的載體在制劑時通常被利用，并包含乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、凝膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油等，但并不局限于此。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物除了上述成分以外，還可包含潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、香味劑、乳化劑、懸浮劑及保存劑等。藥劑學(xué)上許可的適合的載體及制劑詳細(xì)地記載于Remington’s Pharmaceutical Sciences (19thed. , 1995)。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物可實現(xiàn)經(jīng)口或非經(jīng)口投用，優(yōu)選地應(yīng)用經(jīng)口投用方式。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的適合的投用量，根據(jù)制劑化方法、投用方式、患者的年齡、體重、性別、病態(tài)、飼料、投用時間、投用途徑、排泄速度及反應(yīng)敏感性等因素開下多種處方。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的普通投用量，以成人基準(zhǔn)，包含在0. 001mg/kg-100mg/kg范圍內(nèi)。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物根據(jù)本發(fā)明所屬的技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員容易實施的方法，利用藥劑學(xué)上許可的載體和/或賦形劑來進(jìn)行制劑化，由此能夠以單位容量形態(tài)制備或者裝入于多容量容器內(nèi)進(jìn)行制備。此時，劑型可以是油或水性介質(zhì)中的溶液、懸浮液、糖漿劑或乳化液形態(tài)，或者是提取劑、散劑、粉末劑、顆粒劑、錠劑或膠囊劑形態(tài)，還可包含分散劑或穩(wěn)定劑。本發(fā)明的組合物可提供為食品組合物。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實例，本發(fā)明的組合物是食品學(xué)組合物，該組合物包含(a)本發(fā)明的上述荔枝核提取物的食品學(xué)有效量；以及(b)食品學(xué)上許可的載體。并且，本發(fā)明提供一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或改善方法，該方法包括如下步驟給需要包含(a)上述組合物的食品學(xué)有效量；以及(b)食品學(xué)上許可的載體的組合物的對象(Subject)進(jìn)行投用。本發(fā)明的組合物制成食品組合物時，作為有效成分不僅包含荔枝核提取物，還包含制備食品時通常添加的成分，例如，蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪、營養(yǎng)素、調(diào)味劑及甜味劑。上述碳水化合物的例子，可列舉單糖類，例如為葡萄糖、果糖等；二糖類，例如為麥芽糖、蔗糖、低聚糖等；以及多糖類，例如為糊精、環(huán)糊精等常規(guī)的糖及木糖醇、山梨糖醇、赤蘚糖醇等糖醇。作為香味劑可使用天然香味劑[索馬甜、甜葉菊提取物(例如，甜葉菊甙A、甘草甜素等])及合成香味劑(糖精、阿斯巴甜等)。例如，本發(fā)明的食品組合物制成健康飲料時，除了本發(fā)明的荔枝核提取物以外還可包含檸檬酸、液態(tài)果糖、糖、葡萄糖、醋酸、蘋果酸、果汁、杜仲提取液、大棗提取液、甘草提取液等。發(fā)明效果簡略說明本發(fā)明的特征及優(yōu)點如下。 (i)本發(fā)明提供一種包含荔枝核提取物作為有效成分的肥胖及脂肪肝預(yù)防或治療用組合物。(ii)本發(fā)明的組合物導(dǎo)致體脂肪量的減少、內(nèi)臟脂肪量的減少、對脂肪組織生成起到重要作用的核轉(zhuǎn)錄因子C/EBPa和PPAR Y 2以及作為其靶基因的aP2基因的表達(dá)量減少，最終呈現(xiàn)肥胖的預(yù)防或治療活性。(iii)本發(fā)明的組合物能夠維持肝的形態(tài)功能、結(jié)構(gòu)功能及生理功能地抑制及治療脂肪肝疾病的進(jìn)行，而且也具有預(yù)防發(fā)病的效果。( iv)尤其是，本發(fā)明的組合物通過減少存在于肝組織內(nèi)的脂質(zhì)含量，來改善肝組織內(nèi)的脂肪堆積，使肝功能標(biāo)記酶的活性正?；⒕哂蓄A(yù)防脂肪肝發(fā)生，抑制病情進(jìn)展或者使病態(tài)好轉(zhuǎn)的效果。(V)并且，本發(fā)明提供一種具有預(yù)防及治療肥胖及脂肪肝的功效的荔枝核提取物的醫(yī)藥及食品的基礎(chǔ)資料。

圖Ia-圖Ib是在本發(fā)明中表示攝取實驗飼料的老鼠的體重及飼料攝取量的結(jié)果。該圖表示8只老鼠的平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差值，棒圖(bar)上的其他文字表示實施單向方差分析(one-way AN0VA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’s multiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。高脂肪飼料(HFD,high fat diet)意味著高脂肪對照飼料,補充蒸枝核的高脂肪飼料(LSD, Litchi semen-supplemented highfat diet)意味著補充蒸枝核提取物的飼料，ND (Normal diet)意味著正常飼料。Finalbody weight意味著最終體重,body weight gain意味著累積體重增加量,Food intake意味著吸收的飼料量(攝食量)，F(xiàn)ood efficiency ratio意味著飼料效率。圖Ia中，最上方的曲線圖為關(guān)于HFD的曲線圖，中間曲線圖為關(guān)于LSD的曲線圖，最下方曲線圖為關(guān)于ND的曲線圖。圖2是在本發(fā)明中按不同部位表示攝取實驗飼料的老鼠的內(nèi)臟脂肪重量的結(jié)果。該圖表示8只老鼠的平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差值，棒圖(bar)上的其他文字表示實施單向方差分析(one-way AN0VA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’s multiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。Epididymal為附睪脂肪的重量，Perirenal為腎周脂肪的重量,Mesenteric為腸系膜脂肪的重量,Retroperitoneal為腹膜后腔脂肪的重量，Total為比較總內(nèi)臟脂肪的重量的結(jié)果。在圖2的各個曲線圖中，最左側(cè)的條線圖是關(guān)于ND的條線圖，中間的條線圖是關(guān)于HFD的條線圖，最右側(cè)條線圖是關(guān)于LSD的條線圖。圖3是在本發(fā)明中表示老鼠內(nèi)臟脂肪組織的脂肪生成(adipogenesis)相關(guān)基因表達(dá)變化的結(jié)果。左側(cè)畫面表示C/EBP a、PPAR Y 2及aP2的RT-PCR的凝膠圖像，右側(cè)畫面表示上述基因的相對表達(dá)程度。將所有數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH，glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) mRNA,所表不的所有表達(dá)水準(zhǔn)是對于 ND 老鼠的相對值。這種結(jié)果利用從8只老鼠中收取的RNA試樣，將3個獨立的實驗結(jié)果表示為平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差。棒圖(bar)上的其他文字表示實施單向方差分析(one-way ANOVA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’s multiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。在圖3的各個曲線圖中，最左側(cè)的條線圖是關(guān)于ND的條線圖，中間的條線圖是關(guān)于HFD的條線圖，最右側(cè)條線圖是關(guān)于LSD的條線圖。 圖4是在本發(fā)明中表示老鼠內(nèi)臟脂肪組織的炎癥相關(guān)基因表達(dá)變化的結(jié)果。左側(cè)畫面表示腫瘤壞死因子a (TNFa )及白介素_6 (IL_6)的RT-PCR的凝膠圖像，右側(cè)畫面表示上述基因的相對表達(dá)程度。將所有數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH，glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) mRNA,所表不的所有表達(dá)水準(zhǔn)是對于 ND 老鼠的相對值。這種結(jié)果利用從8只老鼠中收取的RNA試樣，將3個獨立的實驗結(jié)果表示為平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差。棒圖(bar)上的其他文字表示實施單向方差分析(one-way ANOVA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’s multiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。在圖4的各個曲線圖中，最左側(cè)的條線圖是關(guān)于ND的條線圖，中間的條線圖是關(guān)于HFD的條線圖，最右側(cè)條線圖是關(guān)于LSD的條線圖。圖5是在本發(fā)明中表示老鼠內(nèi)臟脂肪組織的UCPs基因表達(dá)變化的結(jié)果。左側(cè)畫面表示UCPl及UCP3的RT-PCR的凝膠圖像，右側(cè)畫面表示上述基因的相對表達(dá)程度。將所有數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化為甘油醒-3-磷酸脫氫酶(GAPDH, glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)mRNA,所表示的所有表達(dá)水準(zhǔn)是對于ND老鼠的相對值。這種結(jié)果利用從8只老鼠中收取的RNA試樣，將3個獨立的實驗結(jié)果表示為平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差。棒圖(bar)上的其他文字表示實施單向方差分析(one-way ANOVA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’smultiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。在圖5的各個曲線圖中，最左側(cè)的條線圖是關(guān)于ND的條線圖，中間的條線圖是關(guān)于HFD的條線圖，最右側(cè)條線圖是關(guān)于LSD的條線圖。實施方式以下，通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說明。這些實施例僅用于更加具體地說明本發(fā)明，根據(jù)本發(fā)明的主旨，本發(fā)明的范圍不局限于這些實施例，這對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。
實施例未另行涉及其他內(nèi)容的情況下，固體/固體為(重量/重量)份或者百分比(％)，固體/液體為(重量/體積)份或者百分比，以及液體/液體為(體積/體積)份或百分比。實施例I:荔枝核提取物的調(diào)配在粉碎機中將蒸枝(Litchi chinensis Sonn.)的種子I. 2kg制成粗粉末之后,力口入酒精(乙醇)61，在回流提取器中進(jìn)行3次熱水提取。用過濾紙來過濾提取物之后，在減壓濃縮機中低溫濃縮之后使用冷凍干燥機來干燥，由此獲得提取物25. 5g (產(chǎn)率2. 1%)用于實驗。實施例2:利用老鼠的荔枝核提取物的體重及內(nèi)臟脂肪減少功效實驗飼料制備及實驗動物的飼養(yǎng)在本實驗中使用的肥胖誘導(dǎo)飼料為高脂肪對照飼料(high fat diet, HFD :40%脂肪卡路里(fat calorie)、17g 豬油(lard) +3% 玉米油(corn oil) /IOOg 食物(diet)),補充了蒸枝核提取物的飼料(Litch semen-supplemented high fat diet, LSD)與 HFD 的組成相同，以0. 5%水準(zhǔn)包含荔枝核提取物。正常飼料(ND)基于AIN-76嚙齒動物飼料(rodent diet)組成(American Institute of Nutrition, Report of the AmericanInstitute of Nutrition ad hoc committee on standards for nutritional studies.J. Nutr.，107:1340-1348，(1977))調(diào)配(表 I)。表I
U I減~I高脂肪對照飼料I篇枝核提取物補成分 (HFD)充飼料USD)_ (g/kgdiet) (g/kgdiet) (Q/kodiet)
干酪素_200_200_200_
DL-蛋氨酸j~~3~^
玉米淀粉(Corn starch ) 150111106
蔗糖(Sucrose)500*~ 370370_
纖維素(Cellulose)_50_50_50_
玉米油(Cornoil)_50_30_30_
緒油(Lard )_-_170_170_
維生素復(fù)合水n_10_12_12_
礦物復(fù)合水2)_35_42_42_
重酒石酸膽堿(Choline:""
bitartrate)_^^f_
膽固醇(Cholestero!) ■1010
7" 石,酸.膽 f:~4~4
(UtyInydroqii iiione )
荔枝核提取物-一~5
總合(g)MOOIOM1000
脂肪(％卡路里)39.039.0
總熱量，kJ,kg diet_16439_19315_19315_D 礦物混合物(g/kg of mix):CaHP04500 ；NaCl 74 ；K2H607H20220 ；K2S0452 ；Mg0 24 ；MnC0s3. 5 ；Fe (C6H5O7)*6H20 6 ；ZnCO31. 6 ；CuC030. 3 ；KI030. 01 ；Na2Se03 *5H20 0. 01 ；CrK (SO4)20. 55 ;糖粉 118. 03。2)維生素混合物(g/kg of mix):硫胺素.HCl 0. 6 ;核黃素0. 6 ;卩比卩多醇.HCl 0. 7 ；煙酸3 ;D-泛酸鈣1.6 ;葉酸0.2 ;D-生物素0.02 ;氰鈷銨(Vitamin B12) (0. 1%)1. 0 ;維生素 A 棕櫚酸鹽(500，000IU/g);膽鈣化醇(Vitamin D3) (400, 000IU/gm) 0. 25 ;維生素 E 醋酸鹽(500IU/g) 10 ;甲萘醌亞硫酸氫鈉0. 08 ;糖粉981. 15。用固體飼料使5周齡的雄性C57BL/6J老鼠(奧琳特，韓國)適應(yīng)一周實驗室環(huán)境之后，根據(jù)隨機區(qū)組設(shè)計(randomized block design)來任意配置高脂肪飼料對照組和實驗組，如此飼養(yǎng)了總共10周。每天上午10-11點之間供應(yīng)飼料和水，每天測定飼料攝取量，并且每周測定體重。為了抑制隨著攝取飼料而突然發(fā)生的體重變化，去除飼料桶，經(jīng)過2小時之后測定體重。實驗動物禁食12小時以上之后，用二乙醚(diethyl ether,德山純化學(xué)品)麻醉的狀態(tài)下采取血液、肝及內(nèi)臟脂肪組織(附睪脂肪、腎周脂肪、腸系膜脂肪及腹膜后腔脂肪)，再用0. IM磷酸緩沖溶液(pH 7. 4)洗滌之后測定重量。從腹部大動脈采取的血液的在IOOOxg下離心分離15分鐘，分離出血漿。體重及內(nèi)臟脂肪重量變化10周攝取實驗詞料之后,察看最終體重及10周間的體重增加量,與聞脂肪詞料對照組(HFD)相比時，在補充攝取荔枝核提取物的組(LSD)中，最終體重減少16%，而且累積體重增加量減少28%。荔枝核提取物的攝取未致使飼料攝取量發(fā)生變化，將實驗飼料飼養(yǎng)期間的總體重增加量除以實驗飼料攝取量的飼料效率(food efficiency ratio),在SLD組中比HFD組更減少(圖Ia-圖lb)。因此，荔枝核提取物具有體重降低效果，可知這種荔枝核提取物的體重減少功效并不是來源于食欲抑制。10周攝取飼料之后，分別摘除組成內(nèi)臟脂肪的附睪脂肪、腎周脂肪、腸系膜脂肪及腹膜后腔脂肪之后測定重量，其結(jié)果表明，比對照組(HFD)荔枝核提取物攝取組(LSD)中附睪脂肪重量減少24%，腎周脂肪重量減少24%，腸系膜脂肪重量減少39%，腹膜后腔脂肪重量減少11%，合計這些四個部位的總內(nèi)臟脂肪重量減少29% (P〈0.001，圖2)。因此確認(rèn)到，荔枝核提取物具有十分優(yōu)秀的體重及內(nèi)臟脂肪量減少效果。實施例3:荔枝核提取物的非酒精性脂肪肝預(yù)防及治療功效肝組織的生化分析以如上飼養(yǎng)10周的實驗動物作為對象，如下測定肝組織的脂質(zhì)成分。根據(jù)福爾茨(Folch)等的方法(FolchJ, Lees M, Sloane Stanley GH. A simplemethod for the isolation and purification of total lipides from animal tissues.J Biol Chem.，226:497-509 (1957))如下提取肝組織的脂質(zhì)成分。在0. 25g的肝組織加入Iml的蒸懼水之后,使用波呂特龍(polytron)均化器(IKA-WERKE GmbH & Co. , Ultra-Turrax, Staufen, Germany)來進(jìn)行均質(zhì)化。在均質(zhì)液加入氯仿甲醇溶液(2 1, v/v) 5ml均勻混合之后，在IOOOxg下離心分離10分鐘，分離出下清液，在上清液再次添加氯仿甲醇溶液(2 l,v/v)2ml之后，反復(fù)進(jìn)行相同過程來完全分離肝的脂質(zhì)成分。在如此獲得的下清液加入氯仿甲醇:0. 05%CaCl2 (3 :48 47, v/v/v)溶液3ml來混合I分鐘之后，在IOOOxg下離心分離10分鐘，取下最終下清液，用氮氣完全干燥之后，將干燥的脂質(zhì)溶解于Iml的甲醇中，用于脂質(zhì)成分分析。肝組織脂質(zhì)提取液的中性脂肪、膽固醇及游離脂肪酸濃度是使用商業(yè)用脂質(zhì)分析試劑盒(生物診斷系統(tǒng)Bio Clinical System)來測定的。用作肝功能指標(biāo)的血中 ALT (alanine aminotransferase)及 AST (aspartate aminotransferase)活性是使用商業(yè)用分析試劑盒(生物診斷系統(tǒng)Bio Clinical System,韓國)來測定的。肝組織的脂質(zhì)濃度變化察看10周攝取實驗飼料的老鼠的肝重量，比高脂肪飼料對照組，在荔枝核提取物攝取組(LSD)中絕對肝重量(g)減少36%，體重對肝重量(g/100g體重)分別減少25%。察看肝組織的脂質(zhì)濃度，比高脂肪飼料對照組(HFD)，在荔枝核提取物攝取組中中性脂肪濃度減少16%，膽固醇濃度減少16%，游離脂肪酸濃度減少23%。并且，就攝取高脂肪飼料的組而言，比正常飼料組，用作肝功能指標(biāo)的血中ALT及AST活性得到增加，荔枝核提取物攝取組比高脂肪飼料對照組，分別減少血中ALT及AST活性53%及20% (表2)。表2的值是將針對8只老鼠的結(jié)果表示為平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差的值，相同的列中的其他文字表示實施單向方差分析(one-way AN0VA)之后利用鄧肯氏新復(fù)極差法(Duncan’s multiple range test)表示與P〈0. 05的其他飼料組(dietary groups)之間的差異。因此可知,蒸枝核提取物具有顯著緩解非酒精性脂肪肝現(xiàn)象，并顯著改善作為用于診斷肝功能異常的血液指標(biāo)的肝功能數(shù)值的效果。表2
權(quán)利要求
1.一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用組合物，其特征在于，包含荔枝核提取物作為有效成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于，上述組合物用于減少肝脂肪或內(nèi)臟脂肪。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，上 述脂肪包含中性脂肪、膽固醇或游離脂肪酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，上述內(nèi)臟脂肪包含選自附睪脂肪、腎周脂肪、腸系膜脂肪及腹膜后腔脂肪的一種或其以上的脂肪。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于，上述組合物用于減少血液內(nèi)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶及天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶的量。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于，上述組合物用于減少過氧化物酶體增殖物活化受體Y (PPARy ), CCAAT增強子結(jié)合蛋白(C/EBPs)或脂肪酸結(jié)合蛋白(aP2)的表達(dá)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于，上述組合物用于增加解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)或解偶聯(lián)蛋白3 (UCP3)的表達(dá)。
8.一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用藥劑學(xué)組合物，其特征在于，包含 Ca)上述權(quán)利要求I至7中任一項的組合物的治療學(xué)有效量；以及 (b)藥劑學(xué)上許可的載體。
9.一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或改善用食品組合物，其特征在于，包含 Ca)上述權(quán)利要求I至7中任一項的組合物的食品學(xué)有效量；以及 (b)食品學(xué)上許可的載體。
10.一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療方法，其特征在于，包括如下步驟給需要包含(a)上述權(quán)利要求I至7中任一項的組合物的藥劑學(xué)有效量；以及(b)藥劑學(xué)上許可的載體的組合物的對象進(jìn)行投用。
11.一種脂肪肝或肥胖的預(yù)防或改善方法，其特征在于，包括如下步驟給需要包含(a)上述權(quán)利要求I至7中任一項的組合物的食品學(xué)有效量；以及(b)食品學(xué)上許可的載體的組合物的對象進(jìn)行投用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含荔枝核提取物的脂肪肝或肥胖的預(yù)防或治療用組合物。本發(fā)明的組合物導(dǎo)致體脂肪量的減少、內(nèi)臟脂肪量的減少、總膽固醇濃度的減少、對脂肪組織生成起到重要作用的核轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα和PPARγ2以及作為這些核轉(zhuǎn)錄因子的靶基因的aP2基因的表達(dá)量的減少，最終呈現(xiàn)肥胖的預(yù)防或治療活性。本發(fā)明的組合物能夠維持肝的形態(tài)功能、結(jié)構(gòu)功能及生理功能地抑制及治療脂肪肝疾病的進(jìn)行，而且也具有預(yù)防發(fā)病的效果。尤其是，本發(fā)明的組合物通過改善存在于肝組織內(nèi)的脂質(zhì)含量，來改善肝組織內(nèi)的脂肪堆積，并使肝功能標(biāo)記酶的活性實現(xiàn)正?；纱司哂心軌蝾A(yù)防脂肪肝的發(fā)生，并抑制病情的進(jìn)展或者病態(tài)好轉(zhuǎn)的效果。并且，本發(fā)明提供關(guān)于具有預(yù)防及治療肥胖及脂肪肝的功效的荔枝核提取物的醫(yī)藥及食品的基礎(chǔ)資料。
文檔編號A61P3/04GK102740871SQ201080061825
公開日2012年10月17日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日
發(fā)明者樸太瑄, 黃完均 申請人:延世大學(xué)校技術(shù)持株株式會社