專利名稱：由紅藻類制備無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的方法及利用該方法的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由紅藻類制備無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的方法及利用上述提取物的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑，更具體地涉及一種由紅藻類中類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)含量相對(duì)高的紫菜或角叉菜制備無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的方法以及利用上述無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的紫外線吸收特性的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑。
背景技術(shù)：
太陽(yáng)紫外線不僅會(huì)引起以紅斑為代表的急性皮膚反應(yīng)，而且長(zhǎng)時(shí)間暴露于太
陽(yáng)紫外線環(huán)境時(shí)，將引發(fā)皮膚老化和皮膚癌。到達(dá)地表上的太陽(yáng)光線中包含的紫外線(Ultraviolet Ray,UV ray)根據(jù)波長(zhǎng)大致劃分為兩個(gè)區(qū)域,分為長(zhǎng)波UV-A (320nm_400nm)和中波 UV-B (280nm-320nm)o其中，當(dāng)能量相對(duì)大的UV-B被皮膚層吸收時(shí)，將引發(fā)急性皮膚脫落、DNA變異或致癌。另一方面，據(jù)有關(guān)報(bào)告內(nèi)容，UV-A的能量雖然小于UV-B，但相比UV-B，可滲透至皮膚更深層，引起早期皮膚老化現(xiàn)象，而且它將導(dǎo)致生成活性氧或者引發(fā)IL-I P和TNF-a等炎癥癥狀，最終引起基因表達(dá)的變化，UV-A將激活NF-k B和AP-I等轉(zhuǎn)錄因子。因UV-A激活轉(zhuǎn)錄因子，將引發(fā)稱為基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMP’ s)的一系列膠原蛋白溶解酶和彈力蛋白溶解酶，由此導(dǎo)致的膠原蛋白量的減少和纖維素的分段現(xiàn)象最終將引發(fā)典型的光老化現(xiàn)象。并且，UV-A很容易被作為皮膚色素體的尿刊酸(urocanicacid)或DNA等吸收，最終生成活性氧，與蛋白質(zhì)和脂類等重要分子產(chǎn)生反應(yīng)，從而破壞重要的生命分子或?qū)е缕鋯适Чδ?。UV-B的量隨著不同季節(jié)、同一天的不同時(shí)間、云量、緯度等發(fā)生變化，而UV-A則是常年以比較恒定量到達(dá)地表上，因此，要想實(shí)現(xiàn)持續(xù)的皮膚護(hù)理，應(yīng)更多地保護(hù)皮膚遠(yuǎn)離UV-A。為了保護(hù)皮膚免受紫外線的破壞而使用的紫外線屏蔽劑(Sunscreen)大致劃分為無(wú)機(jī)粒子形態(tài)和有機(jī)化合物形態(tài)。無(wú)機(jī)粒子形態(tài)的紫外線屏蔽劑包括作為超微礦物粒子的氧化鋅、二氧化鈦、二氧化鐵等類型的無(wú)機(jī)粒子，上述無(wú)機(jī)粒子粘附于皮膚表面，起到反射太陽(yáng)光線(紫外線)的屏障作用。無(wú)機(jī)粒子形態(tài)的紫外線屏蔽劑可保持皮膚的清涼，防御自然的太陽(yáng)光線(紫外線)，而且不會(huì)被皮膚吸收，因此，不會(huì)造成皮膚問(wèn)題，但它會(huì)對(duì)皮膚造成厚重感，而且在皮膚上留下殘留物。另一方面，有機(jī)化合物形態(tài)的紫外線屏蔽劑包含聚娃氧燒 _15 (Dimethico-diethylbenzalmalonate, Parsol)、苯甲酮(Sodium DihydroxyDimethoxy 0丨8111:1^0&6112(^116110116)、對(duì)氨基苯酸(口-4111；[110&61120；[。acid, PABA)等紫外線吸收性非常好的活性合成化合物，可阻擋UV-A滲透至皮膚深層并在膠原蛋白纖維或其他組織中引起老化的現(xiàn)象和由UV-B引起曬斑(Sunburn)或皮膚癌等現(xiàn)象,但容易引起皮炎或過(guò)敏，容易被溶解或生成活性氧。最近有報(bào)告還稱，上述有機(jī)化合物可能引起包括內(nèi)分泌系統(tǒng)障礙的副作用。因此，迫切需要開發(fā)一種不會(huì)對(duì)皮膚造成厚重感和因殘留物導(dǎo)致的異物感，同時(shí)不會(huì)導(dǎo)致刺激性皮炎、接觸性皮炎、光過(guò)敏性皮炎或光毒性皮炎等皮膚刺激或過(guò)敏反應(yīng)以及毒性等副作用的紫外線屏蔽劑用天然素材
發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問(wèn)題
本發(fā)明是為了解決上述的問(wèn)題而提出的，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種無(wú)光毒性或細(xì)胞毒性等并且因具有出色的紫外線吸收能力而能夠作為紫外線屏蔽劑的主要成分使用的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法。并且，本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種利用無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑。解決問(wèn)題的手段
本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)無(wú)數(shù)次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從紅藻類中的紫菜和角叉菜中提取包含被認(rèn)為是UV-A屏蔽物質(zhì)的類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)的紫外線屏蔽用提取物時(shí)，相比從其他綠藻類、褐藻類及紅藻類植物提取的情況，具有更高的產(chǎn)出率，還發(fā)現(xiàn)從上述紫菜和角叉菜中提取的紫外線屏蔽用提取物的光毒性及細(xì)胞毒性非常低，由此完成了本發(fā)明。為了達(dá)到本發(fā)明的一個(gè)目的，本發(fā)明提供一種無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其包括步驟(a)，準(zhǔn)備好從紫菜或角叉菜中選擇的一種以上紅藻類；步驟(b)，在上述準(zhǔn)備好的紅藻類中添加碳原子數(shù)為I至5的酒精與水的體積比為1:9至9:1的混合溶齊[J，在30°C 60°C的溫度保持以提取有效成分；以及步驟(C)，對(duì)包含上述有效成分及剩余紅藻類固體成分的混合溶劑進(jìn)行過(guò)濾來(lái)分離為上清液與剩余紅藻類固體成分。優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟(d)，在該步驟(d)中，使上述分離出的上清液通過(guò)薄膜過(guò)濾器，來(lái)去除雜質(zhì)。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟(e)，在該步驟(e)中，對(duì)上述分離出的上清液或去除雜質(zhì)后的上清液進(jìn)行濃縮和干燥，來(lái)獲得固體化的粗提取物。并且，優(yōu)選地，在上述固體化的粗提取物未經(jīng)薄膜過(guò)濾器去除雜質(zhì)的情況下，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟(f)，在該步驟(f)中，使上述固體化的粗提取物溶解于水并通過(guò)薄膜過(guò)濾器，來(lái)去除雜質(zhì)。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟
(g)，在該步驟(g)中，使通過(guò)上述步驟(f)去除雜質(zhì)后的粗提取物水溶液以水和碳原子數(shù)為I至5的酒精的濃度梯度展開，來(lái)獲得吸收280nm 400nm的紫外線波長(zhǎng)的粗提取餾分。此時(shí)，為了測(cè)量是否吸收紫外線波長(zhǎng)，可使用紫外檢測(cè)器(UV detector)，還可補(bǔ)充使用折射率(refractive index, RI)。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟
(h)，在該步驟(h)中，使上述粗提取餾分通過(guò)疏水性色譜柱，，來(lái)獲得第一次提純提取物。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟(i)，在該步驟(i)中，使上述第一次提純提取物通過(guò)大小排斥柱(Size ExclusionColumn)，來(lái)獲得第二次提純提取物。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可包括步驟(j )，在該步驟(j )中，對(duì)上述二次提純提取物進(jìn)行濃縮和干燥，來(lái)獲得固體化的提純提取物。為了達(dá)到本發(fā)明的再一個(gè)目的，本發(fā)明提供一種包含通過(guò)上述制備方法制備的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑。此時(shí)，紫外線屏蔽用提取物含有類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)作為有效成分,所含類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)的種類有帕里盯(Palythine)、海燕屬-330(Asterina-330)及施諾啉(Shinorine),還補(bǔ)充包含紫菜屬-334 (Porphyra-334)。由于類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)具有環(huán)己酮(cyclohexanone)或環(huán)己胺(cyclohexenimine)色素體結(jié)構(gòu)，因此,很好地吸收UV-A (320nm 400nm)區(qū)域的紫、外線，其吸光系數(shù)與人造紫外線屏蔽劑(Sunscreen)的吸光系數(shù)相似。發(fā)明的效果
本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，由于使用紫菜或角叉菜作為提取原料，因此，含有類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)的紫外線屏蔽用提取物的產(chǎn)出率相對(duì)地明顯高于從其他綠藻類、褐藻類及紅藻類植物中提取時(shí)的產(chǎn)出率。并且，從紫菜或角叉菜中提取的紫外線屏蔽用提取物，由于其光毒性和細(xì)胞毒性非常低，不會(huì)對(duì)皮膚造成厚重感甚至由殘留物導(dǎo)致的異物感，同時(shí)還可用作沒(méi)有刺激性皮炎、接觸性皮炎、光過(guò)敏性皮炎或光毒性皮炎等皮膚刺激或過(guò)敏反應(yīng)以及毒性等副作用的紫外線屏蔽劑的主要成分。


圖I表示本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法的流程。圖2為表示根據(jù)利用人類紅血細(xì)胞的光溶血試驗(yàn)法得出的從紫菜中提取的無(wú)毒性紫外線屏蔽用粗提取物(PE)和第二次提純提取物(P7)的光毒性結(jié)果的曲線圖。圖3為表示從紫菜中提取的無(wú)毒性紫外線屏蔽用粗提取物(PE)的濃度為500 U g/ml時(shí)的、由利用人類紅血細(xì)胞的光溶血試驗(yàn)法得出的光毒性結(jié)果的照片。圖4為表示從紫菜中提取的無(wú)毒性紫外線屏蔽用第二次提純提取物(P7)的濃度為250ii g/ml時(shí)的、由利用人類紅血細(xì)胞的光溶血試驗(yàn)法得出的光毒性結(jié)果的照片。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的一實(shí)施方式涉及一種無(wú)光毒性或細(xì)胞毒性等且因紫外線吸收能力出色而能夠作為紫外線屏蔽劑的主要成分的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法。下面，將參照?qǐng)D1，分步驟說(shuō)明本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法。但圖I表示一優(yōu)選實(shí)施例的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法的流程，本發(fā)明的技術(shù)思想并不因此受到限定或限制，顯然能夠由本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員進(jìn)行各種變形并實(shí)施。準(zhǔn)備提取原料的步驟SI使用從紫菜(Porphyra)或角叉菜(Chondrus)中選擇的一種以上作為提取原料。紫菜或角叉菜是紅藻類(Rhodophyta)植物的一種，根據(jù)本發(fā)明人的研究，含有類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids, MAA)的紫外線屏蔽用提取物的產(chǎn)出率相對(duì)地明顯高于從其他綠藻類、褐藻類及紅藻類植物中提取時(shí)的產(chǎn)出率。優(yōu)選地，使用干燥的紫菜或角叉菜，更優(yōu)選地，使用粗碎的紫菜或角叉菜。粗碎的紫菜或角叉菜，由于表面積非常大，可提高在提取溶劑作用下的提取速度及提取產(chǎn)出率。紫菜或角叉菜可通過(guò)乳缽(研缽)或粉碎裝置等完成粗碎。利用提取溶劑提取有效成分的步驟S2
在粗碎的紫菜或角叉菜等紅藻類中添加提取溶劑，保持規(guī)定溫度以提取有效成分。此時(shí)，使用水、酒精或者水與酒精的混合溶劑作為提取溶劑，優(yōu)選地，使用酒精與水的體積比為1:9至9:1的混合溶劑，更優(yōu)選地，使用酒精與水的體積比為4:1的混合溶劑。酒精與 水的體積比小于1:9的情況下，酒精含量過(guò)少，導(dǎo)致提取速度及提取產(chǎn)出率降低；而酒精與水的體積比大于9:1的情況下，酒精含量的增加帶來(lái)的提取速度及提取產(chǎn)出率的增加率不高，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)性降低，酒精與水的體積比為4:1的情況下，提取速度、提取產(chǎn)出率及經(jīng)濟(jì)性表現(xiàn)最佳。酒精使用碳原子數(shù)為I至5的酒精，優(yōu)選地使用甲醇或乙醇，更優(yōu)選地使用甲醇。使用甲醇的情況下，其提取速度及提取產(chǎn)出率高于其他酒精。提取溫度的范圍不受到很大限制，優(yōu)選地約為30°C 60°C。提取溫度小于30°C的情況下，提取速度及提取產(chǎn)出率過(guò)低；提取溫度超過(guò)60°C的情況下，導(dǎo)致部分酒精氣化，而無(wú)法用于提取。通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離上清液與剩金紅藻類固體成分的步驟S3
利用提取溶劑提取完有效成分后，對(duì)包含有效成分及剩余紅藻類固體成分的混合溶劑進(jìn)行過(guò)濾，來(lái)分離為上清液與剩余紅藻類固體成分。關(guān)于用于過(guò)濾的過(guò)濾材料，只要能夠有效分離上清液與剩余紅藻類固體成分，則其種類不受到很大限制，具體可使用過(guò)濾紙(Filter paper)或過(guò)濾布等,氣孔大小約在0. I ii m 0. 005mm范圍內(nèi)。另一方面，完成第一次提取后，通過(guò)過(guò)濾而分離出的剩余紅藻類固體成分中存在未提取的類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids,MAA)等有效成分,為了提高最終提取產(chǎn)出率，將上述剩余紅藻類固體成分添加至混合溶劑，反復(fù)進(jìn)行一次至三次提取后通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離上清液與剩余紅藻類固體成分的過(guò)程。并且，雖然未在圖I中表示，但本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法還可選擇性地包含使分離出的上清液通過(guò)薄膜過(guò)濾器(Membrane filter)來(lái)去除雜質(zhì)的步驟。薄膜過(guò)濾器是具有納米大小的氣孔(約小于IOOnm)的膜，起到一種從上清液去除包含在過(guò)濾上清液中的雜質(zhì)或污染物質(zhì)等的作用。從上清液獲得固體化的粗提取物的步驟S4
對(duì)經(jīng)過(guò)濾分離或薄膜過(guò)濾器處理后的上清液進(jìn)行濃縮及干燥過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)固體化，從而獲得粗提取物。優(yōu)選地，上清液的濃縮采用減壓濃縮方法，上清液的干燥采用凍結(jié)干燥方法。在采用減壓濃縮方法的情況下，在低溫條件下可容易使提取溶劑蒸發(fā)，采用凍結(jié)干燥方法的情況下，由于在低溫條件下提取物實(shí)現(xiàn)固體化，因而能夠防止提取物的有效成分在熱作用下改性。制備固體化的耜.提取物水溶液并進(jìn)行薄膜過(guò)濾器處理的步驟S5
將固體化的的粗提取物溶解于水，來(lái)制備粗提取物水溶液。另一方面，在粗提取物水溶液的粗提取物在其制備過(guò)程中未經(jīng)薄膜過(guò)濾器處理的情況下，使粗提取物水溶液通過(guò)薄膜過(guò)濾器來(lái)去除雜質(zhì)等。去除雜質(zhì)后的粗提取物水溶液經(jīng)過(guò)后述的分餾及提純步驟。并且，雖未在圖I中圖示，但通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離上清液與剩余紅藻類固體成分的步驟S3中，經(jīng)過(guò)濾及薄膜過(guò)濾器處理后的上清液也可進(jìn)行后述的分餾及提純處理。對(duì)耜.提取物水溶液進(jìn)行分餾的步驟S6
使去除雜質(zhì)后的粗提取物水溶液或在通過(guò)過(guò)濾來(lái)分離上清液與剩余紅藻類固體成分的步驟S3中經(jīng)過(guò)濾及薄膜過(guò)濾器處理后的上清液，以水和酒精的濃度梯度展開，從展開的粗提取物水溶液中，獲得吸收280nm 400nm的紫外線波長(zhǎng)的粗提取餾分。此時(shí)，酒精使用碳原子數(shù)為I至5的酒精，優(yōu)選地使用甲醇。關(guān)于水-酒精濃度梯度的展開，具體例子 可以例舉依次展開水、50體積％的酒精水溶液的方法。另一方面，為了測(cè)量展開的粗提取物水溶液或上清液中吸收80nm 400nm的紫外線波長(zhǎng)的分餾部分，使用紫外檢測(cè)器(UVdetector),還可補(bǔ)充使用折射率(refractive index, RI)。用疏水性色譜柱對(duì)耜.提取餾分進(jìn)行第一次提純的步驟S7
使所搜集的粗提取餾分通過(guò)疏水性色譜柱，來(lái)獲得第一次提純提取物。此時(shí)，使用的疏水性色譜柱其類型不受限制，具體而言，在由瓊脂糖膠(agarose gel)、硅膠或有機(jī)高分子樹脂形成的基體粒子的表面結(jié)合有從疏水性烷基、疏水性芳基、疏水性氰基及疏水性胺基構(gòu)成的組中選擇的一個(gè)疏水性官能團(tuán)。疏水性烷基有丁基、辛基、十八烷基等；疏水性芳基有苯基乙基；疏水性氰1基有氰1基丙基；疏水性胺基有氣基丙基。并且，優(yōu)選地，本發(fā)明使用的疏水性色譜柱的硅膠表面結(jié)合有從疏水性烷基、疏水性芳基、疏水性氰基及疏水性胺基構(gòu)成的組中選擇的一個(gè)疏水性官能團(tuán)，作為這種疏水性色譜柱，市面上有日本資生堂公司的CAPCELL PAK C8, CAPCE11 PAk C18等。其中，CAPCELL PAK C18是在膠囊類型的硅膠的表面蒸鍍(vacuum evaporation )娃(Si I icone )高分子來(lái)形成單層,在單層的表面結(jié)合十八烷基。尤其，在本發(fā)明中，使用CAPCELL PAK C18 UG120作為疏水性色譜柱的情況下，流動(dòng)相(mobile phase)則使用醋酸水溶液。用大小排斥梓對(duì)第一次提純提取物講行第二次提純的步驟S8
使第一次提純提取物通過(guò)大小排斥柱(Size Exclusion Column),來(lái)獲得第二次提純提取物。此時(shí)，使用的大小排斥柱若可用于水溶性系統(tǒng)，則其類型不受很大限制，具體地可以是資生堂公司的二氧化硅基水溶系列大小排斥柱(KW-800系列、KW-400系列)、多羥甲基丙烯酸酯(Polyhydroxy Methacrylate)基的大小排斥柱(OHpak系列)等。從第二次提純提取物獲得固體化的提純提取物的步驟S9
對(duì)第二次提純提取物進(jìn)行濃縮和干燥，來(lái)獲得固體化的提純提取物。特征在于，優(yōu)選地，第二次提純提取物的濃縮采用減壓濃縮方法，干燥則采用凍結(jié)干燥方法。采用減壓濃縮方法的情況下，在低溫條件下可容易使水等溶劑蒸發(fā)，采用凍結(jié)干燥方法的情況下，由于在低溫條件下提純提取物實(shí)現(xiàn)固體化，因而能夠防止提純提取物的有效成分在熱作用下改性。本發(fā)明的再一實(shí)施方式涉及一種利用通過(guò)本發(fā)明的制備方法制備的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑。本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物含有類菌胞素氨基酸(Mycosporine-likeamino acids,MAA)作為有效成分，含有帕里盯(Palythine)、海燕屬-330 (Asterina-330)及施諾啉(Shinorine)作為類菌胞素氨基酸(Mycosporine-like amino acids,MAA),選擇性地還含有紫菜屬-334(Porphyra-334)，因而UV-A吸收性能出色。并且,本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物(尤其是第二次提純提取物)的光毒性或細(xì)胞毒性非常低，可用作無(wú)毒性紫外線屏蔽劑的主要成分 。有關(guān)紫外線屏蔽劑的具體組成，包含約0. 05 10重量％的本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物、約5 40重量％的乳狀介質(zhì)、約I 10重量％的乳化劑、微量的輔助劑以及余量的水等水狀介質(zhì)作為活性成分。乳狀介質(zhì)有鏈燒烴(paraffin)或礦物油等碳?xì)溆汀⑹D(paraffin wax)、天然油、硅油、棕櫚酸異丙酯等脂肪酸酯、硬脂醇等脂肪醇等，乳狀介質(zhì)構(gòu)成“油中水”(water inoil)或“水中油”(oil in water)狀態(tài)的乳狀成分。乳化劑(Emulsifier)有山梨醇酯(Sorbitan eser,商標(biāo)名SPAN)、乙氧基化山梨醇酯(Ethoxylated Sorbitan ester,商標(biāo)名 Tween)、娃多兀醇(Silicone Polyol)、硬脂酸
鐘、乙氧基化脂肪酸酷等。輔助劑有通常包含在紫外線屏蔽劑中的潤(rùn)滑劑(Emolient)、保濕劑、抗氧化劑、乳化穩(wěn)定劑、增粘劑、防腐劑、芳香劑、著色劑等。以下，通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更明確的說(shuō)明。但下述實(shí)施例并不限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。I.提取原料的甄別
從國(guó)內(nèi)海水中采取綠藻類(Green algae,綠藻門)、褐藻類(Brown algae,褐藻門)、紅藻類(Red algae,紅藻門)樣本,使用濾紙去除水分后在乳缽進(jìn)行粗碎,每個(gè)樣本準(zhǔn)備IOOg的提取原料。在IOOg提取原料中添加IOml的具有80體積％甲醇濃度的水溶液(由甲醇體積80及水體積20組成的混合溶劑)，在約45°C溫度條件下使用攪拌機(jī)攪拌5分鐘，提取有效成分后，使用過(guò)濾紙進(jìn)行過(guò)濾，以約280nm 400nm波長(zhǎng)的紫外線進(jìn)行掃描，檢索提取液的紫外線吸收能力。表I表示從綠藻類樣本提取的提取液的紫外線吸收能力結(jié)果；表2表示從褐藻類樣本提取的提取液的紫外線吸收能力結(jié)果；表3表示從紅藻類樣本提取的提取液的紫外線吸收能力結(jié)果。表I
蔡藻類種類I顯示吸收峰值的紫外線波長(zhǎng)(mn)
石莼(UlvalactucaL. )_未檢狽J出_
孑 L 石莼(UlvapertUSAKj el Iman )_未檢狽 J 出_
牡丹菜(UlvaconglobataKjellman )_未檢狽 J 出_
表2
褐藻類種類I顯示吸收峰值的紫外線波長(zhǎng)(mn)
篩狀孑L葉藻(AgarumcribrosomBory)_未檢狽J出_
繩藻(Cordaf i IumLamouroux )未檢測(cè)出
葡萄昆布(Ekloniastolonifera)_未檢狽J出_
帶形解氏藻(KjellmanielacrassifoliaMiyabe)未檢測(cè)出
權(quán)利要求
1.一種無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，包括 步驟(a)，準(zhǔn)備好從紫菜或角叉菜中選擇的一種以上紅藻類； 步驟(b)，在上述準(zhǔn)備好的紅藻類中添加碳原子數(shù)為I至5的酒精與水的體積比為1:9至9:1的混合溶劑，在30°C 60°C的溫度保持以提取有效成分；以及 步驟(C)，對(duì)包含上述有效成分及剩余紅藻類固體成分的混合溶劑進(jìn)行過(guò)濾來(lái)分離為上清液與剩余紅藻類固體成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，上述步驟(a)的紅藻類被粗碎。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括使用上述步驟(C)的剩余紅藻類固體成分，反復(fù)進(jìn)行一次至三次步驟(b)及步驟(C)的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括步驟(d)，在該步驟(d)中，使上述分離出的上清液通過(guò)薄膜過(guò)濾器，來(lái)去除雜質(zhì)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括步驟(e)，在該步驟(e)中，對(duì)上述分離出的上清液進(jìn)行濃縮和干燥，來(lái)獲得固體化的粗提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括 步驟(f)，使上述固體化的粗提取物溶解于水并通過(guò)薄膜過(guò)濾器，來(lái)去除雜質(zhì)；以及 步驟(g)，使上述去除雜質(zhì)后的粗提取物水溶液以水和碳原子數(shù)為I至5的酒精的濃度梯度展開，來(lái)獲得吸收280nm 400nm的紫外線波長(zhǎng)的粗提取餾分。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括步驟(h)，在該步驟(h)中，使上述粗提取餾分通過(guò)疏水性色譜柱，來(lái)獲得第一次提純提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，上述疏水性色譜柱的硅膠的表面結(jié)合有從疏水性烷基、疏水性芳基、疏水性氰基及疏水性胺基構(gòu)成的組中選擇的一個(gè)疏水性官能團(tuán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括步驟(i)，在該步驟(i)中，使上述第一次提純提取物通過(guò)大小排斥柱，來(lái)獲得第二次提純提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，其特征在于，還包括步驟(j )，在該步驟(j )中，對(duì)上述二次提純提取物進(jìn)行濃縮和干燥，來(lái)獲得固體化的提純提取物。
11.一種無(wú)毒性紫外線屏蔽劑，其特征在于，包含通過(guò)如權(quán)利要求I至10中任一項(xiàng)所述的制備方法制備的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑，其特征在于，上述無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物含有類菌胞素氨基酸作為有效成分。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑，其特征在于，上述無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物包含帕里叮、海燕屬-330及施諾啉作為類菌胞素氨基酸。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的無(wú)毒性紫外線屏蔽劑，其特征在于，上述無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物還包含紫菜屬-334作為類菌胞素 氨基酸。
全文摘要
本發(fā)明提供一種無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，該方法包括步驟(a)，準(zhǔn)備好從紫菜或角叉菜中選擇的一種以上紅藻類；步驟(b)，在上述準(zhǔn)備好的紅藻類中添加碳原子數(shù)為1至5的酒精與水的體積比為1:9至9:1的混合溶劑，在30℃～60℃的溫度保持以提取有效成分；以及步驟(c)，對(duì)包含上述有效成分及剩余紅藻類固體成分的混合溶劑進(jìn)行過(guò)濾來(lái)分離為上清液與剩余紅藻類固體成分。本發(fā)明的無(wú)毒性紫外線屏蔽用提取物的制備方法，由于使用紫菜或角叉菜作為提取原料，因此，含有類菌胞素氨基酸的紫外線屏蔽用提取物的產(chǎn)出率相對(duì)地明顯高于從其他綠藻類、褐藻類及紅藻類植物中提取的產(chǎn)出率。并且，從紫菜或角叉菜中提取的紫外線屏蔽用提取物，由于其光毒性和細(xì)胞毒性非常低，不會(huì)對(duì)皮膚造成厚重感甚至由殘留物導(dǎo)致的異物感，同時(shí)還可用作沒(méi)有對(duì)刺激性皮炎、接觸性皮炎、光過(guò)敏性皮炎或光毒性皮炎等皮膚刺激或過(guò)敏反應(yīng)以及毒性等副作用的紫外線屏蔽劑的主要成分。
文檔編號(hào)A61P17/00GK102740869SQ201080063299
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2010年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月8日
發(fā)明者樸真喜, 韓泰準(zhǔn) 申請(qǐng)人:仁川大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)