專利名稱：用于局部應(yīng)用的新的協(xié)同藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于局部應(yīng)用的新的協(xié)同藥物組合物。更具體地，本發(fā)明涉及用于制備用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍、糖尿病性足潰瘍和其他皮膚疾病的局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物。本發(fā)明的新制劑包括一種或多種協(xié)同活性成分以及一種或多種非活性成分。協(xié)同活性成分包括與一種或多種殺菌劑和抑菌劑協(xié)同組合的促細胞分裂蛋白(生長因子)。更具體地，協(xié)同活性成分包括重組人表皮生長因子(rh-EGF)(Bharat Biotech International Limited 的 REGEN-D )和 / 或血小板衍生的生長因子(rh-PDGF-BB)、磺胺嘧啶銀(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)，而一種或多種非活性成分可以包括載體、防腐劑、乳化劑、潤膚劑和柔膚劑以及一種或多種其他組分。本發(fā)明的新組合物可用于制備用于以乳膏或凝膠形式或液體形式應(yīng)用于傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍、糖尿病性足潰瘍和其他皮膚疾病的局部制劑。
背景技術(shù)：
燒傷是皮膚所經(jīng)歷的任何由熱、冷、電、化學(xué)品、摩擦或輻射引起的極端情況。燒傷傷害一般伴隨組織液和電解質(zhì)失衡、燒傷區(qū)域的減速愈合、代謝紊亂、肌肉分解代謝和各種其他的重要器官并發(fā)癥，并且還可以具有繼發(fā)性并發(fā)癥，如細菌和/微生物感染。這些并發(fā)癥的每一種需要不同的藥劑/藥物來提供拯救生命時的綜合燒傷管理。燒傷相關(guān)的傷害和死亡是東南亞的主要問題，特別是在發(fā)展中國家，如印度。根據(jù)WHO報道，東南亞區(qū)域占全球負擔(dān)的近10%，僅印度每年有35，000例燒傷相關(guān)的死亡。即使在發(fā)達國際，例如美國，每年估計210萬美國人尋求燒傷的醫(yī)療處理。燒傷患者死亡率的主因中的一種是嚴重的全身感染。這些感染的主要進入途徑是未處理的燒傷表面暴露于各種細菌和病原體。各種因素，例如皮膚屏障的破壞、大的皮膚細菌負荷、正常菌群轉(zhuǎn)成條件病原體的可能性以及免疫系統(tǒng)的嚴重抑制，促成燒傷受害者的敗血癥，其通常是威脅生命的[I]。燒傷表面和傷口縫合的早期上皮再形成的適當(dāng)傷口管理是燒傷患者的治療和預(yù)后的重要步驟。感染控制是在預(yù)防繼發(fā)性感染以及維持適當(dāng)?shù)臒齻线^程中的非常重要的過程。雖然在燒傷的細菌平衡的建立中使用局部抗微生物劑是必要的，但是它伴隨延遲的燒傷愈合，其中皮膚增殖和膠原沉積的過程起主要作用[2]。一些研究顯示，燒傷愈合過程被延遲，這對于二級和三級燒傷是顯著的，因為利用其受體的生長促進因子如重組人表皮生長因子(rh-EGF)或血小板衍生的生長因子(rh-PDGF-BB)的產(chǎn)生被延遲或減少。重組人表皮生長因子rh-EGF屬于通過結(jié)合靶細胞上的受體激酶來調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移和分化的生長因子家族[3]。對于許多細胞類型，包括平滑肌細胞，已經(jīng)顯示rh-EGF用作有效的促細胞分裂原，還用作分化因子[4]。動物中的實驗研究已經(jīng)說明，rh-EGF的局部應(yīng)用加速了部分厚度傷口和二級燒傷的表皮再生速率[5]。rh-EGF是分子量為6. 2kDa的53個氨基酸的蛋白，并且通過重組基因技術(shù)獲得。構(gòu)建了編碼合成的rh-EGF多核苷酸序列的新載體，所述多核苷酸序列在大腸桿菌(E.coli)中過表達并被純化以獲得> 98%純的蛋白[6]。
在傷口愈合過程中，通過EGF受體由rh-EGF肽提供了細胞增殖信號。EGF受體具有酪氨酸激酶跨膜結(jié)構(gòu)域以及胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域和胞外結(jié)構(gòu)域，其參與rh-EGF結(jié)合。這導(dǎo)致EGF受體二聚化、該受體的自體磷酸化和其他蛋白的酪氨酸磷酸化。這激活了促細胞分裂原激活的蛋白激酶(MAP激酶)途徑，最終引起轉(zhuǎn)錄因子(例如C-Fs)磷酸化以產(chǎn)生促進增殖的AP-I和ELK-I。JAK激酶響應(yīng)于rh-EGF的對STAT-I和STAT-3轉(zhuǎn)錄因子的激活促成增殖信號傳導(dǎo)。而且，由rh-EGF活性蛋白激酶C誘導(dǎo)的磷脂酰肌醇信號傳導(dǎo)和鈣釋放是EGF信號傳導(dǎo)的另一組成部分。上述過程吸引細胞進入傷口并刺激其增殖，提高肉芽組織的形成速率并增加膠原生成[7，8]。盡管生長因子(如rh-EGF)幫助愈合燒傷，但重要的是預(yù)防燒傷管理期間引起的感染。重組人表皮生長因子 rh-EGF(REGEN-D,BharatBiotech International Limited)被克隆并在大腸桿菌中過表達，通過顯著減少愈合持續(xù)時間而顯示了增強的燒傷愈合。但是燒傷相關(guān)風(fēng)險是微生物感染入侵。這是抗微生物劑在燒傷管理中發(fā)揮重要作用的地方?，F(xiàn)有技術(shù)中，各種局部抗細菌/抗微生物劑可用于傷口護理，如桿菌肽、硫酸多粘 菌素B、新霉素、聚維酮碘、醋酸磺胺米隆乳膏、硝基糠腙、艮他霉素等。桿菌肽是有效對抗革蘭氏陽性球菌和桿菌的多肽抗生素。桿菌肽還可增強傷口的上皮再形成，盡管它對角質(zhì)形成細胞增殖沒有影響?？剐跃甑陌l(fā)生率不可能增加，因為桿菌肽對細菌質(zhì)膜的性質(zhì)起作用，而不對分子合成起作用[9]。硫酸多粘菌素B是有效對抗革蘭氏陰性生物的簡單的堿性肽抗生素。硫酸多粘菌素B引起角質(zhì)形成細胞增殖的更大減少[10]。新霉素是廣譜抗生素，并且對于革蘭氏陰性生物特別有效。然而，使用新霉素更頻繁地出現(xiàn)副作用，如過敏反應(yīng)、特別是皮疹[11]。聚維酮碘是有效對抗革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌的殺菌劑。已經(jīng)顯示臨床濃度的聚維酮碘體外對于人成纖維細胞和角質(zhì)形成細胞是毒性的。還報道了聚維酮碘被傷口滲出液失活。該局部藥劑可能硬化而非軟化傷口焦痂，因此增加了傷口清創(chuàng)的難度和不適。醋酸磺胺米隆是甲基化的局部磺胺化合物。該藥物具有寬范圍的抗細菌活性，對抗大部分革蘭氏陰性和革蘭氏陽性病原體。然而，磺胺米隆的使用可能抑制上皮再形成?；前访茁∫种贫嘈魏税准毎?PMN)和淋巴細胞活性[16]。硝基糠腙化合物是有效對抗金黃色葡萄球菌(S. aureus)、腸桿菌(Bnterobactor)和大腸桿菌的廣譜抗細菌劑，但是對銅綠假單胞菌(P. aeruginosa)效力較差，并且沒有顯著的殺真菌活性。已經(jīng)顯示硝基糠腙對在培養(yǎng)物中的角質(zhì)形成細胞的生長和遷移具有有害作用[17]。美國的燒傷中心不常使用硝基糠腙。艮他霉素對于革蘭氏陰性微生物非常有效?？赡墚a(chǎn)生對艮他霉素的抗性，并且該抗性必然限制該藥物治療的使用。已經(jīng)顯示艮他霉素抑制PMN的活性。已經(jīng)報道了艮他霉素的皮膚過敏性[20]?；前粪奏ゃy(SSD)是作為I %水混溶乳膏制備的硝酸銀和磺胺嘧啶鈉的局部磺胺化合物。磺胺嘧啶銀有效對抗大范圍的菌系，特別是革蘭氏陰性細菌(如大腸桿菌、腸桿菌、克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌)和革蘭氏陽性細菌(如金黃色葡萄球菌和白色念珠菌(Candida albicans))。
在可用于燒傷的各種局部抗微生物劑中，以上指出的那些中的一些，磺胺衍生物近年來在革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌感染所感染的不同程度燒傷的治療中享有當(dāng)之無愧的聲譽，同時有效對抗酵母。在磺胺類藥中，在大多數(shù)燒傷患者中被選擇用于預(yù)防和治療的藥物是磺胺嘧啶銀(SSD)。SSD是有效的廣譜抗微生物劑，通常加入用于燒傷的局部乳膏。事實上，最近五十年以來，SSD已經(jīng)常規(guī)用于治療微生物感染的不同程度燒傷。過去的研究顯示，SSD抑制對其他抗微生物劑抗性的細菌，并且該化合物優(yōu)于許多其他抗微生物劑。它作用于微生物的細胞膜和細胞壁以產(chǎn)生其殺細菌作用。銀從制劑中以選擇性地對細菌有毒性的濃度緩慢釋放。銀還損傷細菌細胞的DNA?；前粪奏ぃ缙渌前奉愃?，通過與對氨基苯甲酸(PABA)競爭而抑制細菌的二氫葉酸的合成。它不對人類細胞起作用。另一種抗微生物劑，即葡萄糖酸氯己定(CHG)是強大的相對無毒的殺菌劑，其在目前的臨床實踐中被廣泛認可[18]。CHG是重要的殺菌劑、消毒劑、抗細菌牙洗劑和 防腐劑。它具有寬的抗微生物譜，并且有效對抗革蘭氏陽性、革蘭氏陰性細菌、病毒和真 菌。CHG結(jié)合細菌細胞壁和胞質(zhì)組分，導(dǎo)致改變的滲透平衡和胞質(zhì)組分沉淀。在低濃度下，氯己定是抑菌劑；在高濃度下，它是殺菌劑。葡萄糖酸氯己定是結(jié)合角質(zhì)層的二雙胍(bisbiguanide),提供了持續(xù)的殺細菌和殺真菌活性。它在有機材料(例如全血)存在下不失去其效力。CHG被吸附至微生物的細胞壁，引起吸收材料從多種細菌的泄漏，并且影響蛋白結(jié)構(gòu)，抑制例如膜結(jié)合的ATP酶[19]，改變蛋白構(gòu)型并促進細胞對多粘菌素的攝取。盡管SSD是最近五十年以來用于燒傷的標準治療，但是一些研究顯示，該化合物延遲了傷口愈合過程，這對于二級和三級燒傷是顯著的，因為利用其受體的生長促進因子的產(chǎn)生被延遲或減少。而且，從燒傷處吸收銀導(dǎo)致銀毒性，這導(dǎo)致皮膚再生的損害和皮膚組織機械強度降低。針對人皮膚成纖維細胞的幾項體外研究顯示了隨遞增濃度的SSD和醋酸磺胺米隆而累進的細胞毒性。在相同研究中，人皮膚成纖維細胞預(yù)先暴露于EGF、堿性成纖維細胞生長因子或血小板衍生的生長因子導(dǎo)致了人類皮膚成纖維細胞對抗SSD效應(yīng)的細胞保護[29] ο已經(jīng)報道了細菌對銀耐受的案例。Cason等人早在1966年報道了燒傷中革蘭氏陰性桿菌中的這種案例[21]。在20世紀70年代末，出現(xiàn)耐受SSD的革蘭氏陰性分離株(陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、斯氏普羅威登斯菌(Providencia stuartii)和銅綠假單胞菌)對燒傷感染或定殖的爆發(fā)的幾個報道。顯然，暴露于銀可以選擇抗性微生物，并且這可以在其中廣泛使用銀時在固有銀抗性細菌的優(yōu)勢中發(fā)揮重要作用。Li等人報道了通過在體外反復(fù)暴露于遞增濃度而使細菌發(fā)展對高濃度銀(>1024ppm)的耐受性[27]。與使用SSD治療燒傷相關(guān)的缺點導(dǎo)致Bharat BiotechInternationalLimited (BBIL)開發(fā)了包含SSD和rh-EGF的制劑。該組合有助于rh-EGF的延長時期的釋放和對于最佳傷口愈合效果必需的銀遞送的限制。該SSD和rh-EGF組合的最重要功能是rh-EGF針對SSD的細胞保護作用，并且還通過EGF的合作補充來幫助逆轉(zhuǎn)受損燒傷愈合過程。結(jié)果確立了該組合通過加快燒傷患者的傷口愈合過程來幫助逆轉(zhuǎn)銀在那里的細胞毒效應(yīng)。但已經(jīng)提出了對臨床樣本中報道的由于滲透屏障導(dǎo)致的對發(fā)展SSD的細菌抗性和銀抗性生物的可能性的擔(dān)憂。
使用BBIL的rh-EGF和SSD的組合進行有關(guān)EGF進入血流的滲透性的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)為陰性，這清楚地表明，在BBIL產(chǎn)生的rh-EGF不進入血流。SSD與BBIL的rh-EGF的組合在燒傷患者中的試驗顯示了應(yīng)用rh-EGF對皮膚和皮下燒傷的愈合過程的加速效力，這樣導(dǎo)致皮膚具有與正常皮膚相同的外觀、彈性和顏色并且主要成就是沒有肥大性疤痕。這些證據(jù)顯示rh-EGF對愈合的作用，可能是由于其促細胞分裂效應(yīng)。雖然rh-EGF和SSD的組合照顧了通過逆轉(zhuǎn)SSD效應(yīng)延遲傷口愈合的問題，在該制劑最重要的缺點在于，由于SSD的不可滲透能力而常發(fā)現(xiàn)磺胺抗性。盡管存在使用銀離子管理感染的醫(yī)療益處，但已經(jīng)提出對發(fā)展細菌抗性的可能性的擔(dān)憂，并且已經(jīng)暗示與抗生素交叉抗性的關(guān)聯(lián)。已經(jīng)在臨床和環(huán)境樣本中報道了銀抗性生物。SSD與EGF的組合只能防止由于銀的細胞毒效應(yīng)并幫助逆轉(zhuǎn)受損的傷口愈合過程。但這種組合不能有效對抗微生物由于滲透屏障對SSD的抗性。這種組合不足以阻止抗銀微生物的感染，并且這可能會導(dǎo)致繼發(fā)性感染的起因，繼發(fā)性感染可能延長傷口愈合過程，而且還嚴重威脅燒傷?，F(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)測試并使用了大量的抗微生物劑。其中最常見藥劑之一是磺胺嘧啶銀(SSD)，它已經(jīng)單獨或以與其他抗微生物劑(如葡萄糖酸氯己定(CHG))的組合或以·SSD 與 rh-EGF 的組合(如 Bharat BiotechInternational Limited 所使用的)使用。然而，現(xiàn)有技術(shù)制劑都沒能提供更廣譜的覆蓋、更快傷口愈合而沒有抗性發(fā)展的風(fēng)險、金屬離子毒性、細胞毒性等。發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的是提供用于制備局部制劑的廣譜藥物組合物，所述局部制劑將用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍、糖尿病性足潰瘍和其他皮膚疾病。本發(fā)明的另一個目的是提供包括抗微生物劑/抗細菌劑和促細胞分裂蛋白的新的局部藥物制劑，其具有更廣的抗細菌/抗微生物譜并且有效對抗SSD抗性微生物而沒有或具有可忽略的副作用。本發(fā)明另一個目的是提供含有任何一種生長因子的具有更好和更快傷口愈合性質(zhì)的新的局部藥物制劑。本發(fā)明另一個目的是提供乳膏、凝膠或液體形式的新的廣譜局部藥物制劑，其具有更長的穩(wěn)定性和貯存期限。發(fā)明概述公開了用于制備用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍、糖尿病性足潰瘍和其他皮膚疾病的局部制劑的新的協(xié)同廣譜藥物組合物，其中所述制劑可以是乳膏、凝膠或液體形式。本發(fā)明的新的協(xié)同組合物包括至少三種協(xié)同活性成分和一種或多種非活性成分。協(xié)同活性成分包括一種或多種廣譜殺菌劑、一種或多種廣譜抑菌劑和促細胞分裂生長因子。非活性成分被用來為制劑提供基底、滲透性和穩(wěn)定性，并且包括載體、防腐劑、乳化劑、潤膚劑和柔膚劑和一種或多種其他組分。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，促細胞分裂蛋白是BharatBiotechInternational Limited開發(fā)的重組人表皮生長因子(rh-EGF) (REGEN-D )或血小板衍生的生長因子(rh-PDGF-BB)。
殺菌劑和抑菌劑選自由以下組成的組桿菌肽、磺胺嘧啶銀(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚維酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，廣譜殺菌劑是磺胺嘧啶銀(SSD)，并且廣譜抑菌劑是葡萄糖酸氯己定(CHG)。制劑的協(xié)同非活性成分選自由以下組成的組PEG_30 二聚羥基硬脂酸酯、異十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化鈦、聚羥基硬脂酸、硬脂酸鋁、礬土、硫酸鎂、硬脂酸、山梨糖醇、對羥基苯甲酸甲酯鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、氫氧化鈉、EDTA 二鈉、丙烯酰二甲基牛磺酸銨/VP共聚物、二棕櫚酰羥脯氨酸、Bois II 、鯨蠟醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14異鏈烷烴、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、輕質(zhì)液體石臘、pemulen TR-1> carbopol ultrez、甘露糖醇和凈化水。本發(fā)明的新的協(xié)同組合物具有協(xié)同效應(yīng)，如更廣的抗微生物和/或抗細菌譜、對 抗SSD抗性微生物的效力、更好且更快的傷口愈合、SSD細胞毒性的逆轉(zhuǎn)、具有持續(xù)抗細菌/抗微生物活性的制劑的更長的穩(wěn)定性和貯存期限。各種試驗和測試結(jié)果已經(jīng)顯示，該組合物最適合不同程度的燒傷，并且該新的協(xié)同組合物還可用于其他適應(yīng)癥，如傷口、皮移植片、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍。研究結(jié)果清楚指示，所述的新制劑在不同程度燒傷中非常有效，并且還用于燒傷的快速愈合而無任何感染。對這些新制劑進行穩(wěn)定性研究，該新制劑的實時和加速時間穩(wěn)定性研究顯示，該組合是穩(wěn)定的，且在無任何感染的燒傷的快速愈合中更有效。包含rh-EGF、磺胺嘧啶銀(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)的制劑的新的協(xié)同組合物阻止微生物對銀的抗性作用，并幫助銀在燒傷中的滲透。制劑中即使低濃度的CHG也幫助銀在燒傷中的滲透，從而增強銀針對抗性微生物的效力。BBIL的rh-EGF、SSD和CHG的這種協(xié)同組合的選擇原理是，磺胺抗性經(jīng)常是歸因于滲透屏障，并且公知氯己定能夠影響該屏障，其次是該組合在燒傷治療中具有與SSD相當(dāng)?shù)念A(yù)防性質(zhì)，并且在前者中的任何一個均未形成抗性，并且使用制劑的三種藥劑比單獨使用rh-EGF+SSD的傷口愈合過程更快。該新的協(xié)同組合幫助rh-EGF逆轉(zhuǎn)銀效應(yīng)，并且還有效對抗廣譜的對銀抗性的微生物，其中通過添加低濃度的CHG而增加銀滲透來阻止該抗性。由于CHG和SSD之間的協(xié)同相互作用，獲得了組合物的協(xié)同結(jié)果。制劑的CHG增加了 SSD的抗細菌效力。而且，對極高濃度SSD抗性的微生物也可以在SSD與本發(fā)明制劑中CHG組合使用時被殺傷。假單胞桿菌和葡萄球菌菌株的一些菌種對磺胺的抗性是由于以上段落中解釋的屏障機制。但是對于CHG和SSD組合，結(jié)論是CHG沒有充分改變膜以允許含氮堿基、核苷酸或核苷外流，改變足以允許磺胺喃唳(sulphadizine)分子進入,從而使燒傷中的微生物徹底減少。因此，CHG和SSD與本發(fā)明新制劑中BBIL的rh_EGF的協(xié)同效應(yīng)通過局部預(yù)防作用提供了對燒傷感染的最有效控制，并且用于治療。附圖
簡述圖I是顯示制劑中使用不同濃度rh-EGF的就動物數(shù)目而言的傷口愈合百分比的幾何表示。圖2是顯示制劑中使用不同濃度rh-PDGF-BB的就動物數(shù)目而言的傷口愈合百分比的幾何表示。圖3是顯示使用不同制劑組合物的燒傷患者的傷口愈合百分比的幾何表示。圖4是顯示通過ELISA方法評估新制劑中rh_EGF含量的幾何表示。圖5是新制劑對金黃色葡萄球菌的動力學(xué)比較的圖解表示。圖6是本發(fā)明制劑的加速穩(wěn)定性研究的幾何表示。圖7是本發(fā)明制劑的實時穩(wěn)定性研究的幾何表示。詳述
本文公開了本發(fā)明的詳細實施方案，然而要理解，公開的實施方案僅是本發(fā)明的示例，本發(fā)明可以各種形式實施。因此，本文公開的具體結(jié)構(gòu)和功能細節(jié)不應(yīng)當(dāng)被解釋為限制性的，而僅僅作為權(quán)利要求的基礎(chǔ)并作為教導(dǎo)本領(lǐng)域技術(shù)人員以基本上任何適當(dāng)詳細結(jié)構(gòu)不同地利用本發(fā)明的代表性基礎(chǔ)。而且，本文使用的術(shù)語和短語意圖不是限制性的，而是提供本發(fā)明的可理解的描述。本發(fā)明涉及用于制備用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍、糖尿病性足潰瘍和其他皮膚疾病的乳膏或凝膠或液體形式的局部制劑的新的協(xié)同廣譜藥物組合物。本發(fā)明的新的協(xié)同組合物包括至少三種協(xié)同活性成分和一種或多種非活性成分。協(xié)同活性成分包括一種或多種廣譜殺菌劑、一種或多種廣譜抑菌劑和促細胞分裂生長因子。非活性成分被用來為制劑提供基底、滲透性和穩(wěn)定性，并且包括載體、防腐劑、乳化劑、潤膚劑和柔膚劑和一種或多種其他組分。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，促細胞分裂蛋白是BharatBiotechInternational Limited開發(fā)的重組人表皮生長因子(rh-EGF) (REGEN-D )或生長因子，如血小板衍生的生長因子(rh-PDGF-BB)。殺菌劑和抑菌劑選自由以下組成的組桿菌肽、磺胺嘧啶銀(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚維酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，選擇的廣譜殺菌劑是磺胺嘧啶銀(SSD)，并且廣譜抑菌劑是葡萄糖酸氯己定(CHG)。制劑的協(xié)同非活性成分選自由以下組成的組PEG_30 二聚羥基硬脂酸酯、異十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化鈦、聚羥基硬脂酸、硬脂酸鋁、礬土、硫酸鎂、硬脂酸、山梨糖醇、對羥基苯甲酸甲酯鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、氫氧化鈉、EDTA 二鈉、丙烯酰二甲基牛磺酸銨/VP共聚物、二棕櫚酰羥脯氨酸、Bois II 、鯨蠟醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14異鏈烷烴、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、輕質(zhì)液體石臘、pemulen TR-1> carbopol ultrez、甘露糖醇和凈化水。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，新的協(xié)同組合物以產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)的期望比例包括促細胞分裂蛋白(rh-EGF)、殺菌劑(SSD)和抑菌劑(CHG)，所述協(xié)同效應(yīng)如更廣的微生物和/或細菌覆蓋、對抗銀微生物的效力、更好且更快的傷口愈合、SSD細胞毒性的逆轉(zhuǎn)、SSD對銀效應(yīng)的逆轉(zhuǎn)、具有持續(xù)抗細菌/抗微生物活性的制劑的更長的貯存期限。重組人表皮生長因子(rh-EGF)(Bharat Biotech International Limited 的REGEN D)是公知的生長因子，其已經(jīng)用于治療和管理諸如傷口、皮移植片、燒傷、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍的適應(yīng)癥。rh-EGF屬于生長因子家族，已知其調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移和分化。還已知rh-EGF用作促細胞分裂原，并且還作為許多細胞類型的分化因子。雖然rh-EGF幫助傷口愈合，但重要的是防止燒傷管理期間的感染。SSD是燒傷的標準治療。但一些研究顯示，該化合物延遲傷口愈合過程(這對于二級和三級燒傷是顯著的)，因為利用其受體的生長促進因子的產(chǎn)生被延遲或減少。為了防止銀抗性微生物的效應(yīng)并幫助銀針對抗性微生物的滲透，開發(fā)了本發(fā)明的新制劑，其中向SSD和rh-EGF的組合添加額外藥劑CHG。組合背后的原理是，即使低濃度的CHG也幫助銀針對燒傷中抗性微生物的滲透，從而幫助銀針對抗性微生物的效力。葡萄糖酸氯己定是結(jié)合角質(zhì)層的二雙胍，提供了經(jīng)6小時的持續(xù)殺細菌和殺真菌活性，即使當(dāng)從區(qū)域擦去時。它在有機材料(例如全血)存在下不失去其效力，它是重要的 抗菌劑、消毒劑、抗細菌牙洗劑和防腐劑。它具有對抗革蘭氏陽性、革蘭氏陰性細菌、病毒和真菌的抗微生物譜。CHG結(jié)合細菌細胞壁和胞質(zhì)組分，導(dǎo)致改變的滲透平衡和胞質(zhì)組分沉淀。使用該新的協(xié)同組合物確立的結(jié)果顯示了通過添加rh-EGF防止銀的細胞毒性而逆轉(zhuǎn)銀效應(yīng)。CHG的添加使得該新組合通過增加銀針對抗性微生物的滲透性而有效對抗廣譜的微生物。該新的協(xié)同制劑還顯示了以其組合在體外分析中對微生物減少的效應(yīng)，其中該協(xié)同組合有效對抗廣譜的抗生素抗性微生物。結(jié)果確立，該新的協(xié)同組合物是高度穩(wěn)定的，具有超過兩年的貯存期限，其用作用于治療由燒傷引起的不同程度的傷口以及用于其他適應(yīng)癥(如傷口、皮移植片、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍)的局部藥物制劑。在本發(fā)明中，使用標準的可用方法測量制劑中每種組分的濃度。通過用從5 μ g、10 μ g和15 μ g開始的不同濃度的rh-EGF并維持SSD和CHG在最佳濃度進行動物試驗[實施例I]并在燒傷患者中進行試驗[實施例3]來確定rh-EGF的效力。通過用從1口8、348和5口8開始的不同濃度的rh_PDGF_BB并維持SSD和CHG在最佳濃度進行動物試驗[實施例2]來確定rh-PDGF-BB的效力。通過驗證的ELISA方法來估計rh_EGF濃度[實施例4]。為了估計新制劑中的SSD，基于美國藥典中可用的測定方法來進行測定。這些估計的結(jié)果顯示，可以估計向乳膏中添加的SSD的精確量[實施例5]。為了估計新制劑中的CHG，基于英國藥典中可用的測定方法來進行測定[實施例5] ο含有rh-EGF、SSD和CHG的這種新的協(xié)同制劑還顯示以其組合在體外分析中對微生物減少的效應(yīng)，其中如果該協(xié)同組合首次有效對抗廣譜的抗生素抗性微生物，則動力學(xué)起作用[實施例6]。在本發(fā)明中，對包含SSD、CHG和rh_EGF的新制劑進行加速和實時穩(wěn)定性研究，并且結(jié)果清楚顯示這三種成分是穩(wěn)定的，在所有制劑的添加的組合物中沒有任何減少或降低，并且該新制劑穩(wěn)定超過兩年。
實施例
實施例I :選擇不同濃度的rh-EGF來測試在動物模型中的效力對于新的協(xié)同制劑組合SSD、CHG和添加第三藥劑，即BBIL的rh_EGF，從5 μ g、10μ g和15 μ g變化，以選擇這三種藥劑的最佳組合。對這些新制劑進行穩(wěn)定性研究。在設(shè)計的動物模型中應(yīng)用穩(wěn)定的制劑以檢查這些新制劑的效力。對于新制劑的效力，在動物模型中測試8種組合的制劑1.1%磺胺嘧啶銀乳膏2. I %磺胺嘧啶銀 +rh-EGF10 μ g/g 乳膏3. 1%磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF5 μ g/g乳膏
4. 1%磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10 μ g/g乳膏5. 1%磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF15 μ g/g乳膏6. I %磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF5 μ g/g凝膠7. I %磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh-EGF10 μ g/g凝膠8. I %磺胺卩密唳銀+0. 02%葡萄糖酸氯己定+rh_EGF15 μ g/g凝膠選擇共計96只大鼠[48只雄性和48只雌性]來測試rh_EGF的新協(xié)同制劑的效力。將總動物群體分成兩個主要組，作為測試組的組I和作為對照組的組II。每組再分為8個亞組，其中這8組應(yīng)用上述組合的8種不同的制劑，所述制劑具有從5 μ g/g、10 μ g/g和15 μ g/g開始的不同濃度rh-EGF乳膏和凝膠。表I :新制劑和動物數(shù)目數(shù)據(jù)。
_組I (測試)組II (對照)
N4848
性別(M/F) 24/2424/24
年齡(周) 6-7周6-7周動物模型中的燒傷產(chǎn)生使用測試和對照組動物來產(chǎn)生燒傷。使用特制黃銅棒來在大鼠中產(chǎn)生燒傷。黃銅棒在75±2°C熱水浴中維持15±lmin。在實驗開始前一天,給動物剃出2x2x2cm大小的區(qū)域。從水浴取出黃銅棒并在大鼠皮膚上放置15-20秒的短時段，然后立即拿開。以當(dāng)棒觸碰動物皮膚時應(yīng)該產(chǎn)生約Icm傷口的方式選擇棒直徑。對于每只動物，使用單獨無菌棒來預(yù)防動物中可能存在的任何感染或從一只動物到另一只動物的任何傳染(transferofinfection)。在大鼠上產(chǎn)生燒傷30分鐘之后，應(yīng)用上述五種新的基于乳膏的制劑。用無菌棉拭子將研究制劑和對照均勻涂布在燒傷區(qū)域，每天兩次，直至傷口愈合，或者直至六周結(jié)束時。在應(yīng)用之前，對動物進行任何可能的基本燒傷管理。該研究的主要目的是愈合持續(xù)時間，組I病例中的愈合持續(xù)時間與組II相比顯著減少超過40%。與對照組相比,在新制劑組中觀察到上皮形成的次要終點(secondary endpoint)。乳膏和凝膠制劑之間的效力差異很小。乳膏制劑與凝膠制劑相比更有效，并且這些乳膏和凝膠制劑都優(yōu)于其他兩種正常制劑。在3至8新制劑亞組中觀察到?jīng)]有顯著的疤痕增生或任何色素沉積變化。所有新制劑動物的燒傷愈合持續(xù)時間不相似，但是愈合時間百分比與對照組動物相比超過50%。表2:新制劑隊列數(shù)據(jù)。
權(quán)利要求
1.一種用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，所述局部制劑用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍，所述協(xié)同藥物組合物包括促細胞分裂蛋白、一種或多種殺菌劑和一種或多種抑菌劑，所述局部制劑還包括一種或多種其他成分。
2.如權(quán)利要求I所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述促細胞分裂蛋白是選自由以下組成的組的一種或多種生長因子重組人表皮生長因子(rh-EGF)、AA和/或BB的血小板衍生的生長因子(rh-PDGF-AA和/或rh_PDGF_BB)或任何其他生長因子。
3.如權(quán)利要求I所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述殺菌劑和抑菌劑選自由以下組成的組桿菌肽、磺胺嘧啶銀(SSD)、硝基糠腙、葡萄糖酸氯己定(CHG)、硫酸多粘菌素B、新霉素、聚維酮碘、磺胺米隆、硝基糠腙和艮他霉素。
4.如權(quán)利要求I或2所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述促細胞分裂蛋白是重組人表皮生長因子(rh-EGF)。
5.如權(quán)利要求I或2所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述促細胞分裂蛋白的濃度是I μ g/g至15 μ g/g wt/wto
6.如權(quán)利要求I或3所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述殺菌劑的濃度是O. 0001%至10%。
7.如權(quán)利要求I或3所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述抑菌劑的濃度是O. 0001%至5%。
8.如權(quán)利要求I或3所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述殺菌劑是廣譜抗生素磺胺嘧啶銀(SSD)。
9.如權(quán)利要求I或3所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述抑菌劑是廣譜抗生素葡萄糖酸氯己定(CHG)。
10.如權(quán)利要求I所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述制劑的所述一種或多種其他成分選自由以下組成的組PEG-30 二聚羥基硬脂酸酯、異十六烷、C-12-15烷基苯甲酸酯、二氧化鈦、聚羥基硬脂酸、硬脂酸鋁、礬土、硫酸鎂、硬脂酸、山梨糖醇、對羥基苯甲酸甲酯鈉、對羥基苯甲酸丙酯鈉、氫氧化鈉、EDTA 二鈉、丙烯酰二甲基?；撬徜@/VP共聚物、二棕櫚酰羥脯氨酸、Bois II 、鯨蠟醇、C12-15烷基苯甲酸酯、辛酸/癸酸三甘油酯、醋酸生育酚、聚丙烯酰胺、C13-14異鏈烷烴、乙氧基二甘醇、苯氧基乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸乙酯和對羥基苯甲酸丙酯、三乙醇胺、輕質(zhì)液體石臘、pemulen TR-1、carbopol ultrez、甘露糖醇和凈化水。
11.如權(quán)利要求I所述的用于制備局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物，其中所述局部制劑是乳膏和/或凝膠和/或液體的形式。
12.如權(quán)利要求I所述的新的協(xié)同藥物組合物，所述協(xié)同藥物組合物用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍，其中所述組合物有效對抗革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌、銀抗性細菌、厭氧菌、酵母和真菌，提供更好且更快的傷口愈合，并且在2-8 °C的貯存溫度下穩(wěn)定超過兩年。
全文摘要
公開了用于制備用于預(yù)防和治療傷口、燒傷、皮移植片、壓力性潰瘍和糖尿病性足潰瘍的局部制劑的新的協(xié)同藥物組合物。所述協(xié)同組合物包括與一種或多種殺菌劑和抑菌劑組合的促細胞分裂蛋白。本發(fā)明中的促細胞分裂蛋白是重組人表皮生長因子(Bharat Biotech International Limited的rh-EGF)和/或任何其他生長因子，如rh-PDGF-BB，并且殺菌劑和抑菌劑是廣譜抗生素磺胺嘧啶銀(SSD)和葡萄糖酸氯己定(CHG)。除了協(xié)同組合物以外，局部制劑還包括基底成分、載體、防腐劑、乳化劑、潤膚劑和柔膚劑以及一種或多種其他組分。新組合物產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，如更廣的抗菌覆蓋、通過rh-EGF逆轉(zhuǎn)SSD的銀效應(yīng)、對抗燒傷中銀抗性微生物的效力、以及更好且更快的傷口愈合。新組合物可用于制備用于乳膏、凝膠或液體形式的局部制劑。新制劑具有更長的貯存期限并且在2-8℃的貯存溫度下穩(wěn)定超過兩年。
文檔編號A61K31/345GK102939097SQ201080067208
公開日2013年2月20日 申請日期2010年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者克修拉·莫漢·威德麥都, 文卡塔·切里什·巴布·佩盧里, 卡杰什·夏爾馬 申請人:巴拉特生物技術(shù)國際有限公司