專利名稱：從柿葉提取含量≥85-98%的柿葉黃酮的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及黃酮類的提取，特別是一種從柿葉提取含量> 85-98%的柿葉黃酮的 方法。
背景技術：
柿葉中的主要有效成分為黃酮類，黃酮類在柿子葉中的總含量為121. 3mg/100g, 目前已發(fā)現(xiàn)的黃酮化合物有黃芪甙(分子量446. 36)、異槲皮素(338.27)、山萘酚 3-0-β-D-葡萄糖甙、山萘酚(286. 24)、槲皮素(338. 27)、山萘酚3-0-α-L-鼠李糖甙、山 萘酚3-β -D-木糖甙、山萘酚3-0-α -L-阿拉伯糖甙、槲皮素3-0-[2〃 -o-(3. 4. 5_三羥 基苯甲酰)]_葡萄糖甙、蘆丁(664. 57)、金絲桃甙(槲皮素-3-半乳糖甙)、楊梅樹皮甙 (464. 38)，紫云英甙等，其中黃酮甙類結合的糖類均為單糖，分子量均小于1000。因此，柿葉 黃酮類化學成分的分子量均小于1000。柿葉黃酮主要是以甙類的形式存在，采用不同的提取方法可以得到不同的黃酮類 物質以及不同的含量。目前已公開的柿葉黃酮提取工藝的的文獻主要有(1)用70%乙醇 提取2次，每次溶劑用量為柿葉重的10倍，每次提取時間為1.證，此提取工藝耗時長，而且 使用了有機溶劑乙醇，成本高；(2)用10-15倍PH= 13的水進行提取，然后將提取液過YF-I 樹脂。此方法提取率低。此提取采用濃堿在高溫下進行，黃酮苷易水解，破壞了黃酮成分， 提取溶劑多，時間長，成本較高；⑶中國專利CN 101194921 A采用水提取，乙醇沉淀，乙酸 乙酯萃取，大孔樹脂純化的工藝。此方法采用大孔樹脂進行純化，操作繁瑣，周期長，且需要 采用蒸汽等加熱過程，生產(chǎn)耗用乙醇量大，成本高；(4)中國專利CN 101637492Α采用70% 的乙醇水浴回流提取或用濃度為70%的乙醇于微波加熱回流提取或用濃度為70%的乙醇 于超聲波加熱回流提取，用大孔樹脂進行純化，此方法同樣需要采用蒸汽等加熱過程，成本 高，周期長，工藝繁瑣；( 中國專利CN 101322737A采用低碳醇提取，大孔樹脂進行純化， 乙酸乙酯萃取的方法，得到黃酮提取物含量為80-98%，但是此方法同樣需要采用蒸汽等加 熱過程，耗用乙醇量大，時間長，成本高；(6)中國專利CN 170卯42A采用雙水相萃取法，用 乙醇提取，雙水相萃取，乙酸乙酯反萃，得到黃酮的含量為12. 1%，此方法需要用到硫酸胺 等有機試劑，而且黃酮含量低，不適用于人體使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從柿葉中提取黃酮類物質、工藝簡單、生產(chǎn)成本低，對 環(huán)境污染少，提取時間短，提取物黃酮類物質含量> 85-98%的柿葉黃酮的方法。本發(fā)明所述從柿葉提取含量> 85-98%的柿葉黃酮的方法，包括如下步驟(1)將柿葉破碎；(2)用柿葉重2-10倍的PH值=10-14的堿水微波提取1_5次，每次10_60min，所 述的微波功率為200-2000W，提取溫度為30-60°C ；(3)合并提取液，用濃度為5%的鹽酸將提取液的PH值調至5-7 ；
(4)加入絮凝澄清劑，攪拌、靜置30-180min，過濾；(5)濾液過超濾膜純化，并經(jīng)RO反滲透膜脫水，得濃縮液；(6)將濃縮液的PH調至4-5，用乙酸乙酯萃取2-6次；(7)萃取液濃縮、干燥，得含量為85-98%的柿葉黃酮提取物。所述的PH = 10-14堿水是用氫氧化鈉溶液或飽和石灰水配制而成的i所述的絮凝澄清劑為殼聚糖、ZTC1+1澄清劑或101澄清劑中的一種；所述的超濾膜超濾膜為截留分子量為1000-3500Da的卷式膜，過程溫度為 20-50°C，壓力為 0. 1-1. OMPa，膜通透量為 30_60L/h ；所述RO反滲透膜為復合膜，過程溫度為20_50°C，壓力為0. 5_15MPa，膜透過量為 0. 5-200m3/h ；所述萃取中的乙酸乙酯的用量為濃縮液的2-5倍，萃取時間15-120min ；所述的濃縮萃取液采用真空濃縮，濃縮溫度為30-70 °C，真空度 為-0. 06MPa -0. IMPa 所述的干燥為微波真空干燥，溫度為20_60°C，真空度為-0. 06MPa _0. IMPa0本發(fā)明的優(yōu)選制備方法是(1)將柿葉破碎；(2)加入3倍柿葉重量PH = 12的堿水(用氫氧化鈉水溶液調節(jié))，微波提取2次， 提取溫度為40°C，提取時間為20min ；(3)合并提取液，用5%的鹽酸將提取液的PH調至6 ；(4)加入提取液體積0. 2%的殼聚糖絮凝澄清劑，攪勻，靜置60min，過濾；(5)濾液經(jīng)截留分子量為IOOODa的卷式超濾膜純化，并經(jīng)RO復合反滲透膜脫水， 得濃縮液；(6)將濃縮液的PH值調至4. 5，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，每次萃取時間 30min }(7)萃取液在真空條件下進行濃縮，溫度為45°C，真空度為-0. OSMPa ；(8)濃縮液在微波真空干燥條件下干燥，溫度為45°C，真空度為-0. 08Mpa，得含量 為98%的柿葉黃酮提取物。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術工藝簡單，生產(chǎn)成本低，提取時間短，對環(huán)境污染小，提取 物中黃酮類物質的含量高(1)本發(fā)明采用2-10倍PH = 10-14的堿水微波提取1_5次，每次10-60min，提取 溫度30-60°C，耗時短，提取率高，成本低，對環(huán)境無污染，生產(chǎn)操作安全。解決了純水提取率 低的問題；解決了在高溫濃堿條件下提取黃酮類成分易水解的問題；解決了醇提成本高的 問題；解決了上大孔樹脂操作繁瑣，耗時長的問題；(2)本發(fā)明采用絮凝澄清劑除掉了大分子物質，操作簡單，耗時短，成本低，有效的 減緩了超濾膜的壓力，延長了超濾膜的壽命；(3)本發(fā)明使用卷式超濾膜進行純化，超濾膜的截留分子量為1000-3500Da，柿葉 中黃酮的分子量均小于1000，能充分的透過超濾膜，并且操作安全、簡單，生產(chǎn)耗時短，操作 過程不需要使用任何溶劑，大大的降低成本。解決了大孔樹脂純化操作周期長，洗脫次數(shù) 多，乙醇洗脫、回收損耗大、成本高、操作麻煩的缺陷；
(4)本發(fā)明使用RO復合反滲透膜進行脫水，將超濾膜與RO反滲透膜串聯(lián)使用，操 作安全、簡單，耗時短，操作過程不需要使用任何溶劑，大大的降低成本。解決了常規(guī)濃縮耗 時長，成本高的缺陷。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述，但本發(fā)明的內(nèi)容完全不局限于此。實施例1一種從柿葉提取含量> 85-98%的柿葉黃酮的方法，包括如下步驟1、前處理取干柿葉，剔除雜質，霉變柿葉，并將柿葉破碎；2、提取取破碎好的柿葉，加入干凈的微波提取器中，并加入3倍量已用5%氫氧 化鈉調PH = 12的堿水，開啟微波提取器，設定功率1500W，溫度40°C，提取時間20min，提取 次數(shù)2次，將提取液過濾，待用；3、殼聚糖絮凝澄清劑的配制用的醋酸配制的殼聚糖醋酸溶液；4、絮凝澄清劑除雜用5%的鹽酸調節(jié)提取液的PH = 6，加入殼聚糖溶液，使 提取液中殼聚糖濃度為0. 2 %，一邊加一邊攪拌，攪拌IOmin后，靜置60min，過濾，收集澄清 液；5、濾液過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水所述超濾膜為卷式膜，截留分子量為 lOOODa，過程溫度為35°C，壓力為0. 6MPa ；料液流速為40L/h ；RO反滲透膜為復合膜，過程 溫度為35°C，壓力為lOMPa，料液流速為80L/h >6、調節(jié)PH值用5%的鹽酸調節(jié)濃縮液PH值=4. 5 ；7、乙酸乙酯萃取將已經(jīng)調節(jié)好PH值的濃縮液放入萃取罐，加入2倍濃縮液體積 的乙酸乙酯，萃取3次，每次萃取時間30min，收集乙酸乙酯液；8、濃縮將所得的乙酸乙酯液在真空條件下進行濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度 為-O. 08MPa ；9、干燥將所得的濃縮液采用微波真空干燥器干燥，溫度為45°C，真空度 為-0. 08MPa，得到含量為98%的柿葉黃酮提取物。實施例21、前處理取干柿葉，剔除雜質，霉變柿葉，并將柿葉破碎；2、提取取破碎好的柿葉，加入干凈的微波提取器中，并加入2倍量已用飽和石灰 水調PH = 10的堿水，開啟微波提取器，設定頻率2000W，溫度50°C，提取時間30min，提取次 數(shù)3次，將提取液過濾，待用；3、101絮凝澄清劑的配制101絮凝澄清劑用純水配制成5%的溶液，靜置Mh，作 為A液；助劑用純水配制成5%的溶液，靜置Mh，作為B液>4、絮凝澄清劑除雜用5%的鹽酸調節(jié)提取液的PH = 7，加入提取液體積5%的已 配制好的101絮凝澄清劑A液，提取液體積0. 05%的已配制好的B液，一邊加一邊攪拌，攪 拌10分鐘之后，靜置30min，過濾，收集澄清液；5、過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水所述超濾膜為卷式膜，截留分子量為 2500Da,過程溫度為25°C，壓力為0. 4MPa ；料液流速為50L/h ；RO反滲透膜為復合膜，過程 溫度為25°C，壓力為8MPa，料液流速為50L/h ；
6、調節(jié)PH值用5%的鹽酸調節(jié)濃縮液PH值=4 ；7、乙酸乙酯萃取將已經(jīng)調節(jié)好PH值的濃縮液放入萃取罐，加入3倍濃縮液體積 的乙酸乙酯，萃取2次，每次萃取時間60min，收集乙酸乙酯液；8、濃縮將所得的乙酸乙酯液在真空條件下進行濃縮，濃縮溫度為55°C，真空度 為-O. 07MPa ；9、干燥將所得的濃縮液采用微波干燥器干燥，溫度為55 °C，真空度 為-0. 07Mpa，得到含量為93%的柿葉黃酮提取物。實行施例31、前處理取干柿葉，剔除雜質，霉變柿葉，并將柿葉破碎；2、提取取破碎好的柿葉，加入干凈的微波提取器中，并加入7倍量已用氫氧化鈉 調PH = 14的堿水，開啟微波提取器，設定頻率700W，溫度30°C，提取時間60min，提取次數(shù) 4次，將提取液過濾，待用；3、ZTC1+1絮凝澄清劑的配制A組分用純水配制成0. 5%的溶液，溶脹Mh，備用； B組分用1 %的醋酸配制成1 %的溶液，溶脹Mh，備用多4、絮凝澄清劑除雜用5%的鹽酸調節(jié)提取液的PH = 5，加入提取液體積2%的A 組分，稍微攪拌，然后加入提取液體積2%的B組分，攪拌10分鐘，靜置的已配制好的101絮 凝澄清劑A液，提取液體積0. 05 %的已配制好的B液，一邊加一邊攪拌，攪拌IOmin后，靜置 150min，過濾，收集澄清液；5、過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水所述超濾膜為卷式膜，截留分子量為 3500Da,過程溫度為45°C，壓力為0. SMPa ；料液流速為60L/h ；RO反滲透膜為復合膜，過程 溫度為45°C，壓力為12MPa，料液流速為100L/h j6、調節(jié)PH值用5%的鹽酸調節(jié)濃縮液PH值=5 ；7、乙酸乙酯萃取將已經(jīng)調節(jié)好PH值的濃縮液放入萃取罐，加入5倍量濃縮液體 積的乙酸乙酯，萃取5次，每次萃取時間90min，收集乙酸乙酯液；8、濃縮將所得的乙酸乙酯液在真空條件下進行濃縮，濃縮溫度為65°C，真空度 為-O. 06MPa ；9、干燥將所得的濃縮液采用微波真空干燥器干燥，溫度為35°C，真空度 為-0. 06Mpa，得到含量為87%的柿葉黃酮提取物。
權利要求
1.一種從柿葉提取含量> 85-98%的柿葉黃酮的方法，包括如下步驟(1)將柿葉破碎；(2)用柿葉重2-10倍的PH值=10-14的堿水微波提取1_5次，每次10-60min，所述的 微波功率為200-2000W，提取溫度為30-60°C ；(3)合并提取液，用濃度為5%的鹽酸將提取液的PH值調至5-7；(4)加入絮凝澄清劑，攪勻、靜置30-180min、過濾；(5)濾液過超濾膜純化，并經(jīng)RO反滲透膜脫水，得濃縮液；(6)將濃縮液的PH調至4-5，用濃縮液體積2-5倍的乙酸乙酯萃取2-6次，每次 15-120min ；(7)萃取液濃縮、干燥，得含量為85-98%的柿葉黃酮提取物。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述的堿水為氫氧化鈉溶液或飽和石灰水 配制而成。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述的絮凝澄清劑為殼聚糖、ZTC1+1澄清 劑、101澄清劑中的一種。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述的超濾膜為卷式膜，截留分子量為 1000-3500Da，過程溫度為 20_50°C，壓力為 0. 1-1. OMPa，膜通透量為 30_60L/h。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述RO反滲透膜為復合膜，過程溫度為 20-50°C，壓力為 0. 5-15MPa，膜通透量為 0. 5_200m7h。
6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述的濃縮萃取采用真空濃縮，濃縮溫度為 30-70°C，真空度為-0. 06 -0. IMPa0
7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是所述的干燥為微波真空干燥，溫度為 20-60°C，真空度為-0. 06 -0. IMPa0
8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是(1)將柿葉破碎；(2)加入3倍柿葉重量PH值=12的堿水，堿水用氫氧化鈉水溶液調節(jié)，微波提取2次， 提取溫度為40°C，提取時間為20min ；(3)合并提取液，用5%的鹽酸將提取液的PH調至6；(4)加入提取液體積0.2%的殼聚糖絮凝澄清劑，攪勻、靜置60min、過濾；(5)濾液經(jīng)截留分子量為IOOODa的卷式超濾膜純化，并經(jīng)RO復合反滲透膜脫水，得濃 縮液；(6)將濃縮液的PH值調至4.5，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，每次萃取時間30min ；(7)萃取液在真空條件下進行濃縮，溫度為45°C，真空度為-0.OSMpa ；(8)濃縮液在微波真空干燥條件下干燥，溫度為45°C，真空度為-0.OSMpa,得含量為 98%的柿葉黃酮提取物。
9.用權利要求1-8之一所述的方法制備的柿葉黃酮含量>85-98%的柿葉提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從柿葉提取含量≥85-98％的柿葉黃酮的方法，它是將柿葉破碎，用2-10倍的pH＝10-14的水微波提取1-5次，每次提取10-60min，提取溫度為30-60℃，合并提取液，調節(jié)PH＝5-7，加入絮凝澄清劑，攪勻，靜置，過濾，濾液過超濾膜純化和RO反滲透膜脫水，調節(jié)濃縮液pH＝4-5，將所得濃縮液用乙酸乙酯萃取2-6次，萃取液濃縮，干燥制得。本發(fā)明工藝簡單，生產(chǎn)成本低，提取時間短，對環(huán)境污染小，提取物中黃酮類物質的含量高，其含量可達到85-98％。
文檔編號A61K36/44GK102068484SQ20111000359
公開日2011年5月25日 申請日期2011年1月8日 優(yōu)先權日2011年1月8日
發(fā)明者劉樟艷, 呂光政, 陳元勝 申請人:桂林普蘭德生物科技有限公司