專利名稱：一種花生生物活性肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物蛋白質(zhì)組合物的制備方法，尤其涉及一種花生生物活性肽的制備方法。
背景技術(shù)：
花生是我國(guó)重要的油料作物，我國(guó)生產(chǎn)的花生除少部分作為干果食用之外，大部分是作為油料資源用于榨取食用油脂。榨油后所得占花生總重量56% 61%的花生餅粕中蛋白質(zhì)含量為左右，其氨基酸組成較完全，含有大量人體必需氨基酸，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值可與 FAO推薦的模式蛋白質(zhì)相媲美。且資源豐富，價(jià)格低廉，是酶解制備生物活性肽的良好植物蛋白資源?；ㄉ炂啥啾挥米黠暳匣蚍柿?，尚未充分深加工利用，因而造成花生蛋白資源的極大浪費(fèi)。如果對(duì)花生蛋白進(jìn)行有限的酶解，可生產(chǎn)出高營(yíng)養(yǎng)、高附加值且易于吸收的具有生物活性功能的生物制品。肽是由氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的化合物，它是機(jī)體組織細(xì)胞的基本組成成分。 科學(xué)家已在人體中發(fā)現(xiàn)了 100多種生物活性肽，這些肽具有傳遞生理信息，調(diào)節(jié)生理功能的作用，對(duì)于人體的神經(jīng)、消化、生殖、生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、代謝、循環(huán)等系統(tǒng)的正常生理活動(dòng)的維持非常重要，所有疾病的發(fā)生、發(fā)展、治療、康復(fù)都與多肽有關(guān)系。花生肽是指花生蛋白經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)分離、精制等過(guò)程得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物?；ㄉ木哂休^好的功能特性，如花生肽溶液在高濃度下黏度依然較低，能在較寬的 PH值范圍內(nèi)保持溶解狀態(tài)；具有較高的吸濕性和保濕性；滲透壓比氨基酸低得多；能抑制蛋白質(zhì)形成凝膠，減少了由于花生蛋白大分子引起的過(guò)敏原性，增加了產(chǎn)品的穩(wěn)定性等。此外，花生肽還具有抗氧化、抗疲勞、降血壓、提高機(jī)體免疫力等多種生理活性，可廣泛用于醫(yī)藥、保健食品、食品添加劑、調(diào)味品等多個(gè)領(lǐng)域，具有良好的應(yīng)用前景?；ㄉ炛谐撕?0 55%左右的花生蛋白外，還含有糖分、粗纖維、粗脂肪、水分、礦物質(zhì)等其它成分。由于含有這些雜質(zhì)成分，目前制備花生肽的工藝中，很少將花生餅直接作為原料來(lái)使用，不僅浪費(fèi)了生產(chǎn)原料，還增加了生產(chǎn)成本。另外，在純化花生蛋白及制備花生肽的過(guò)程中，均有加酸堿調(diào)節(jié)PH的工序，因此，不可避免的代入大量鹽分，影響了最終產(chǎn)品的品質(zhì)。第三，現(xiàn)有技術(shù)由于水解條件不同，花生肽的分子量也不同，而不同分子量的花生肽具有不同的生理功能，怎樣得到特定分子量的產(chǎn)品，并且提高該分子量產(chǎn)品的純度，從而使產(chǎn)品具有特定的生理功能，也是目前需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種花生生物活性肽的制備方法。本發(fā)明的花生生物活性肽的制備方法如下(A)將花生餅粉碎，過(guò)60 80目篩，用95%正己烷溶劑在50°C條件下浸泡濁，浸提后晾曬至正己烷試劑完全揮發(fā)，為脫脂花生餅粉末，待用；(B)將步驟(A)中正己烷浸提之后的花生餅粉按1 5 1 10溶解至水中，加熱至45 55°C，用堿試劑調(diào)節(jié)pH至8. 0 10. 0，攪拌15min，在3000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，取上清液；(C)將步驟(B)的上清液加熱至70 90°C，用檸檬酸試劑調(diào)節(jié)PH至3. 0 5. 0， 攪拌15min，在3000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，收集沉淀，為花生蛋白；(D)將步驟(C)中收集的沉淀按沉淀與水的質(zhì)量比為1 10 1 20的比例溶解至水中，加熱至90 100°C，保持15 30min，然后冷卻至40 50°C，用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持PH在7. 5 9. 0，按照花生蛋白質(zhì)量的2 0Z0 10%的質(zhì)量，添加堿性蛋白酶Alcalase， 酶解2 4h ；(E)待步驟(D)酶解結(jié)束后，迅速用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至5. 0 3. 0，在3000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，取上清液，為花生肽粗制液；(F)將步驟(E)所得的花生肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為IOOODa超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為花生肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(D)中再次酶解；(G)交換樹(shù)脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7. 5%鹽酸和 10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和0H_型陰離子交換樹(shù)脂，再用去離子水清洗至PH為7. 0左右，待用將步驟(F)中所得的超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液pH = 4. 0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò) Off型陰離子交換樹(shù)脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為花生肽精制液；(H)由步驟(G)中得到的花生肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% 40% ；(I)步驟(H)中的精制液經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成花生肽干粉。上述步驟(A)的目的是用正己烷溶解花生餅中的殘留脂質(zhì)，以去除花生餅中的脂質(zhì)，使最終產(chǎn)品的脂肪含量降低，所謂“浸提”，就是用正己烷溶解花生餅粉中的脂溶性物質(zhì)，然后過(guò)濾或者離心去除液體，留下花生餅固體。上述步驟(B)堿溶的目的是利用蛋白質(zhì)在堿性條件下溶解的特性，將花生蛋白和堿不溶性物質(zhì)分離開(kāi)，以提高花生蛋白的含量。上述步驟(C)酸沉的目的是利用蛋白質(zhì)在酸性等電點(diǎn)條件下沉淀的特性，將花生蛋白和酸溶性物質(zhì)分開(kāi)，以提高花生蛋白的含量。上述步驟(B)、(C)的目的是為了去除花生餅中的雜質(zhì)，提高花生蛋白的含量，為酶解提供原料。一般花生餅中蛋白的含量在50 %左右，經(jīng)過(guò)上述方法處理后，花生蛋白含量可達(dá)90%以上。上述步驟(D)中酶解過(guò)程需要不斷攪拌，同時(shí)加入NaOH溶液以保持pH值在7. 5 9. 0，酶解的目的是將花生餅中的大分子蛋白質(zhì)酶解為小分子蛋白質(zhì)和肽。上述步驟(E)調(diào)酸的目的是為了使酶失活，停止酶解反應(yīng)；離心的目的是為了固液分離，收集酶解液。上述步驟(F)中超濾的目的是為了截取需要分子量的產(chǎn)品；二次酶解的目的是為了將分子量IOOODa以上的大分子蛋白水解成小分子，提高利用原料利用。
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上述步驟(G)中脫鹽的目的是為了去除酶解液中因酶解過(guò)程中不斷調(diào)節(jié)pH而帶入的鹽離子。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果(1)直接以花生餅為原料，提高了原料利用率；(2)用浸提法除去花生餅中的殘留油脂，使最終產(chǎn)品脂肪含量在以下；(3)利用堿溶酸沉法純化花生蛋白，提高水解原料的品質(zhì)，使最終產(chǎn)品的總氮量在 90%以上；(4)采用超濾法對(duì)花生肽進(jìn)行分級(jí)處理，保證100%的花生肽分子量在IOOODa 以下，并對(duì)于分子量IOOODa以上的花生肽進(jìn)行二次酶解，使最終產(chǎn)品的分子量分布均在 IOOODa 以下；(5)利用陰陽(yáng)交換樹(shù)脂對(duì)花生肽粗品進(jìn)行脫鹽，沒(méi)有脫鹽處理的產(chǎn)品鹽分含量在 8%左右，采用本方法中的脫鹽工藝處理的產(chǎn)品鹽分含量在2%以下；(6)由本發(fā)明制備并精制的花生肽具有良好的提高動(dòng)物免疫力的功能。本發(fā)明的方法制備的花生肽有較好的增強(qiáng)動(dòng)物免疫力的效果，實(shí)驗(yàn)證明如下實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠預(yù)飼3d后，按體重隨機(jī)分組，將小鼠分成對(duì)照組，花生200mg/kg. d 劑量組，每組各30只。對(duì)照組給予一定劑量的生理鹽水。喂養(yǎng)中，觀察小鼠活動(dòng)的能力，并且每三天稱量體重一次。各組給藥5周(35天)后，處死小鼠后實(shí)驗(yàn)。處死小鼠后，立即取出臟器，用吸水紙吸去污血，置于電子分析天平上稱量臟器的重量，臟器指數(shù)以臟器重量 (mg)與體重(IOg)之比表示。處死小鼠后立即取出脾臟及胸腺，用吸水紙吸去污血，置于電子分析天平上稱重，免疫器官指數(shù)以免疫器官重量(mg)與體重(IOg)之比表示。表1花生肽對(duì)小鼠體重的影響
權(quán)利要求
1. 一種花生生物活性肽的制備方法，其特征在于包含如下步驟(A)將花生餅粉碎，過(guò)60 80目篩，用95%正己烷溶劑在50°C條件下浸泡池，浸提后晾曬至正己烷試劑完全揮發(fā)，為脫脂花生餅粉末，待用；(B)將步驟(A)中正己烷浸提之后的花生餅粉按1 5 1 10溶解至水中，加熱至 45 55°C，用堿試劑調(diào)節(jié)pH至8. 0 10. 0，攪拌15min，在3000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下， 離心15min，取上清液；(C)將步驟(B)的上清液加熱至70 90°C，用檸檬酸試劑調(diào)節(jié)pH至3.0 5. 0，攪拌 15min，在3000 4000r/min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，收集沉淀，為花生蛋白；(D)將步驟(C)中收集的沉淀按沉淀與水的質(zhì)量比為1 10 1 20的比例溶解至水中，加熱至90 100°C，保持15 30min，然后冷卻至40 50°C，用NaOH試劑調(diào)節(jié)并保持pH在7. 5 9. 0，按照花生蛋白質(zhì)量的2 0Z0 10%的質(zhì)量，添加堿性蛋白酶Alcalase，酶解2 4h ；(E)待步驟⑶酶解結(jié)束后，迅速用HCl溶液調(diào)節(jié)pH至5.0 3. 0，在3000 4000r/ min的轉(zhuǎn)速下，離心15min，取上清液，為花生肽粗制液；(F)將步驟(E)所得的花生肽粗制液注入儲(chǔ)槽中，溶液經(jīng)微濾后通過(guò)分子量截留量為 IOOODa超濾膜，溶液中的小分子物質(zhì)經(jīng)中空纖維膜的內(nèi)壁滲透出來(lái)成為超濾液，收集超濾液，為花生肽超濾液；溶液中的蛋白等大分子物質(zhì)得以保留并得到濃縮，將濃縮液回收至步驟(D)中再次酶解；(G)交換樹(shù)脂于去離子水中浸泡處理M小時(shí)后裝柱，然后分別用7.5%鹽酸和10% NaOH對(duì)其進(jìn)行浸泡，轉(zhuǎn)化為H+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和0H_型陰離子交換樹(shù)脂，再用去離子水清洗至PH為7.0左右，待用；將步驟(F)中所得的花生肽超濾液，以5 10倍柱體積/h的流速通過(guò)H+型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂來(lái)脫除陽(yáng)離子，待流出液PH = 4.0左右時(shí)停止加樣，之后將此流出液以同樣流速通過(guò)Off型陰離子交換樹(shù)脂來(lái)脫除陰離子，至流出液呈pH為7. O時(shí)停止加樣，收集為花生肽精制液；(H)由步驟(G)中得到的花生肽精制液，減壓濃縮至固型物含量30% 40%；(I)步驟(H)中的花生肽精制液經(jīng)噴霧干燥或冷凍干燥制成花生肽干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種花生生物活性肽的制備方法，它是以花生餅為原料，經(jīng)粉碎、浸提后得到脫脂花生餅粉末，再經(jīng)堿溶、酸沉后得花生蛋白，將所得的花生蛋白進(jìn)行酶解、離心和超濾獲得小分子物質(zhì)超濾液和大分子物質(zhì)濃縮液，將小分子物質(zhì)超濾液經(jīng)交換樹(shù)脂脫鹽、濃縮、干燥得到花生肽干粉，將大分子物質(zhì)濃縮液回收進(jìn)行二次酶解、超濾、脫鹽、濃縮、干燥獲得花生肽干粉。本發(fā)明的花生肽有較好的增強(qiáng)免疫力的效果。
文檔編號(hào)A61P37/02GK102174628SQ20111000483
公開(kāi)日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月12日
發(fā)明者亓培實(shí), 何東平, 何莉萍, 倪倩, 劉良忠, 劉雪姣, 宋洋, 江思佳, 陳燕飛, 黃迪惠 申請(qǐng)人:武漢百信食品有限公司