專利名稱：一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，特別涉及含有胰島素類似物和低分子肝素或它們的可藥用鹽的藥物組合物。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一組由環(huán)境和遺傳因素共同作用引起的綜合征，其基本病理特點(diǎn)為胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足，或外周組織對(duì)胰島素不敏感，引起以糖代謝紊亂為主，包括脂肪、蛋白質(zhì)代謝紊亂的一種全身性疾病。糖尿病控制與并發(fā)癥的臨床試驗(yàn)(DCCT)、英國(guó)前瞻性糖尿病研究(UKPDQ等多項(xiàng)循證醫(yī)學(xué)研究已使人們對(duì)強(qiáng)化血糖控制的意義達(dá)成共識(shí)，血糖達(dá)標(biāo)不僅可以預(yù)防或延緩糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生，提高患者的生活質(zhì)量，而且會(huì)大大降低糖尿病相關(guān)的醫(yī)療費(fèi)用。然而現(xiàn)實(shí)中糖尿病患者的血糖達(dá)標(biāo)率較低。據(jù)一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)接受治療的糖尿病患者有2/3未達(dá)到治療目標(biāo)。隨著2型糖尿病病程的延長(zhǎng)，很多患者單純依靠口服降糖已經(jīng)無(wú)法達(dá)到強(qiáng)化治療的目標(biāo)，此時(shí)胰島素治療就成為血糖達(dá)標(biāo)的重要方法。但是臨床治療中發(fā)現(xiàn)，胰島素注射本身也存在如下問(wèn)題(1)只能降低注射期間的血糖，不能完全按血糖變化曲線控制血糖；( 容易產(chǎn)生低血糖；C3)胰島素的吸收穩(wěn)定性差，吸收差異達(dá)52% ； (4)不能有效控制并發(fā)癥。“炎癥學(xué)說(shuō)”是近年來(lái)有關(guān)糖尿病發(fā)病機(jī)制的全新觀念，該學(xué)說(shuō)認(rèn)為，II型糖尿病可能是細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，炎癥在II型糖尿病的發(fā)病機(jī)制中起媒介作用。炎癥反應(yīng)與II型糖尿病并發(fā)癥之間具有密切的聯(lián)系。主要表現(xiàn)在(1)炎癥與糖尿病大血管病變關(guān)系糖尿病大血管病變的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化。英國(guó)前瞻性糖尿病研究證實(shí)，血糖控制良好并不能明顯降低糖尿病大血管病變的發(fā)生率，說(shuō)明在糖尿病大血管病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，除高血糖外還有其它因素起重要作用?，F(xiàn)在認(rèn)為，動(dòng)脈粥樣硬化是源于內(nèi)皮系統(tǒng)異常的動(dòng)脈壁炎癥性疾病?？扇苄约?xì)胞間黏附分子_1、CRP、白介素-1 β、白介素-6 等多種炎癥因子廣泛參與了動(dòng)脈粥樣硬化的一系列病理過(guò)程，包括導(dǎo)致內(nèi)皮損傷及功能不良、黏附分子表達(dá)增加、趨化因子的釋放、白細(xì)胞黏附及遷移、氧化型低密度脂蛋白被巨噬細(xì)胞攝取、巨噬細(xì)胞活化、泡沫細(xì)胞形成，活化的單核細(xì)胞釋放一系列細(xì)胞因子、平滑肌細(xì)胞遷移和增殖，最終形成粥樣斑塊。如果炎癥反應(yīng)持續(xù)發(fā)展，激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一些金屬蛋白酶和其他蛋白分解酶，使粥樣硬化動(dòng)脈的纖維帽薄弱處破裂，壞死組織釋放入血，形成栓子，引起急性心肌梗死等。(2)炎癥與糖尿病微血管病變的關(guān)系近年來(lái)眾多的研究結(jié)果顯示，嚴(yán)格控制血糖、調(diào)節(jié)腎內(nèi)及全身血流動(dòng)力學(xué)僅對(duì)部分糖尿病腎病患者有一定的延緩作用，部分糖尿病腎病患者仍然緩慢進(jìn)展至終末期腎衰竭，推測(cè)在糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中還有其他因素起重要作用?，F(xiàn)有研究結(jié)果證實(shí)， 炎癥可能是糖尿病腎病持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵因素。炎癥可能通過(guò)引發(fā)氧化應(yīng)激，使低密度脂蛋白氧化為氧化型低密度脂蛋白，增加單核細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附和浸潤(rùn)，損傷腎小球內(nèi)皮細(xì)胞。已有研究證實(shí)，炎癥機(jī)制參與了糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。Vincent等在〈〈Inhibition of caspase-l/Interleu-kin 1 β signaling prevents degeneration of retinal capillaries in diabetes and galactosemia)) (Diabetes，2007 年 56 卷 1 期) 一文對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠注射白介素-1 β拮抗劑后，通過(guò)長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)，其能夠抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜微血管的退化。Demircan等《Determination of vitreous interleukin-21(IL21)and tumour necrosis factor (TNF) levels in proliferative diabetic retinopathy)) (Eye, 2006年20卷12期)一文通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，患有糖尿病增生性視網(wǎng)膜病變的患者血清中的白介素-1 β和TNF-α水平比正常對(duì)照組升高，提示兩者可能在糖尿病增生性視網(wǎng)膜病變的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。非酒精性脂肪肝病常與II型糖尿病肥胖患者相伴，非酒精性脂肪肝病的病理發(fā)展有單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化4個(gè)階段，炎癥在整個(gè)過(guò)禾呈中起重要作用°CA ID等在〈〈Local and systemic insulin resistance resulting from hepatic activation of IKK-2 β and NF2kappaB)) (NatMed，2005 年 11 卷 2 期)一文公開(kāi)了其機(jī)制可能是肝內(nèi)脂肪的蓄積增多，炎癥因子基因的表達(dá)增強(qiáng)，亦可能由腹部脂肪組織釋放促炎癥因子，通過(guò)門靜脈到達(dá)肝臟，引起肝內(nèi)炎癥。

發(fā)明內(nèi)容
為了顯著改善糖尿病患者的血糖水平，盡可能的減少糖尿病并發(fā)癥，尤其是動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病視網(wǎng)膜病變、非酒精性脂肪肝的發(fā)生率以及糖尿病并發(fā)癥的進(jìn)展和惡化， 本發(fā)明提供了一種藥物組合物，它含有如下活性成分(1)胰島素類似物；和(2)低分子肝素或其可藥用鹽，所述的胰島素類似物為門冬胰島素、賴脯胰島素或甘精胰島素，所述的低分子肝素可以選自依諾肝素、那屈肝素、達(dá)肝素、帕肝素或瑞維肝素。優(yōu)選地，上述藥物組合物中胰島素類似物為甘精胰島素。優(yōu)選地，上述藥物組合物中低分子肝素的可藥用鹽為鈉鹽或鈣鹽。所述的低分子肝素的可藥用鹽可以選自低分子肝素鈣、低分子肝素鈉、依諾肝素鈉、那屈肝素鈣、達(dá)肝素鈉、帕肝素鈉或瑞維肝素鈉。本發(fā)明在常規(guī)降糖藥物胰島素類似物的基礎(chǔ)上創(chuàng)造性地引入低分子肝素或它們的可藥用鹽，結(jié)果在改善血糖、尿糖水平方面取得了很好的協(xié)同作用，并在抑制補(bǔ)體C3激活、改善血清高敏C反應(yīng)蛋白(CRP)水平方面具有顯著進(jìn)步，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生以及惡化方面取得了預(yù)料不到的治療效果。本發(fā)明對(duì)上述藥物組合物中的活性成分進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地，藥物組合物中含有如下活性成分(1)甘精胰島素；和(2)低分子肝素鈣或低分子肝素鈉。本發(fā)明通過(guò)實(shí)施例11研究了本發(fā)明藥物組合物對(duì)GK大鼠血糖水平、尿糖水平、糖
4化血清蛋白水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低分子肝素和甘精胰島素的藥物組合物可以用于治療糖尿病，并且效果顯著。尤其是重量比為0.25 50000 1的低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和甘精胰島素的藥物組合物在改善血糖、尿糖水平、糖化血清蛋白方面取得了意想不到的協(xié)同作用。因此本發(fā)明的藥物組合物中低分子肝素鈣或低分子肝素鈉與甘精胰島素的重量比優(yōu)選為0. 25 50000 1，可以進(jìn)一步優(yōu)選為10 8000 1。與此同時(shí)，本發(fā)明提供了一種治療糖尿病的方法，即給藥本發(fā)明的藥物組合物， 優(yōu)選地組合物中含有2. 5mg 500mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. Olmg IOmg甘精胰島素；進(jìn)一步優(yōu)選為，組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和 0. 05mg aiig甘精胰島素。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，給藥頻次是可以依據(jù)病情狀況、年齡等因素綜合考慮后確定的。作為免疫系統(tǒng)的核心組成部分，補(bǔ)體的生理作用主要是攻擊外來(lái)病原和清除免疫復(fù)合物。在病理狀態(tài)下，過(guò)度激活的補(bǔ)體形成膜攻擊復(fù)合物，可以使正常細(xì)胞溶解破壞，或者產(chǎn)生C3a和⑶a等各種中間產(chǎn)物誘導(dǎo)平滑肌的收縮、肥大細(xì)胞釋放組胺，血管通透性的增加以及趨化吸引具有相應(yīng)受體的粒細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞向補(bǔ)體激活的炎癥區(qū)域游走和聚集，參與加重炎癥反應(yīng)和組織損傷。因此，抑制補(bǔ)體激活，可以減弱炎癥反應(yīng)和組織損傷。鑒于炎癥反應(yīng)與II型糖尿病并發(fā)癥諸如動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病視網(wǎng)膜病變、非酒精性脂肪肝之間的密切聯(lián)系，本發(fā)明尤其研究了甘精胰島素和低分子肝素的抗炎效果，以期能夠在降低糖尿病并發(fā)癥發(fā)生率方面取得進(jìn)展。雖然低分子肝素本身具有一定的抗炎活性，但是抗炎活性主要集中在低分子肝素對(duì)炎癥細(xì)胞、炎癥因子及黏附因子的作用。目前還沒(méi)有一種機(jī)制能夠很好的解釋低分子肝素的抗炎活性作用機(jī)理。本發(fā)明在甘精胰島素的基礎(chǔ)上同時(shí)給藥低分子肝素或低分子肝素的可藥用鈉鹽或鈣鹽，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甘精胰島素聯(lián)合低分子肝素同時(shí)給藥能夠顯著抑制補(bǔ)體C3的激活，從而抑制糖尿病患者炎癥反應(yīng)的發(fā)生或惡化，這為開(kāi)展治療糖尿病的同時(shí)進(jìn)行改善糖尿病并發(fā)癥提供了一條嶄新的途徑。通過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)表明(見(jiàn)實(shí)施例12，從治療前后的補(bǔ)體C3的水平來(lái)看，與單獨(dú)給藥低分子肝素、單獨(dú)給藥甘精胰島素相比，本發(fā)明含有低分子肝素和甘精胰島的藥物組合物在改善補(bǔ)體C3水平方面具有顯著性差異(ρ < 0.05)，并取得了協(xié)同作用，這進(jìn)一步表明本發(fā)明的藥物組合物在抑制補(bǔ)體激活、減弱炎癥反應(yīng)和組織損傷方面取得了預(yù)想不到的協(xié)同的治療效果效果，因此本發(fā)明的藥物組合物可以作為治療和/或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的藥物使用，尤其是II型糖尿病并發(fā)癥的治療和/或預(yù)防。因此本發(fā)明提供了本發(fā)明的藥物組合物的一種新用途，即本發(fā)明的藥物組合物在制備治療抑制補(bǔ)體C3激活的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明對(duì)藥物組合物中的活性成分的含量進(jìn)行了優(yōu)選，優(yōu)選地藥物組合物中含有2. 5mg 500mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和 0. Olmg IOmg甘精胰島素。進(jìn)一步優(yōu)選地，組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. 05mg 2mg甘精胰島素。其中給藥頻次對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是可以依據(jù)病情、年齡等各種因素綜合考慮后確定的。血清CRP是炎癥標(biāo)志物，在發(fā)熱性疾病、各種炎癥狀態(tài)和創(chuàng)傷時(shí)，血清CRP水平會(huì)明顯增高。長(zhǎng)期以來(lái)，臨床常以健康群體CRP的95%參考值上限判斷患者有無(wú)明顯的感染性炎癥。但是，高靈敏度CRP (Hs-CRP)檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用研究結(jié)果表明，原先認(rèn)為是正常的血清CRP水平的高低卻同未來(lái)的心血管病的發(fā)生密切相關(guān)。大量研究資料表明，動(dòng)脈粥樣化的血栓形成除了是脂肪堆積過(guò)程外，也是一個(gè)慢性炎癥過(guò)程，而CRP是動(dòng)脈粥樣化的血栓形成疾病的介導(dǎo)和標(biāo)志物。CRP對(duì)心絞痛、急性冠狀動(dòng)脈綜合癥和行經(jīng)皮血管成形術(shù)患者，具有預(yù)測(cè)心肌缺血復(fù)發(fā)危險(xiǎn)和死亡危險(xiǎn)的作用。本發(fā)明通過(guò)臨床研究(見(jiàn)實(shí)施例 12)證實(shí)了本發(fā)明的藥物組合物顯著降低了糖尿病患者血清CRP，并具有協(xié)同作用，這預(yù)示著將顯著減弱糖尿病患者與炎癥相關(guān)的并發(fā)癥反應(yīng)。這進(jìn)一步說(shuō)明，本發(fā)明的藥物組合物可以用于治療和/或預(yù)防諸如糖尿病并發(fā)癥動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病視網(wǎng)膜病變、非酒精性脂肪肝等。與此同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種治療和/或預(yù)防糖尿病并發(fā)癥尤其是動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病視網(wǎng)膜病變、非酒精性脂肪肝的方法，即給與本發(fā)明的組合物治療，優(yōu)選地藥物組合物中含有2. 5mg 500mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. Olmg IOmg甘精胰島素。進(jìn)一步優(yōu)選地，組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. 05mg 2mg甘精胰島素，其中給藥頻次對(duì)與本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是可以依據(jù)病情、年齡等各種因素綜合考慮后確定的。值得說(shuō)明的是，本發(fā)明涉及的藥物組合物中低分子肝素的效價(jià)以100IU/mg計(jì)，胰島素的效價(jià)以26IU/mg計(jì)。但是本發(fā)明不僅僅局限于低分子肝素、胰島素上述效價(jià)。如果改變低分子肝素和/或胰島素的效價(jià)，在本發(fā)明的技術(shù)啟示下，獲得相應(yīng)的重量比例關(guān)系和相應(yīng)的藥物含量是顯而易見(jiàn)的。比如，低分子肝素的效價(jià)以100IU/mg計(jì)，胰島素的效價(jià) W^IU/mg計(jì)，本發(fā)明的藥物組合物中低分子肝素與甘精胰島素的重量比為30 1，藥物組合物中含有30mg低分子肝素和Img甘精胰島素，這時(shí)低分子肝素與甘精胰島素的效價(jià)比為 3000 26。在保證低分子肝素與甘精胰島素的效價(jià)比為3000 沈不變的情況下，如果低分子肝素的效價(jià)以80IU/mg計(jì)，胰島素的效價(jià)以^IU/mg計(jì)，本發(fā)明的藥物組合物中低分子肝素與甘精胰島素的重量比為37. 5 1，藥物組合物中含有37. 5mg低分子肝素和Img甘精胰島素。為了更好地表達(dá)本發(fā)明，本發(fā)明提供了含有本發(fā)明藥物組合物的注射劑，還含有氯化鋅、間甲酚、甘油，并且pH值為3. 0 7. 0。注射劑的制備完全可以通過(guò)常規(guī)制劑技術(shù)進(jìn)行制備?？傊?，本發(fā)明的藥物組合物與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下突出的優(yōu)勢(shì)(1)與單獨(dú)給藥相比，本發(fā)明的藥物組合物在改善GK大鼠血糖、尿糖和糖化血清蛋白水平方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)，并具有很好的協(xié)同作用。(2)與單獨(dú)給藥相比，本發(fā)明藥物組合物在改善血清CRP水平、抑制補(bǔ)體C3激活方面具有很好的協(xié)同作用，本發(fā)明的藥物組合物在抑制補(bǔ)體激活、減弱炎癥反應(yīng)和組織損傷方面取得了預(yù)想不到的技術(shù)效果，可以用于預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施方式
進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1注射劑處方低分子肝素鈉 50g甘精胰島素 0. OOlg
氯化鋅IOg間甲酚8g甘油IOg氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至7. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例2注射劑處方低分子肝素鈉 0. 25g甘精胰島素 Ig氯化鋅Ig間甲酚0.8g甘油Ig氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至3. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例3注射劑處方低分子肝素鈉 IOg甘精胰島素 Ig氯化鋅Ig間甲酚2g甘油4g氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至5. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例4注射劑
處方
低分子肝素鈉80g
甘精胰島素0. Olg
氯化鋅15g
間甲酚IOg
甘油IOg
氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至3. 5，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例5注射劑處方低分子肝素鈉30g甘精胰島素 Ig氯化鋅5g間甲酚8g甘油IOg氯化鈉 9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至5. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例6注射劑處方低分子肝素鈣50g門冬胰島素 0. OOlg氯化鋅IOg間甲酚9g甘油8.6g氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的低分子肝素鈣、門冬胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至7. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例7注射劑處方依諾肝素鈉0. 25g甘精胰島素Ig氯化鋅 Ig間甲酚0. 8g甘油Ig氯化鈉 9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的依諾肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至3. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例8注射劑處方那屈肝素鈣 IOg甘精胰島素 Ig氯化鋅1.2g間甲酚2g甘油4. 5g氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的那屈肝素鈣、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至5. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌30min即得。實(shí)施例9注射劑處方帕肝素鈉80g甘精胰島素 O.Olg氯化鋅15g間甲酚8. 8g甘油IOg氯化鈉9g注射用水加至IOOOg制備工藝取處方量的帕肝素鈉、甘精胰島素，加入適量的注射用水，再加入甘油、 間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至3. 5，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100攝氏度滅菌
30min即得。
實(shí)施例10注射劑
處方
達(dá)肝素鈉30g
賴脯胰島素Ig
氯化鋅IOg
間甲酚8g
1，2_丙二醇5g
氯化鈉9g
注射用水加至IOOOg
制備工藝取處方量的達(dá)肝素鈉、賴脯胰島素，加入適量的注射用水，再加入1，2-丙二醇、間甲酚、氯化鋅進(jìn)行充分溶解，并調(diào)節(jié)PH值至5. 0，加入氯化鈉，過(guò)濾、灌封，100
攝氏度滅菌30min即得。 實(shí)施例11本發(fā)明藥物組合物對(duì)糖尿病GK大鼠血糖、尿糖和糖化血清蛋白影響的試驗(yàn)研究1、材料與方法1.1 材料(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼料正常Wistar大鼠10只，SPF級(jí)12周齡雄性GK大鼠148只，購(gòu)于上海斯萊克動(dòng)物中心。高脂飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供；基礎(chǔ)飼料由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。(2)試劑與儀器尿糖試紙、酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司提供)，德國(guó)羅康全血糖儀及配套試紙。1.2 方法所有大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將GK大鼠空腹血糖彡11. lmmol/L入組，剔除剩余GK 大鼠18只。將入組GK大鼠130只隨機(jī)分為模型組(10只)、實(shí)驗(yàn)一組(40只)、實(shí)驗(yàn)二組 (40只)、實(shí)驗(yàn)三組(40只)，然后對(duì)各組進(jìn)行喂養(yǎng)并作如下處理模型組(10只)繼續(xù)正常喂養(yǎng)1周，等待給藥；實(shí)驗(yàn)一組GO只)飼喂高糖高脂飼料(由10.0%豬油，20.0%蔗糖，10.0%蛋黃粉，0. 5%膽酸鈉和59. 5%常規(guī)飼料組成)1周，待35只GK大鼠血糖水平達(dá)到25. 0 30. Ommol/L后，選擇30只隨機(jī)分為低分子肝素A組(10只)、甘精胰島素A組(10只)和復(fù)方A組(10只)，等待給藥，剔出剩余GK大鼠；實(shí)驗(yàn)二組(40只)繼續(xù)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，選擇血糖水平在11. 1 15. Ommol/LGK 大鼠30只，隨機(jī)分為低分子肝素B組(10只)、甘精胰島素B組(10只)和復(fù)方B組(10 只)，等待給藥，同時(shí)剔除不符合要求的GK大鼠10只；實(shí)驗(yàn)三組GO只)飼喂高糖飼料(由10. 0%蔗糖，10. 0%蛋黃粉，0. 5%膽酸鈉和 79. 5%常規(guī)飼料組成)1周，待全部GK大鼠血糖水平達(dá)到15. 1 9mmol/L后，選擇30 只大鼠隨機(jī)分為低分子肝素C組(10只)、甘精胰島素C組(10只)和復(fù)方C組(10只)， 等待給藥，同時(shí)剔除剩余GK大鼠10只。具體給藥方案如下1. 2. 1正常對(duì)照組等量生理鹽水；1. 2. 2模型對(duì)照組等量生理鹽水；1. 2. 3低分子肝素A組腹腔注射低分子肝素注射液(％ig/kg低分子肝素，制備工藝同實(shí)施例3)1. 2. 4甘精胰島素A組腹腔注射甘精胰島素注射液(0. 4mg/kg甘精胰島素，制備工藝同實(shí)施例3)；1. 2. 5復(fù)方A組腹腔注射如實(shí)施例3的注射劑(％ig/kg低分子肝素+0. 4mg/kg甘精胰島素)；1. 2. 6低分子肝素B組腹腔注射低分子肝素注射液(80mg/kg低分子肝素，制備工藝同實(shí)施例4)；1. 2. 7甘精胰島素B組腹腔注射甘精胰島素注射液(0. Olmg/kg甘精胰島素，制備工藝同實(shí)施例4)；1. 2. 8復(fù)方B組腹腔注射如實(shí)施例4的注射劑(80mg/kg低分子肝素+0. Olmg/kg甘精胰島素)；1. 2. 9低分子肝素C組腹腔注射低分子肝素注射劑(6mg/kg低分子肝素，制備工藝同實(shí)施例5)；1. 2. 10甘精胰島素C組腹腔注射甘精胰島素注射液(0. 2mg/kg甘精胰島素，制備工藝同實(shí)施例5)；1. 2. 11復(fù)方C組腹腔注射如實(shí)施例5的注射劑(6mg/kg低分子肝素+0. 2mg/kg 甘精胰島素)。所有大鼠每天給藥一次，自由飲水，所有GK大鼠均給予高脂飼料，Wistar大鼠正常飲食。其中低分子肝素效價(jià)以100U/mg計(jì)，甘精胰島素效價(jià)以^U/mg計(jì)。2、樣本制備及指標(biāo)檢測(cè)于用藥治療期間，每周一次眼眶靜脈采血，監(jiān)測(cè)空腹血糖值變化。用藥治療第28 天，禁食12h，末次給藥Ih后，腹主動(dòng)脈取血，注入一潔凈試管中靜置，分離血清，立即檢測(cè) FBG，其余血清樣品分裝于1. 5ml凍存管中，_20°C冰箱保存等待相關(guān)生化、放免指標(biāo)測(cè)定。 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。檢測(cè)指標(biāo)及其方法如下2. 1空腹血糖(FBG)的測(cè)定，采用葡萄糖氧化酶法；2. 2糖化血清蛋白(GSP)含量測(cè)定，采用果糖胺法；2. 3尿糖的測(cè)定，采用尿糖試紙；2. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理將以上所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按照以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS15. 0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)算數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(i±s)表示，多組資料比較采用方差分析，組內(nèi)比較采用t檢驗(yàn)。 以ρ <0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 1本發(fā)明藥物組合物對(duì)糖尿病大鼠的血糖、尿糖的影響由表1可知(1)與模型組相比，本發(fā)明藥物組合物對(duì)糖尿病大鼠血糖、尿糖的影響都具有顯著或極顯著性差異。這表明本發(fā)明藥物組合物在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面具有很好的作用。(2)與低分子肝素A組、甘精胰島素A組相比，復(fù)方A組在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面具有顯著性差異，并取得了很好的協(xié)同作用，這表明本發(fā)明藥物組合物分別與單獨(dú)給藥低分子肝素、單獨(dú)給藥甘精胰島素相比，在治療糖尿病方面具有顯著降低血糖和尿糖的突出優(yōu)勢(shì)。(3)與低分子肝素B組、甘精胰島素B組相比，復(fù)方B組在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面具有顯著性差異，并取得了很好的協(xié)同作用，這表明本發(fā)明藥物組合物分別與單獨(dú)給藥低分子肝素、單獨(dú)給藥甘精胰島素相比，在治療糖尿病方面具有顯著降低血糖和尿糖的突出優(yōu)勢(shì)。(4)與低分子肝素C組、甘精胰島素C組相比，復(fù)方C組在改善糖尿病血糖、尿糖水平方面具有顯著性差異，并取得了很好的協(xié)同作用，這表明本發(fā)明藥物組合物分別與單獨(dú)給藥低分子肝素、單獨(dú)給藥甘精胰島素相比，在治療糖尿病方面具有顯著降低血糖和尿糖的突出優(yōu)勢(shì)。由此可見(jiàn)，本發(fā)明含有低分子肝素和甘精胰島素的藥物組合物在改善糖尿病大鼠血糖、尿糖水平方面具有意想不到的技術(shù)效果，并取得了協(xié)同改善血糖、尿糖水平的作用。值得說(shuō)明的是，本發(fā)明還考察了重量比為50000 1和0.25 1的低分子肝素和甘精胰島素復(fù)方藥物對(duì)GK大鼠血糖和尿糖的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明重量比為50000 1的低分子肝素和甘精胰島素復(fù)方藥物在改善糖尿病大鼠血糖、尿糖水平方面，血糖水平平均值從28. 5mmol/L降低至13. 2mmol/L，尿糖水平平均值從3. 02mmol/L降低至1. IOmmol/L ；重量比為0.25 1的低分子肝素和甘精胰島素復(fù)方藥物在改善糖尿病大鼠血糖、尿糖水平方面，血糖水平平均值從27. 5mmol/L降低至14. 2mmol/L，尿糖水平平均值從3. 12mmol/L降低至1.25mm0l/L。這進(jìn)一步表明，重量比為50000 1和0. 25 1的低分子肝素和甘精胰島素復(fù)方藥物改善GK大鼠血糖和尿糖水平方面具有很好的效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，針對(duì)不同的血糖水平，給與本發(fā)明藥物組合物不同的劑量，本發(fā)明含有低分子肝素和甘精胰島素的藥物組合物都可以用于治療糖尿病，并且效果顯著。尤其是重量比為0.25 50000 1的低分子肝素和甘精胰島素的藥物組合物在降低血糖、尿糖方面取得了意想不到的技術(shù)效果。表1本發(fā)明藥物組合物對(duì)糖尿病大鼠血糖(mmol/L)、尿糖(mmol/L)的影響
權(quán)利要求
1.一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，其特征在于它含有如下活性成分(1)胰島素類似物；和(2)低分子肝素或其可藥用鹽，所述的胰島素類似物為門冬胰島素、賴脯胰島素或甘精胰島素。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的低分子肝素選自依諾肝素、那屈肝素、達(dá)肝素、帕肝素或瑞維肝素。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的胰島素類似物為甘精胰島素。
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于低分子肝素的可藥用鹽為鈉鹽或鈣鹽。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于它含有如下活性成分(1)甘精胰島素；和(2)低分子肝素鈣或低分子肝素鈉。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述的低分子肝素鈣或低分子肝素鈉與甘精胰島素的重量比為0.25 50000 1。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于所述的組合物中含有2.5mg 500mg 低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. Olmg IOmg甘精胰島素。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于低分子肝素鈣或低分子肝素鈉與甘精胰島素的重量比為10 8000 1。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. 05mg aiig甘精胰島素。
10.如權(quán)利要求7或9所述的藥物組合物，其特征在于它是注射劑，還含有氯化鋅、間甲酚、甘油，并且PH值為3.0 7.0。
11.如權(quán)利要求1或5所述的藥物組合物在制備治療抑制補(bǔ)體C3激活的藥物中的應(yīng)用。
12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物中含有2.5mg 500mg 低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. Olmg IOmg甘精胰島素。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其特征在于組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. 05mg aiig甘精胰島素。
14.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備治療和/或預(yù)防II型糖尿病并發(fā)癥的藥物中的應(yīng)用，所述的II型糖尿病并發(fā)癥為動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病視網(wǎng)膜病變或非酒精性脂肪肝。
15.如權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物中含有如下活性成分(1)甘精胰島素；和(2)低分子肝素鈣或低分子肝素鈉。
16.如權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物組合物中含有2.5mg 500mg 低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. Olmg IOmg甘精胰島素。
17.如權(quán)利要求16所述的藥物組合物，其特征在于組合物中含有20mg 40mg低分子肝素鈣或低分子肝素鈉和0. 05mg aiig甘精胰島素。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療糖尿病及其并發(fā)癥的藥物組合物，特別涉及一種含有胰島素類似物和低分子肝素或它們的可藥用鹽的藥物組合物。與單獨(dú)給藥相比，本發(fā)明的藥物組合物在改善GK大鼠血糖、尿糖和糖化血清蛋白水平方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)，并具有很好的協(xié)同作用；在改善血清CRP水平、抑制補(bǔ)體C3激活方面也具有很好的協(xié)同作用，因此可以用于預(yù)防和/或治療糖尿病及其并發(fā)癥。
文檔編號(hào)A61K38/28GK102580060SQ20111002023
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2011年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月8日
發(fā)明者王恩力, 趙志全 申請(qǐng)人:山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司