專利名稱：八肽膽囊收縮素在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及八肽膽囊收縮素的用途，尤其是八肽膽囊收縮素在制藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK, PZ)是從豬小腸提取物中分離出來的、由33 個氨基酸組成的多肽，于19 年、1943年被提純。CCK是一種廣泛存在于胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦腸肽，通過與靶細胞膜上的特 異性受體結(jié)合而發(fā)揮細胞調(diào)節(jié)作用。1980年Sankaran等在胰腺腺胞中發(fā)現(xiàn)了 CCK1R，同年 在腦中又發(fā)現(xiàn)了一種藥理學(xué)性質(zhì)完全不同的CCK2R。CCKR是細胞膜上的一類糖蛋白，屬于 G蛋白偶聯(lián)超家族。不同結(jié)構(gòu)類型的CCKR組織分布不同，介導(dǎo)不同的細胞效應(yīng)。CCKlR主 要分布在外周組織，但也有部分中樞神經(jīng)組織分布；CCK2R主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，但也 有部分外周組織分布。CCK與其受體結(jié)合后發(fā)揮多種生理功能，如在胃腸道的主要生理作用是刺激胰酶 分泌與合成，增強胰碳酸氫鹽分泌和胃排空，刺激膽囊收縮與奧狄氏括約肌松弛，還可興奮 肝膽汁分泌，調(diào)節(jié)小腸、結(jié)腸運動等多方面功能。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮神經(jīng)遞質(zhì)的作用，參 與了痛覺感受、食欲調(diào)節(jié)、記憶等生理過程，亦有調(diào)節(jié)垂體激素釋放的作用，與驚恐、焦慮、 癲癇等病理表現(xiàn)有關(guān)；同時，CCK還具有控制中樞呼吸節(jié)律及調(diào)節(jié)心血管緊張的作用。用胰蛋白酶消化33肽的CCK，可使其羧基端8個氨基酸解裂出來，稱為八肽膽囊收 縮素(CCK - 8)，CCK - 8具有整個CCK分子的全部活性，是膽囊收縮素-促胰酶素分子的 最小活性片段。在CCK分子羧基端第7位的酪氨酸是硫酸鹽化的，其上的硫酸酯基團的存 在為發(fā)揮其生物活性所必需。CCK-8 的氨基酸序列為 H-Asp-Tyr (SO3H) -Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2,分子式 為C49H62NltlO16S3，分子量為1143. 27。已知可以用作膽囊收縮診斷試劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種八肽膽囊收縮素的新用途，S卩八肽膽囊收縮 素在制藥中的新應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是一種八肽膽囊收縮素在制備 治療或預(yù)防內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防內(nèi)毒素休克的藥中的應(yīng)用。八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防膿毒血癥的藥中的應(yīng)用。八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防多器官功能障礙綜合征的藥物中的應(yīng)用。八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防全身性炎癥反應(yīng)綜合征的藥物中的應(yīng)用。為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用八肽膽囊收縮素的藥理試驗及結(jié)果來說 明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。內(nèi)毒素是指革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要活性成分脂多糖(LPS)。內(nèi)毒素血癥是由于血中或病灶內(nèi)革蘭氏細菌死亡，釋放出大量脂多糖(LPS)入血而引起的一種病 理生理過程，臨床多見于嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染、應(yīng)激以及網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能障礙等。在此過程 中，LPS可誘導(dǎo)炎性細胞產(chǎn)生多種促炎細胞因子如腫瘤壞死因子-α (TNF-α)、白細胞介 素-1β (IL-Ιβ)、白細胞介素-6(IL_6)等，這些細胞因子可再度激活炎癥細胞，釋放更多 的促炎因子，導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)綜合征(S^S)。如果短時間內(nèi)大量LPS入血或血液中LPS 不被及時清除，內(nèi)毒素血癥則會引起微循環(huán)障礙，最終形成內(nèi)毒素休克。體循環(huán)和肺循環(huán)血 流動力學(xué)紊亂是形成內(nèi)毒素休克時主要的血流動力學(xué)變化。在此過程中，體循環(huán)血流動力 學(xué)紊亂主要表現(xiàn)為平均動脈壓(MAP)進行性下降，重要器官如肝、腎等血流灌注不足；肺循 環(huán)血流動力學(xué)紊亂主要表現(xiàn)為肺動脈壓(PAP)早期升高晚期下降，上述血流動力學(xué)紊亂可 最終形成多器官功能障礙綜合征(M0DQ。內(nèi)毒素血癥和內(nèi)毒素休克均為臨床的危重病癥， 死亡率極高，目前人類尚未找到有效的治療方法。一、CCK-8對內(nèi)毒素血癥肺臟炎癥反應(yīng)的影響 UCCK-8改善內(nèi)毒素血癥大鼠肺臟形態(tài)學(xué)變化
健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠48只，體重15(T200g，由河北省實驗動物中心提 供。隨機分為8組，每組6只。①對照組在各時間點依次注入與其他實驗組同體積的生理 鹽水。②LPS組依次注入醋酸鉛2. 5mg/100g b. w.、LPS5mg/kg、生理鹽水。③LPS+CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、生理鹽水，30min后注入CCK-8 20 μ g/kg。④LPS+DMS0+PF+CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、DMS0+PF 0. lmL/100g b. w.(體積比1:4，在注入LPS 20min后注 入)、CCK-8 (在注入LPS 30min后注入)。⑤LPS+CR1+CCK-8組依次注入醋酸鉛、LPS、CRl 0. 5mg/kg (在注入 LPS 20min 后注入)、CCK-8 (在注入 LPS 30min 后)。⑥ LPS+CR2+CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、CR2 0. 5mg/kg (在注入LPS 20min后注入)、CCK-8 (在注入LPS 30min后注入)。⑦醋酸鉛組依次注入醋酸鉛2. 5mg/100g b. w.、生理鹽水。⑧CCK-8組 依次注入醋酸鉛、生理鹽水、CCK-8。注CR1為 LPS+L-364, 718 CCK-8 1 受體阻滯劑；CR2 為 LPS+LY488, 513 CCK-8 2 受體阻滯劑；各組中所用試劑的濃度和劑量相同。以尾靜脈注入醋酸鉛和LPS制備大鼠內(nèi)毒素休克模型，鱟試劑檢測法檢測血中內(nèi) 毒素含量>0. 2EU/ml為內(nèi)毒素血癥模型復(fù)制成功。取左肺上葉，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片及HE染色，光鏡下觀察肺組織形 態(tài)學(xué)變化。每例取Imm3左肺下葉組織3飛塊，4%戊二醛固定，1%鋨酸后固定，常規(guī)電鏡標(biāo)本 制樣，透射電鏡下觀察肺臟超微結(jié)構(gòu)變化。1. 1光鏡觀察
LPS組(第②組)大鼠12 h后肺小動脈充血，肺泡間隔增寬，毛細血管擴張淤血、PMN增 加；肺泡腔萎陷較為明顯，參看圖1B。在注射LPS 30min后，即內(nèi)毒素血癥形成后，給予 CCK-8可明顯改善上述病變，參看圖1C(第③組)。預(yù)先給予CR2可明顯抑制CCK-8的效應(yīng)， 參看圖IF (第⑥組)，而預(yù)先給予CRl則對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響，參看圖IE (第⑤組)。 所述LPS+DMS0+PF+CCK-8組(第④組，阻滯劑的溶劑對照組)與LPS+CCK-8組(第③組)相比， 無明顯變化。對照組、醋酸鉛組和CCK-8組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，無異常改變，參見圖1A、圖 IG和圖1H。
1.2電鏡觀察
LPS組大鼠12 h后肺毛細血管內(nèi)PMN增加，內(nèi)皮細胞腫脹，胞質(zhì)電子密度降低，飲泡 增多，肺泡隔細胞板層體排空；II型肺泡上皮細胞微絨毛減少，線粒體腫脹、空化，板層體減 少，參見圖2B。預(yù)先給予CR2阻滯劑可明顯抑制CCK-8的效應(yīng)，而預(yù)先給予CRl阻滯劑則 對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響。CCK受體阻滯劑的溶劑對照組(LPS+DMS0+PF+CCK-8組)與 LPS+CCK-8組相比，無明顯變化。對照組、醋酸鉛組和CCK-8組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，無異常 改變。具體參看圖2A-圖2H。上述結(jié)果顯示CCK-8緩解肺組織炎性細胞浸潤、肺泡間隔增厚、肺泡腔萎縮等現(xiàn) 象，充分表明CCK-8對內(nèi)毒素血癥中急性肺損傷具有重要的治療作用。2、CCK-8抑制內(nèi)毒素血癥大鼠肺組織促炎細胞因子TNF- α、IL-I β、IL_6的生成 取上述各實驗組的肺組織標(biāo)本，勻漿后以每分鐘10 000轉(zhuǎn)離心，酶聯(lián)免疫吸附分析
(ELISA)試劑盒分析組織上清TNF-α、IL-I β和IL-6水平。根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果分別在各細胞 因子表達高峰2 h處死留取標(biāo)本檢測TNF-α和IL-I β，12 h處死留取標(biāo)本的檢測IL-6。LPS組2h后肺臟TNF-α和IL_1 β含量顯著高于對照組(Ρ<0. 05)，給予CCK-8 后TNF-α和IL-I β含量較LPS組顯著減少(P<0. 05)。預(yù)先應(yīng)用CR2的LPS+CR2+CCK-8 組中，TNF-α和IL-I β含量升高，明顯抑制了 CCK-8的效應(yīng)(Ρ<0. 05)。預(yù)先應(yīng)用CRl的 LPS+CR1+CCK-8組對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響(Ρ>0. 05)。醋酸鉛和CCK-8組細胞因子含量 較對照組無顯著差異(Ρ>0. 05)。參看圖3。LPS組12h后肺臟IL-6含量顯著高于對照組(P<0. 05)，給予CCK-8后IL-6含量較 LPS組顯著減少(P<0. 05)。預(yù)先應(yīng)用CR2的LPS+CR2+CCK-8組中，IL-6含量升高，明顯抑制 了 CCK-8的效應(yīng)(P<0. 05)。預(yù)先應(yīng)用CRl的LPS+CR1+CCK-8組的效應(yīng)無明顯影響(P>0. 05)。 醋酸鉛和CCK-8組細胞因子含量較對照組無顯著差異(P>0. 05)。參看圖4。本試驗證實，CCK-8可以在不同階段抑制肺臟不同促炎因子的表達，表明CCK-8在 內(nèi)毒素血癥早期和晚期均可發(fā)揮抗炎作用，且在內(nèi)毒素血癥晚期的抗炎作用更加顯著，這 對于全面抑制肺臟炎癥級聯(lián)反應(yīng)，改善預(yù)后具有重要意義。二、CCK-8對內(nèi)毒素休克大鼠血流動力學(xué)的影響
大鼠內(nèi)毒素休克模型的制備20%烏拉坦，0.5ml/100g b. w.腹腔注射，全身麻醉后將 大鼠固定于手術(shù)臺上，由尾靜脈注入醋酸鉛，待血壓穩(wěn)定后注入LPS并加注0. 5ml生理鹽 水使LPS全部進入體內(nèi)后，出現(xiàn)血壓顯著下降至SKPa為ES模型復(fù)制成功。試驗分組
①對照組在各時間點依次注入與實驗組同體積的生理鹽水；
②LPS 組注入醋酸鉛 20mg/100g b. w，LPS 30 mg/kg ；
③LPS+CCK-8組依次注入醋酸鉛、LPS、生理鹽水(與相應(yīng)時間點等體積)、CCK-8 50 μ g/kg (LPS 后 30min 注入)；
④LPS+ CR1+CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、CRl lmg/kg (LPS 后 20min)、CCK-8 ；
⑤LPS+ CR2 +CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、CR2 lmg/kg (LPS 后 20min)、CCK-8 ；
⑥LPS+DMSO+PF+ CCK-8 組依次注入醋酸鉛、LPS、DMS0+PF 0. lml/100g b. w.(體積 比 1 :4，LPS 后 20min 注入)、CCK-8 ；
⑦醋酸鉛組依次注入醋酸鉛20mg/100gb.w.、生理鹽水(與相應(yīng)時間點等體積)；⑧CCK-8組依次注入醋酸鉛、生理鹽水(與相應(yīng)時間點等體積)、CCK-8。1、CCK-8延緩內(nèi)毒素血癥大鼠MAP進行性下降，降低PAP。頸正中切口，分離左側(cè)頸動脈監(jiān)測MAP;采用肺動脈導(dǎo)管由右頸靜脈插至肺動脈 入口處記錄PAP。本實驗所用的Sprague Dawley (SD)大鼠從動物品系分類上屬遠交群，即 封閉群動物。雖然隨機交配使群體基因頻率基本保持穩(wěn)定不變，但個體之間具有遺傳雜合 性，且差異較大，該特點使遠交系具有類似于人類群體遺傳異質(zhì)性的遺傳組成。因此，本實 驗復(fù)制的動物模型更符合疾病實際的臨床表現(xiàn)，在此基礎(chǔ)上研究CCK-8的治療作用更具臨 床意義。根據(jù)變化趨勢的不同，將動物分為兩群，并設(shè)計了兩組時間點來記錄MAP和PAP。第一群動物結(jié)果顯示，LPS組1.5 h，MAP下降，PAP升高(早期升高)，與對照組相 比有顯著差異(P<0. 05)；注射LPS 3h, MAP進一步下降(P<0. 05)，而PAP卻隨著MAP的進 行性降低由早期升高轉(zhuǎn)為晚期下降，與對照組相比無顯著差異(P>0. 05)。給予CCK-8可明 顯延緩LPS誘導(dǎo)的上述各時間點MAP的進行性下降(P<0. 05)；預(yù)先應(yīng)用CR2抑制了 CCK-8 的效應(yīng)(P<0. 05);預(yù)先應(yīng)用CRl對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響(P>0. 05)。而CCK-8對LPS誘 導(dǎo)的PAP的影響不同于對MAP的影響，給予CCK-8不能有效緩解LPS誘導(dǎo)的1. 5h時間點 PAP的升高(P>0. 05)，甚至表現(xiàn)為池時間點PAP進一步升高；預(yù)先應(yīng)用CRl和CR2對CCK-8 的效應(yīng)均無明顯影響(P>0. 05)。醋酸鉛組和CCK-8組的MAP、PAP與對照組未見顯著差異 (P>0. 05)。參看圖5和圖6。第二群動物結(jié)果顯示，LPS組MAP呈現(xiàn)進行性下降的趨勢，與對照組各時間點相 比有顯著差異(P<0. 05)，且與第一群大鼠相比，LPS誘導(dǎo)的第二群大鼠MAP下降速度更為 緩慢。CCK-8對LPS誘導(dǎo)的MAP變化的影響與第一群動物相似，即CCK-8明顯延緩了 LPS 誘導(dǎo)的上述各時間點MAP的進行性下降；預(yù)先應(yīng)用CR2也同樣明顯抑制了 CCK-8的效應(yīng) (P<0. 05)，CRl對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響(P>0. 05)。PAP表現(xiàn)為早期升高晚期下降，變化 趨勢與第一群大鼠一致。但CCK-8對LPS誘導(dǎo)的PAP變化的影響與第一群動物不同，雖然 給予CCK-8后PAP于池時間點仍然表現(xiàn)為升高，但是在Mi時PAP下降，而此時MAP還未 到達休克水平，提示CCK-8可在延緩MAP下降且未達休克水平時緩解LPS誘導(dǎo)的肺動脈高 壓。給予CCK-8后8h，PAP進一步下降，與對照組相應(yīng)時間點相比無顯著差異(P>0. 05)，而 此時MAP接近休克水平，進一步表明CCK-8緩解LPS誘導(dǎo)的PAH的效應(yīng)可以維持到鄰近休 克水平。預(yù)先應(yīng)用CCK-2R阻滯劑在MiAh時間點可明顯抑制CCK-8對LPS誘導(dǎo)的PAH的 效應(yīng)(P<0. 05)；而CRl對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響(P>0. 05)。CCK受體阻滯劑的溶劑對照 組(LPS+DMS0+PF+CCK-8組)的上述各時間點MAP、PAP分別與LPS +CCK-8組相比無明顯差 異；醋酸鉛組和CCK-8組的MAP、PAP與control組比較也未見顯著差異(P>0. 05)。參看圖 7和圖8。在本實驗中，在注射LPS 30min之后應(yīng)用CCK-8，能夠有效延緩MAP進行性下降，表 明CCK-8可以及時、有效的阻斷LPS誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，提示CCK-8對于LPS誘導(dǎo)的體循 環(huán)紊亂具有潛在的緩解作用。對于PAP，結(jié)果顯示CCK-8可在延緩MAP下降且未達休克水平的前提下緩解LPS誘 導(dǎo)的肺動脈高壓，這表明在LPS之后應(yīng)用CCK-8仍然能夠通過降低LPS誘導(dǎo)的PAH，但這種 效應(yīng)依賴對MAP的調(diào)節(jié)。2、CCK_8恢復(fù)內(nèi)毒素血癥大鼠心率(HR)，增加潮氣量(TV)分離氣管，自3到4環(huán)狀軟骨間切口，迅速插入氣管插管，連接心電導(dǎo)連，分別記錄Oh、 1. 5h、3h 的 HR, TV 的變化。處理前HR和TV各組之間未見顯著差異，LPS組較對照組相應(yīng)時間點均下降 (P<0. 05)；給予CCK-8后上述各時間點HR和TV較LPS組顯著升高(P<0. 05)。預(yù)先應(yīng)用 CR2阻滯劑明顯抑制了 CCK-8的效應(yīng)。預(yù)先應(yīng)用CRl阻滯劑對CCK-8的效應(yīng)無明顯影響 (P>0. 05)。CCK受體阻滯劑的溶劑對照組(LPS+DMS0+PF+CCK-8組)的上述各時間點HR與 LPS +CCK-8組無明顯差異(P>0. 05)。醋酸鉛組、CCK-8組與對照組比較各時間點未見顯著 差異。(參見圖9和圖10)。3、CCK-8改善內(nèi)毒素血癥大鼠肝腎微循環(huán)變化
應(yīng)用激光多普勒血流儀，記錄Oh、1. 5h、;3h各時間點單位時間內(nèi)通過探針照射面 積下的紅細胞數(shù)反映肝腎微循環(huán)變化。處理前各組肝腎微循環(huán)血流之間未見顯著差異，LPS組在各時間點較對照組顯著 降低(P<0. 05)；給予CCK-8后上述各時間點肝腎微循環(huán)血流較LPS組顯著升高(P<0. 05)。 預(yù)先應(yīng)用CR2可明顯抑制CCK-8的效應(yīng)(P<0. 05)，而預(yù)先應(yīng)用CRl對CCK-8的效應(yīng)無明 顯影響(P>0.05)。溶劑對照組(LPS+DMS0+PF+CCK-8組)的上述各時間點肝腎微循環(huán)血流 與LPS +CCK-8組無明顯差異(P>0. 05)。醋酸鉛組、CCK-8組與對照組比較各時間點未見顯 著差異。參見圖11和圖12。CCK-8對內(nèi)毒素血癥時肝、腎微循環(huán)的調(diào)節(jié)作用可有助于CCK-8延緩MAP下降，這 充分體現(xiàn)了 CCK-8對ES (內(nèi)毒素休克)時血流動力學(xué)紊亂的調(diào)節(jié)是系統(tǒng)的、多層次的、有效 地。當(dāng)前臨床上用于抗ES的藥物往往只能單一的升高血壓不能有效改善微循環(huán)，而CCK-8 抗LPS損傷的研究結(jié)果提示，如果CCK-8能作為臨床藥物，在改善微循環(huán)方面將體現(xiàn)強大的 優(yōu)勢。采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于
1)本發(fā)明對已知的八肽膽囊收縮素發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域；
2)本發(fā)明的八肽膽囊收縮素安全無毒、可靠的特點，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前
旦
足；
3)本發(fā)明的產(chǎn)品制成的藥物具有顯著抑制促炎細胞因子生成，改善肺組織結(jié)構(gòu)損傷； 明顯延緩平均動脈壓下降，改善肝、腎微循環(huán)血流，提高心率；有效降低肺動脈高壓，改善潮 氣量的作用。這些藥理作用針對了內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克、膿毒血癥、多器官功能障礙綜 合征(M0DQ、全身性炎癥反應(yīng)綜合征(S^S)等病癥的最根本的病理變化，有利于預(yù)防和治 療此類疾病的發(fā)生和發(fā)展。


下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步詳細的說明。圖IA-圖IE是在光學(xué)顯微鏡下，大鼠肺組織結(jié)構(gòu)變化(X400)，其中圖IA為對照 組，圖 IB 為 LPS 組，圖 IC 為 LPS +CCK-8 組，圖 ID 為 LPS+DMSO+PF + CCK-8 組，圖 IE 為 LPS+ CR1+CCK-8 組，圖 IF 為 LPS+ CR2+CCK-8 組，圖 IG 為醋酸鉛組，圖 IH 為 CCK-8 組；
圖2是本發(fā)明大鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)變化，其中圖2A為對照組，圖2B為LPS組，圖2C 為 LPS +CCK-8 組，圖 2D 為 LPS+DMSO+PF + CCK—8 組，圖 2E 為 LPS+ CR1+CCK—8 組，圖 2F為LPS+ CR2+CCK-8組，圖2G為醋酸鉛組，圖2H為CCK-8組；
圖3為給予CCK-8后2h肺組織TNF-α和IL_1 β含量。#表示與對照組比較，▲表示與 LPS比較，■表示與LPS+CCK-8組比較，/7 <0. 05 ；
圖4為給予CCK-8后1 肺組織IL-6含量，#表示與對照組比較，▲表示與LPS比較，丨 表示與LPS+CCK-8組比較，/7 <0. 05 ；
圖5給予不同處理后MAP (kPa)變化(士·5，η=6)，#表示與相同時間點對照組比較，▲ 表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖6給予不同處理后PAP (kPa)變化(士·5，η=6)，#表示與相同時間點對照組比較，▲ 表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖7給予不同處理后MAP (Kpa)變化(士^，n=6)，#表示與相同時間點對照組比較， ▲表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖8給予不同處理后PAP (Kpa)變化(士s，n=6)，#表示與相同時間點對照組比較，▲ 表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/XO. 05 ；
圖9 給予不同處理后HR(bpm)變化(士& n=6)，#表示與相同時間點對照組比較，▲ 表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖10 給予不同處理后TV(ml)變化(士·5，η=6)，#表示與相同時間點對照組比較，▲ 表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖11給予不同處理后肝微循環(huán)(BPU)變化(士& n=6)，#表示與相同時間點對照組 比較，▲表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05 ；
圖12給予不同處理后腎微循環(huán)(BPU)變化(士& n=6)，#表示與相同時間點對照組 比較，▲表示與相同時間點LPS組比較，"表示與相同時間點LPS+CCK-8組比較，/^ <0. 05。
具體實施例方式實施例1
用生理鹽水將33. 7 μ L質(zhì)量濃度為25% 28%氨水稀釋至10 mL,得約0. 05 mol/L氨 水(現(xiàn)用現(xiàn)配)。將CCK-8 (硫酸化CCK-8，購自美國Sigma公司)5 mg與5 mL 0. 05 mol/L 的氨水充分振蕩混勻，即得1 mg/mL CCK-8溶液，再進行50 μ L/管分裝，冰浴操作，-80°C保 存，有效期半年。使用前用生理鹽水稀釋至1 mg/L濃度，避免反復(fù)凍融。CCK-8預(yù)防給藥可以降低內(nèi)毒素血癥小鼠的死亡率。將健康的雄性昆明小鼠80只，隨機分為四組，每組20只。(1)第一組為對照 組，腹腔注射生理鹽水0. ImL ； (2)第二組為LPS組，腹腔注射LPS 25 mg/kg (其中LPS 濃度為5mg/mL，注射量為0. lmL/20g) ； (3)第三組為CCK-8+LPS組腹腔注射本實施例 的 lmg/L 的 CCK-8 溶液，注射量為 0. 12mL/20g, 10 min 后腹腔注射 LPS 25mg/kg (LPS 5mg/mL,0. lmL/20g) ； (4)第四組為CCK-8組腹腔注射本實施例CCK-8的產(chǎn)品，注射量為 0. 12mL/20go觀察48 h死亡率。結(jié)果顯示
①各組試驗小鼠注射后，未出現(xiàn)注射部位的出血、感染、壞死等現(xiàn)象；
②對照組(第一組)及CCK-8組(第四組)的小鼠經(jīng)注射后，行動、進食及精神狀況末出 現(xiàn)異常，至48 h上述兩組小鼠均存活，死亡率為0 ；③LPS組(第二組)小鼠腹腔注射LPS溶液Ih后出現(xiàn)精神萎靡、毛發(fā)打綹、行動遲緩、停 止進食、腹瀉等癥狀，至48h，第三組小鼠共死亡14只，死亡率為70% ((14/20，P<0. 007 vs 對照組))，存活小鼠在注射LPS 40h后上述癥狀逐漸減輕，至48 h，存活小鼠已恢復(fù)至正常 行動、進食及精神狀態(tài)；
④CCK-8+LPS(第三組)的小鼠在注射后池開始陸續(xù)出現(xiàn)上述精神萎靡、毛發(fā)打綹、行 動遲緩、停止進食、腹瀉等癥狀，但表現(xiàn)較LPS組(第二組)輕，至48 h，CCK-8+LPS組小鼠共 死亡2只，死亡率為10% (2/20,P<0. 007 vs LPS組)，存活的小鼠在注射3 后，上述癥狀 減輕，在注射48h，存活小鼠已恢復(fù)至正常行動、進食及精神狀態(tài)。試驗結(jié)果見表1。
表1昆明小鼠單純注射LPS或LPS + CCK-8后48h的死亡率(n=20)
權(quán)利要求
1.一種八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防內(nèi)毒素血癥的藥物中的應(yīng)用。
2.—種八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防內(nèi)毒素休克的藥物中的應(yīng)用。
3.—種八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防膿毒血癥的藥物中的應(yīng)用。
4.一種八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防多器官功能障礙綜合征的藥物中的應(yīng)用。
5.一種八肽膽囊收縮素在制備治療或預(yù)防全身性炎癥反應(yīng)綜合征的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了八肽膽囊收縮素(CCK-8)在制藥領(lǐng)域中的新用途。CCK-8具有減輕肺臟間質(zhì)水腫及白細胞浸潤，抑制促炎細胞因子生成，改善肺組織結(jié)構(gòu)損傷，改善血流動力學(xué)障礙，延緩平均動脈壓下降和肺動脈壓升高，改善肝、腎微循環(huán)血流，恢復(fù)心率，降低肺動脈高壓，改善潮氣量等作用。用于預(yù)防和治療內(nèi)毒素血癥、內(nèi)毒素休克、膿毒血癥、多器官功能障礙綜合征(MODS)、全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病等炎癥與免疫性疾病。
文檔編號A61P29/00GK102107000SQ20111003878
公開日2011年6月29日 申請日期2011年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月16日
發(fā)明者叢斌, 張冬, 張敬各, 張曉靜 申請人:河北醫(yī)科大學(xué)