專利名稱：芹菜素衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于有機(jī)合成領(lǐng)域，具體涉及芹菜素衍生物、其制備方法和用于治療女性生殖系統(tǒng)癌癥如宮頸癌、卵巢癌等有關(guān)疾病用途。
背景技術(shù)：
女性生殖系統(tǒng)腫瘤，約占全身腫瘤的1/5，尤其子宮與卵巢更易發(fā)生腫瘤。在發(fā)展中國家，宮頸癌屬于常見多發(fā)的婦科腫瘤，排行榜首。卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位，但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，女性生殖系統(tǒng)癌癥嚴(yán)重威脅著婦女的生活質(zhì)量和生命，因此尋找新的、有效的藥物已經(jīng)成為科研工作者研究的熱點(diǎn)。黃酮類化合物是一類多酚化合物，廣泛存在于顯花植物特別是食用植物中。在亞洲，數(shù)千年來用于預(yù)防和治療疾病用的藥用植物和香料中多含有黃酮類化合物或其衍生物。經(jīng)過篩選發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物許多抗腫瘤效應(yīng)。其中抗腫瘤活性較好的芹菜素是一種分布廣泛的羥基黃酮化合物，大量存在于水果、蔬菜、豆類及茶葉中，在芹菜中含量最高。研究表明芹菜素可通過抗腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、干擾細(xì)胞信號通路、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移以及抗氧化等方面發(fā)揮抗癌的作用。芹菜素資源儲蓄量大，分布較廣，用來研究開發(fā)抗腫瘤藥物具有廣泛的應(yīng)用前景。因此，有必要對其進(jìn)行更好地開發(fā)利用。Konnoshima等通過對多個(gè)黃酮類化合物的篩選(包括芹菜素)發(fā)現(xiàn)，C2-C3雙鍵能抑制癌細(xì)胞活化，7位羥基能加強(qiáng)抑制作用，4位羰基是必要的，但甙化則會導(dǎo)致活性降低。Yasukawa等用抑制TPA誘導(dǎo)小鼠耳部腫瘤試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷目勾侔┳饔眠M(jìn)行篩選，其中5， 7-二羥基_3，4’ - 二甲氧基黃酮的抗促癌活性最強(qiáng)，其中，C2-C3雙鍵是抗促癌作用的必要條件。從以上生物活性與結(jié)構(gòu)關(guān)系中分析，芹菜素的5，7，4’位羥基、C2-C3雙鍵及4-位羰基是活性部位，如果對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，應(yīng)在其它位置連接別的化學(xué)基團(tuán)，以期得到活性更好的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一類芹菜素衍生物，其結(jié)構(gòu)通式見圖1，其中R為H、鹵素、氰基、烷基、烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷氧基、硫醚基、烷羰基、羧基、烷氧基羰基、羰基氨基、被取代的羰基氨基、磺酰基氨基、氨基羰基、被取代的氨基羰基或被取代的氨基磺酰基。其中R優(yōu)選雜芳基或硫醚基中的氮雜環(huán)芳香基或三硫醚基。本發(fā)明的另一目的是提供芹菜素黃酮類衍生物的制備方法(如圖幻，具體步驟如下(1)?；磻?yīng)將芹菜素加入合適的有機(jī)溶劑中溶解，加入適量的?；噭⒋呋瘎┰跍囟葹?0 100°C，反應(yīng)時(shí)間為0. 5 6小時(shí)的條件進(jìn)行。其中?；噭┌ㄋ狒?乙酸酐、甲酸酐、碳酸酐等)、酰氯(乙酰氯、苯甲酰氯、肉桂酰氯等)、羧酸酯(C1CH2C00C2H5、 CH3C0CH2C00C2H5等)；有機(jī)溶劑為無水有劑溶劑(吡啶、四氫呋喃、氯仿、二氯甲烷、二氧六環(huán)等)；催化劑為三乙胺、吡啶、4-(N，N-二甲胺基)吡啶等。(2)烷氧化反應(yīng)將乙?；那鄄怂厝芙獾綗o水有機(jī)溶劑中，加入被取代的丙烯基，在溫度為10 100°C，反應(yīng)時(shí)間為0. 5 6小時(shí)的條件進(jìn)行，其中被取代的丙烯基為 RCHXCH = CH2(R為H、鹵素、氰基、烷基、烯基、炔基、芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、雜芳基、烷氧基、硫醚基、烷羰基、羧基、烷氧基羰基、羰基氨基、被取代的羰基氨基、磺酰基氨基、氨基羰基、被取代的氨基羰基或被取代的氨基磺?；Ｆ渲蠷優(yōu)選雜芳基或硫醚基中的氮雜環(huán)芳香基或三硫醚基；X為Cl、Br、I等鹵素)(3) Claisen重排將烷氧化后的芹菜素衍生物加熱，發(fā)生Claisen重排，將取代的丙烯基重拍到6位碳上。反應(yīng)溫度為0 100°C。(4)去?；Ｗo(hù)在堿性條件下，將步驟(3)中得到的化合物水解，去掉酰基化的保護(hù)，即得到目標(biāo)化合物。根據(jù)本發(fā)明所述組合物，其含有至少一種式1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑包括填充劑、粘合劑、防腐劑、矯味劑、稀釋劑、著色劑等，本發(fā)明藥物組合物可以按照藥劑領(lǐng)域已知的制備方法制備。根據(jù)本發(fā)明藥物的性質(zhì)及使用形式，藥物的劑型視情況而定，可根據(jù)需要按照藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制成適合口服、直腸給藥、肌肉注射、滴注液等劑型。如片劑、膠囊、膏劑、貼劑、懸浮液，注射液或滴液。本發(fā)明所得的化合物從初步的抗癌實(shí)驗(yàn)觀察，有比較好的效果，可用于治療女性生殖系統(tǒng)癌癥如宮頸癌、卵巢癌等有關(guān)疾病。


圖1是本發(fā)明芹菜素衍生物的結(jié)構(gòu)通式圖2是本發(fā)明芹菜素衍生物的反應(yīng)流程圖3是本發(fā)明的化合物1合成的反應(yīng)流程圖4是本發(fā)明的化合物2合成的反應(yīng)流程
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)描述，但不意味著對本發(fā)明的任何限制。實(shí)施例一在200ml的燒瓶中加入0. 405g的芹菜素，用60ml的無水吡啶溶解，加入0. 254ml 的乙酸酐試劑，室溫下攪拌2小時(shí)后，用乙酸乙酯萃取3次、濃縮后用硅膠柱層析分離，得到?；a(chǎn)物。將乙?；那鄄怂?.03g溶解到無水DMF中，加入適量的被取代的丙烯基 R1CHClCH = CH2 (R1為吡啶)，在室溫下，攪拌3小時(shí)，用乙酸乙酯萃取3次，濃縮后用硅膠柱層析分離，得到烷氧化產(chǎn)物。烷氧化產(chǎn)物200°C下發(fā)生Claisen重排，在5%的NaOH乙醇溶液中發(fā)生水解，除掉7，4’位?；Ｗo(hù)，經(jīng)過硅膠柱層析得到最終產(chǎn)物化合物1，反應(yīng)流程如圖3。1H-WR(CDCl3) δ :6. 40 (1H, d, J = 2. IHz, H-8) ；6. 68 (1H, s, H-3) ；7. 80 (2H, dd, J = 8. 5,2. 0Hz, H-2，，6，) ；7. 12 (2H, dd, J = 8. 5,2. 1Hz, H_3，，5，) ；12. 15 (1H, s, C5-OH)；10. 72 (1H, s, C7-OH) ；2. 21(2H, d, J = 3. 2,H-1") ；4· 53 (1H，m，H_2”)；4. 86 (1H，d，H_3，，)； 7. 32 (2H, d, J = 6. 0，H_3”，5”)；8. 52 (2H, d, J = 6. 0，H_4”，6”)。實(shí)施例二在200ml的燒瓶中加入0. 398g的芹菜素，用60ml的無水吡啶溶解，加入0. 254ml 的乙酸酐試劑，室溫下攪拌2小時(shí)后，用乙酸乙酯萃取3次、濃縮后用硅膠柱層析分離，得到?；a(chǎn)物。將乙酰化的芹菜素0. 034g溶解到無水DMF中，加入適量的被取代的丙烯基 R1CHClCH = CH2 (R1為大蒜新素)，在室溫下，攪拌3小時(shí)，用乙酸乙酯萃取3次，濃縮后用硅膠柱層析分離，得到烷氧化產(chǎn)物。烷氧化產(chǎn)物200°C下發(fā)生Claisen重排，在5%的NaOH乙醇溶液中發(fā)生水解，除掉7，4’位酰基保護(hù)，經(jīng)過硅膠柱層析得到最終產(chǎn)物化合物2，反應(yīng)流程如圖4。1H-WR(CDCl3) δ :6. 38 (1H, d, J = 2. IHz, H-8) ；6. 65 (1H, s, H-3) ；7. 75 (2H, dd, J = 8. 4,2. 0Hz, H-2，，6，) ；7. 07 (2H, dd, J = 8. 4,2. 1Hz, H_3，，5，) ；12. 02 (1H, s, C5-OH)； 10. 62 (1H, s, C7-OH) ；2. 14 (2H, d, J = 3. 4, H-1") ；4. 45 (1H，m，H-2”)；4. 76 (1H，d，H-3，，)； 2. 14 (1H，m, H-4”)；4. 31 (1H, m, H—5”)；2. 35 (2H, d, H—6”)；2. 14 (2H, d, J = 3. 4，H—7”)； 4. 43 (1H, m, H—8”)；3. 85 (2H, d, H—9”)。實(shí)施例三化合物1和化合物2的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)1、對宮頸癌Hela細(xì)胞的凋亡實(shí)驗(yàn)(1)材料化合物1和化合物2由沈陽億靈醫(yī)藥科技有限公司自制；人宮頸癌Hela 細(xì)胞株購于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院。(2)方法細(xì)胞培養(yǎng)人宮頸癌Hela細(xì)胞用含10 %小牛血清的DMEM培養(yǎng)液，于 37°C,5% CO2飽和濕度條件下靜置培養(yǎng)。選擇對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行分組實(shí)驗(yàn)。MTT法檢測化合物1和2對細(xì)胞增殖的影響細(xì)胞以5X 104/ml的密度接種于96 孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)4 后，每孔加入不同濃度的芹菜素、化合物1和2各100 μ 1，濃度分別為l、5、10、20g/ml，對照組加入含10% FBS的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)12、對、4他后，分別向每孔加入20 μ 1 MTT (5mg/ml)溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO 100 μ 1，振蕩5min， 酶標(biāo)儀檢測。每時(shí)間濃度組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。所得OD值根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞抑制率。細(xì)胞抑制率(％) = (1-0D實(shí)驗(yàn)組/OD正常組)X 100%，以空白組OD值調(diào)零。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT結(jié)果顯示1 10 μ g/ml芹菜素、化合物1和2均能抑制Hela 細(xì)胞的增殖，呈時(shí)間-劑量依賴性關(guān)系；20 μ g/ml芹菜素、化合物1和2細(xì)胞毒性作用明顯， 作用Mh，芹菜素細(xì)胞抑制率為82. 71 %，化合物1和2作用Mh以后細(xì)胞幾乎全部死亡，見表1。表1對Hela細(xì)胞增殖的抑制作用
權(quán)利要求
1.-類具有抗腫瘤活性的芹菜素衍生物，其特征在于該類衍生物由下列結(jié)構(gòu)式表示
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芹菜素衍生物，其特征在于所述的R為H、鹵素、雜芳基或烷硫基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的芹菜素衍生物，其特征在于所述的R為雜芳基或硫醚基，優(yōu)選氮雜環(huán)芳香基或三硫醚基。
4.權(quán)利要求1-3所述的芹菜素衍生物的制備方法，其特征在于首先對芹菜素的7，4’ 羥基進(jìn)行?；Ｗo(hù)，通過烷氧化在5位羥基上連接被取代的丙乙烯基，再通過Claisen重排，將取代的丙烯基重排到6位碳上，在堿性條件下脫去7，4’的?；Ｗo(hù)，即得到目標(biāo)化合物。
5.藥物組合物，其含有至少一種如權(quán)利要求1所述的式1化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物，其為片劑、膠囊、膏劑、貼劑、懸浮液，注射液或滴液
7.權(quán)利要求6所述的組合物可用于治療女性生殖系統(tǒng)癌癥如宮頸癌、卵巢癌等有關(guān)疾病。
全文摘要
本發(fā)明提供一類具有如下結(jié)構(gòu)的芹菜素衍生物(結(jié)構(gòu)式1)、它們的制備方法及用途。這些化合物對Hela細(xì)胞、CAOV3細(xì)胞等具有良好的抑制活性，可用于治療女性生殖系統(tǒng)癌癥如宮頸癌、卵巢癌等有關(guān)疾病。
文檔編號A61K31/4433GK102161655SQ20111004504
公開日2011年8月24日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者關(guān)屹, 閆冬 申請人:關(guān)屹, 遼寧億靈科創(chuàng)生物醫(yī)藥科技有限公司