專利名稱：一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于黃酮類化合物的制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蕎麥黃酮的制備方法。
背景技術(shù)：
黃酮類化合物是以2-苯基色原酮為基本母核的一類化合物，廣泛存在于植物中， 黃酮類化合物具有心血管系統(tǒng)活性、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化自由基、抗炎、鎮(zhèn)痛、保肝降壓、消炎、清熱解毒等多種生物活性，特別是具有抗自由基及抗癌、防癌的作用，所以黃酮類化合物在醫(yī)藥、食品、保健品等領(lǐng)域的應(yīng)用具有廣闊的前景。因此，研究黃酮類化合物的提取、分離純化制備技術(shù)具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和實(shí)用價(jià)值?，F(xiàn)有制備黃酮類化合物的方法，例如《農(nóng)產(chǎn)品加工》2009年第5期中的“蕎麥粉中黃酮類化合物提取工藝的研究”一文中，公開的方法是采用乙醇浸提法提取蕎麥粉中的黃酮類化合物，其最佳工藝為以蕎麥粉為原料，用乙醇體積濃度75%的乙醇溶液為提取劑， 按料液比為1 30，在溫度80°C下提取9h，浸提蕎麥粉中的黃酮類化合物。該方法的主要缺點(diǎn)是①未分離氨基酸、多糖、蛋白質(zhì)等大小分子雜質(zhì)，導(dǎo)致產(chǎn)品中黃酮含量低，顏色深， 重新溶解時(shí)出現(xiàn)大量沉淀，產(chǎn)品質(zhì)量差；②未對(duì)該制備過程中產(chǎn)生的廢液等進(jìn)行回收再利用或無害化處理，污染環(huán)境；③原料利用率低，經(jīng)濟(jì)效益差。又如《離子交換與吸附》2008年第M期中的“大孔吸附樹脂分離純化香椿葉總黃酮的研究”一文中，公開的方法是以香椿葉粉末為原料，以50 80%的乙醇為提取劑，先在70°C下提取2次，再用經(jīng)預(yù)處理的X-5 大孔吸附樹脂對(duì)提取液進(jìn)行吸附分離純化制得總黃酮。該方法的主要缺點(diǎn)是①大孔樹脂以極性相似原理進(jìn)行吸附分離，選擇性不高，不能有效區(qū)分結(jié)構(gòu)與黃酮差異大，但極性相近的雜質(zhì)；②生產(chǎn)過程中的分離效率低，制得的產(chǎn)品純度低，需要用液相色譜或硅膠柱等進(jìn)一步純化；③未對(duì)分離黃酮后的過柱液進(jìn)行無害化處理，污染環(huán)境。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有制備黃酮類化合物方法的不足，提供一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，具有工藝簡(jiǎn)單，節(jié)約能源，無有害廢物排放，資源綜合利用率高，產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)。本發(fā)明的原理是在堿性條件下，1,6-己二醇二縮水甘油醚可交聯(lián)殼聚糖微球及槲皮素的游離羥基反應(yīng)，生成以醚鍵相連的反應(yīng)性高分子，該反應(yīng)性高分子以含有大量微孔結(jié)構(gòu)的交聯(lián)殼聚糖微球?yàn)檩d體、以接枝的槲皮素為吸附官能團(tuán)，利用槲皮素具有黃酮化合物基本母核、可與具有相同或相似結(jié)構(gòu)的吸附質(zhì)形成基于大JI-JI鍵疏水結(jié)合的特性， 實(shí)現(xiàn)對(duì)黃酮化合物的選擇性分離，再用洗脫劑洗脫吸附于該樹脂上的黃酮化合物，接著經(jīng)過濃縮、干燥等處理，即可獲得高純度的黃酮化合物。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法先以蕎麥粉為原料制備出蕎麥黃酮提取液，再以殼聚糖為原料制備出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂，然后用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂進(jìn)行吸附，最后經(jīng)洗脫、真空濃縮及凍干而得到蕎麥黃酮產(chǎn)品。其具體的方法步驟如下(1)制備蕎麥黃酮提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質(zhì)量(g)乙醇體積濃度為40 60%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 30 40的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2 4小時(shí)，然后再放置于離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為6000 10000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離10 20 分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀。對(duì)于收集的離心清液，即為制備蕎麥黃酮提取液，用于吸附分離蕎麥黃酮；對(duì)于收集的離心沉淀，送入閃蒸器中進(jìn)行干燥，用于制備蕎麥淀粉。(2)制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂①制備交聯(lián)殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為1 25 50的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中，形成殼聚糖溶液。再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進(jìn)行分散，制備出液體石蠟分散的殼聚糖溶液。 然后按殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 10 30 的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)20 30分鐘，就制備出交聯(lián)反應(yīng)殼聚糖溶液。②制備交聯(lián)殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯(lián)反應(yīng)殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0. 5 1的比例，在交聯(lián)殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末，攪拌混合均勻。然后再用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系PH為9 10，再加熱升溫至60 70°C，并在60 70°C恒溫下反應(yīng)2. 5 3. 5小時(shí)后，將反應(yīng)溶液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第一次抽濾，分別收集第一次抽濾渣和抽濾液。對(duì)于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50 60°C熱蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌2 4次，除去殘留的液體石蠟，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣。對(duì)于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為2000 4000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液。對(duì)于收集的上層液體石蠟，可再次用于分散殼聚糖溶液；對(duì)于收集的下層清液，經(jīng)生化處理達(dá)標(biāo)后排放；對(duì)于收集的洗滌后的濾渣，先加入3 6倍體積的體積濃度為2 5 %的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液。然后將該混合液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣。將收集的脫碳酸鈣濾過液泵人蒸發(fā)器中，在80 100°C下，進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，回收氯化鈣濃縮液，可再利用；對(duì)于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5 7. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣(即為制備出的交聯(lián)殼聚糖微球)。對(duì)于洗滌液經(jīng)生化處理達(dá)標(biāo)后排放。③制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1， 6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5 15的比例，先將第 (2)-②步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0. 15 0. 25%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進(jìn)行分散后，再用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH為9. 5 11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應(yīng)2 4小時(shí)。反應(yīng)完成后通過抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，分別收集濾渣和濾液。對(duì)于收集的濾液，即為未反應(yīng)的槲皮素和1，6己二醇-二縮水甘油醚，可再用于制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖吸附樹脂；對(duì)于收集的濾渣，先用3 5倍體積的蒸餾水洗滌，除去未參與接枝反應(yīng)的槲皮素，然后再在60 80°C 下進(jìn)行干燥直至恒重，就制備出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂。(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行反沖，排出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱中的氣泡后，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進(jìn)行吸附， 直至過柱流出液中出現(xiàn)蕎麥黃酮時(shí)為止，收集過柱流出液(即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液)。吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行洗滌，洗滌夾雜于樹脂間的雜質(zhì)，分別收集洗滌流出液和出吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱。對(duì)于收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇，再進(jìn)行好氧處理，達(dá)標(biāo)后排放。(4)洗脫蕎麥黃酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱中，泵入乙醇體積濃度為85 95%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫吸附于接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱上的蕎麥黃酮，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時(shí)為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的3 5倍/小時(shí)。分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂。對(duì)于洗脫流出液，用于制備蕎麥黃酮凍干粉；對(duì)于洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂，用蒸餾水洗滌后可再次用于吸附蕎麥黃酮。(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第(4)步完成后，將第(4)步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6 -0. 9Mpa、溫度為75 90°C下，進(jìn)行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稌r(shí)為止， 收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發(fā)液(即回收的乙醇)。對(duì)于回收的乙醇，調(diào)節(jié)其濃度后可再次用于提取蕎麥黃酮或洗脫蕎麥黃酮；對(duì)于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預(yù)凍 5 6小時(shí)，然后再置于冷凍干燥機(jī)中，在溫度為-50 _60°C、真空度為25 501 的條件下，干燥M 30小時(shí)，就制備出純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，主要有以下效果(1)本發(fā)明基于大π鍵間的疏水作用，直接從蕎麥黃酮粗提取物溶液中選擇性吸附黃酮，省去使用硅膠柱或液相色譜的純化工序，工藝簡(jiǎn)單并且高效，獲得純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。(2)本發(fā)明使用常規(guī)的生產(chǎn)設(shè)備在溫和的條件下進(jìn)行生產(chǎn)，操作簡(jiǎn)便且易于控制， 因此生產(chǎn)成本低、能源消耗少。(3)本發(fā)明制備的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖吸附樹脂可重復(fù)使用，再生效果好；對(duì)提取、洗脫蕎麥黃酮的乙醇進(jìn)行了回收及回用，對(duì)卸載蕎麥黃酮的過柱流出液，進(jìn)行了凈化處理，降低了生產(chǎn)成本且無“三廢”排放，是一種綠色環(huán)保的分離方法。本發(fā)明方法制備的產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、化妝品等行業(yè)中。在醫(yī)藥行業(yè)中，作為合成抗生素、抗腫瘤、降壓藥等的原料，或作為抗氧化、抗菌等功能性添加劑等。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體方式，進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例1一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，具體步驟如下(1)制備蕎麥黃酮粗提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質(zhì)量(g)乙醇體積濃度為40%的乙醇溶液體積 (mL)的比為1 30的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2小時(shí)，然后再放置于離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離10分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀。對(duì)于收集的離心清液，即為制備蕎麥黃酮提取液，用于吸附分離蕎麥黃酮；對(duì)于收集的離心沉淀，送入閃蒸器中進(jìn)行干燥，用于制備蕎麥淀粉。(2)制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂①制備交聯(lián)殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為1 25的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中，形成殼聚糖溶液。再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進(jìn)行分散，制備出液體石蠟分散的殼聚糖溶液。然后按殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 10的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)20分鐘，就制備出交聯(lián)反應(yīng)殼聚糖溶液。②制備交聯(lián)殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯(lián)反應(yīng)殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0.5的比例，在交聯(lián)殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末，攪拌混合均勻。然后再用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系PH為9，再加熱升溫至60°C，并在60°C恒溫下反應(yīng)2. 5小時(shí)后，將反應(yīng)溶液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第一次抽濾，分別收集第一次抽濾渣和抽濾液。對(duì)于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50°C熱蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌2 次，除去殘留的液體石蠟，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣。對(duì)于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液。對(duì)于收集的上層液體石蠟，可再次用于分散殼聚糖溶液；對(duì)于收集的下層清液，經(jīng)生化處理達(dá)標(biāo)后排放；對(duì)于收集的洗滌后的濾渣，先加入3倍體積的體積濃度為2%的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液。然后將該混合液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣。將收集的脫碳酸鈣濾過液泵人蒸發(fā)器中，在80°C下，進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，回收氯化鈣濃縮液，可再利用； 對(duì)于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣(即為制備出的交聯(lián)殼聚糖微球)。對(duì)于洗滌液經(jīng)生化處理達(dá)標(biāo)后排放。③制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1， 6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5的比例，先將第⑵ 步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0. 15%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進(jìn)行分散后，再用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)其PH為9. 5，攪拌吸附50分鐘后升溫至70°C，然后加入 1,6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應(yīng)2小時(shí)。反應(yīng)完成后通過抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，分別收集濾渣和濾液。對(duì)于收集的濾液，即為未反應(yīng)的槲皮素和1，6己二醇-二縮水甘油醚，可再用于制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖吸附樹脂；對(duì)于收集的濾渣，先用3倍體積的蒸餾水洗滌，除去未參與接枝反應(yīng)的槲皮素，然后再在60°C下進(jìn)行干燥直至恒重，就制備出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂。(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行反沖，排出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱中的氣泡后，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進(jìn)行吸附， 直至過柱流出液中出現(xiàn)蕎麥黃酮時(shí)為止，收集過柱流出液(即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液)。吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行洗滌，洗滌夾雜于樹脂間的雜質(zhì)，分別收集洗滌流出液和吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱。對(duì)于收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇， 再進(jìn)行好氧處理，達(dá)標(biāo)后排放。(4)洗脫蕎麥黃酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱中，泵入乙醇體積濃度為85%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，洗脫吸附于接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱上的蕎麥黃酮，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時(shí)為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的3倍/小時(shí)。分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂。對(duì)于洗脫流出液，用于制備蕎麥黃酮凍干粉；對(duì)于洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂，用蒸餾水洗滌后可再次用于吸附蕎麥黃酮。(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第(4)步完成后，將第(4)步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6Mpa、溫度為75°C下，進(jìn)行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稌r(shí)為止，收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發(fā)液(即回收的乙醇)。對(duì)于回收的乙醇，調(diào)節(jié)其濃度后可再次用于提取蕎麥黃酮或洗脫蕎麥黃酮；對(duì)于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預(yù)凍5小時(shí)，然后再置于冷凍干燥機(jī)中，在溫度為-50°C、真空度為25 的條件下，干燥M小時(shí)，就制備出純度為85%的蕎麥黃酮凍干粉。實(shí)施例2—種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，同實(shí)施例1，其中第(1)步中，蕎麥粉的質(zhì)量(g)乙醇體積濃度為50%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 35，攪拌溶解3小時(shí)，離心機(jī)中在轉(zhuǎn)速為8000轉(zhuǎn)/分下，離心15分鐘。第O)-①步中，殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為 1 35。殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 20，交聯(lián)反應(yīng)25分鐘。第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0. 8。調(diào)節(jié)體系pH為9. 5， 升溫至65°C，并在65°C恒溫下反應(yīng)3小時(shí)。用溫度為55°C熱蒸餾水洗滌3次。在洗滌后的濾渣中加入5倍體積的體積濃度為3. 5%的鹽酸溶液。蒸發(fā)器的溫度為90°C ；用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7為止。第O)-③步中，交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 10，加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0.20%的槲皮素蒸餾水溶液中，調(diào)節(jié)其PH為10，攪拌吸附55分鐘后升溫至80°C，恒溫反應(yīng)3小時(shí)。用4倍體積的蒸餾水洗滌，在70°C下進(jìn)行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為90%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的4倍/小時(shí)。第(5)步中，真空濃縮機(jī)的真空度為-0. 7Mpa、溫度為80°C。預(yù)凍5. 5小時(shí)，冷凍干燥機(jī)的溫度為45°C、真空度為40 ，干燥27小時(shí)。實(shí)施例3一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，同實(shí)施例1，其中第(1)步中，蕎麥粉的質(zhì)量(g)乙醇體積濃度為60%的乙醇溶液體積(mL)的比為1 40，攪拌溶解4小時(shí)，離心機(jī)中在轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分下，離心20分鐘。第O)-①步中，殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為的鹽酸溶液的體積(mL)比為 1 50。殼聚糖的質(zhì)量(g)體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積(mL)比為1 30，交聯(lián)反應(yīng)30分鐘。第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 1。調(diào)節(jié)體系PH為10，升溫至701，并在701恒溫下反應(yīng)3.5小時(shí)。用溫度為60°C熱蒸餾水洗滌4次。在洗滌后的濾渣中加入6倍體積的體積濃度為5%的鹽酸溶液。蒸發(fā)器的溫度為100°C;用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7. 5為止。第O)-③步中，交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 15，加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0.25%的槲皮素蒸餾水溶液中，調(diào)節(jié)其PH為11.5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至95°C，恒溫反應(yīng)4小時(shí)。用5倍體積的蒸餾水洗滌，在80°C下進(jìn)行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為95%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的5倍/小時(shí)。第(5)步中，真空濃縮機(jī)的真空度為-0. 9Mpa、溫度為90°C。預(yù)凍6小時(shí)，冷凍干燥機(jī)的溫度為-60°C、真空度為50 ，干燥30小時(shí)。
權(quán)利要求
1. 一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于具體方法步驟如下(1)制備蕎麥黃酮提取液以蕎麥粉為原料，按蕎麥粉的質(zhì)量乙醇體積濃度為40 60%的乙醇溶液體積的比為Ig 30 40mL的比例，先在蕎麥粉中加入乙醇溶液，在常溫下攪拌溶解2 4小時(shí)，然后再放置于離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為6000 10000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離10 20分鐘，分別收集離心清液和離心沉淀，將收集的離心沉淀選入閃蒸器中進(jìn)行干燥；(2)制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂①制備交聯(lián)殼聚糖溶液第(1)步完成后，以殼聚糖為原料，按殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 25 50mL的比例，先將殼聚糖溶解于鹽酸溶液中；再在攪拌條件下加入等體積的液體石蠟進(jìn)行分散；然后按殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 10 30mL的比例，在液體石蠟分散的殼聚糖溶液中加入戊二醛溶液，進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)20 30分鐘；②制備交聯(lián)殼聚糖微球第O)-①步完成后，將第O)-①步制備出的交聯(lián)反應(yīng)殼聚糖溶液，先按致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0.5 1的比例，在交聯(lián)殼聚糖溶液中加入致孔劑碳酸鈣粉末， 攪拌混合均勻；然后再用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH為9 10，再加熱升溫至60 70°C， 并在60 70°C恒溫下反應(yīng)2. 5 3. 5小時(shí)后，將反應(yīng)溶液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第一次抽濾， 分別收集第一次抽濾渣和抽濾液；對(duì)于收集的第一次抽濾渣，先用等體積的溫度為50 60°C熱蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌2 4次，分別收集洗滌液和洗滌后的濾渣，對(duì)于收集的洗滌液，先與收集的第一次抽濾液合并后，再泵人離心機(jī)中，在轉(zhuǎn)速為2000 4000轉(zhuǎn)/分下，進(jìn)行離心分離，分別收集上層液體石蠟和下層清液；對(duì)收集的下層清液，經(jīng)生化處理達(dá)標(biāo)后排放；對(duì)于收集的洗滌后的濾渣，先加入3 6倍體積的體積濃度為2 5%的鹽酸溶液，在攪拌下溶解洗滌后濾渣中的碳酸鈣而形成混合液；然后將該混合液泵人抽濾機(jī)中，進(jìn)行第二次抽濾，分別收集脫碳酸鈣濾過液和脫碳酸鈣濾渣，將收集的脫碳酸鈣濾過液泵入蒸發(fā)器中，在80 100°C下，進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，回收氯化鈣濃縮液；對(duì)于收集的脫碳酸鈣濾渣，先用蒸餾水反復(fù)進(jìn)行洗滌至洗滌液的PH值為6. 5 7. 5為止，分別收集洗滌液和洗滌后的碳酸鈣濾渣，即為制備出的交聯(lián)殼聚糖微球；對(duì)于洗滌液，經(jīng)生化處理，達(dá)標(biāo)后排放；③制備接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5 15的比例，先將第O)-② 步制備出的交聯(lián)殼聚糖微球加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0. 15 0. 25%的槲皮素蒸餾水溶液中，攪拌進(jìn)行分散后，再用稀氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH為9. 5 11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二縮水甘油醚，恒溫反應(yīng)2 4小時(shí)；反應(yīng)完成后通過抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾，分別收集濾渣和濾液，對(duì)于收集的濾渣，先用3 5倍體積的蒸餾水洗滌，然后再在60 80°C下進(jìn)行干燥直至恒重；(3)吸附蕎麥黃酮第O)-③步完成后，將第O)-③步制備出的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂裝入中壓層析柱中，先用與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行反沖，再泵入第(1)步制備出的蕎麥黃酮提取液進(jìn)行吸附，直至過柱流出液中出現(xiàn)蕎麥黃酮時(shí)為止，收集過柱流出液，即為卸載蕎麥黃酮的過柱流出液，吸附完成后，再次泵入與接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱等體積的蒸餾水進(jìn)行洗滌，分別收集洗滌流出液和吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱，對(duì)收集的洗滌流出液與卸載蕎麥黃酮的過柱流出液合并后，先減壓蒸餾回收乙醇，再進(jìn)行好氧處理，達(dá)標(biāo)后排放；(4)洗脫蕎麥黃酮第(3)步完成后，在第C3)步收集的吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱中， 泵入乙醇體積濃度為85 95%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，直至洗脫流出液中無蕎麥黃酮時(shí)為止，乙醇洗脫液的流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的3 5倍/ 小時(shí)；分別收集洗脫流出液和洗脫蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂；(5)制備蕎麥黃酮凍干粉第⑷步完成后，將第⑷步收集的洗脫流出液，泵入真空濃縮裝置中，在真空度為-0. 6 -0. 9Mpa、溫度為75 90°C下，進(jìn)行真空濃縮，直至濃縮液中無乙醇?xì)馕稌r(shí)為止， 收集蕎麥黃酮濃縮液和蒸發(fā)液；對(duì)于收集的蕎麥黃酮濃縮液，先在_18°C的冰箱中預(yù)凍5 6小時(shí)，然后再置于冷凍干燥機(jī)中，在溫度為-50 _60°C、真空度為25 50 的條件下， 干燥M 30小時(shí)，就制備出純度為85 95%的蕎麥黃酮凍干粉。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質(zhì)量乙醇體積濃度為40%的乙醇溶液體積的比為Ig 30mL, 攪拌溶解2小時(shí)，離心機(jī)中在轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分下，離心10分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 25mL，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 10mL，交聯(lián)反應(yīng)20分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0.5，調(diào)節(jié)體系pH為9，升溫至 60°C，并在60°C恒溫下反應(yīng)2. 5小時(shí)，用溫度為50°C熱蒸餾水洗滌2次，在洗滌后的濾渣中加入3倍體積的體積濃度為2%的鹽酸溶液，蒸發(fā)器的溫度為80°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的 PH值為6. 5為止；第O)-③步中，交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 5，加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0.15%的槲皮素蒸餾水溶液，調(diào)節(jié)其pH為9. 5，攪拌吸附50分鐘后升溫至70°C，恒溫反應(yīng)2小時(shí)，用3倍體積的蒸餾水洗滌，在60°C下進(jìn)行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為85%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的3倍/小時(shí)；第(5)步中，真空濃縮機(jī)的真空度為-0. 6Mpa、溫度為75°C，預(yù)凍5小時(shí)，冷凍干燥機(jī)的溫度為_50°C、真空度為25Pa，干燥M小時(shí)。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質(zhì)量乙醇體積濃度為50%的乙醇溶液體積的比為Ig 35mL, 攪拌溶解3小時(shí)，離心機(jī)中在轉(zhuǎn)速為8000轉(zhuǎn)/分下，離心15分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 35mL，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 20mL，交聯(lián)反應(yīng)25分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 0.8，調(diào)節(jié)體系pH為9. 5，升溫至65°C，并在65°C恒溫下反應(yīng)3小時(shí)，用溫度為55°C熱蒸餾水洗滌3次，在洗滌后的濾渣中加入5倍體積的體積濃度為3. 5%的鹽酸溶液，蒸發(fā)器的溫度為90°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7為止；第O)-③步中，交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 10的比例，加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0.20%的槲皮素蒸餾水溶液，調(diào)節(jié)其PH為10，攪拌吸附55分鐘后升溫至80°C，恒溫反應(yīng)3小時(shí)，用4倍體積的蒸餾水洗滌，在70°C下進(jìn)行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為90%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的4倍/小時(shí)；第(5)步中，真空濃縮機(jī)的真空度為-0. 7Mpa、溫度為80°C;預(yù)凍5. 5小時(shí)，冷凍干燥機(jī)的溫度為45°C、真空度為401 ，干燥27小時(shí)。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，其特征在于第(1)步中，蕎麥粉的質(zhì)量乙醇體積濃度為60%的乙醇溶液體積的比為Ig 40mL, 攪拌溶解4小時(shí)，離心機(jī)中在轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分下，離心20分鐘；第O)-①步中，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為的鹽酸溶液的體積比為Ig 50mL，殼聚糖的質(zhì)量體積濃度為2. 5%的戊二醛溶液的體積比為Ig 30mL，交聯(lián)反應(yīng)30分鐘；第O)-②步中，致孔劑碳酸鈣殼聚糖的質(zhì)量比為1 1，調(diào)節(jié)體系PH為10，升溫至 700C，并在70°C恒溫下反應(yīng)3. 5小時(shí)，用溫度為60°C熱蒸餾水洗滌4次，在洗滌后的濾渣中加入6倍體積的體積濃度為5%的鹽酸溶液，蒸發(fā)器的溫度為100°C，用蒸餾洗滌至洗滌液的PH值為7. 5為止；第O)-③步中，交聯(lián)殼聚糖微球中的游離羥基1，6己二醇-二縮水甘油醚槲皮素游離羥基的摩爾比為1 1 15，加入槲皮素的質(zhì)量濃度為0.25%的槲皮素蒸餾水溶液， 調(diào)節(jié)其PH為11. 5，攪拌吸附50 60分鐘后升溫至95°C，恒溫反應(yīng)4小時(shí)，用5倍體積的蒸餾水洗滌，在80°C下進(jìn)行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇體積濃度為95%的乙醇溶液，流速為吸附蕎麥黃酮的接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂柱體積的5倍/小時(shí)；第(5)步中，真空濃縮機(jī)的真空度為_0.9Mpa、溫度為90°C;預(yù)凍6小時(shí)，冷凍干燥機(jī)的溫度為_60°C、真空度為50Pa，干燥30小時(shí)。
全文摘要
一種用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂分離蕎麥黃酮的方法，屬于黃酮類化合物的制備技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明先以蕎麥粉為原料制備出含蕎麥黃酮提取液，再以殼聚糖為原料制備出接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂，然后用接枝槲皮素交聯(lián)殼聚糖樹脂進(jìn)行吸附，最后經(jīng)洗脫、真空濃縮及凍干而得蕎麥黃酮產(chǎn)品。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單，節(jié)約能源，無有害廢物排放，資源綜合利用率高，產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)。采用本發(fā)明方法制備出的產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、化妝品等行業(yè)中。在醫(yī)藥行業(yè)中，作為合成抗生素、抗腫瘤、降壓藥等的原料，或作為抗氧化、抗菌等功能性添加劑等。
文檔編號(hào)A61K36/70GK102172371SQ201110045489
公開日2011年9月7日 申請(qǐng)日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者周小華, 張 杰, 徐渙渙, 徐溢, 桑魯燕, 王永紅, 王穎麗 申請(qǐng)人:重慶大學(xué)