專利名稱：一種pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種眼用藥物制劑，具體涉及ー種眼用在體凝膠制劑，特別是ー種PH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑，以及所述凝膠制劑的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)眼部給藥方式 常采用滴眼液的形式，但滴眼液存在滯留時間短、生物利用度低等問題，在人體內(nèi)藥物與角膜的接觸時間大約僅有l(wèi)_2min，眼部生物利用度一般少于10%。因此，眼用液體制劑的先天不足，促使人們探索開發(fā)滯留時間長，兼有緩控釋能力的眼部固體給藥系統(tǒng)。環(huán)境敏感凝膠藥物給藥系統(tǒng)是隨著藥用高分子材料科學的迅猛發(fā)展而誕生的新型劑型，提高了患者的順應(yīng)性。環(huán)境敏感凝膠是指以溶液狀態(tài)給藥后立即在用藥部位發(fā)生相轉(zhuǎn)變，形成的非化學交聯(lián)的半固體制劑。其中，PH敏感型眼用凝膠在非生理狀態(tài)下為自由流動的液體，給藥后在眼部PH值下形成凝膠，延長藥物在眼內(nèi)的滯留時間以提高生物利用度。本制劑采用黃芩苷為活性藥物，其是由唇形科植物黃芩的干燥根中提取的ー種黃酮類化合物。研究表明，黃芩苷對臨床眼科常見病原菌，如金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白色葡萄球菌，枯草桿菌等均有很強的抑菌殺菌作用，其對結(jié)膜炎，角膜炎的治療作用已得到肯定(專利公開號CN1943596);另據(jù)報道，采用硒性白內(nèi)障及體外晶狀體氧化損傷模型研究黃芩苷對這兩類晶狀體抗氧化體系的影響，研究結(jié)果顯示，對形成白內(nèi)障的大鼠給予黃芩苷后，其超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶活力(GSH-Px)升高，可溶性蛋白含量上升，丙ニ醛的含量下降，從而表明了黃芩苷可以清除自由基，增強GSH-Px，SOD活力，提高它們的抗氧化能力，因此黃芩苷還具有治療白內(nèi)障的作用[專利公開號CN 1515288，參考文獻I.張永欽，黃芩甙對白內(nèi)障晶狀體作用的研究[J]，眼科研究，1998，16⑶；2.劉新文，黃芩黃酮對硒性白內(nèi)障晶狀體抗氧化酶表達的影響[J]，中國生物化學與分子生物學報，2002，18 (4)]。但是，黃芩苷幾乎不溶于水，脂溶性也差，并且其穩(wěn)定性與pH密切相關(guān)。由于黃芩苷苷元母核在堿性溶液(PH > 7)中迅速開環(huán)形成查兒酮，在2h已降解10%以上。因此在堿性條件下不穩(wěn)定(參考文獻1.于波濤，黃芩苷穩(wěn)定性研究[J]，中草藥，2002，33 (3)，;王雷，黃芩苷在不同溶媒中的穩(wěn)定性研究[J]，中國藥師，2006,9 (2))。目前國內(nèi)上市的黃芩苷眼用產(chǎn)品主要是滴眼液，其pH值一般在7-8。由于滴眼液這ー劑型本身存在的缺點及黃芩苷本身在不同PH值下的理化性質(zhì)，使得滴入眼部的黃芩苷大部分流失，生物利用度較低。因此本發(fā)明選用黃芩苷作為制劑活性成分，將其做成pH敏感型黃岑苷眼用在體凝膠劑(Baicalin-containing in situ pH-triggeredgellingsystem for sustained ophthalmic drug delivery),不但提高了活性成分黃岑苷的穩(wěn)定性，而且有望得到角膜滲透能力強并具有緩釋作用的新型制劑，從而提高黃芩苷的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供ー種pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑及其制備方法和用途。本發(fā)明的眼用凝膠制劑為淡黃色，在體外為液體，滴入眼內(nèi)成為凝膠，凝膠黏度隨外界應(yīng)カ的增加而降低。它以黃芩苷為活性成分，輔以PH敏感材料、增稠劑、等滲調(diào)節(jié)劑、防腐剤、緩沖液等制成眼用凝膠制劑，并精確控制處方的PH值，不僅能實現(xiàn)pH敏感型眼用劑型的正常轉(zhuǎn)換，還保證了黃芩苷的活性和溶解性，很好地解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的黃芩苷滴眼液的問題。具體地，本發(fā)明包括以下幾個方面本發(fā)明的ー個方面涉及ー種pH敏感型眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分組分重量份黃芩苷O. 05-10 ；
pH 敏感材料0.1-3;增稠劑0.1-10;等滲調(diào)節(jié)劑0.1-10;防腐劑0.001-3;PH5-6.2 的緩沖液 80-100。pH敏感材料用于調(diào)節(jié)凝膠基質(zhì)在人體生理條件和非生理條件下，液態(tài)和半固體凝膠態(tài)之間的轉(zhuǎn)變，可增大藥物生物利用度，并提高病人順應(yīng)性。其中所述PH敏感材料包括但不限于丙烯酸聚合物、醋酸纖維素酞酸酯(CAP)和殼聚糖中的至少ー種，在本發(fā)明的一個實施方案中，所述pH敏感材料為丙烯酸聚合物，具體為卡波姆(CarbopoI ),例如為Carbopol 974P NF、Carbopol 98ONF或Carbopol 934P nf。增稠劑用于調(diào)節(jié)凝膠基質(zhì)的粘度，依據(jù)藥物釋放程度和病人順應(yīng)性調(diào)節(jié)用量。所述增稠劑的成份和含量為本領(lǐng)域的常規(guī)選擇，其包括但不限于羥丙基甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素、こ基纖維素、聚維酮和聚こ烯醇中的ー種或數(shù)種，其中HPMC可以為E4M、E10M、F4M或K4M，在本發(fā)明的一個實施方案中，為HPMC E4M、HPMC F4M或HPMC K4M。所述等滲調(diào)節(jié)劑的成份和含量為本領(lǐng)域的常規(guī)選擇，其包括但不限于氯化鈉、葡萄糖、甘露糖醇、山梨醇或丙ニ醇中的ー種或數(shù)種，在本發(fā)明的一個實施方案中，所述等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。所述防腐劑的成份和含量為本領(lǐng)域的常規(guī)選擇，其包括但不限于苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、洗必泰、苯扎氯銨、苯扎溴銨、尼泊金甲、こ、丙酯中的ー種或數(shù)種，在本發(fā)明的一個實施方案中，所述防腐劑為苯扎溴銨。所述緩沖液的成份和含量為本領(lǐng)域的常規(guī)選擇，其包括但不限于pH5-6. 2的磷酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液中的ー種或數(shù)種。在本發(fā)明中，所述磷酸鹽緩沖液可以是PBS緩沖液，或者是由磷酸氫ニ鈉和磷酸ニ氫鈉組成的緩沖液。在本發(fā)明的實施方案中，所述緩沖液為PH5-6. 2的PBS緩沖液。在本發(fā)明的ー個實施方案中，所述緩沖液的PH值為5. 8或6. O。根據(jù)緩沖液在眼用制劑中的作用以及其所占的重量份，可以認為本發(fā)明所述眼用制劑的PH值為5-6. 2。優(yōu)選地，本發(fā)明的眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)0· 05-10份黃芩苷、0.1-3 份CarbopoI 、O.ト ο 份 hpmc e4m、hpmc F4M 或 hpmc κ4μ、ο·ト 10 份氯化鈉、O. 001-3份苯扎溴銨和80-100份PH5-9的磷酸鹽緩沖液。更優(yōu)選地，本發(fā)明的眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)O. 05-1. 5份黃芩苷、O. 2-2份CarbopoI 、0· 3-3份HPMC E4M、HPMC F4M或HPMC Κ4Μ、0· 9-1份氯化鈉、O. 001-0. I份苯扎溴銨和90-100份ρΗ5· 8-6. O的磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明的一個實施方案中，其由下列組分(按重量份計)組成O. I份黃芩苷、O. 3份CarbopoI 、O. 6份HPMC Ε4Μ、0· 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份ρΗ5· 8的磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，其由下列組分(按重量份計)組成O. I份黃芩苷、O. 3份CarbopoI 、O. 6份HPMC F4M、0· 9份氯化鈉、O. OOl份苯扎溴銨和94份ρΗ5· 8的磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，其由下列組分(按重量份計)組成O. I份黃芩 苷、O. 3份Carbopol 、0.6份hpmc Κ4Μ、ο· 9份氯化鈉、O. OOl份苯扎溴銨和94份ρΗ5· 8
的磷酸鹽緩沖液。本發(fā)明的另一方面涉及所述的眼用在體凝膠制劑的制備方法，其包括以下步驟(I)制備基質(zhì)按照上述各重量份，取pH敏感材料和增稠劑，在不斷攪拌下加入適量緩沖液中，攪拌均勻，即得基質(zhì)；(2)制備藥物溶液按照上述各重量份，取黃芩苷、等滲調(diào)節(jié)劑和防腐剤，逐漸加入緩沖液中，混合均勻，即得藥物溶液；(3)混合將⑵步制得的藥物溶液在不斷攪拌下加入⑴步制得的基質(zhì)中，攪拌均勻，溶液通過微孔濾膜過濾，再從濾器上加緩沖液至總量。本發(fā)明的另一方面涉及所述的眼用在體凝膠制劑在制備預(yù)防和/或治療結(jié)膜炎和/或角膜炎的藥物中的用途。本發(fā)明的另一方面涉及所述的眼用在體凝膠制劑在制備預(yù)防和/或治療白內(nèi)障的藥物中的用途。其中所述白內(nèi)障優(yōu)選為早期白內(nèi)障。發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供了ー種pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑，該制劑組成合理，在體外(pH值約為5-6. 2)為液體，滴入眼內(nèi)(pH值約為6. 8)成為凝膠，凝膠粘度隨外界應(yīng)カ的增加而降低。本發(fā)明的眼用制劑具有以下優(yōu)勢I)本發(fā)明的pH敏感型眼用在體凝膠制劑在解決不同pH條件下劑型正常轉(zhuǎn)換的同時，能夠很好地保留黃芩苷的活性和溶解性，解決了現(xiàn)有技術(shù)中黃芩苷滴眼液生物利用度低，以及在不同PH值條件下，特別是在堿性條件下穩(wěn)定性差、容易失去活性的問題；2)在體凝膠制劑的應(yīng)用可以增加黃芩苷的角膜滲透能力，因而增加了有效藥物濃度，極大的提高了黃芩苷的生物利用度；3)在體凝膠制劑的應(yīng)用可以增加黃芩苷在角膜的附著時間，起到緩釋的作用，有效的解決了單獨黃芩苷滴眼液存在的代謝過快，不能較長時間保留的問題。


圖I本發(fā)明的眼用在體凝膠劑在pH5. 8和pH6. 8條件下的凝膠顯微結(jié)構(gòu)。
其中A為凝膠溶液在pH5. 8時的結(jié)構(gòu)，B為凝膠溶液滴加蒸餾水后呈現(xiàn)的結(jié)構(gòu)，C為凝膠溶液的PH調(diào)節(jié)至6. 8時的結(jié)構(gòu)。圖2本發(fā)明的眼用在體凝膠劑的基質(zhì)粘度的pH變化范圍圖3本發(fā)明的眼用在體凝膠劑在ρΗ5· 8 (非生理條件)和ρΗ6· 8 (生理條件)下的
流變學實驗結(jié)果。圖4黃芩苷滴眼液與pH敏感型在體凝膠的體外消除試驗結(jié)果。其中A為黃芩苷滴眼液，B為pH敏感型在體凝膠；其中ROI O :位置參比，ROI I 角膜表面，ROI 2:鼻淚管，ROI 3:咽部。圖5黃芩苷滴眼液與pH敏感型在體凝膠Y -閃爍照相圖片。其中左側(cè)三幅為黃芩苷滴眼液，右側(cè)三幅為pH敏感型在體凝膠；在IOmin內(nèi)共采集63幀動態(tài)圖像，其中A為前期圖像，B為中期圖像，C為末期圖像。圖6黃芩苷滴眼液和pH敏感型眼用在體凝膠劑的房水藥物動力學曲線。其中橫坐標為時間(t/h)，單位為h(小吋)，縱坐標為藥物濃度(C)，單位為μ g · mL 1 ο
具體實施例方式下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。以下實施例中不同pH值的磷酸鹽緩沖液均為PBS緩沖液，按照2010版的《中國藥典》配制。實施例IpH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(I)藥物處方的組成為o. I份黃岑苷、O. 3份卡波姆974P nf ( Carbopol 974PNF)、0· 6份HPMC Ε4Μ、0· 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份ρΗ5· 8的磷酸鹽緩沖液(PBS)。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，包括以下步驟(I)制備基質(zhì)取所述配比的Carbopol 和HPMC E4M在不斷攪拌下加入適量PH5. 8的磷酸鹽緩沖液中，攪拌均勻，即得基質(zhì)；(2)制備藥物溶液取所述配比的黃芩苷、氯化鈉和苯扎溴銨，逐漸加入PH5. 8的磷酸鹽緩沖液中，混合均勻，即得藥物溶液；(3)混合將⑵步制得的藥物溶液在不斷攪拌下加入⑴步制得的基質(zhì)中，攪拌均勻，溶液通過微孔濾膜過濾，再從濾器上加PH5. 8的磷酸鹽緩沖液至總量。實施例2pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(2)藥物處方的組成為0· I份黃芩苷、O. 3份CarbopoI 980NF、0. 6份HPMC F4M、O. 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例3pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(3)藥物處方的組成為0. I份黃芩苷、O. 3份Carbopo I 934P NF、0. 6份HPMC K4M、O. 9份氯化鈉、O. OOl份苯扎溴銨和94份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例4pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(4)藥物處方的組成為0. 2份黃芩苷、O. 3份Carbopo I 974P NF、0. 5份HPMC E4M、O. 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例5pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(5)藥物處方的組成為0. I份黃芩苷、O. 4份Carbopo I 974P NF、0. 4份HPMC E4M、 O. 99份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例6pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(6)藥物處方的組成為0. I份黃芩苷、O. 4份Carbopo I 974P NF、0. 6份HPMC E4M、O. 9份氯化鈉、O. 01份苯扎溴銨和94份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例7pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(7)藥物處方的組成為0. I份黃芩苷、O. 5份Carbopol 974P NF、0. 4份HPMC E4M、O. 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和90份pH5. 8的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例8pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠的制備(8)藥物處方的組成為0. I份黃芩苷、O. 6份Carbopol 974P NF、0. 4份HPMC E4M、O. 9份氯化鈉、O. 001份苯扎溴銨和94份pH6. O的磷酸鹽緩沖液。上述pH敏感型眼用在體凝膠制劑的制備方法，與實施例I相同。實施例9黃芩苷在不同pH值的磷酸鹽緩沖液中的穩(wěn)定性為了考察黃芩苷原料藥在不同pH值的磷酸鹽緩沖液的穩(wěn)定性，從而判定pH凝膠介質(zhì)的PH值。將定量黃芩苷置于蒸餾水及不同pH值磷酸鹽緩沖液中(pH 5.8,6.0,6.2,6. 4,6. 6,6. 8 and 7· O)，分別在0，O. 5，I. 0，I. 5，2· 0，4· 0，8· O and 10. Oh取樣，并進行HPLC測定。表I黃芩苷在不同pH值的磷酸鹽緩沖液中的穩(wěn)定性(η = 3)
濃度0/o(w/v)
介質(zhì)Oh 0.5h l.Oh 2.0h 4.0h 6.0h 8.0h IOh
H20 100.0±0.0 100.2±0.2 100.2±0.3 100.1±0.2 100.0±0.3 99.8±0.2 100.1±0.1 99.6±0.2pH 5.8 PBS 100.0士0.0 100.5±0.1 100.1 士0.2 100.2±0.2 99.9士0.2 100.0土0.1 99.8±0.2 99.8±0.1_pH 6.0 PBS lOO.OiO.O 99.9土0.2 100.0±0.3 100.1±0.2 99.6±0.2 99.2±0.3 98.9±0.3 98.0±0·3_ρΗ 6.2 PBS 100.0士0.0 100.0±0.3 99.8±0.2 99.8±0.4 99.4±0.2 99.0士0.3 98.5±0.3 96.3±0.3_pH 6.4 PBS 100.0士0.0 99.8±0.1 99.7±0.4 99.7±0.3 99.2±0.3 98.6士0.2 97.1±0.4 94.1±0·5pH 6.6 PBS 100.0士0.0 99.8±0.2 99.8±0.5 99.4±0.3 99.2±0.4 97.7士0.4 95.9±0.7 93.5±0.7_pH 6.8 PBS lOO.OiO.O 99.2土0.4 98.5±0.4 96.2土0.4 93.3±0.3 92.2±0.5 88.5±0.9 85.3±1.1pH7.0PBS」100.0±0.0|96.5±0.5 I 91.5±0.6 l_89.1±0.6 _^82.9±1.0 丄78.0士 1.6 l_ 72.3±2.4 | 65.7±3.3
由表I可知,黃岑苷在pH5. 8,6. O和6. 2時的穩(wěn)定性較好，當pH大于6. 6時,穩(wěn)定性迅速下降。實施例10激光共聚焦顯微鏡考察凝膠顯微結(jié)構(gòu)為了考察本發(fā)明藥物pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠劑在pH5. 8和pH6. 8條件下微觀結(jié)構(gòu)的變化，發(fā)明人將熒光探針FITC標記于實例I所制備的凝膠上，取O. 01% FITC水溶液與凝膠渦旋混合，在激光共聚焦顯微鏡下考察其微觀結(jié)構(gòu)。微觀結(jié)構(gòu)見圖I。圖IA中，凝膠溶液在pH5. 8時呈ー線性聚合物，圖IB為藥物滴加約O. 5mL蒸餾水后呈現(xiàn)的結(jié)構(gòu)，線性結(jié)構(gòu)并未改變，僅被少許稀釋；而圖IC為滴加2M氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 8，可明顯看到pH值升高后，其微觀結(jié)構(gòu)線性結(jié)構(gòu)相互聯(lián)結(jié)而形成團狀凝膠網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果表明，隨著PH的變化凝膠微觀結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的改變，在非生理偏酸性條件下，卡波姆(Carbopol )呈線性結(jié)構(gòu)，骨架中含有大量的可解離基團，生理條件下，荷負電羧基間的靜電排斥使Carbopol 分子鏈伸展，増加了生成氫鍵的可能性，因而形成團狀結(jié)構(gòu)，具有更適宜的凝膠強度。 實施例11凝膠基質(zhì)粘度的pH變化范圍為了判定凝膠基質(zhì)的在不同pH值下粘度的變化，從而確定凝膠液態(tài)-固態(tài)間的pH轉(zhuǎn)化點，發(fā)明人對不同pH下的凝膠粘度作出比較。方法如下固定凝膠基質(zhì)處方，在適宜的pH范圍內(nèi)，采用實施例I處方，固定處方基質(zhì)，分別將基質(zhì)調(diào)節(jié)pH至 5. 0,5. 8,6. 0,6. 2、6· 5 和 7. 0，然后采用 Brookfield流變儀(DV-IIIjUSA)分別測定粘度，將所得粘度對PH值作圖，得凝膠粘度對pH的變化曲線(見圖2)。結(jié)果表明，凝膠基質(zhì)的粘度變化拐點在pH5. 8-6. O之間，pH > 6. 2后粘度迅速上升，由此可說明非生理條件下，PH5. 8的凝膠基質(zhì)處于液體狀態(tài)，當趨近于生理條件時，可逐漸形成膠體狀態(tài)。實施例12流變學試驗為了說明本發(fā)明藥物的釋放情況，發(fā)明人還進行了流變學研究，其方法如下取本發(fā)明實施例I所制得的樣品藥物制劑，并將溶液用0. 5M氫氧化鈉溶液分別調(diào)pH值至pH6. 8±0. I。上述溶液在非生理條件(pH5. 8±0. 1，25°C)，生理條件(pH6. 8±0. 1，350C )下，采用Brookfield流變儀(DV-III，USA)進行流變學考察。樣品在測試前要在水浴中平衡5分鐘，將所測樣品放入與流變儀配套的適配器中，選擇適宜轉(zhuǎn)子，調(diào)節(jié)剪切速率為O 25S—1，加速度為0. lS_Vmin。流變學曲線見圖3。結(jié)果表明非生理條件與生理條件下的聚合物皆隨剪切速率的降低，表現(xiàn)為假塑性流體性質(zhì)。HPMC在生理條件下粘度低于非生理條件，原因是由于HPMC粘度并不受pH值影響，調(diào)節(jié)pH值過程當中被稀釋；Carbopol 在非生理條件下粘度為2. 02mPa. s,具有牛頓流體性質(zhì)，調(diào)節(jié)PH值至6. 8后呈現(xiàn)加速性流體性質(zhì)，并且粘度増大；空白基質(zhì)和載藥在體凝膠在非生理條件與生理條件下，粘度發(fā)生明顯改變，PH為6. 8時發(fā)生相轉(zhuǎn)變，說明在體凝膠為PH依賴型凝膠。載藥后凝膠粘度略微提高，更加有助于凝膠在角膜處的粘附能力。說明加入卡波姆后，尤其增加了在生理條件下，藥物在角膜處的粘附能力。實施例13角膜滯留時間試驗為了考察藥物在體內(nèi)的緩釋效果，發(fā)明人對凝膠的在體角膜滯留時間進行了研究。將99mTc-DTPA均勻混合于黃芩苷滴眼液和pH敏感型在體凝膠中。給藥時，所有制劑的放射活性介于2. IMBq/lOO μ L 2. 7MBq/100 μ L劑量之間。將家兔用兔夾板固定，使其保持清醒狀態(tài)臥于SPECT系統(tǒng)(Toshiba GCA 602A, Japan)的監(jiān)測器前，低能高分辨率探頭距離兔眼5cm。待測的放射性標記溶液于室溫放置30min，然后滴加100 μ L至左眼角膜表面12點鐘位置。SPECT系統(tǒng)自動調(diào)節(jié)至140KeV測定99mTc的放射線，給藥5S后開始連續(xù)動態(tài)采集。采用128X128像素矩陣，IOmin內(nèi)先后以36 X 5S再12 X IOS最后15X20S的順序采集63幀動態(tài)圖像。 根據(jù)99mTc-DTPA放射性活度在IOmin內(nèi)的變化趨勢進行討論，結(jié)果如圖4。全部圖像均劃分出4個感興趣區(qū)域(ROI)，分別為ROI O位置參比，ROI I角膜表面，ROI 2鼻淚管和ROI 3咽部，放射性標記物的移動準確地落在這些區(qū)域內(nèi)。自動校正衰變后，將角膜表面區(qū)域的殘留放射活性對時間作圖以評價消除動力學參數(shù)自動校正衰變后，將角膜表面區(qū)域的殘留放射活性對時間作圖以評價消除動力學。由圖4可知黃芩苷滴眼液組(A) IOmin內(nèi)角膜區(qū)域的放射活度一直呈現(xiàn)衰減趨勢，鼻淚管和咽部中的放射活度也快速由上升轉(zhuǎn)為下降趨勢，提示藥物以滴眼液的形式給藥后，迅速經(jīng)內(nèi)眼角消除到達鼻淚管和咽部，未在角膜前區(qū)域滯留；pH敏感型在體凝膠組(B)放射活度在角膜區(qū)域IOmin內(nèi)沒有明顯的衰減，鼻淚管和咽部中的放射活度由低至高，維持平臺期，說明藥物大部分滯留于角膜表面區(qū)域，并且呈緩慢釋放趨勢。再根據(jù)藥物在IOmin內(nèi)兔眼在體的動態(tài)流動位置進行討論，SPECT系統(tǒng)在IOmin共采集63幀動態(tài)圖像，選取實驗的前、中、末期Y -閃爍照相圖片，將黃芩苷滴眼液與pH敏感型在體凝膠的結(jié)果進行對比，結(jié)果見圖4。由圖5結(jié)果可知，黃芩苷滴眼液在兔眼內(nèi)流動較快，實驗中期制劑溶液沿鼻淚管轉(zhuǎn)移，實驗?zāi)┢跁r已明顯看出溶液到達咽部，并通過咽部毛細血管擴散；而凝膠制劑則較溶液轉(zhuǎn)移緩慢，中期和末期都未見明顯的擴散趨勢。說明PH敏感型在體凝膠角膜粘附性良好，有效的解決了單獨黃芩苷滴眼液存在的代謝過快，不能較長時間保留的問題，起到了緩釋的作用。實施例14動物藥代動力學試驗-在體微滲析技術(shù)為了解藥物在眼內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及特點，給臨床合理用藥提供參考，發(fā)明人還對本發(fā)明藥物PH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠劑(實施例I制備的樣品)進行了臨床前動物藥代動力學研究，方法和結(jié)果如下實驗前，以3只家兔為實驗動物，采用微滲析技術(shù)進行眼內(nèi)藥代動力學的研究。手術(shù)前3天向家兔眼內(nèi)滴入氧氟沙星滴眼液，以消除眼部炎癥。手術(shù)前O. 5和4h，家兔耳緣靜脈注射100U · kg-1肝素鈉，以防止由于炎癥反應(yīng)引起前房內(nèi)纖維生成手術(shù)時。結(jié)膜下注射利多卡因注射液進行局部麻酔，將其固定于兔盒中，用開瞼器撐開眼瞼，開始手木。用針頭在眼角部位角膜緣處做貫通性穿刺，將微滲析探針由針孔導出，抽去針頭，調(diào)整探針的位置使?jié)B析窗恰好全部浸入房水中，探針兩端分別在鼻穎側(cè)和外眼角固定。創(chuàng)ロ處滴入氧氟沙星眼藥水防止感染。經(jīng)過2天恢復期，待創(chuàng)ロ完全愈合后開始體內(nèi)藥代動力學實驗。以生理鹽水為灌注液，流速設(shè)定為3. 0μ L · HIirT1，沖洗O. 5h后，在結(jié)膜囊內(nèi)滴入IOOyL黃芩苷滴眼液(黃芩苷pH5. 8磷酸緩沖鹽溶液，對照組)及黃芩苷pH敏感型眼用在體凝膠，同時開始收集樣品，在最初的Ih內(nèi)每IOmin收集樣品，然后每20min收集樣品，所有樣品立即進行HPLC測定。
房水藥物濃度測定結(jié)果表2和表3，兩組溶液的房水藥物動力學曲線見圖6。表2黃芩苷滴眼液給藥后房水藥物濃度測定(η = 3)
權(quán)利要求
1.pH敏感型眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分組分重量份 黃芩苷0. 05-10 ； pH敏感材料0. 1-3 ； 增稠劑0. 1-10 ； 等滲調(diào)節(jié)劑0. 1-10 ； 防腐劑0. 001-3 ； PH5-6. 2 的緩沖液 80-100。
2.權(quán)利要求I的眼用在體凝膠制劑，其中所述pH敏感材料選自丙烯酸聚合物、醋酸纖維素酞酸酯和殼聚糖中的至少ー種。
3.權(quán)利要求I的眼用在體凝膠制劑，其中所述增稠劑選自羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、こ基纖維素、聚維酮和聚こ烯醇中的至少ー種；所述等滲調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、葡萄糖、甘露糖醇、山梨醇和丙ニ醇中的至少ー種；所述防腐劑選自苯甲醇、三氯叔丁醇、硫柳汞、洗必泰、苯扎氯銨、苯扎溴銨、尼泊金甲酷、尼泊金こ酯和尼泊金丙酯中的至少ー種；所述緩沖
4.權(quán)利要求I的眼用在體凝膠制劑，其中所述pH敏感材料為Carbopol ,增稠劑為HPMC E4M、HPMC F4M或HPMC K4M，等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉，防腐劑為苯扎溴銨，緩沖液為磷酸鹽緩沖液。
5.權(quán)利要求1-4任一項的眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)0.05-10 份黃芩苷、0. 1-3 份Carbopol 、0. 1-10 份 HPMC E4M、HPMC F4M 或 HPMC K4M、0.1-10份氯化鈉、0. 001-3份苯扎溴銨和80-100份PH5-6. 2的磷酸鹽緩沖液。
6.權(quán)利要求5的眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)0.05-1. 5份黃芩苷、0. 2-2 份CarbopoI 、0. 3-3 份 HPMC E4M、HPMC E4M 或 HPMC K4M、0. 9-1 份氯化鈉、0.001-0. I份苯扎溴銨和90-100份pH5. 8-6. 0的磷酸鹽緩沖液。
7.權(quán)利要求6的眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)0.I份黃芩苷、0.3份Carbopo I 、0. 6份HPMC E4M、0. 9份氯化鈉、0. 001份苯扎溴銨和94份PH5-6. 2的PBS緩沖液。
8.權(quán)利要求1-7任一項的眼用在體凝膠制劑的制備方法，其包括以下步驟 (1)制備基質(zhì)按照權(quán)利要求1-6所述重量份，取pH敏感材料和增稠劑，在不斷攪拌下加入適量緩沖液，攪拌均勻，即得基質(zhì)； (2)制備藥物溶液按照權(quán)利要求1-6所述重量份，取黃芩苷、等滲調(diào)節(jié)劑和防腐剤，逐漸加入緩沖液中，混合均勻，即得藥物溶液； (3)混合將(2)步制得的藥物溶液在不斷攪拌下加入(I)步制得的基質(zhì)中，攪拌均勻，溶液通過微孔濾膜過濾，再從濾器上加緩沖液至總量。
9.權(quán)利要求1-7任一項的眼用在體凝膠制劑在制備預(yù)防和/或治療結(jié)膜炎和/或角膜炎的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1-7任一項所述的眼用在體凝膠制劑在制備預(yù)防和/或治療白內(nèi)障的藥物中的用途，優(yōu)選為早期白內(nèi)障。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑，其包含下列組分(按重量份計)，0.05-10份黃芩苷，0.1-3份pH敏感材料，0.1-10份增稠劑，0.1-10份等滲調(diào)節(jié)劑，0.001-3份防腐劑和80-100份pH5-6.2的緩沖液。本發(fā)明還涉及所述pH敏感型黃芩苷眼用在體凝膠制劑的制備方法，以及其在制備預(yù)防和/或治療結(jié)膜炎、角膜炎或白內(nèi)障的藥物中的用途。
文檔編號A61K47/36GK102648894SQ201110045668
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者劉志東, 李佳瑋, 李楠, 李琳, 武昊昀 申請人:天津中醫(yī)藥大學