專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
乳腺增生病是常見(jiàn)的婦女外科疾病，其發(fā)病率高，嚴(yán)重影響廣大婦女的身心健康， 該病具有發(fā)展成乳腺癌的危險(xiǎn)性。因而積極治療乳腺增生病，提高婦女健康水平，降低癌變 率有非常重大的意義?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，乳腺增生病的發(fā)生是因內(nèi)分泌功能紊亂、卵巢功能失 調(diào)，致使體內(nèi)雌激素水平增高或活性增強(qiáng)，孕激素水平下降所致。對(duì)于乳腺增生疼痛較重或 局部結(jié)節(jié)明顯，壓痛明顯的患者，臨床多用性激素療法和內(nèi)分泌療法。如黃體酮，丹那唑、三 苯氧胺、溴隱亭等。用上述方法治療，療效雖好，但副作用較大，價(jià)格較昂貴，不能長(zhǎng)期堅(jiān)持 治療，而停藥后疼痛復(fù)發(fā)，腫塊增大，最終仍需繼續(xù)治療一手術(shù)切除。尤其是性激素應(yīng)用 后可能會(huì)進(jìn)一步干擾人體激素間的平衡，增加癌變的可能性。綜上所述，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療此病 目前以手術(shù)為主，藥物為輔。無(wú)論是手術(shù)切除、藥物治療，都存在費(fèi)用高、副作用明顯、創(chuàng)傷 面大、手術(shù)或停藥后易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)。因此西醫(yī)對(duì)該病尚無(wú)理想的解決途徑和治療方法。子宮肌瘤也為婦科常見(jiàn)疾病，西醫(yī)常采用手術(shù)治療，肌瘤患者在絕經(jīng)前切除子宮。 即使保留卵巢，常引起更年期綜合癥、冠心病及骨質(zhì)疏松癥的提早出現(xiàn)，而絕大部分進(jìn)行肌 瘤剔除術(shù)患者會(huì)在短期內(nèi)復(fù)發(fā)。目前治療子宮肌瘤常用的化學(xué)藥物雖能在短時(shí)期內(nèi)縮小肌 瘤體積，抑制子宮出血，卻不能控制肌瘤的增長(zhǎng)和新的肌瘤出現(xiàn)，且應(yīng)用這些拮抗雌激素和 孕激素的藥物后，容易產(chǎn)生低雌激素水平，從而誘發(fā)閉經(jīng)、更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松等。子宮肌瘤在中醫(yī)學(xué)屬于癥瘕、積聚、石癥范疇?！堆C論》云“子宮肌瘤乃離 經(jīng)之血與好血不相合是謂瘀血。日久則結(jié)為癥"。本病由于氣血失調(diào)、郁怒傷肝、肝郁氣滯， 痰濕內(nèi)蘊(yùn)，瘀滯而成積塊，肝腎兩虛，沖任失調(diào)所致；陰陽(yáng)失調(diào)、肝氣不舒，腎氣不化，遂致氣 機(jī)不暢，氣滯血瘀，積而成徵癥。子宮肌瘤主要是臟腑功能失調(diào)、氣血不和、以致血瘀阻滯、 留而結(jié)聚而成，總病機(jī)與瘀血分不開(kāi)。中醫(yī)藥治療本病多以疏肝理氣、行氣活血、破瘀化痰散結(jié)的方法。臨床上應(yīng)用行氣 藥以川芎、香附、枳殼等為多；活血化瘀藥多用桃仁、紅花、王不留行等；疏肝理氣藥多用柴 胡、郁金等；化痰藥則以浙貝母、海藻、昆布為主。中藥在治療子宮肌瘤方面不僅能控制并縮 小肌瘤組織，綜合調(diào)節(jié)人體激素水平，并且能改善月經(jīng)不調(diào)、白帶、腰酸等臨床癥狀，遠(yuǎn)期療 效顯著。其作用多與改善微循環(huán)、調(diào)整機(jī)體性激素水平等有關(guān)。目前，主要有桂枝茯苓丸/ 膠囊、宮瘤消膠囊、大黃蟄蟲(chóng)丸用于治療子宮肌瘤，但仍缺少抗子宮肌瘤療效確切、安全系 數(shù)高的中成藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法，有利于保證成品 的質(zhì)量。
本發(fā)明治療乳腺增生病的濃縮丸劑是由11味中藥組成，具體組方為
柴胡125g、香附125g、大黃(酒炙)83. 4g、青皮83. 4g、川芎83. 4g、莪術(shù)83. 4g、土鱉蟲(chóng) 83. 4g、浙貝母83. 4g、當(dāng)歸125g、白芍125g、王不留行83. 4g，制成1000丸。具體制備方法
取處方量二分之一量的酒大黃粉碎成細(xì)粉，備用。浙貝母、王不留行加70%乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液， 靜置16小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮成清膏，備用。香附、青皮、川芎、莪術(shù)和當(dāng)歸水蒸汽蒸餾6小時(shí)，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液濾 過(guò)，備用，揮發(fā)油用環(huán)糊精包結(jié)，包結(jié)物低溫干燥。剩余的酒大黃等其余四味，分別加水10倍量，煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并 濾液和上述蒸餾后的水溶液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 1. 10 (50°C)，靜置16小時(shí)，離 心(2500轉(zhuǎn)/分)，取上清液濃縮成清膏，和上述醇提清膏混合后繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度為 1. 15 1.20 (50°C)的清膏，取90%左右的清膏噴霧干燥，其余清膏繼續(xù)濃縮至1. 35 1.38 (50°C)的稠膏，將噴霧干燥粉和適量酒大黃細(xì)粉、β-環(huán)糊精包結(jié)物混合后，加入適量 糊精混勻，用9 1 混合粉量的55% 75%濃度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大 黃細(xì)粉、適量稠膏將丸滾圓，干燥，用剩余稠膏、適量滑石粉和活性炭包衣，蟲(chóng)白蠟打光，制 成1000丸，即得。該藥為中藥復(fù)方制劑，其處方與制備方法在此之前未有公開(kāi)，其質(zhì)量的控制方法 未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法包括性狀、浸出物檢查、鑒別、丸劑常 規(guī)檢查、含量測(cè)定5個(gè)步驟，具體為
a、性狀為本品為黑色炭衣濃縮丸，丸芯為黑褐色；氣芳香，味微咸苦。b、浸出物檢查為取重量差異項(xiàng)下的本品約4g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加 甲醇100ml，密塞，稱(chēng)定重量，置水浴上回流1小時(shí)，放置至室溫，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸干，殘?jiān)?0%氫氧化鈉溶液 5ml使溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水25ml洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入同一分液漏斗中，搖勻， 用水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去 水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時(shí)，置干燥 器中冷卻30分鐘，迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1. 2% ；
C、鑒別為
(1)柴胡的薄層色譜鑒別取浸出物檢查項(xiàng)下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作 為供試品溶液；另取柴胡對(duì)照藥材0. 5g，加甲醇20ml超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至 約5ml，作為對(duì)照藥材溶液。再取柴胡皂苷a對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0.5 mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法；試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲 醛的40%硫酸溶液，在60°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光及紫外光燈365 nm下檢視供試品 色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)
(2)香附的薄層色譜鑒別取本品10g，研細(xì)，置園底燒瓶中，加水250ml，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，再加入ani乙酸乙酯，回流10分鐘，放置至室溫，取乙酸乙酯層作為供 試品溶液另取α-香附酮，加乙酸乙酯制成每Irnl含Img的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層 色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF2M薄層板上，以甲苯-乙酸 乙酯-冰醋酸92:5:5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視。供試品色譜 中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；噴以二硝基苯胼試液，放置片刻，斑 點(diǎn)漸變?yōu)槌燃t色；
(3)大黃的薄層色譜鑒別取本品0.3g，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)， 取濾液5ml，蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙 醚分2次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品 溶液；另取大黃對(duì)照藥材0. Ig,同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn) 于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上層溶液為展 開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365 nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃 色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；
(4)青皮的薄層色譜鑒別取本品2g，研細(xì)，加甲醇20ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，取濾 液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑1. 5cm，長(zhǎng)9cm，柱上端 加Ig中性氧化鋁，先以水IOOml洗脫，棄去，再以2%吡啶甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作 為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法；試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄 層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:27:13為展開(kāi)劑，展至約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙 酸乙酯-甲酸-水20:10:1 1的上層溶液為展開(kāi)劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁 試液，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的熒光斑點(diǎn)；
(5)浙貝母的薄層色譜鑒別取本品10g，研細(xì)，加濃氨試液2ml與三氯甲烷50ml，放置 過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，拌入少許中性氧化鋁，水浴上拌勻干燥，加 于中性氧化鋁柱(100-200目，2g，內(nèi)徑約15mm)上，用乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘 渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取貝母素甲對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含2mg的 溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B);試驗(yàn)，吸取對(duì)照 品溶液2 μ 1、供試品溶液10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨 試液17:2:1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品 色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(6)白芍的薄層色譜鑒別取本品2g，研細(xì)，加甲醇20ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，取濾 液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑1. 5cm，長(zhǎng)9cm，柱上端 加Ig中性氧化鋁，先以水IOOml洗脫，棄去，再以2%吡啶甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含Img 的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上 述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸 40:5:10:0. 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
d、丸劑常規(guī)檢查為應(yīng)符合中國(guó)藥典丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；
e、含量測(cè)定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋 酸75:25:1為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm ；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品 適量，加甲醇分別制成每Iml含大黃酸、大黃素、大黃酚各150 μ g，蘆薈大黃素、大黃素甲醚 各75μ g的溶液；分別精密量取上述對(duì)照品溶液各anl，混勻，即得每Iml含大黃酸、大黃 素、大黃酚各30 μ g，蘆薈大黃素、大黃素甲醚各15 μ g ；
供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0. 5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失 重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液IOml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇，加水IOml，鹽酸Iml，加 熱回流30分鐘，立即冷卻，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗 中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗滌一次，棄去水液，三氯 甲烷液蒸干，殘?jiān)蛹状级哭D(zhuǎn)移至IOml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得；
測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；
本品每丸含酒大黃以蘆薈大黃素C15H1Q05、大黃酸C15H806、大黃素C15HltlO5、大黃酚C15HltlO4 和大黃素甲醚C16H12O5的總量計(jì)，不得少于0. 6mg。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)該藥建立了較高的能保證成品的質(zhì)量的檢測(cè)方法。由于本品所含藥 味較多，成分復(fù)雜，檢測(cè)方法是經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)摸索才建立起來(lái)的，除丸劑的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)外， 建立了君藥柴胡的浸出物含量測(cè)定、臣藥大黃的高效液相含量測(cè)定，建立了柴胡、香附、大 黃、青皮、浙貝母、芍藥6味中藥的薄層色譜鑒別，鑒別藥味占全部中藥的50%以上。該檢測(cè) 方法標(biāo)準(zhǔn)較高，其各個(gè)步驟密不可分，可完全保證成品質(zhì)量的目的。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述 實(shí)施例一濃縮丸劑的制備
濃縮丸劑配方為柴胡125g、香附125g、大黃(酒炙)83. 4g、青皮83. 4g、川芎83. 4g、莪 術(shù)83. 4g、土鱉蟲(chóng)83. 4g、浙貝母83. 4g、當(dāng)歸125g、白芍125g、王不留行83. 4g，制成1000丸。取處方量二分之一量的酒大黃粉碎成細(xì)粉，備用。浙貝母、王不留行加70%乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液， 靜置16小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮成清膏，備用。香附、青皮、川芎、莪術(shù)和當(dāng)歸水蒸汽蒸餾6小時(shí)，提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液濾 過(guò)，備用，揮發(fā)油用環(huán)糊精包結(jié)，包結(jié)物低溫干燥。剩余的酒大黃等其余四味，分別加水10倍量，煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并 濾液和上述蒸餾后的水溶液，濃縮至相對(duì)密度為1.05 1. 10 (50°C)，靜置16小時(shí)，離 心(2500轉(zhuǎn)/分)，取上清液濃縮成清膏，和上述醇提清膏混合后繼續(xù)濃縮至相對(duì)密度為1. 15 1.20 (50°C)的清膏，取90%左右的清膏噴霧干燥，其余清膏繼續(xù)濃縮至1. 35 1.38 (50°C)的稠膏，將噴霧干燥粉和適量酒大黃細(xì)粉、β-環(huán)糊精包結(jié)物混合后，加入適量 糊精混勻，用9 1 混合粉量的55% 75%濃度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大 黃細(xì)粉、適量稠膏將丸滾圓，干燥，用剩余稠膏、適量滑石粉和活性炭包衣，蟲(chóng)白蠟打光，制 成1000丸，即得。上述方法制得的濃縮丸(以下稱(chēng)濃縮丸)對(duì)乳腺體積和乳腺重量的影響(結(jié)果見(jiàn)表 1)
由表1可見(jiàn)，模型組家兔乳腺增生，乳腺體積明顯增大，乳腺重量明顯增加與模型組 比較，濃縮丸4g生藥/ kg、2g生藥/ kg劑量組家兔乳腺體積均明顯減小(P<0.05)，乳腺重 量亦均明顯減輕(P<0.(^)，濃縮丸Ig生藥/ kg劑量組家兔乳腺體積、乳腺重量與模型組 比較均無(wú)明顯差異與模型組比較，乳疾靈顆粒組家兔乳腺體積明顯減小(P<0.05)，乳腺 重量亦明顯減輕(P<0. 05))。表1.濃縮丸對(duì)乳腺體積和乳腺重量的影響(H 士 SD，n=8)
權(quán)利要求
1. 一種治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法，包括性狀、浸出物檢查、鑒別、丸劑常 規(guī)檢查、含量測(cè)定五個(gè)步驟，a、性狀為本品為黑色炭衣濃縮丸，丸芯為黑褐色；氣芳香，味微咸苦；b、浸出物檢查為取重量差異項(xiàng)下的本品約4g，研細(xì)，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加甲醇 100ml，密塞，稱(chēng)定重量，置水浴上回流1小時(shí)，放置至室溫，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的 重量，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液50ml，蒸干，殘?jiān)?0 %氫氧化鈉溶液5ml 使溶解，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水25ml洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入同一分液漏斗中，搖勻，用 水飽和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗滌2次，每次40ml，棄去水 液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時(shí)，置干燥器 中冷卻30分鐘，迅速精密稱(chēng)定重量，計(jì)算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1. 2% ；C、鑒別為(1)柴胡的薄層色譜鑒別取浸出物檢查項(xiàng)下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作 為供試品溶液；另取柴胡對(duì)照藥材0. 5g，加甲醇20ml超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至 約5ml，作為對(duì)照藥材溶液；再取柴胡皂苷a對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5 mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法；試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲 醛的40%硫酸溶液，在60°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光及紫外光燈365 nm下檢視供試品 色譜中，在與對(duì)照藥材及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)；(2)香附的薄層色譜鑒別取本品10g，研細(xì)，置園底燒瓶中，加水250ml，連接揮發(fā)油測(cè) 定器與回流冷凝管，再加入anl乙酸乙酯，回流10分鐘，放置至室溫，取乙酸乙酯層作為供 試品溶液另取α -香附酮，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液作為對(duì)照品溶液；照薄層色 譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF2M薄層板上，以甲苯-乙酸 乙酯-冰醋酸92 5 5為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視；供試品色譜 中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；噴以二硝基苯胼試液，放置片刻，斑 點(diǎn)漸變?yōu)槌燃t色；(3)大黃的薄層色譜鑒別取本品0.3g，研細(xì)，加甲醇20ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)， 取濾液5ml，蒸干，殘?jiān)铀甀Oml使溶解，再加鹽酸1ml，加熱回流30分鐘，立即冷卻，用乙 醚分2次振搖提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)尤燃淄镮ml使溶解，作為供試品 溶液；另取大黃對(duì)照藥材0. Ig,同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃酸對(duì)照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μ 1，分別點(diǎn) 于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30 60°C)_甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上層溶液為展 開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365 nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃 色熒光斑點(diǎn)，置氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；(4)青皮的薄層色譜鑒別取本品2g，研細(xì)，加甲醇20ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，取濾 液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑1. 5cm，長(zhǎng)9cm，柱上端 加Ig中性氧化鋁，先以水IOOml洗脫，棄去，再以2%吡啶甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作 為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法；試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一用硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100 27 13為展開(kāi)劑，展至約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙 酸乙酯-甲酸-水20:10:1 1的上層溶液為展開(kāi)劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁 試液，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的熒光斑點(diǎn)；(5)浙貝母的薄層色譜鑒別取本品10g，研細(xì)，加濃氨試液2ml與三氯甲烷50ml，放置 過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖糏ml使溶解，拌入少許中性氧化鋁，水浴上拌勻干燥，加 于中性氧化鋁柱(100-200目，2g，內(nèi)徑約15mm)上，用乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘 渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取貝母素甲對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含2mg的 溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法；試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液2 μ 1、供試品溶液10μ 1，分 別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液17:2:1為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出， 晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 斑點(diǎn)；(6)白芍的薄層色譜鑒別取本品2g，研細(xì)，加甲醇20ml，加熱回流20分鐘，濾過(guò)，取濾 液10ml，蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱內(nèi)徑1. 5cm，長(zhǎng)9cm，柱上端 加Ig中性氧化鋁，先以水IOOml洗脫，棄去，再以2%吡啶甲醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸 干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含Img 的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅 膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0. 2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾 干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng) 的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；d、丸劑常規(guī)檢查為應(yīng)符合中國(guó)藥典丸劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；e、含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋 酸75:25:1為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm ；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品 適量，加甲醇分別制成每Iml含大黃酸、大黃素、大黃酚各150 μ g，蘆薈大黃素、大黃素甲醚 各75μ g的溶液；分別精密量取上述對(duì)照品溶液各anl，混勻，即得每Iml含大黃酸、大黃 素、大黃酚各30 μ g，蘆薈大黃素、大黃素甲醚各15 μ g ；供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0. 5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失 重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液IOml，置50ml燒瓶中，揮去甲醇，加水IOml，鹽酸Iml，加 熱回流30分鐘，立即冷卻，并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗 中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗滌一次，棄去水液，三氯 甲烷液蒸干，殘?jiān)蛹状级哭D(zhuǎn)移至IOml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；本品每丸含酒大黃以蘆薈大黃素C15H1Q05、大黃酸C15H806、大黃素C15HltlO5、大黃酚C15HltlO4 和大黃素甲醚C16H12O5的總量計(jì)，不得少于0. 6mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療乳腺增生病的濃縮丸劑的檢測(cè)方法，包括性狀、鑒別、丸劑常規(guī)檢查、浸出物檢查、含量測(cè)定5個(gè)步驟，所述濃縮丸劑配方為柴胡125g、香附125g、大黃(酒炙)83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪術(shù)83.4g、土鱉蟲(chóng)83.4g、浙貝母83.4g、當(dāng)歸125g、白芍125g、王不留行83.4g。該檢測(cè)方法有利于保證成品的質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P15/14GK102120021SQ201110058699
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者葉華, 孫玲, 石榮火, 錢(qián)坤, 陳琴 申請(qǐng)人:雷允上藥業(yè)有限公司