專利名稱：覆盆子用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是覆盆子用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
覆盆子，又稱樹(shù)莓、木莓、托盤等，屬于薔薇科，懸鉤子屬植物，為多年生小灌木。覆盆子含有機(jī)酸、糖類及少量維生素C，沒(méi)食子酸(ellagic acid), β-谷甾醇(β-sitosterol),覆盆子酸(fupenzic acid),具有延緩衰老，消除疲勞,提高免疫力等功效。未見(jiàn)其與抗真菌藥物聯(lián)合使用抗真菌的報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種覆盆子用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，其對(duì)氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑等抗真菌藥物有明顯的增效作用，對(duì)于臨床耐藥性菌株，當(dāng)抗真菌藥物和覆盆子提取物合用時(shí)，能明顯降低抗真菌藥物的用藥劑量，增強(qiáng)對(duì)耐藥真菌的抑制作用。因此覆盆子可用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品，用于不同深部和淺部真菌感染的治療。發(fā)明效果本發(fā)明為覆盆子提取物開(kāi)辟了新的用途，將其用于抗真菌藥物的增效劑，不僅能提高藥物的抗真菌作用，而且在臨床治病真菌耐藥性日趨普遍，耐藥程度日趨嚴(yán)重的情況，使抗真菌藥物恢復(fù)對(duì)耐藥真菌的作用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。


圖I是ICR小鼠感染白念珠菌0304103后的生存曲線圖注小鼠靜脈注射白念珠菌03041032h后給藥物治療(連續(xù)給藥4天)。動(dòng)物分為六組，分別為模型組、氟康唑(O. 5mg/kg)、覆盆子(2g/kg)單用治療組、覆盆子(O. 4g/kg)合用氟康唑(O. 5mg/kg)治療組、覆盆子(O. 08g/kg)合用氟康唑(O. 5mg/kg)治療組以及覆盆子(2g/kg)合用氟康唑(O. 5mg/kg)治療組。其中覆盆子(O. 08g/kg)合用氟康唑(O. 5mg/kg)治療組與氟康唑(O. 5mg/kg)單用組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明覆盆子(0.08g/kg)合用氟康唑(0.5mg/kg)比陽(yáng)性藥物氟康唑(O. 5mg/kg)單用對(duì)小鼠全身系感染白念珠菌療效好。實(shí)施方式以下所列實(shí)施例，僅為幫助本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例I :覆盆子和氟康唑聯(lián)用對(duì)不同臨床真菌株的作用材料和方法I.試藥；藥材覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子的干燥果實(shí)。提取過(guò)程把粉碎后的藥材粉末加入IOOOml圓底燒瓶中，加入70%こ醇水浴回流2h，回流液過(guò)濾，放入已稱重的燒瓶中，50°C左右減壓旋蒸至粘稠浸膏狀。在燒瓶中加入蒸餾水，加熱使充分溶解(取出少許作為水提液，得到lg/ml的生藥濃度)，再加入與蒸餾水等量的無(wú)水こ醇，加熱充分混勻，合并提取液混勻，得O. 5g/ml的生藥濃度，取少許到EP管中做體外實(shí)驗(yàn)。氟康唑注射液輝瑞制藥有限公司，批號(hào)9149102。各試藥置于_20°C保存。實(shí)驗(yàn)前，將藥物取出置于35°C溫箱融化，充分混勻，分別進(jìn)行藥效學(xué)檢驗(yàn)。2.菌株臨床株耐藥白念珠菌(100、904、953)，近平滑念珠菌(90018)，克柔念珠菌(4996)，熱帶念珠菌(2718)，均由上海長(zhǎng)海醫(yī)院真菌室提供，分別采自長(zhǎng)海醫(yī)院不同科室臨床樣本，并經(jīng)形態(tài)學(xué)和生化學(xué)鑒定。所有實(shí)驗(yàn)用菌株均于沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)劃板活化，白念珠菌、克柔念珠菌、熱帶念珠菌等球狀菌于30°C培養(yǎng)2周后，分別挑取單克隆再次劃板活化，取第二次所 得單克隆置SDA斜面，用上述方法培養(yǎng)后于4°C保存?zhèn)溆谩?.培養(yǎng)液RPMI 1640液體培養(yǎng)液RPMI1640 (Gibco BRL) 10g，NaHOT3 2. Og,嗎啡啉丙磺酸(MOPS)(Sigma) 34. 5g(0. 165M)，加三蒸水 900ml 溶解，IN NaOH 調(diào) pH 至 7. 0(25°C )，三蒸水定容至IOOOml，O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌，分裝后于4°C保存?zhèn)溆谩Ｉ潮て咸烟黔傊腆w培養(yǎng)基(SDA)蛋白胨10g，葡萄糖40g，瓊脂18g，加三蒸水900ml溶解，加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，調(diào)整pH至7.0，以三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121°C，15min)后于4°C保存?zhèn)溆谩EPD 培養(yǎng)液酵母浸膏IOg,蛋白胨20g,葡萄糖20g,加三蒸水900ml溶解,加入2mg/ml氯霉素水溶液50ml，三蒸水定容至1000ml，高壓滅菌(121°C，15min)后于4°C保存?zhèn)溆谩?.儀器設(shè)備Multiskan MK3型酶標(biāo)檢測(cè)儀(芬蘭Labsystems產(chǎn)品)隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)THZ-82A臺(tái)式恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)Sff-CT-IF型超凈化工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)5.菌液制備實(shí)驗(yàn)前，用接種圈從4°C保存的SDA培養(yǎng)基上挑取白念珠菌、熱帶念珠菌等球狀菌少量，接種至Iml YEPD培養(yǎng)液，于30°C，200rpm振蕩培養(yǎng)，活化16h，使真菌處于指數(shù)生長(zhǎng)期后期。取該菌液至ImlYEro培養(yǎng)液中，用上述方法再次活化，16h后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整菌液濃度至I X IO3 5 X 103CFU/ml。6.藥敏板制備取無(wú)菌96孔板，于每排I號(hào)孔加RPMI 1640液體培養(yǎng)基100 μ I作空白對(duì)照；3 12號(hào)孔各加新鮮配制的菌液99 μ I ;2號(hào)孔分別加菌液196μ I和6. 4mg/ml氟康唑2 μ I ；12號(hào)孔不含藥物，只加菌液100 μ I作陽(yáng)性生長(zhǎng)對(duì)照。調(diào)配不同濃度的覆盆子提取物。在2號(hào)孔加相應(yīng)濃度的覆盆子提取物2 μ 1，3 11號(hào)孔各加I μ I。
對(duì)2 11號(hào)孔進(jìn)行10級(jí)倍比稀釋，使各孔的最終氟康唑濃度分別為64、32、16、8、4、2、1、0. 5,0. 25和O. 125 μ g/ml，而月季花提取物的濃度保持恒定，各孔中DMSO含量均低于1%。將各藥敏板于30°C恒溫箱培養(yǎng)。7. MIC8。值判定在30°C恒溫箱中，念珠菌培養(yǎng)48h后，用酶標(biāo)分析儀于630nm測(cè)各孔OD值。與陽(yáng)性對(duì)照孔比，以O(shè)D值下降80%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC8。(真菌生長(zhǎng)80%被抑制時(shí)的藥物濃度)。當(dāng)藥物的MIC8tl值超過(guò)測(cè)定濃度范圍時(shí)，按以下方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)=MICm值高于最高濃度64 μ g/ml時(shí),計(jì)為“> 64 μ g/ml” ；MIC80值為最低濃度或在最低濃度以下時(shí)，不作區(qū)別，均計(jì)為“彡O. 125yg/ml”。上述實(shí)驗(yàn)均平行操作2到3次，當(dāng)MIC8tl值能準(zhǔn)確重復(fù)或只差一個(gè)濃度時(shí)才被接受，并以較高濃度作為MIC8tl值；當(dāng)MIC8tl值相差兩個(gè)濃度以上吋，則需重新實(shí)驗(yàn)，直到符合要求為止。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I表I覆盆子與氟康唑合用對(duì)不同菌株的MIC8tl值(μ g/ml)
權(quán)利要求
1.覆盆子用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的覆盆子的藥材原料是薔薇科植物華東覆盆子的干燥果實(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的覆盆子是覆盆子藥材水提物或こ醇提取物的ー種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的こ醇提取是指用70%こ醇提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗真菌的應(yīng)用中的真菌包括1)敏感菌株敏感白色念珠菌(Y0109，SC5314)，敏感近平滑念珠菌(90018,22090)；2)耐藥菌株耐藥白色念珠菌(103，100，904，953，J28)，耐藥熱帶念珠菌(2718)，天然耐藥克柔念珠菌(44996，46)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗真菌的應(yīng)用中的耐藥菌株是對(duì)氟康唑耐受，敏感菌株是對(duì)氟康唑敏感。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的覆盆子的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗真菌藥物包括1)多烯類藥物兩性霉素B，甲帕霉素；2)唑類藥物氟康唑，咪康唑，酮康唑，伊曲康唑；3)其他藥物5_氟胞嘧啶，卡泊芬凈。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是將覆盆子用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品的用途。經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)，覆盆子提取物與氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和酮康唑等抗真菌藥合用，能不同程度地提高對(duì)淺表部和深部真菌感染的治療效果，并能使抗真菌藥物恢復(fù)對(duì)耐藥真菌的作用。因此可用于制備抗真菌藥物增效劑產(chǎn)品。
文檔編號(hào)A61K36/73GK102670767SQ201110059300
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者劉偉, 姜遠(yuǎn)英, 安毛毛, 曹永兵, 林輝, 王耘, 顧文文 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)