專利名稱：薰衣草總黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種總黃酮的制備方法，更具體地說是涉及薰衣草總黃酮制備方法的技術(shù)領(lǐng)域，屬于中藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
芳香植物薰衣草為唇形科薰衣草屬多年生亞灌木,主要有狹葉薰衣草Lavandulaangustifola、寬葉薰衣草L. spica、雜薰衣草L. intermedia三個(gè)來源植物,原產(chǎn)于阿爾卑斯山脈南麓的地中海沿岸地區(qū)，現(xiàn)廣泛栽培種植于世界各地。作為維吾爾醫(yī)常用藥材，薰衣草具有消散寒氣、補(bǔ)胃理腦、燥濕止痛之功效，用于胸腹脹滿、感冒咳喘、頭暈頭痛、心悸氣短、關(guān)節(jié)骨痛等病癥的治療，臨床應(yīng)用已有數(shù)千年的歷史，被收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊(cè)》中。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)薰衣草的研究多集中于其精油上，而對(duì)其非精油部分的研究較少。薰衣草非精油部分主要包含三萜、黃酮及酚酸類化學(xué)成分。其中，黃 酮類成分具抗氧化、抗炎、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療食品化妝品領(lǐng)域之中。2009年Torras-Claveria L等采用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)提純薰衣草精油后的藥渣進(jìn)行了抗氧化活性成分的研究，從中獲得了 23個(gè)黃酮和酚酸類成分，并通過高效液相色譜測(cè)定了這些成分的含量(J Agric Food Chem. 2007,55(21) :8436-43);國(guó)內(nèi)吳霞等從新疆薰衣草中分離得到了 7個(gè)黃酮類化合物(中國(guó)中藥雜志，2007，32 (9) =821-823.);楊潔等通過用50%乙醇提取、減壓濃縮和冷凍干燥獲得薰衣草總黃酮粗提物研究了該植物的抗氧化能力，發(fā)現(xiàn)其具有明顯清除超氧陰離子和羥自由基的能力(中國(guó)食品添加劑，2010，2 :162-165.)。然而在本發(fā)明以前，國(guó)內(nèi)外各種文獻(xiàn)對(duì)薰衣草黃酮的研究?jī)H局限于實(shí)驗(yàn)室中對(duì)各單體化合物的提取分離純化，文獻(xiàn)報(bào)道的薰衣草總黃酮僅僅是粗提物，即熏衣草50%乙醇提取物。薰衣草總黃酮及其制備方法卻沒有被研究，更沒有在工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用。為了解決這一問題，本發(fā)明提供了如下的方案。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種薰衣草總黃酮的制備方法，即大孔吸附樹脂吸附富集薰衣草總黃酮的方法。本發(fā)明所陳述的制備工藝具有自動(dòng)化程度高、成本低、無污染的優(yōu)點(diǎn)，能夠有效富集薰衣草中的黃酮類成分，這是以往文獻(xiàn)所沒有報(bào)道的。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種薰衣草總黃酮提取物是通過如下的技術(shù)方案制備的(I)原料準(zhǔn)備采集薰衣草全草后，洗凈，晾干或曬干，再將其粉碎成莖長(zhǎng)小于I厘米的粉末。(2)提取將處理好的薰衣草藥材，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去離子水加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 1-1. 2，在不斷攪拌下加入4-5倍重量的95%乙醇(v/v)，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，放置，備用。 進(jìn)一步將上述步驟提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%乙醇(v/v)加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；浸膏用去離子水混懸后，以乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加熱溶解，靜置24小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液，減壓濃縮，得浸膏B，放置，備用。⑶純化①將浸膏A以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以50-70%乙醇(v/v)洗脫，收集50-70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。②將浸膏A和浸膏B合并，以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以50-70%乙醇(v/v)洗脫，收集50-70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。 按上述步驟制備的薰衣草總黃酮提取物，其總黃酮含量的重量百分比在50% -70%之間。為了更好的理解本發(fā)明，下面用本發(fā)明的發(fā)明原理以及產(chǎn)品性能檢測(cè)結(jié)果來說明本發(fā)明比現(xiàn)有技術(shù)優(yōu)異之處。本發(fā)明的原理基于大孔吸附樹脂是一種由苯乙烯、二苯乙烯或a -甲基丙烯酸酯等聚合而成的高分子網(wǎng)狀孔穴結(jié)構(gòu)，是以吸附性和分子篩原理相結(jié)合的新型分離材料。該材料在水溶液中吸附力較強(qiáng)且具有良好的吸附選擇性。其柱層析以固相萃取的方法，在保證原料藥材標(biāo)示性成分含量的前提下，在吸附有效部位的同時(shí)將該植物中無效成分糖類和鞣質(zhì)等雜質(zhì)選擇性地去除。大孔樹脂的常用型號(hào)有D-101、AB-8和HPD-600等，其特點(diǎn)是吸附容量大、工藝流程短、得率高、純度高、樹脂再生容易、效果可靠等。在本發(fā)明中，大孔樹脂在吸附黃酮的同時(shí)將植物中的無效成分糖類、鞣質(zhì)等雜質(zhì)分離除去，并在保證黃酮類成分含量的前提下，有效地富集薰衣草總黃酮。本發(fā)明提供的一種薰衣草總黃酮提取物的制備方法，分別通過去離子水提取或去離子水和95%乙醇(v/v)聯(lián)合提取，進(jìn)一步采用國(guó)產(chǎn)大孔吸附樹脂AB-8型或DlOl型或HPD-100或HPD-400或HPD-450或HPD-500或HPD-600或HPD-750富集純化獲得薰衣草總黃酮，以蘆丁為對(duì)照品，按《中國(guó)藥典》總黃酮測(cè)定方法測(cè)定總黃酮含量的重量百分比為50% -70%。具體步驟如下(I)原料準(zhǔn)備采集薰衣草全草后，洗凈，晾干或曬干，再將其粉碎成莖長(zhǎng)小于I厘米的粉末。(2)提取將處理好的薰衣草藥材，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去離子水加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 1-1. 2，在不斷攪拌下加入4-5倍重量的95%乙醇(v/v)，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，放置，備用。進(jìn)一步將上述步驟提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%乙醇(v/v)加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；浸膏用去離子水混懸后，以乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加熱溶解，靜置24小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液，減壓濃縮，得浸膏B，放置，備用。(3)純化①將浸膏A以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以50-70%乙醇(v/v)洗脫，收集50-70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。②將浸膏A和浸膏B合并，以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以50-70%乙醇(v/v)洗脫，收集50-70%乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I(I)稱取狹葉薰衣草10kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入8倍重量的去離子水加熱回流提取3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 1，在不斷攪拌下加入4倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，放置，備用。(2)將上述步驟提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入10倍重量的95%(v/v)乙醇加熱回流提取2次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；浸膏用水混懸后，以乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加熱溶解，靜置24小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液中，減壓濃縮，得浸膏B，放置，備用。實(shí)施例2將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解，上AB-8大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，黃酮含量的重量百分比為62. 35%，得率為4. 54%。實(shí)施例3將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解，上DlOl大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，黃酮含量的重量百分比為56. 12%，得率為4. 27%。實(shí)施例4將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，HPD600大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以50% (v/v)乙醇洗脫，收集50% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，黃酮含量的百分比為50. 21%，得率為3.01%。實(shí)施例5將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，上HPD500大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為53. 81%，得率為 3. 57%。實(shí)施例6將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，上HPD100大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為56. 68%，得率為 3. 73%。 實(shí)施例7將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，上HPD400大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為59. 70%，得率為 3. 92%。實(shí)施例8將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，上HPD450大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為58. 60%，得率為 3. 59%。實(shí)施例9將實(shí)例I中的浸膏A以去離子水混懸溶解后，上HPD750大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為56. 38%，得率為 3. 52%。實(shí)施例10將實(shí)例I中的浸膏A和浸膏B合并后以去離子水混懸溶解，上AB-8大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70%(v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即得薰衣草總黃酮，含量為69. 31 %，得率為4. 49%。實(shí)施例11(I)稱取寬葉薰衣草0. 5kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入12倍重量的去離子水加熱回流提取2次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 2，在不斷攪拌下加入4倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，備用；
(2)將步驟⑴提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入6倍重量的95% (v/v)乙醇加熱回流提取3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；浸膏用水混懸后，以乙酸乙酯萃??；萃取液濃縮至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加熱溶解，靜置24小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液中，減壓濃縮，得浸膏B，備用；(3)將浸膏A和浸膏B合并，以去離子水混懸溶解，上AB-8型大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以70% (v/v)乙醇洗脫，收集70% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮，含量為62. 62%，得率為4. 41%。實(shí)施例12
(I)稱取雜薰衣草0. 5kg，粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入12倍重量的去離子水加熱回流提取I次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 2，在不斷攪拌下加入5倍重量的95% (v/v)乙醇，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，備用；
(2)將步驟(I)提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入12倍重量的95% (v/v)乙醇加熱回流提取I次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏；浸膏用水混懸后，以乙酸乙酯萃??；萃取液濃縮至浸膏后，以95%乙醇(v/v)加熱溶解，靜置12小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液中，減壓濃縮，得浸膏B，備用；(3)將浸膏A和浸膏B合并，以去離子水混懸溶解，上DlOl型大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%乙醇(v/v)洗脫除雜，再以60% (v/v)乙醇洗脫，收集60% (v/v)的乙醇洗脫液，濃縮干燥得棕黃色 粉末，即得薰衣草總黃酮，含量為56. 33%，得率為4. 08%。
權(quán)利要求
1.一種薰衣草總黃酮的制備方法，其特征在于采用如下步驟進(jìn)行 (1)將薰衣草全草粉碎成小于Icm的粉末，置于提取罐中，加入8到12倍重量的去離子水加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至溶液比重為I. 1-1. 2，在不斷攪拌下加入4-5倍重量的95%こ醇(v/v)，放置12小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮，得浸膏A，放置，備用。
(2)將步驟(I)提取后剩下的藥渣，晾干后，置于提取罐中，加入6到12倍重量的95%こ醇(v/v)加熱回流提取1-3次，過濾，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，以こ酸こ酯萃??；萃取液濃縮至浸膏后，以95%こ醇(v/v)加熱溶解，靜置24小時(shí)，過濾，濾液合并入萃取后溶液中，減壓濃縮，得浸膏B，放置，備用。
(3)將浸膏A以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%こ醇(v/v)洗脫除雜，再以50-70%こ醇(v/v)洗脫，收集50-70%こ醇(v/v)洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。
或?qū)⒔郃和浸膏B合井，以去離子水混懸溶解后，上大孔樹脂柱吸附，先分別以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10%こ醇(v/v)洗脫，再以50-70%こ醇(v/v)洗脫，收集50-70%こ醇(v/v)洗脫液，濃縮干燥得棕黃色粉末，即為薰衣草總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的薰衣草總黃酮的制備方法，其特征在于所得到的薰衣草總黃酮為棕黃色粉末，總黃酮含量的重量百分比在50%至70%之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的薰衣草總黃酮的制備方法，其特征在于其來源植物分別為狹葉薰衣草 Lavandula angustifolia、寬葉薰衣草 Lavandula spica、雜薰衣草 Lavandulaintermedia 的全草。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的薰衣草總黃酮的制備方法，其特征在于所使用的大孔吸附樹脂為國(guó)產(chǎn)大孔吸附樹脂AB-8型或DlOl型或HPD-100或HPD-400或HPD-450或HPD-500或HPD-600 或 HPD-750。
全文摘要
本發(fā)明涉及薰衣草總黃酮的制備方法，其特征包含以下步驟①將薰衣草置于提取罐中，以去離子水加熱回流提取，提取液濃縮至溶液比重為1.1-1.2，在不斷攪拌下加入4-5倍重量的95％乙醇，放置12h，過濾，減壓濃縮得浸膏A；②以95％乙醇將步驟①產(chǎn)生的藥渣加熱回流提取，提取液減壓濃縮后，以乙酸乙酯萃??；萃取液濃縮至浸膏后，用95％乙醇加熱溶解，靜置24h，過濾，濾液合并入萃取后溶液中，減壓濃縮，得浸膏B；③將浸膏A或浸膏A和B合并后以去離子水溶解，上大孔樹脂柱，以5倍柱體積的去離子水和5倍柱體積的10％乙醇洗脫除雜后，再以50-70％醇洗脫，收集50-70％乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得。
文檔編號(hào)A61K36/53GK102688284SQ20111006760
公開日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者徐芳, 李晨陽(yáng), 譚為, 趙軍, 陳燕 申請(qǐng)人:新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所