專利名稱：一種梔子滲漉液質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥成藥質(zhì)量控制，具體涉及一種中藥桅子滲漉液生產(chǎn)過程比重及桅 子苷質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
中藥是我國最具有原創(chuàng)和自主知識產(chǎn)權(quán)的產(chǎn)業(yè)之一。中成藥與飲片是中藥的主要 臨床應(yīng)用形式。由于中藥療效的物質(zhì)基礎(chǔ)的復(fù)雜性，中成藥的質(zhì)量控制技術(shù)手段較為粗放， 體現(xiàn)在中成藥的質(zhì)量控制采用的是工藝制法控制，加上代表性的化學(xué)指標(biāo)性成分定量檢測 和制劑定性檢查。即，“過程上的定性加點(diǎn)上的定量”。沒有全過程的以理化指標(biāo)為基礎(chǔ)的 全面質(zhì)量控制，這是導(dǎo)致中成藥質(zhì)量、臨床療效穩(wěn)定性差的重要原因之一。桅子為常用中藥，是茜草科植物山桅Cardenia jasminoides Ellis.的果實(shí)，性苦 寒、無毒，歸心、肝、肺、胃、三焦經(jīng)，具瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒的功效，臨床上常用于 熱病心煩、高熱煩躁、濕熱黃疸、小便短赤、熱淋、血淋、血熱出血、癰腫瘡毒，以及外用治療 扭挫傷痛等。桅子含有三類主要有效化學(xué)成分環(huán)烯醚萜苷、有機(jī)酸以及色素，其中環(huán)烯醚 萜苷類成分中桅子苷含量最高，且具有多種藥理活性，為中國藥典中桅子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中指定 的含量測定的指標(biāo)成分。近紅外(NIR)光譜定性定量檢測技術(shù)是建立在傳統(tǒng)理化分析手段基礎(chǔ)上的二級 分析方法，依賴于近紅外光譜儀、計(jì)算機(jī)技術(shù)和化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件基礎(chǔ)，是目前應(yīng)用在化工煙 草、石油等行業(yè)較為成熟的在線和快速檢測手段。近紅外光譜分析技術(shù)是綠色、快速、非破 壞性的質(zhì)量控制、品質(zhì)分析和在線分析技術(shù)，已成為近年來發(fā)展最快的分析測試技術(shù)之一。 但尚未有采用OTR光譜技術(shù)用于桅子滲漉液比重和桅子苷含量同時(shí)分析，進(jìn)行生成過程質(zhì) 量控制方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了進(jìn)一步提高和穩(wěn)定桅子滲漉液的生產(chǎn)質(zhì)量，克服中成藥無生產(chǎn)過程的理化指 標(biāo)在線控制，本發(fā)明應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)對桅子滲漉液比重和指標(biāo)成分進(jìn)行連續(xù)取樣和現(xiàn) 場分析，結(jié)合傳統(tǒng)定量檢測，建立了在線應(yīng)用的滲漉液比重、指標(biāo)成分的近紅外模型。本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種測定桅子滲漉液比重及桅子苷含量的方 法，其特征在于包括如下步驟步驟1、測定合格桅子滲漉液的比重及桅子苷含量，并采集近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建立桅子滲漉液近紅外光譜與比重及桅子苷含 量之間的對應(yīng)模型；步驟3、測定待測的桅子滲漉液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對應(yīng)模型，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測的桅子滲漉液樣品的比 重及桅子苷含量。
所述桅子滲漉液的制備及測定步驟如下取桅子藥材，粉碎為粗粉，照流浸膏及浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典》附錄)， 用60%乙醇作溶劑浸沒藥材，浸漬M小時(shí)后，以3-細(xì)1/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，現(xiàn)場收集濃 縮液，取樣測定比重和桅子苷含量，并采集近紅外光譜。本發(fā)明所述的方法，其特征在于利用一次近紅外光譜采集，通過建立的軟件模 型，同時(shí)獲得中藥桅子滲漉液比重和桅子苷含量。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光譜采集時(shí)，采用透 射方式進(jìn)行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果，分辨率0. 3-20nm,掃描光譜范圍 為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光譜時(shí)，采用透 射方式進(jìn)行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光譜時(shí)，采用 透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100-2300nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光譜時(shí)，以現(xiàn)場取樣 方式、在線取樣方式和旁線取樣方式之一進(jìn)行。本發(fā)明所述的方法，其特征在于其特征在于樣品桅子苷RP-HPLC分析條件包括 色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m，柱溫25°C )，流動(dòng)相為乙腈-水(15 85)，進(jìn)樣 體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長238nm。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn) 平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測效果驗(yàn) 證。本發(fā)明所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn) 平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；⑵采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測效果驗(yàn) 證；(4)精密度試驗(yàn)；(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)。優(yōu)選的本發(fā)明的測定方法，步驟如下步驟1、測定合格桅子滲漉液的比重及桅子苷含量，并采集近紅外光譜；樣品制備與收集取桅子藥材1500g，粉碎為粗粉，照流浸膏及浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典 2010版》一部附錄10)，用60%乙醇作溶劑浸沒藥材，浸漬M小時(shí)后，以3 細(xì)1/分鐘的 速度進(jìn)行滲漉，每200ml為一份，經(jīng)取樣測定比重和桅子苷濃度，并采集近紅外光譜，共采 集樣品57份，共收集約1. 2L滲漉液，減壓回收醇至稠膏狀(每Iml相當(dāng)藥材2. 5g)，樣品桅子苷HPLC分析照中國藥典2010版桅子含量測定方法，采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品 進(jìn)行桅子苷含量分析，分析條件如下色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m,柱溫25°C )， 流動(dòng)相為乙腈-水(15 85)，進(jìn)樣體積20uL,流速lml/min, UV檢測波長238nm,圖譜見附
5圖1、附圖2，樣品比重測定采用安東帕便攜式比重計(jì)DMA35測定(室溫)，獲取NIR光譜掃描光譜時(shí)在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長an，待 溶液穩(wěn)定并無氣泡后進(jìn)行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm，共得到61個(gè)樣品的總光譜圖，見附圖3，步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分 別建立桅子滲漉液近紅外光譜與比重及桅子苷含量之間的對應(yīng)模型；光譜預(yù)處理對掃描得到的原始吸收光譜進(jìn)行光譜預(yù)處理，以消除噪音和基線漂移 的影響，采用的預(yù)處理方法為一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)，一階導(dǎo)數(shù)光譜圖見 圖4，經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移，建立PLSl數(shù)學(xué)模型樣品順序編號，隨機(jī)選擇10個(gè)作為外部驗(yàn)正集樣品，其余作 為建模樣品，將經(jīng)過預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法 (PLSl)，交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型，NIR 和HPLC測定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學(xué)值誤差Residual這2個(gè)統(tǒng)計(jì) 量來檢驗(yàn)剔除，經(jīng)過異常值的剔除進(jìn)行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型，得到的樣品比重及 桅子苷的NIR光譜預(yù)測值與樣品比重實(shí)測值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏差 較小，樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9560, RMSECV = 0. 000899，桅子苷模型的主 成分維數(shù)為 6，R2 = 0. 9782，RMSECV = 0. 086497，步驟3、測定待測的桅子滲漉液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對應(yīng)模型，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測的桅子滲漉液樣品的比 重及桅子苷含量。本發(fā)明應(yīng)用OTR光譜技術(shù)對中藥桅子滲漉過程中指標(biāo)成分桅子苷及滲漉液比重 進(jìn)行連續(xù)取樣和現(xiàn)場分析，結(jié)合傳統(tǒng)定量檢測，建立了在線應(yīng)用的桅子滲漉液指標(biāo)成分桅 子苷及滲漉液比重的近紅外模型。該方法為桅子滲漉過程中指標(biāo)成分及物理指標(biāo)快速定量 分析和生產(chǎn)過程中的在線檢測，控制產(chǎn)品的質(zhì)量提供了有效的分析方法。


圖1桅子苷對照品HPLC圖譜圖2桅子滲漉液樣品HPLC圖譜圖3桅子滲漉液樣品近紅外光譜原始總光譜4桅子滲漉液樣品近紅外光譜一階導(dǎo)數(shù)光譜圖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不表明對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。實(shí)施例1儀器與試藥儀器AOTF Luminar 5030-731近紅外光譜分析儀(美國BRIMR0SE公司)，SNAP 光譜采集軟件和CAMO化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件；AglientllOO色譜儀(美國Agilent公司)，DAD二極管陣列檢測器；安東帕便攜式密度計(jì)DMA35(奧地利Anton I^ar公司)；玻璃層析柱 150 X 15cm (上海精工儀器公司)試藥桅子藥材(江西匯仁藥業(yè)有限公司)；桅子苷對照品(中國藥品生物制品檢 定所)；乙醇為藥用乙醇(提取用)，甲醇為色譜純試劑，水為超純水。方法與結(jié)果1樣品制備與收集取桅子藥材1500g，粉碎為粗粉，照流浸膏及浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典 2010版》一部附錄10)，用60%乙醇作溶劑浸沒藥材，浸漬M小時(shí)后，以3 細(xì)1/分鐘的 速度進(jìn)行滲漉，每200ml為一份，經(jīng)取樣測定比重和桅子苷濃度，并采集近紅外光譜，共采 集樣品57份，共收集約1. 2L滲漉液，減壓回收醇至稠膏狀(每Iml相當(dāng)藥材2. 5g)。2樣品桅子苷HPLC分析照中國藥典2010版桅子含量測定方法，采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品 進(jìn)行桅子苷含量分析，分析條件如下色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m,柱溫25°C )， 流動(dòng)相為乙腈-水(15 85)，進(jìn)樣體積20uL，流速lml/min，UV檢測波長238nm。圖譜見 附圖1、附圖2。3樣品比重測定采用安東帕便攜式比重計(jì)DMA35測定(室溫)。4獲取NIR光譜掃描光譜時(shí)在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待 溶液穩(wěn)定并無氣泡后進(jìn)行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍 為1100 2300nm。共得到61個(gè)樣品的總光譜圖，見附圖3。5建立模型5. 1光譜預(yù)處理對掃描得到的原始吸收光譜進(jìn)行光譜預(yù)處理，以消除噪音和基線 漂移的影響。采用的預(yù)處理方法為一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)。一階導(dǎo)數(shù)光 譜圖見圖4。經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂 移。5. 2建立PLSl數(shù)學(xué)模型樣品順序編號，隨機(jī)選擇10個(gè)作為外部驗(yàn)正集樣品，其余 作為建模樣品。將經(jīng)過預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法 (PLSl)，交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型。OTR 和HPLC測定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學(xué)值誤差Residual這2個(gè)統(tǒng)計(jì) 量來檢驗(yàn)剔除。經(jīng)過異常值的剔除進(jìn)行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型。得到的樣品比重 及桅子苷的OTR光譜預(yù)測值與樣品比重實(shí)測值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏 差較小。樣品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9560，RMSECV = 0. 000899，桅子苷模型 的主成分維數(shù)為 6，R2 = 0. 9782，RMSECV = 0. 086497。5. 3模型預(yù)測效果驗(yàn)證以建立的校正模型對10份外部驗(yàn)正集樣品進(jìn)行分析。樣 品比重及淫羊藿苷的測試結(jié)果分別見表1，表2。OTR光譜預(yù)測值與樣品比重真值、桅子苷 HPLC測定真值的相關(guān)系數(shù)r分別為0.9706和0.9705。結(jié)果表明，OTR光譜預(yù)側(cè)值與樣品 比重實(shí)測值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好。表1滲漉液比重校正模型對外部驗(yàn)證集樣品的分析結(jié)果(n = 10)
權(quán)利要求
1.一種測定桅子滲漉液比重及桅子苷含量的方法，其特征在于包括如下步驟步驟1、測定合格桅子滲漉液的比重及桅子苷含量，并采集近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建立桅子滲漉液近紅外光譜與比重及桅子苷含量之 間的對應(yīng)模型；步驟3、測定待測的桅子滲漉液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對應(yīng)模型，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測的桅子滲漉液樣品的比重及 桅子苷含量。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于其特征在于采集中藥桅子滲 漉液近紅外光譜采集時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是1-1000次掃描的平均結(jié)果， 分辨率0. 3-20nm，掃描光譜范圍為1100_2300nm。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光 譜時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是200-500次掃描的平均結(jié)果，分辨率l-5nm，掃描 光譜范圍為1100-2300nm。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于采集中藥桅子滲漉液近紅外光 譜時(shí)，采用透射方式進(jìn)行，每一張光譜都是300次掃描的平均結(jié)果，分辨率2nm，掃描光譜范 圍為 1100-2300nm。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于樣品桅子苷RP-HPLC分析條件包括色譜 柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm，5 μ m，柱溫25°C )，流動(dòng)相為乙腈-水(15 85)，進(jìn)樣體積 20uL，流速 lml/min，UV 檢測波長 238nm。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟2中模型的建立包括(1)一階導(dǎo)數(shù)9 點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交叉-驗(yàn)證法 (cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和預(yù)測效果驗(yàn) 證。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于其特征在于步驟2中模型的建立包括(1) 一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)光譜預(yù)處理；(2)采用偏最小二乘法(PLSl)、交 叉-驗(yàn)證法(cross-validation)用Unscrambler定量分析軟件建立模型；(3)模型校正和 預(yù)測效果驗(yàn)證；(4)精密度試驗(yàn)；(5)穩(wěn)定性試驗(yàn)。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟如下步驟1、測定合格桅子滲漉液的比重及桅子苷含量，并采集近紅外光譜；樣品制備與收集取桅子藥材1500g，粉碎為粗粉，照流浸膏及浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典2010版》 一部附錄10)，用60% L醇作溶劑浸沒藥材，浸漬M小時(shí)后，以3 細(xì)1/分鐘的速度進(jìn)行 滲漉，每200ml為一份，經(jīng)取樣測定比重和桅子苷濃度，并采集近紅外光譜，共采集樣品57 份，共收集約1. 2L滲漉液，減壓回收醇至稠膏狀(每Iml相當(dāng)藥材2. 5g)，樣品桅子苷HPLC分析照中國藥典2010版桅子含量測定方法，采用RP-HPLC連續(xù)收集的所有滲漉液樣品進(jìn)行 桅子苷含量分析，分析條件如下色譜柱YMC ODS分析柱(6 X 150mm, 5 μ m,柱溫25°C )，流 動(dòng)相為乙腈-水(15 85)，進(jìn)樣體積20uL，流速11111/1^11，而檢測波長23811111，圖譜見附圖.1、附圖2，樣品比重測定采用安東帕便攜式比重計(jì)DMA35測定(室溫)， 獲取OTR光譜掃描光譜時(shí)在樣品溶液中浸入OTR光譜儀自帶的光纖透射式探頭，光纖長2m，待溶液 穩(wěn)定并無氣泡后進(jìn)行掃描.測試條件為掃描次數(shù)300次，分辨率2nm，掃描光譜范圍為 1100 2300nm，共得到61個(gè)樣品的總光譜圖，見附圖3，步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別 建立桅子滲漉液近紅外光譜與比重及桅子苷含量之間的對應(yīng)模型；光譜預(yù)處理對掃描得到的原始吸收光譜進(jìn)行光譜預(yù)處理，以消除噪音和基線漂移的影 響，采用的預(yù)處理方法為一階導(dǎo)數(shù)9點(diǎn)平滑法(savitzky-golay)，一階導(dǎo)數(shù)光譜圖見圖4， 經(jīng)一階導(dǎo)數(shù)處理可以很好的消除樣品由于顏色差別引起的光譜基線偏移和漂移，建立PLSl數(shù)學(xué)模型樣品順序編號，隨機(jī)選擇10個(gè)作為外部驗(yàn)正集樣品，其余作為建模 樣品，將經(jīng)過預(yù)處理后的光譜數(shù)據(jù)與HPLC分析數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，采用偏最小二乘法(PLSl)， 交叉-驗(yàn)證法(cross-validation)，用Unscrambler定量分析軟件建立模型，NIR和HPLC 測定的異常值分別采用光譜影響值Leverage和化學(xué)值誤差Residual這2個(gè)統(tǒng)計(jì)量來檢驗(yàn) 剔除，經(jīng)過異常值的剔除進(jìn)行優(yōu)化，得到較為理想的校正模型，得到的樣品比重及桅子苷的 NIR光譜預(yù)測值與樣品比重實(shí)測值及HPLC分析值之間相關(guān)性良好，測定數(shù)據(jù)偏差較小，樣 品比重模型的主成分維數(shù)為7，R2 = 0. 9560，RMSECV = 0. 000899，桅子苷模型的主成分維 數(shù)為 6，R2 = 0. 9782，RMSECV = 0. 086497，步驟3、測定待測的桅子滲漉液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對應(yīng)模型，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測的桅子滲漉液樣品的比重及 桅子苷含量。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述桅子滲漉液的制備及測定步驟如下 取桅子藥材，粉碎為粗粉，照流浸膏及浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(《中國藥典》附錄)，用 60%乙醇作溶劑浸沒藥材，浸漬M小時(shí)后，以3-%il/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，現(xiàn)場收集濃縮 液，取樣測定比重和桅子苷含量，并采集近紅外光譜。
全文摘要
本發(fā)明提供一種測定梔子滲漉液比重及梔子苷含量的方法，包括如下步驟步驟1、測定合格梔子滲漉液的比重及梔子苷含量，并采集近紅外光譜；步驟2、采用化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別建立梔子滲漉液近紅外光譜與比重及梔子苷含量之間的對應(yīng)模型；步驟3、測定待測的梔子滲漉液樣品的近紅外光譜；步驟4、利用對應(yīng)模型，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)軟件分別獲得待測的梔子滲漉液樣品的比重及梔子苷含量。
文檔編號A61P17/00GK102119973SQ20111006830
公開日2011年7月13日 申請日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者李勝華, 梅玲華, 王木蘭, 耿炤, 胡浩武 申請人:江西匯仁藥業(yè)有限公司