專利名稱：藥西瓜提取物及其生產(chǎn)方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從植物藥西瓜的果實(shí)中提取的提取物及其生產(chǎn)方法和應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng) 域，是一種藥西瓜提取物及其生產(chǎn)方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著人類生活節(jié)奏的加快，生活模式的改變，人類疾病的模式已經(jīng)改變，已經(jīng)轉(zhuǎn)化 為以腫瘤、心臟病、糖尿病等慢性疾病為主。調(diào)查表明，腫瘤疾病已成為當(dāng)今世界威脅人類 健康最嚴(yán)重的疾病之一，其發(fā)病呈現(xiàn)年輕化趨勢，我國腫瘤發(fā)病率每年以3%到5%的速度在 提高，世界上每年新發(fā)腫瘤80%發(fā)生在中國、印度、巴西等發(fā)展中國家。相關(guān)調(diào)查顯示，我 國城市當(dāng)中男性發(fā)病率最高的腫瘤，是肺癌、胃癌、肝癌，而女性以乳腺癌、宮頸癌為多。其 中惡性腫瘤患者的每年醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)800億，約占醫(yī)療衛(wèi)生總費(fèi)用的20%，腫瘤已成為造成 我國最佳勞動力損失、醫(yī)療費(fèi)用上漲的一大原因。然而，國內(nèi)抗腫瘤新藥長期處于“饑渴狀 態(tài)”。目前，腫瘤疾病的高死亡率不僅使無數(shù)家庭遭受痛苦，也使他們背負(fù)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù) 擔(dān)。因此，抗腫瘤疾病藥物的研究一直是醫(yī)藥界關(guān)注的熱點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)新的抗腫瘤藥物從來都是 困擾醫(yī)藥學(xué)界的難題。國內(nèi)外對腫瘤藥物的研發(fā)投入正在逐步加大。目前抗腫瘤藥物主要分為烷化劑、 抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、抗腫瘤植物藥及其衍生物、其他抗腫瘤藥與輔助治療藥5個亞 類。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，抗腫瘤中藥主要有兩類一類是細(xì)胞毒藥物，即對腫瘤細(xì)胞具有 直接殺傷作用，主要含有天然抗腫瘤活性成分，可直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長。第二類是具 有免疫增強(qiáng)作用、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑樣作用的藥物，通過調(diào)節(jié)臟腑氣血陰陽的失衡，改善機(jī)體 全身的病理狀態(tài)，增加機(jī)體自身的抗病力。其中抗腫瘤植物藥的藥用成分則屬于免疫促進(jìn) 劑，攜帶特定信息，易被遭受腫瘤細(xì)胞作用的機(jī)體正常組織所識別，使受損的免疫功能恢復(fù) 至正常水平。由于化學(xué)合成的抗腫瘤藥物的毒副作用及成本、環(huán)保等問題逐漸受到重視，近 年來，從中藥和天然藥物中尋找新的抗腫瘤藥物成為世界關(guān)注的熱點(diǎn)，它可以與化療同時 應(yīng)用，能提高療效，減輕化療藥物的毒副作用。現(xiàn)代中藥配合手術(shù)、放療、化療，能夠增效減 毒，提高治愈率，不能做手術(shù)和放化療的中晚期病人，用中藥可以控制病情、延長壽命、提高 生存質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)帶瘤生存。另外，有并發(fā)癥的病人也可以加用一些對癥治療的中藥。藥西瓜，又名苦西瓜，系維吾爾醫(yī)習(xí)用藥材，維語名Mqiktamiz (阿其克塔吾孜)， 為葫蘆科植物藥西瓜GirWAz1S colocynthis (L. ) Schrad.的干燥成熟果實(shí)。藥西瓜原植 物為多年生或一年生草質(zhì)藤本植物，其主要藥用部位為果實(shí)。藥西瓜原產(chǎn)于北非、中亞和西 亞各國，我國不產(chǎn)。藥西瓜是世界伊斯蘭各國臨床應(yīng)用的藥材之一，在北非民間用于治療風(fēng) 濕病、血液病，同時作為腹瀉藥在民間應(yīng)用甚為廣泛。傳統(tǒng)維吾爾醫(yī)認(rèn)為，藥西瓜[性]“三 級熱，二級干”，能清除異常粘液質(zhì)和黑膽質(zhì)，祛散寒濕，通絡(luò)止痛，開胸止咳，用于頭痛，偏 頭痛，癱瘓癡呆，癲癇健忘，關(guān)節(jié)骨痛，心胸痹阻，耳聾眼花，水腫便秘，黃疸咳喘。目前，尚未 見到藥西瓜及其提取物在抗腫瘤方面的研究和報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物的藥西瓜提取物及其生產(chǎn)方法和應(yīng)用，該 藥西瓜提取物特別能用于制備抗腫瘤藥物。本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種用于制備抗腫瘤藥物的藥 西瓜提取物，其按下述步驟得到
第一步，將藥西瓜果實(shí)粉碎過10目至30目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水和/或乙醇 粗提，其中，水粗提為將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下 加熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液；乙醇粗提為將藥西瓜果實(shí)粉 末加8倍至10倍重量份的30%至90%的乙醇水溶液，在80°C至100°C提取兩次，每次2小 時至3小時，過濾，合并濾液；
第二步，將上述濾液濃縮至原體積的三分之一，得濃縮液，加相當(dāng)于濃縮液體積1倍量 至2倍量的無水乙醇，室溫放置沉淀12小時至M小時，濾除沉淀得到乙醇溶液；
第三步，將上述乙醇溶液濃縮至原體積的五分之一至二分之一后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值 為3至6，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；其中，大孔樹脂采用弱極性大孔樹脂， 弱極性大孔樹脂選用HPD400、D-101、AB-8型弱極性大孔樹脂中的一種，大孔樹脂與聚酰胺 樹脂混合使用時，按重量比1比1進(jìn)行混合；
第四步，以相當(dāng)于3至8個層析柱體積的去離子水沖洗上述層析柱，再以10%至90% 的乙醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每濃度洗脫劑的用量相當(dāng)于3至8個層析柱體積，流速為2 至5個層析柱體積/小時，收集乙醇洗脫液并合并；
第五步，將上述合并后的乙醇洗脫液在40°C至90°C、0.07 Mpa至0. IMpa下濃縮，回收 乙醇，再在50°C至80°C、0. 07 Mpa至0. IMpa下減壓干燥，即得所需的藥西瓜提取物。本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種用于制備抗腫瘤藥物的藥 西瓜提取物的生產(chǎn)方法，其按下述步驟進(jìn)行
第一步，將藥西瓜果實(shí)粉碎過10目至30目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水和/或乙醇 粗提，其中，水粗提為將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下 加熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液；乙醇粗提為將藥西瓜果實(shí)粉 末加8倍至10倍重量份的30%至90%的乙醇水溶液，在80°C至100°C提取兩次，每次2小 時至3小時，過濾，合并濾液；
第二步，將上述濾液濃縮至原體積的三分之一，得濃縮液，加相當(dāng)于濃縮液體積1倍量 至2倍量的無水乙醇，室溫放置沉淀12小時至M小時，濾除沉淀得到乙醇溶液；
第三步，將上述乙醇溶液濃縮至原體積的五分之一至二分之一后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值 為3至6，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；其中，大孔樹脂采用弱極性大孔樹脂， 弱極性大孔樹脂選用HPD400、D-101、AB-8型弱極性大孔樹脂中的一種，大孔樹脂與聚酰胺 樹脂混合使用時，按重量比1比1進(jìn)行混合；
第四步，以相當(dāng)于3至8個層析柱體積的去離子水沖洗上述層析柱，再以10%至90% 的乙醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每濃度洗脫劑的用量相當(dāng)于3至8個層析柱體積，流速為2 至5個層析柱體積/小時，收集乙醇洗脫液并合并；
第五步，將上述合并后的乙醇洗脫液在40°C至90°C、0.07 Mpa至0. IMpa下濃縮，回收 乙醇，再在50°C至80°C、0. 07 Mpa至0. IMpa下減壓干燥，即得所需的藥西瓜提取物。
本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種上述藥西瓜提取物的藥物 組合物，其以該藥西瓜提取物為有效成分，與藥學(xué)上可接受的載體所組成。本發(fā)明的技術(shù)方案之四是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種上述藥物組合物的制劑類 型，選自片劑、糖衣劑片、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、 緩釋膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、 注射劑、粉針劑、凍干粉劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、滴丸劑或貼劑。本發(fā)明的技術(shù)方案之五是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種上述藥西瓜提取物在制備 抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案之五是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的一種上述藥物組合物在制備抗 腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的藥西瓜提取物具有顯著的抗腫瘤作用，且口服給藥安全，可用于制 備抗腫瘤藥物；本發(fā)明首次提出藥西瓜提取物具有抗腫瘤活性。該生產(chǎn)方法簡單易行，工藝 可靠，所得提取物質(zhì)量穩(wěn)定；生產(chǎn)中所使用的材料可通過乙醇回收和樹脂再生循環(huán)利用，生 產(chǎn)成本低，適合產(chǎn)業(yè)化。
具體實(shí)施例方式發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)上述發(fā)明的技術(shù)方案和實(shí)際情況來確定具體 的實(shí)施方式。下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步論述。實(shí)施例1 該藥西瓜提取物按下述步驟得到
第一步，將藥西瓜果實(shí)粉碎過10目至30目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水和/或乙醇 粗提，其中，水粗提為將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下 加熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液；乙醇粗提為將藥西瓜果實(shí)粉 末加8倍至10倍重量份的30%至90%的乙醇水溶液，在80°C至100°C提取兩次，每次2小 時至3小時，過濾，合并濾液；
第二步，將上述濾液濃縮至原體積的三分之一，得濃縮液，加相當(dāng)于濃縮液體積1倍量 至2倍量的無水乙醇，室溫放置沉淀12小時至M小時，濾除沉淀得到乙醇溶液；
第三步，將上述乙醇溶液濃縮至原體積的五分之一至二分之一后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值 為3至6，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；其中，大孔樹脂采用弱極性大孔樹脂， 弱極性大孔樹脂選用HPD400、D-101、AB-8型弱極性大孔樹脂中的一種。大孔樹脂與聚酰胺 樹脂混合使用時，按重量比1比1進(jìn)行混合；
第四步，以相當(dāng)于3至8個層析柱體積的去離子水沖洗上述層析柱，再以10%至90% 的乙醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每濃度洗脫劑的用量相當(dāng)于3至8個層析柱體積，流速為2 至5個層析柱體積/小時，收集乙醇洗脫液并合并；
第五步，將上述合并后的乙醇洗脫液在40°C至90°C、0.07 Mpa至0. IMpa下濃縮，回收 乙醇，再在50°C至80°C、0. 07 Mpa至0. IMpa下減壓干燥，即得所需的藥西瓜提取物。實(shí)施例2 將藥西瓜果實(shí)粉碎過20目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水粗提將藥西 瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下加熱回流提取兩次，每次1. 5小 時至3小時，過濾，合并濾液，濃縮至原體積的三分之一，加濃縮液體積1倍量至2倍量的無水乙醇放置沉淀12小時，濾除沉淀，濾液濃縮后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值為3至6，上AB-8型 大孔樹脂層析柱，待上樣液全部吸附后，以3至8個層析柱體積去離子水沖洗層析柱，再 以50%、70%、90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每濃度乙醇用量為3至8個層析柱體積，流速為每小 時2至5個層析柱體積，收集乙醇洗脫液，合并后于60°C至90°C濃縮，濃縮液再于50°C至 80°C減壓干燥，即得藥西瓜提取物。實(shí)施例3 與實(shí)施例1至實(shí)施例2的不同之處在于上述層析柱處理時以30%、50%、 70%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例4 與實(shí)施例1至實(shí)施例3的不同之處在于所用大孔吸附樹脂選用 D-201、D-301、HPD400、HPD600、AB-8等型號的大孔樹脂中的一種，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例5 將藥西瓜果實(shí)粉碎過20目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以30%乙醇水溶液 粗提將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的30%乙醇水溶液，在80°C至100°C下加熱 回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液，濃縮至原體積的三分之一，加濃縮 液體積1倍量至2倍量的無水乙醇放置沉淀12小時，濾除沉淀，濾液濃縮后以稀鹽酸調(diào)節(jié) PH值為3至6，上AB-8型大孔樹脂層析柱，待上樣液全部吸附后，以3至8個層析柱體積 去離子水沖洗層析柱，再以50%、70%、90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每濃度乙醇用量為3至8個 層析柱體積，流速為每小時2至5個層析柱體積，收集乙醇洗脫液，合并后于60°C至90°C 濃縮，濃縮液再于50°C至80°C減壓干燥，即得藥西瓜提取物。實(shí)施例6 與實(shí)施例5的不同之處在于上述層析柱處理時以30%、50%、70%的乙醇 進(jìn)行梯度洗脫，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例7:與實(shí)施例5和實(shí)施例6的不同之處在于所用大孔吸附樹脂選用 D-201、D-301、HPD400、HPD600、AB-8等型號的大孔樹脂中的一種，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例8 將藥西瓜果實(shí)粉碎過20目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以50%乙醇水溶液 粗提將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的50%乙醇水溶液，在80°C至100°C下加熱 回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液，濃縮至原體積的三分之一，加濃縮 液體積1倍量至2倍量的無水乙醇放置沉淀12小時，濾除沉淀，濾液濃縮后以稀鹽酸調(diào)節(jié) PH值為3至6，上AB-8型大孔樹脂層析柱，待上樣液全部吸附后，以3至8個層析柱體積 去離子水沖洗層析柱，再以50%、70%、90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每濃度乙醇用量為3至8個 層析柱體積，流速為每小時2至5個層析柱體積，收集乙醇洗脫液，合并后于60°C至90°C 濃縮，濃縮液再于50°C至80°C減壓干燥，即得藥西瓜提取物。實(shí)施例9 與實(shí)施例8的不同之處在于上述層析柱處理時以30%、50%、70%的乙醇 進(jìn)行梯度洗脫，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例10:與實(shí)施例8和實(shí)施例9的不同之處在于所用大孔吸附樹脂選用 D-201、D-301、HPD400、HPD600、AB-8等型號的大孔樹脂中的一種，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例11 將藥西瓜果實(shí)粉碎過20目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以70%乙醇水溶 液粗提將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的70%乙醇水溶液，在80°C至100°C下加 熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液，濃縮至原體積的三分之一，加濃 縮液體積1倍量至2倍量的無水乙醇放置沉淀12小時，濾除沉淀，濾液濃縮后以稀鹽酸調(diào) 節(jié)PH值為3至6，上AB-8型大孔樹脂層析柱，待上樣液全部吸附后，以3至8個層析柱體 積去離子水沖洗層析柱，再以50%、70%、90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每濃度乙醇用量為3至8個層析柱體積，流速為每小時2至5個層析柱體積，收集乙醇洗脫液，合并后于60°C至 90°C濃縮，濃縮液再于50°C至80°C減壓干燥，即得藥西瓜提取物。實(shí)施例12 與實(shí)施例11的不同之處在于上述層析柱處理時以30%、50%、70%的乙 醇進(jìn)行梯度洗脫，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例13 與實(shí)施例11和實(shí)施例12的不同之處在于所用大孔吸附樹脂選用 D-201、D-301、HPD400、HPD600、AB-8等型號的大孔樹脂中的一種，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例14 將藥西瓜果實(shí)粉碎過20目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以90%乙醇水溶 液粗提將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的90%乙醇水溶液，在80°C至100°C下加 熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液，濃縮至原體積的三分之一，加濃 縮液體積1倍量至2倍量的無水乙醇放置沉淀12小時，濾除沉淀，濾液濃縮后以稀鹽酸調(diào) 節(jié)PH值為3至6，上AB-8型大孔樹脂層析柱，待上樣液全部吸附后，以3至8個層析柱體 積去離子水沖洗層析柱，再以50%、70%、90%的乙醇進(jìn)行梯度洗脫，每濃度乙醇用量為3至 8個層析柱體積，流速為每小時2至5個層析柱體積，收集乙醇洗脫液，合并后于60°C至 90°C濃縮，濃縮液再于50°C至80°C減壓干燥，即得藥西瓜提取物。實(shí)施例15 與實(shí)施例14的不同之處在于上述層析柱處理時以30%、50%、70%的乙 醇進(jìn)行梯度洗脫，得到藥西瓜提取物。實(shí)施例16 與實(shí)施例14和實(shí)施例15的不同之處在于所用大孔吸附樹脂選用 D-201、D-301、HPD400、HPD600、AB-8等型號的大孔樹脂中的一種，得到藥西瓜提取物。通過以下實(shí)驗(yàn)列對本發(fā)明藥西瓜提取物的抗腫瘤作用進(jìn)行說明
實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥西瓜提取物對人肺腺癌細(xì)胞和人宮頸癌細(xì)胞病變的抑制作用 1.實(shí)驗(yàn)材料和儀器
1. 1樣品1號至5號樣品，5個批次的1號至5號的樣品是從上述實(shí)施例1至實(shí)施例 16所得藥西瓜提取物中隨機(jī)抽樣而得。1.2細(xì)胞株人肺腺癌細(xì)胞A549，人宮頸癌Hela細(xì)胞，均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物 研究所腫瘤室提供。1. 3試劑 F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基，Gibco出品；DMSO，Sigma出品；胎牛血清，杭 州四季青生物工程材料有限公司；MTT、胰蛋白酶，Amresco，北京三博遠(yuǎn)志生物技術(shù)有限公 司分裝。1.4 儀器 BHC-1300II A-B3生物安全柜，蘇凈集團(tuán)安泰公司；HH. CP-Ol型(X)2培養(yǎng)箱，上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公 司；)(DS-1B倒置顯微鏡；AL204電子天平，梅特勒一托利多儀器(上海)有限公司；550型酶 標(biāo)儀，Bio-Rad公司；SZ-96自動雙重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠。2.實(shí)驗(yàn)方法
細(xì)胞培養(yǎng)及接種 A549用含10 %體積百分比的胎牛血清的F12培養(yǎng)液于37°C、5%C02 條件下培養(yǎng)。Hela用含10 %體積百分比的胎牛血清的MEM培養(yǎng)液于37°C、5 %C02條件下 培養(yǎng)。兩種細(xì)胞分別取生長活躍、形態(tài)良好的單層培養(yǎng)細(xì)胞用0. 25 %的胰酶消化后，以各自 的培養(yǎng)液配成濃度為4. 5 XlOVml的細(xì)胞懸液，接種于無菌96孔板，200 μ 1/hole，M小時 后，吸棄上清，1-5號樣品分別以培養(yǎng)液配成5、2. 5,1.25,0. 625,0.3125,0. 156,0. 78 mg/ml 等濃度加藥，每濃度4個復(fù)孔，培養(yǎng)48小時后，加入以PBS配制的MTT (5mg/ml) 10 μ 1/hole,繼續(xù)培養(yǎng)4小時，吸棄上清，加DMSO 100 μ 1/hole,振搖后在酶標(biāo)儀上于570nm測定 OD值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)一批。計(jì)算樣品對細(xì)胞生長的抑制率CT，并用SPSS軟件11. 5計(jì)算樣品對 腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC5Q。CT=(對照孔OD值-加樣孔OD值)/對照孔OD值X 100 %
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果1-5號樣品對A549和Hela細(xì)胞的生長均有抑制作用。(見表1、2、3)
4.結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1-5號樣品均具有一定的抗腫瘤活性。實(shí)驗(yàn)例2 本發(fā)明藥西瓜提取物對人肝癌細(xì)胞和白血病細(xì)胞病變的抑制作用 使用人肝癌細(xì)胞株IfePh和人急性早幼粒白血病細(xì)胞株HL-60 (美國ATCC公司)，以含
10%體積百分比的胎牛血清(Hyclone公司)的RPMI-1640完全培養(yǎng)(Sigma公司)在37°C， 飽和濕度，含體積分?jǐn)?shù)為5%C02、95%空氣的二氧化碳培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，2—3天傳代一次。 取對數(shù)生長期細(xì)胞，以0. 125%胰酶(Sigma公司)消化后，PBS (磷酸鹽緩沖液)(0. 05mol/ L，PH7. 4)洗滌2次，完全培養(yǎng)基重新懸浮，顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為 1 X 105/ml，鋪96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，IOOul/孔，培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞貼壁。加入待測樣品，IOul/ 孔，空白孔加IOul生理鹽水，培養(yǎng)48小時。棄去上清液，PBS洗滌細(xì)胞2次，加入含0. 04%MTT (Amresco公司)的培養(yǎng)基，IOOul/孔，再培養(yǎng)4小時。棄去上清，加DMSO (二甲基亞砜) IOOul/孔，震蕩10分鐘使生成物formazan充分溶解，在Zenyth200st酶標(biāo)儀上測定各孔吸 光度值，測定波長570nm。腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性率計(jì)算
抑制率(％)= (Ase-A樣品)/Ase X 100% (見表 4) 計(jì)算50%細(xì)胞殺傷時藥物濃度(IC5tl), IC50采用加權(quán)直線回歸法處理。其中Ase 空白的吸光度值；A#s:樣品吸光度值 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1-5號樣品均具有一定的抗腫瘤活性
在本發(fā)明中每個批次的1號至5號的樣品是分別做試驗(yàn)的，本發(fā)明中的1號的樣品試 驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)為5個批次的1號的樣品分別做試驗(yàn)的平均結(jié)果，其它2號至5號的樣品試驗(yàn) 結(jié)果數(shù)據(jù)的方式都與1號的樣品試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)的方法相同。在本發(fā)明中乙醇水溶液濃度均為體積百分比。
權(quán)利要求
1.一種用于制備抗腫瘤藥物的藥西瓜提取物，其特征在于按下述步驟得到第一步，將藥西瓜果實(shí)粉碎過10目至30目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水和/或乙醇 粗提，其中，水粗提為將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下 加熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液；乙醇粗提為將藥西瓜果實(shí)粉 末加8倍至10倍重量份的30%至90%的乙醇水溶液，在80°C至100°C提取兩次，每次2小 時至3小時，過濾，合并濾液；第二步，將上述濾液濃縮至原體積的三分之一，得濃縮液，加相當(dāng)于濃縮液體積1倍量 至2倍量的無水乙醇，室溫放置沉淀12小時至M小時，濾除沉淀得到乙醇溶液；第三步，將上述乙醇溶液濃縮至原體積的五分之一至二分之一后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值 為3至6，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；其中，大孔樹脂采用弱極性大孔樹脂， 弱極性大孔樹脂選用HPD400、D-101、AB-8型弱極性大孔樹脂中的一種，大孔樹脂與聚酰胺 樹脂混合使用時，按重量比1比1進(jìn)行混合；第四步，以相當(dāng)于3至8個層析柱體積的去離子水沖洗上述層析柱，再以10%至90% 的乙醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每濃度洗脫劑的用量相當(dāng)于3至8個層析柱體積，流速為2 至5個層析柱體積/小時，收集乙醇洗脫液并合并；第五步，將上述合并后的乙醇洗脫液在40°C至90°C、0.07 Mpa至0. IMpa下濃縮，回收 乙醇，再在50°C至80°C、0. 07 Mpa至0. IMpa下減壓干燥，即得所需的藥西瓜提取物。
2.一種用于制備抗腫瘤藥物的藥西瓜提取物的生產(chǎn)方法，其特征在于按下述步驟進(jìn)行第一步，將藥西瓜果實(shí)粉碎過10目至30目篩，得到藥西瓜果實(shí)粉末，以水和/或乙醇 粗提，其中，水粗提為將藥西瓜果實(shí)粉末加8倍至10倍重量份的水，在80°C至100°C下 加熱回流提取兩次，每次1. 5小時至3小時，過濾，合并濾液；乙醇粗提為將藥西瓜果實(shí)粉 末加8倍至10倍重量份的30%至90%的乙醇水溶液，在80°C至100°C提取兩次，每次2小 時至3小時，過濾，合并濾液；第二步，將上述濾液濃縮至原體積的三分之一，得濃縮液，加相當(dāng)于濃縮液體積1倍量 至2倍量的無水乙醇，室溫放置沉淀12小時至M小時，濾除沉淀得到乙醇溶液；第三步，將上述乙醇溶液濃縮至原體積的五分之一至二分之一后以稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值 為3至6，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；其中，大孔樹脂采用弱極性大孔樹脂， 弱極性大孔樹脂選用HPD400、D-101、AB-8型弱極性大孔樹脂中的一種，大孔樹脂與聚酰胺 樹脂混合使用時，按重量比1比1進(jìn)行混合；第四步，以相當(dāng)于3至8個層析柱體積的去離子水沖洗上述層析柱，再以10%至90% 的乙醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每濃度洗脫劑的用量相當(dāng)于3至8個層析柱體積，流速為2 至5個層析柱體積/小時，收集乙醇洗脫液并合并；第五步，將上述合并后的乙醇洗脫液在40°C至90°C、0. 07Mpa至0. IMpa下濃縮，回收 乙醇，再在50°C至80°C、0. 07Mpa至0. IMpa下減壓干燥，即得所需的藥西瓜提取物。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥西瓜提取物的藥物組合物，其特征在于以該藥西瓜提 取物為有效成分，與藥學(xué)上可接受的載體所組成。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物的制劑類型，選自片劑、糖衣劑片、薄膜衣 片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉劑、栓劑、 軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、滴丸劑或貼劑。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥西瓜提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
一種藥西瓜提取物及其生產(chǎn)方法和應(yīng)用。該提取物的生產(chǎn)方法為第一步，藥西瓜果實(shí)粉碎，以水或乙醇粗提，得提取液；第二步，提取液過濾濃縮后加無水乙醇放置沉淀,濾除沉淀得乙醇溶液；第三步,將所得乙醇溶液濃縮后調(diào)節(jié)pH值，上大孔樹脂和/或聚酰胺樹脂層析柱吸附；第四步,將所得溶液濃縮,回收乙醇,再干燥，即得到所需的藥西瓜提取物。本發(fā)明所述的藥西瓜提取物具有顯著的抗腫瘤作用，且口服給藥安全,可用于制備抗腫瘤藥物；本發(fā)明首次提出藥西瓜提取物具有抗腫瘤活性。該生產(chǎn)方法簡單易行，工藝可靠，所得提取物質(zhì)量穩(wěn)定；生產(chǎn)中所使用的材料可通過乙醇回收和樹脂再生循環(huán)利用，生產(chǎn)成本低,適合產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號A61P35/00GK102138957SQ20111008050
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者劉沖, 地力努爾, 楊偉俊, 滿爾哈巴, 黃華 申請人:新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所